标签： wst

WST-8

品牌：JinPan | 货号：IW0220-20mg

WST-8

产品简介
CAS 193149-74-5
英文名称 WST-8
纯度 ≥98%
分子式 C20H14N6NaO11S2
分子量 601.48
外观（性状） White to yellow Solid
储存条件 Powder : 2-8℃, 2 years; In solvent(母液): -20℃, 1 month; -80℃, 6 months
溶解性 Soluble in Water ≥50mg/mL
MDL MFCD09264687
InChIKey VSIVTUIKYVGDCX-UHFFFAOYSA-M
InChI InChI=1S/C20H14N6O11S2.Na/c1-37-18-10-14(26(29)30)6-9-17(18)24-22-20(21-23(24)12-2-4-13(5-3-12)25(27)28)16-8-7-15(38(31,32)33)11-19(16)39(34,35)36;/h2-11H,1H3,(H-,31,32,33,34,35,36);/q;+1/p-1
PubChem CID 9894947
SMILES COC1=CC([N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]2=NC(C3=CC=C(S(=O)(O)=O)C=C3S(=O)([O-])=O)=NN2C4=CC=C([N+]([O-])=O)C=C4.[Na]
描述 是一种水溶性的四唑染料,用于比色测定细胞增殖或细胞毒性。(It is a water-Soluble tetrazolium dye used for colorimetric determination of cell proliferation or cytotoxicity.)
规格 20mg 50mg
单位 瓶

WST-1 IW0210-10mg

品牌：JinPan | 货号：IW0210-10mg

WST-1

产品简介
CAS 150849-52-8
英文名称 WST-1
纯度 ≥98%
分子式 C19H13IN5NaO8S2
分子量 653.36
外观（性状） Light yellow to brown Solid
储存条件 Powder : 2-8℃, 2 years; In solvent(母液): -20℃, 1 month; -80℃, 6 months
溶解性 Soluble in Water ≥10mg/mL
MDL MFCD01075079
InChIKey JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M
InChI InChI=1S/C19H12IN5O8S2.Na/c20-12-1-3-13(4-2-12)23-21-19(22-24(23)14-5-7-15(8-6-14)25(26)27)17-10-9-16(34(28,29)30)11-18(17)35(31,32)33;/h1-11H,(H-,28,29,30,31,32,33);/q;+1/p-1
PubChem CID 6099081
SMILES C1=CC(=CC=C1N2N=C(N=[N+]2C3=CC=C(C=C3)[N+](=O)[O-])C4=C(C=C(C=C4)S(=O)(=O)[O-])S(=O)(=O)[O-])I.[Na+]
描述 是一种 Tetrazolium 染料,广泛用于细胞活力测定。(It is a Tetrazolium dye widely used in cell viability assays.)
规格 10mg 20mg
单位 瓶

备注：
以上数据均来自公开文献, Solarbio暂未进行独立验证, 仅供参考。
These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

AAT代理,ReadiUseTM WST-8 * 50 mM水溶液*

中文名称

ReadiUseTM WST-8 * 50 mM水溶液*

英文名字
ReadiUseTM WST-8 *50 mM aqueous solution*
供应商
AAT Bioquest
产品货号
AAT-15705
产品报价
￥询价/25mg
美国AAT Bioquest Inc是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括显色、荧光和生物发光技术。

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中文名称

ReadiUseTM WST-8 * 50 mM水溶液*

英文名字
ReadiUseTM WST-8 *50 mM aqueous solution*
供应商
AAT Bioquest
产品货号
AAT-15706
产品报价
￥询价/100mg
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中文名称

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英文名字
ReadiUseTM WST-8 *50 mM aqueous solution*
供应商
AAT Bioquest
产品货号
AAT-15707
产品报价
￥询价/1g
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WST-4试剂货号：W203

WST-4试剂货号：W203
2-Benzothiazolyl-3-(4-carboxy-2-methoxyphenyl)-5-[4-(2-sulfoethylcarbamoyl)phenyl]-2H-tetrazolium
CAS号：178925-54-7
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温
分子式：

C25H20N6O7S2

分子量：

580.59

选择规格：
100mg
水溶性四唑盐
产品详情
WSTs产品说明
技术信息
参考文献

产品详情

外观：黄色或棕色粉末

纯度：通过检测 (TLC)

反应式

1616132642642245.png

WSTs产品说明

水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的，三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性，然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性，但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基，它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐，它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团，颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高，因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。

电子转移到四唑盐的机制

WST图片.jpg

 

技术信息

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图2.WST甲臜染料的吸收光谱

参考文献

1) M. Ishiyama, et al., Anal. Sci., 12, 515 (1996).

WST-9试剂货号：W217

WST-9试剂货号：W217
2-(4-Nitrophenyl)-5-phenyl-3-[4-(4-sulfophenylazo)-2-sulfophenyl]-2H-tetrazolium, monosodium salt
WST-9
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温
分子式：

C25H16N7NaO8S2

分子量：

629.56

选择规格：
100mg
水溶性四唑盐
产品详情
WSTs产品说明
技术信息
参考文献

产品详情

外观：橙色或橙棕色粉末

纯度：通过检测 (TLC)

摩尔吸光度(pH8)：≥24,000 (320 nm左右)

反应式

image.png

WSTs产品说明

水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的，三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性，然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性，但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基，它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐，它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团，颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高，因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。

电子转移到四唑盐的机制

WST图片.jpg

 

技术信息

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图2.WST甲臜染料的吸收光谱

参考文献

1) WST-1: M. Ishiyama, et al., Chem. Pharm. Bull, 41, 1118 (1993),

2) M. Ishiyama, et al., In Vitro Toxicol, 8, 187 (1995),

3) S. Shirahata, et al., Biosci. Biotech. Biochem., 59, 345 (1995),

4) K. Teruya, et al., Biosci. Biotech. Biochem., 59, 341 (1995),

5) Y. Kayamori, et al., Clin. Biochem., 30, 595 (1997);

6) W. Zhang, et al., FASEB J., 20, 2496 (2006);

7) S. Yang, et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 319, 595 (2006);

8) D. Inokuma, et al., Stem Cells, 24, 2810 (2006);

9) T. Ishikawa, et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 26, 1998 (2006).

关联产品

WST-1试剂
2-(4-Iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium, monosodium salt
MAOS试剂
N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethylaniline, sodium salt, monohydrate
TMBZ试剂
3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine
DAOS试剂
N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline, sodium salt
SAT-3试剂
N,N’-Bis(2-hydroxy-3-sulfopropyl)tolidine, disodium salt, tetrahydrate

WST-5试剂货号：W204

WST-5试剂货号：W204
2,2′-Dibenzothiazolyl-5,5′-bis[4-di(2-sulfoethyl)carbamoylphenyl]-3,3′-(3,3′-dimethoxy 4,4′-biphenylene)ditetrazolium, disodium salt
CAS号：178925-55-8
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温
分子式：

C52H44N12Na2O16S6

分子量：

1331.35

选择规格：
100mg
水溶性四唑盐
产品详情
WSTs产品说明
技术信息
参考文献

产品详情

外观：黄色或浅棕绿色粉末

纯度：通过检测 (TLC)

反应式

1616486637402669.png

WSTs产品说明

水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的，三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性，然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性，但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基，它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐，它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团，颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高，因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。

电子转移到四唑盐的机制

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技术信息

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图2.WST甲臜染料的吸收光谱

参考文献

1) M. Ishiyama, et al., Anal. Sci., 12, 515 (1996).

WST-3试剂货号：W202

WST-3试剂货号：W202
2-(4-Iodophenyl)-3-(2,4-dinitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium, monosodium salt
CAS号：515111-36-1
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温
分子式：

C19H10IN6NaO10S2

分子量：

696.34

选择规格：
100mg
水溶性四唑盐
产品详情
WSTs产品说明
技术信息
参考文献

产品详情

外观：浅黄棕色或浅棕色粉末

纯度：通过检测 (TLC)

反应式

1616126018757443.png

WSTs产品说明

水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的，三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性，然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性，但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基，它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐，它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团，颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高，因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。

电子转移到四唑盐的机制

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技术信息

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图2.WST甲臜染料的吸收光谱

WST-1试剂货号：W201

WST-1试剂货号：W201
2-(4-Iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium, monosodium salt
CAS号：150849-52-8
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温
分子式：

C19H11IN5NaO8S2

分子量：

651.35

选择规格：
100mg
500mg
水溶性四唑盐
产品详情
WSTs产品说明
技术信息
参考文献

产品详情

外观：浅黄棕色粉末

纯度：通过检测 (TLC)

反应式

image.png

WSTs产品说明

水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的，三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性，然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性，但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基，它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐，它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团，颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高，因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。

电子转移到四唑盐的机制

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技术信息

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图2.WST甲臜染料的吸收光谱

Microbial Viability Assay Kit-WST试剂盒货号：M439

Microbial Viability Assay Kit-WST试剂盒货号：M439
微生物活性检测试剂盒-WST
Microbial Viability Assay Kit-WST
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
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选择数量：

选择规格：
100 tests
500 tests
价格：
¥680.00现货（会员请登录查看专享价！）
检测时间短
多孔板多样品检测
不易受培养基影响
活动进行中
产品概述
检测时间大幅缩短
灵敏度更高
传统方法对比
显色原理
有检测实例的微生物
参考文献
常见问题Q&A

活动进行中

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凑单关联产品TOP5

NO.1.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.2.    Calcein-AM/PI Double Staining Kit    活死细胞双染检测

NO.3.    Cell Viability Assay Kit    细胞增殖/毒性检测

NO.4.    NAD/NADH Assay Kit-WST    NAD/NADH检测

NO.5.    Biofilm Formation Assay    生物被膜形成量/抑制能力检测

 

产品概述

    使用水溶性四唑盐WST-8作为显色物质的微生物比色法检测试剂盒。微生物通过能量代谢活动在细胞内生成NAD(P)H，WST-8在电子载体的作用下被NAD(P)H还原成水溶性的甲臜产物(橙色)。甲臜产物的生成量与微生物的能量代谢活性成正比例关系。因此，可以通过橙色的显色程度确认微生物的存活率和活性。

本产品由同仁化学研究所与日本福冈县工业技术中心生物食品研究所共同开发。

检测时间大幅缩短

    传统的微生物活力检测一般采用克隆形成实验(Colony Formation Assay)或通过增殖造成的混浊等目视评价方法。这些方法需要的时间很长而且操作繁杂需要一定的熟练度才可以成功检测。而使用本试剂盒检测大肠杆菌时，相对于传统寒天培地法长达22小时的检测时间，本试剂盒仅需要8小时即可检测。(1 CFU/ml)

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操作上更加简单快捷，培养后只需要加入试剂即可。检测时，在96孔板内准备好微生物悬浊液后加入试剂，在培养箱内通过微生物代谢活性开始显色。

1619493765643646.png

 

大肠杆菌的增殖检测例

<检测步骤>

1.将大肠杆菌(NBRC3972)在TSBYE培养基中进行预培养。 2.用Mueller-Hinton(以下略称为MHB)配制成108 CFU/ml的大肠杆菌悬浊液，再用MHB制成10倍稀释系列悬浊液。 3.使用多通道移液器将不同菌体密度的大肠杆菌加入至96孔板中(每孔190 μl)。 4.使用多通道移液器向各孔中加入10 μl显色试剂。 5.为了防止蒸发和污染，用透明密封贴(PCR用等)贴在孔板上，置于酶标仪(VersaMax, 日本Molecular Devices)中。 6.用动力学测定模式(Kinetics)每隔15 min检测一次460 nm处吸光度直至24 h。(37℃)

<检测结果和定量性的确认>

下图是随时间变化的大肠杆菌检测的结果。96孔板的最左列是高密度(约108 CFU/ml)，

越往右密度越低，大约每隔1 h各列依次开始显色。

1619493834167693.png

 

下图是图表化的大肠杆菌检测的结果。以“达到可以目视的吸光度值0.5所需要的时间(h)”为y轴，以各菌体密度(CFU/ml)为x轴作图。如下面的直线关系式，确认检测大肠杆菌的定量性。

y= -0.43Ln(x)+8.01

当x =1时，即1CFU/ml时，y =8.01。因此得知，1个微生物的检测大约需要8 h。也就是说，经过大约8 h培养后，吸光度如果没变化的话可以判定大肠杆菌阴性。

1619493858314826.png

灵敏度更高

用容易分辨的“颜色”代替难以分辨的“浑浊度变化”

麦氏(McFarland)比浊法是通过菌液中的浑浊度来判断活菌数浓度的方法。而本试剂盒是通过颜色的变化检测活菌数的浓度。因肉眼的极限，使用比浊法无法判断的低浓度细菌活性，可以用灵敏度更高的本试剂盒进行检测。

下面是使用微生物定量法检测水溶性维他命之一的维他命B6的检测例。与传统的比浊法相比，可以在更短时间内更灵敏的进行定量。

 

维他命B6的微生物定量例

<检测步骤>

1.向96孔板的各孔中加入90 μl维他命定量用培养基。 2.向96孔板的各孔中加入90 μl标准溶液或样品溶液。 3.将10 μl配置好的各种需要维他命的菌种液和10 μl检测试剂加入孔中，30℃或37℃下培养一段时间。 4.将孔板置于酶标仪，使用终点(End Point)模式检测460 nm处吸光度。加入传统法的检测试剂，检测610 nm处的吸光度(浑浊度)。

使用微生物：Saccharomyces cerevisiae ATCC9080

使用培养基：维他命B6定量用基础培养基

培养温度：30℃

标准物质：吡哆醇盐酸盐

<检测结果和定量性的确认>

下图是本方法(WST法)和传统法的直线性的比较结果。本方法在培养24 h时，0.02~1 ng/ml的浓度范围内呈直线性。而传统法在培养24 h时，灵敏度仍达不到检测标准，需要将培养时间延长至48 h才能与本方法进行比较。

image.png

 

药物耐受性的实验例

<检测步骤>

1.将金黄葡萄菌(SA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分别播种至96孔板中。然后添加各浓度的抗生素。 2.在37℃下培养6 h，添加试剂后再培养2 h进行显色反应。

<检测结果和定量性的确认>

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SA：Staphylococcus aureus

MRSA：Methicilin-resistant Staphylococcus aureus

传统方法对比

与传统抗菌性能实验(Spot-on-lawn法)的对比

抗菌性能检测的应用例

同时使用传统的Spot-on-lawn法(以下简称Spot法)和WST法进行抗菌性能对比实验。Spot法需要用目视的方法确认阻止圆的有无，而且检测所需的时间也更长。WST法的检测结果与传统法的结果相关性一致，而且可以在更短的时间内完成检测。下面是Spot法和WST法的抗菌性能检测实例。

用4种检定菌和待测样本共5种乳酸菌的培养上清液作为检测样本，筛选出具有产生抗菌能力的乳酸菌。

其中乳链菌肽(Nisin)生产菌之一的Lactobacillus lactis NBRC12007作为阳性对照，Lactobacillus lactis NBRC100933作为阴性对照。

为了分离出上清液中的抗菌物质，将乳酸菌培养上清液(pH 6.5-6.8)过滤并灭菌，然后用MHB培养基制备稀释系列，37℃培养6 h。

添加检测试剂之后， 37℃培养2 h。结果显示传统法与WST法相关性一致。

检测针对4种检定菌的24个供体的时候，Spot法需要12枚dish(每个dish8个检测点)，检测时间需要20 h以上。而使用WST法检测时只需要1块96孔板，8 h左右即可完成检测。

1619494151617407.png

显色原理

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微生物通过能量代谢活动在细胞内生成NAD(P)H，WST-8在电子载体的作用下被NAD(P)H还原成水溶性的甲臜产物(橙色)。甲臜产物的生成量与微生物的能量代谢活性成正比例关系。因此，可以通过橙色的显色程度确认微生物的存活率和活性。

有检测实例的微生物

真菌(霉菌类)：Mould 真菌(酵母类)：Yeast
Alternaria alternata NBR+B40:B56C31805

Aspergillus flavus NBRC4295

Aspergillus fumigatus NBRC33022

Aspergillus niger NBRC105649

Aspergillus terreus NBRC6346

Aspergillus ustus NBRC4128

Aureobasidium pullulans NBRC6353

Chaetomium globosum NBRC6347z

Cladosporium cladosporioides NBRC6348

Exophiala   dermatitidis NBRC6421

Paecilomyces variotii NBRC33284

Penicillium citrinum NBRC6352

Penicillium pinzophilum NBRC33285

Phoma citricarpa NBRC5287

Pseudallescheria boydii NBRC32229

Rhizopus oryzae NBRC31005

Sporothrix schenckii NBRC32961

Trichoderma virens NBRC6355

Trichophyton rubrum NBRC   5807

 Candida albicans ATCC90028

Candida albicans JCM   1542

Candida albicans SC5314

Candida krusei NBRC1395

Candida parapsilosis NBRC1396

Candida utilis

Cryptococcus albidus NBRC0378

Cryptococcus neoformans ATCC66031

Saccharomyces cerevisiae NBRC2347

Trichosporon asahii NBRC103889

Trichosporon asahii M9459

Trichosporon asahii M9925

Zygosaccharomyces rouxi
革兰氏阳性菌：Gram-positive 格兰仕阴性菌：Gram-negative
Bacillus cereus

Bacillus subtillis

Corynebacterium glutamicum

Enterococcus faecalis

Enterococcus faecalis FSCC   146002

Lactobacillus casei

Listeria monocytogenes

Micrococcus luteus

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus  NBRC13276

Staphylococcus aureus ATCC   25923

Staphylococcus epidermidis

Staphylococcus epidermidis ATCC   14990

Staphylococcus epidermidis FSCC   223011

Streptococcus mutans NCTC   10449

Streptococcus mutans UA   159

 Acetobacter sp.

Acinetobacter baumannii ATCC   19606

Campylobacter concisus ATCC   33237

Enterobacter cloacae FSCC145003

Escherichia coli 1.1369

Escherichia coli ATCC   25922

Escherichia coli BW25113

Escherichia coli K-12

Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum JCM   12990

Klebsiella pneumoniae FSCC167002

Proteus mirablils

Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa  NBRC13275

Pseudomonas aeruginosa ATCC   27853

Salmonella enteritidis

Salmonella typhimurium

Serratia marcescens

Stenotrophomonas maltophilia ATCC   51331

Vivrio   parahaemolyticus

Yersinia enterocollica

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269
谷氨酸的定量检测试剂盒
Glutamate Assay Kit-WST
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光，防潮
运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamate的定量

选择规格：
1set

凑单关联产品TOP5

NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

NO.2.    Glutamine Assay Kit-WST    谷氨酰胺的定量检测

NO.3.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.4.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

NO.5.    Mito-FerroGreen    铁离子荧光探针

 

试剂盒内含

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产品概述

谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成，而且还作为神经递质发挥重要作用，谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道，胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能，而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡，近年来针对xCT的癌症研究越来越多。

Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量，谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

       本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。

 

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操作步骤

　只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。

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实验例

标准曲线的实验例：

样品中的谷氨酰胺浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酰胺标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酰胺浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。

1609314887231458.png

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

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铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

据报道通过弹性蛋白，抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡，即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中，确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示，通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少，抑制胱氨酸的摄取，从而导致谷胱甘肽的量减少。

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Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例：

将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后，确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。

结果显示，SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少，细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。1612749142364629.png

<使用产品>

· 细胞内GSH：GSSG/GSH Quantification Kit II（货号：G263）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

· 细胞内ROS：ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-（货号：R252）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

· 细胞内ATP：ATP Assay Kit-Luminescence（货号：A550）

· 细胞内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（货号：K261）

<实验条件>

细胞：A549细胞 (1 x 106 cells) 　药物处理时间：48 h

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1622087244529743.png1622087268638819.png

参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma“.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量是多少？
A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

1609381817863934.png
Q2：配制后的Working solution可以保存多久？
A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

※Working solution配制后，避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。
Q3：是否可以定量D-Glutamate？
A3：该试剂盒是用于L-Glutamate定量，无法定量D-Glutamate。
Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？
A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5：待测样品可以保存吗？
A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。 但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。
Q6：为什么我的样品孔没有显色？
A6：样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。
Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？
A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

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Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268
谷氨酰胺定量检测试剂盒
Glutamine Assay Kit-WST
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光，防潮
运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamine的定量

选择规格：
1set

凑单关联产品TOP5

NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

NO.2.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.3.    Glutamate Assay Kit-WST    谷氨酸的定量检测

NO.4.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

NO.5.    Mito-FerroGreen    铁离子荧光探针

 

试剂盒内含

1607220500456163.png

产品概述

谷氨酰胺是TCA循环的中间体α-酮戊二酸的主要来源，并且是用于核酸和其他氨基酸合成及能量产生的重要物质。根据文献报道特别是在癌细胞中，谷氨酰胺作为底物可促进Glutaminolysis的生成，而Glutaminolysis是产生α-酮戊二酸的途径之一。同时Glutaminolysis还可以消除活性氧并减少氧化型谷胱甘肽。

Glutamine Assay Kit-WST是用于定量检测谷氨酰胺的试剂盒。无论是培养基内还是细胞内的谷氨酰胺均可以通过WST的还原反应进行定量，可检测的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酰胺进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酰胺标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酰胺的浓度。

1606449794882504.png

操作步骤

*向谷氨酰胺标准溶液和含有谷氨酰胺酶的样品孔中加入谷氨酰胺酶溶液，并在样品(不含谷氨酰胺酶溶液)的每个孔中加Reaction Buffer。

由下式算出检测样品中的谷氨酰胺浓度。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

1606455360524924.png

实验例

标准曲线的实验例：

样品中的谷氨酰胺浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酰胺标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酰胺浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。

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谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

1606455940746088.png

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量。
A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 12个样品(参照下图)

谷氨酰胺标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

image.png

 

＊当n=3时，至少需要240 μl(每孔40 μl×6孔)。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)
Q2：配制后的Working solution可以保存多久？
A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。
Q3：是否可以定量D-Glutamine？
A3：该试剂盒是用于L-Glutamine定量，无法定量D-Glutamine。
Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？
A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酰胺浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5：待测样品可以保存吗？
A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解液样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。
Q6：为什么我的样品孔没有显色？
A6：样品中的谷氨酰胺浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酰胺浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酰胺浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酰胺浓度调整到最低检测限以上。
Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？
A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

1622086833365247.png

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268
谷氨酰胺定量检测试剂盒
Glutamine Assay Kit-WST
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光，防潮
运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamine的定量

选择规格：
1set

凑单关联产品TOP5

NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

NO.2.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.3.    Glutamate Assay Kit-WST    谷氨酸的定量检测

NO.4.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

NO.5.    Mito-FerroGreen    铁离子荧光探针

 

试剂盒内含

1607220500456163.png

产品概述

谷氨酰胺是TCA循环的中间体α-酮戊二酸的主要来源，并且是用于核酸和其他氨基酸合成及能量产生的重要物质。根据文献报道特别是在癌细胞中，谷氨酰胺作为底物可促进Glutaminolysis的生成，而Glutaminolysis是产生α-酮戊二酸的途径之一。同时Glutaminolysis还可以消除活性氧并减少氧化型谷胱甘肽。

Glutamine Assay Kit-WST是用于定量检测谷氨酰胺的试剂盒。无论是培养基内还是细胞内的谷氨酰胺均可以通过WST的还原反应进行定量，可检测的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酰胺进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酰胺标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酰胺的浓度。

1606449794882504.png

操作步骤

*向谷氨酰胺标准溶液和含有谷氨酰胺酶的样品孔中加入谷氨酰胺酶溶液，并在样品(不含谷氨酰胺酶溶液)的每个孔中加Reaction Buffer。

由下式算出检测样品中的谷氨酰胺浓度。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

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实验例

标准曲线的实验例：

样品中的谷氨酰胺浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酰胺标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酰胺浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。

image.png

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

1606455940746088.png

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量。
A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 12个样品(参照下图)

谷氨酰胺标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

image.png

 

＊当n=3时，至少需要240 μl(每孔40 μl×6孔)。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)
Q2：配制后的Working solution可以保存多久？
A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。
Q3：是否可以定量D-Glutamine？
A3：该试剂盒是用于L-Glutamine定量，无法定量D-Glutamine。
Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？
A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酰胺浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5：待测样品可以保存吗？
A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解液样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。
Q6：为什么我的样品孔没有显色？
A6：样品中的谷氨酰胺浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酰胺浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酰胺浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酰胺浓度调整到最低检测限以上。
Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？
A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

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NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510

NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510
NADP/NADPH检测试剂盒
NADP/NADPH Assay Kit-WST
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光防潮
运输条件：室温

特点：

● 数据可靠，不会与NAD+及NADH反应

● 只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管

● 享有显色底物WST专利

选择规格：
100 tests

凑单关联产品TOP5

NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

NO.2.    Glucose Assay Kit-WST    葡萄糖检测

NO.3.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

NO.4.    Lactate Assay Kit-WST    乳酸检测

NO.5.    Lipi-Green    脂滴检测（绿色）

 

试剂盒内含

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概述

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP) 是磷酸戊糖途径（一种细胞代谢途径）反应中一种重要的辅因子。NADP以氧化态NADP+和还原态NADPH的形式存在于细胞中。NADPH不光对脂肪酸、胆固醇而且对还原型谷胱甘肽的生成至关重要。另外最近的研究表明，NADP+/NADPH通过限制碳水化合物的摄入来延长寿命与NADP+/NADPH有很大关联。

NADP/NADPH Assay Kit-WST能定量检测细胞中总NADP+/NADPH、NADPH和NADP+的量，并计算它们的比值。细胞内NADPH水平可以用试剂盒内的Extraction Buffer裂解细胞后加热进行定量检测。而细胞内的NADP+水平则可以通过总NADP+/NADPH减去NADPH的量计算得到。

原理

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技术资料

分别检测NADP+和NADPH

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分别测定NADP+和NADPH的操作步骤

*只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管

用试剂盒内的提取缓冲液及去除蛋白质用的微量管，能简便地制备细胞裂解液。 通过加热细胞裂解液能单独检测细胞内NADPH量，而细胞内的NADP+量则可以通过总NADP+/NADPH量减去NADPH量的计算得到。

在本试剂盒中，当n=3时，可以测量12个样品和8个标准样品。使用超过12个样品时，您需要准备单独的超滤管。

使用NADP+/NADPH作为标记的研究

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检索来源：Google Scholar

检索关键词：

NADP/NADPH：“NADP/NADPH”

线粒体：”NADP/NADPH”Mitochondria

癌：”NADP/NADPH”Cancer

氧化应激：”NADP/NADPH”Oxidative Stress

孔板检测中数据的可靠性

通过同时检测试剂盒内的标准溶液，可以对浓度在0.01-1 μmol/l的总NADP+/NADPH和NADPH进行定量。如果样品中的总NADP+/NADPH的浓度>1 μmol/l，可以通过稀释样品来调节。实验证实本试剂盒(NADP/NADPH Assay Kit-WST)不会与NAD+及NADH反应。

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操作步骤

（1）按下图，在每孔中分别加入50 μl的标准液和样品溶液。

※为了获得准确的数据，建议每个样品做3个复孔。

1622538669213787.jpg

 

（2）在每孔中加入50 μl Working Solution。

※由于在加入Working Solution后酶会立刻反应，请用多通道移液器以减少由于加液时间延迟而导致的实验误差。

（3）在37°C培养60 min。

※培养时请密封培养板，以防止液体蒸发。

（4）用酶标仪在450 nm处检测吸光度。

（5）用标准曲线测定样品中总NADP+/NADPH和NADPH的量。

※如果原样品在检测前已稀释，可用稀释倍率乘以检测的数值。

※NADP+的量可用下列计算公式计算：总NADP+/NADPH-NADPH的量计算得到。

NADP+=总NADP+/NADPH-NADPH

实验例

细胞样品检测实验例 (加入抗癌药物Doxorubicin)

向Jucket细胞中 (3×106 cells)加入终浓度为500 nmol/l的Doxorubicin (Dox)，在培养24 h后检测NADP+/NADPH 比值和还原型/氧化型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)。用本试剂盒检测PBS清洗后的细胞的NADP+/NADPH比值，用 GSSG/GSH Quantification Kit II (货号：G263) 检测谷胱甘肽的比值。

在细胞内加入DOX后，产生的ROS(H2O2) 破坏了DNA、DNA修复酶 (PARP*) 被激活， 并且NADP+被其消耗。为了补充不足的NADP+，NADPH氧化酶被激活，结果在数据中则会表现为NADP+的增加。与此同时还原型谷胱甘肽 (GSH) 会被产生的ROS所消耗，因此GSH/GSSG的比值会下降。

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常见问题Q&A

Q1：该试剂盒可以检测多少个样本？
A1：

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*所有样品均测定3次（n=3）

上表中显示了当标准样品从2 μmol/l连续稀释，作出一条共计8个点（n=3）的标准曲线时可以检测的样品数量。如果分为2次检测，由于需要重复做一条标准曲线，因此样品检测的数量会更少。
Q2：可以单独购买过滤管吗？
A2：不可以，我们不单独出售过滤管。如果需要其他耗材，可以使用市场上售卖的过滤管。
Q3：工作液稳定吗？
A3：工作液无法长期保存。请在使用前配制工作液，由于工作液对光敏感请注意避光。该工作液在室温下可避光保存4小时。
Q4：样品颜色没有变化，是什么原因？
A4：样品中的NAD含量可能低于使用此试剂盒可测定的检测限度，在这种情况下，请增加细胞数，或者如果检测样品被稀释，则在检测前降低稀释比例。

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509
NAD/NADH检测试剂盒
NAD/NADH Assay Kit-WST
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光防潮
运输条件：室温

特点：

● 数据可靠，不会与NADP及NADPH反应

● 同一样品可以用Lactate Assay Kit-WST（货号：L256）测定上清液中乳酸含量

● 只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管

● 享有显色底物WST专利

选择规格：
100 tests

凑单关联产品TOP5

NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测

NO.2.    Glucose Assay Kit-WST    葡萄糖检测

NO.3.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测  

NO.4.    Lactate Assay Kit-WST     乳酸检测

NO.5.    Lipi-Green    脂滴检测（绿色)

 

试剂盒内含

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概述

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)是参与糖酵解、电子转移系统和TCA循环等细胞主要代谢途径氧化还原反应的重要辅助因子。NAD以氧化型NAD+和还原型NADH的形式存在于细胞中。维持适当的NAD+和NADH水平对细胞功能至关重要。此外最近的研究表明NAD+水平的下降与衰老相关，NAD+的量被认为是衰老相关研究的一个标志。

NAD/NADH检测试剂盒可以定量细胞中NAD+/NADH、NADH和NAD+的量，并测量它们的比值。细胞内NADH水平可以通过试剂盒内含的Extraction Buffer裂解细胞并在加热后选择性地定量检测。而细胞内的NAD+水平则可以通过总的NAD+/NADH总量减去NADH量计算得到。

原理

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技术情报

NAD+和NADH的分别检测

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分别测定NAD+和NADH的操作步骤

*只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管

用试剂盒内的提取缓冲液及去除蛋白质用的微量管，能简便地制备细胞裂解液。通过加热细胞裂解液能单独检测细胞内的NADH量。而细胞内的NAD+量则可以通过总NAD+/NADH量减去NADH量的计算得到。

在本试剂盒中，当n=3时，可以测量12个样品和8个标准品。当使用超过12个样品时，您需要准备单独的微量管。

使用NAD+/NADH作为指标的研究

细胞中NAD+和NADH的量被评估为重要的代谢指标，用于了解受药物管理和基因重组影响的癌细胞和线粒体功能。最近已经明确了长寿相关的受体与NAD+的含量密切相关。越来越多的人将其评估为肥胖，糖尿病和细胞分化等生物学状况的标志物。

1622533183634875.jpg

检索来源：Google Scholar

检索关键词：

NAD/NADH    :  “NAD/NADH”

线粒体             ：“NAD/NADH”Mitochondria

癌                    ：“NAD/NADH”Cancer

肥胖                 ：“NAD/NADH”Obesity

孔板检测中数据的可靠性

可以通过同时测量该试剂盒中包含的标准溶液来进行定量分析。如果样品中NAD+/NADH的总含量高于2 μmol/l，则可以通过稀释样品进行评估。在下面的实验中，使用细胞数相差2倍的HeLa细胞，来确定NAD+和NADH的数量和比率。

 

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使用增殖培养的HeLa细胞（2.5×105，5.0×105个细胞），从标准曲线中得到细胞内NAD+和NADH的量。最终NAD+的量和NADH的量会随着细胞数而改变，但是即使细胞数改变，NAD+和NADH量的比率也不变。

经确认，将2-Deoxy-D-glucose加入到HeLa 细胞后，代谢活性发生了变化。

用乳酸检测试剂盒检测的实验例

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向HeLa细胞（1×106细胞）中加入2-Deoxy-D-glucose，终浓度为6 mmol/l，培养24小时后测定乳酸量和NAD+/NADH比。用Lactate Assay Kit-WST（货号：L256）测定上清液中乳酸含量，去除上清后用本试剂盒检测细胞中的NAD+/NADH比。

最终加入2-Deoxy-D-glucose抑制了细胞内糖酵解系统，并导致乳酸量的减少和NAD+/NADH比率的增加。

操作步骤

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(1) 按照上图，在每孔中分别加入50 μl的标准液和样品溶液。

※为了获得准确的数据，建议每个样品做3个复孔。

(2) 在每孔中加入50 μl Working Solution。

※由于在加入Working Solution后酶会立刻反应，请用多通道移液器以减少由于加液时间延迟而导致的实验误差。

(3) 在37℃培养60 min。

※培养时请密封培养板，以防止液体蒸发。

(4) 用酶标仪在450 nm处检测吸光度。

(5) 用标准曲线测定样品中总NAD+/NADH和NADH的量。

※如果原样品在检测前已稀释，可用稀释倍率乘以检测的数值。

※NAD+的量可用总NAD+/NADH的量-NADH的量计算得到

NAD+= 总NAD+/NADH-NADH

1611124192642580.jpg

标准曲线

常见问题Q&A

Q1：试剂盒可以测量多少个样本？
A1：

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*所有样品均测定3次（n=3）

上表中显示了当标准样品从2 μmol/l连续稀释，作出一条共计8个点（n=3）的标准曲线时可以检测的样品数量。如果分为2次检测，由于需要重复做一条标准曲线，因此样品检测的数量会更少。
Q2：是否可以使用450 nm以外的滤光片进行测量？
A2：也可以使用490 nm的滤光片，但是吸光度会低于在450 nm处的吸光度。当用不同滤光片检测时，校准曲线如下：

1622534040768583.jpg
Q3：可以单独购买过滤管吗？
A3：不可以，我们不单独出售过滤管。如果需要其他耗材，可以使用市场上售卖的过滤管。
Q4：工作液稳定吗？
A4：工作液无法长期保存。请在使用前配制工作液，由于工作液对光敏感请注意避光。该工作液在室温下可避光保存4小时。
Q5：样品颜色没有变化，是什么原因？
A5：样品中的NAD含量可能低于使用此试剂盒可测定的检测限度，在这种情况下，请增加细胞数，或者如果检测样品被稀释，则在检测前降低稀释比例。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269
谷氨酸的定量检测试剂盒
Glutamate Assay Kit-WST
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光，防潮
运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamate的定量

选择规格：
1set

凑单关联产品TOP5

NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

NO.2.    Glutamine Assay Kit-WST    谷氨酰胺的定量检测

NO.3.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.4.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

NO.5.    Mito-FerroGreen    铁离子荧光探针

 

试剂盒内含

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产品概述

　　谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成，而且还作为神经递质发挥重要作用，谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道，胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能，而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡，近年来针对xCT的癌症研究越来越多。

Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量，谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

　　本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。

 

image.png

操作步骤

　　只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。

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实验例

　　标准曲线的实验例：

样品中的谷氨酰胺浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酰胺标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酰胺浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。

1609314887231458.png

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

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铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

据报道通过弹性蛋白，抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡，即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中，确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示，通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少，抑制胱氨酸的摄取，从而导致谷胱甘肽的量减少。

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Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例：

将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后，确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。

结果显示，SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少，细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。1612749142364629.png

<使用产品>

· 细胞内GSH：GSSG/GSH Quantification Kit II（货号：G263）

· 细胞内ROS：ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-（货号：R252）

· 细胞内ATP：ATP Assay Kit-Luminescence（货号：A550）

· 细胞内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（货号：K261）

<实验条件>

细胞：A549细胞 (1 x 106 cells) 　药物处理时间：48 h

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1622087244529743.png1622087268638819.png

参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量是多少？
A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

1609381817863934.png
Q2：配制后的Working solution可以保存多久？
A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

※Working solution配制后，避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。
Q3：是否可以定量D-Glutamate？
A3：该试剂盒是用于L-Glutamate定量，无法定量D-Glutamate。
Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？
A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5：待测样品可以保存吗？
A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。 但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。
Q6：为什么我的样品孔没有显色？
A6：样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。
Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？
A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

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NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510

NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510
NADP/NADPH检测试剂盒
NADP/NADPH Assay Kit-WST
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温

特点：

● 数据可靠，不会与NAD+及NADH反应

● 只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管

● 享有显色底物WST专利

选择规格：
100 tests

凑单关联产品TOP5

NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

NO.2.    Glucose Assay Kit-WST    葡萄糖检测

NO.3.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

NO.4.    Lactate Assay Kit-WST    乳酸检测

NO.5.    Lipi-Green    脂滴检测（绿色）

试剂盒内含

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概述

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP) 是磷酸戊糖途径（一种细胞代谢途径）反应中一种重要的辅因子。NADP以氧化态NADP+和还原态NADPH的形式存在于细胞中。NADPH不光对脂肪酸、胆固醇而且对还原型谷胱甘肽的生成至关重要。另外最近的研究表明，NADP+/NADPH通过限制碳水化合物的摄入来延长寿命与NADP+/NADPH有很大关联。

NADP/NADPH Assay Kit-WST能定量检测细胞中总NADP+/NADPH、NADPH和NADP+的量，并计算它们的比值。细胞内NADPH水平可以用试剂盒内的Extraction Buffer裂解细胞后加热进行定量检测。而细胞内的NADP+水平则可以通过总NADP+/NADPH减去NADPH的量计算得到。

原理

1611188214208217.jpg

技术资料

分别检测NADP+和NADPH

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分别测定NADP+和NADPH的操作步骤

*只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管

用试剂盒内的提取缓冲液及去除蛋白质用的微量管，能简便地制备细胞裂解液。 通过加热细胞裂解液能单独检测细胞内NADPH量，而细胞内的NADP+量则可以通过总NADP+/NADPH量减去NADPH量的计算得到。

在本试剂盒中，当n=3时，可以测量12个样品和8个标准样品。使用超过12个样品时，您需要准备单独的超滤管。

使用NADP+/NADPH作为标记的研究

1622538301925754.jpg

检索来源：Google Scholar

检索关键词：

NADP/NADPH：“NADP/NADPH”

线粒体：”NADP/NADPH”Mitochondria

癌：”NADP/NADPH”Cancer

氧化应激：”NADP/NADPH”Oxidative Stress

孔板检测中数据的可靠性

通过同时检测试剂盒内的标准溶液，可以对浓度在0.01-1 μmol/l的总NADP+/NADPH和NADPH进行定量。如果样品中的总NADP+/NADPH的浓度>1 μmol/l，可以通过稀释样品来调节。实验证实本试剂盒(NADP/NADPH Assay Kit-WST)不会与NAD+及NADH反应。

1622538475403958.jpg

操作步骤

（1）按下图，在每孔中分别加入50 μl的标准液和样品溶液。

※为了获得准确的数据，建议每个样品做3个复孔。

1622538669213787.jpg

 

（2）在每孔中加入50 μl Working Solution。

※由于在加入Working Solution后酶会立刻反应，请用多通道移液器以减少由于加液时间延迟而导致的实验误差。

（3）在37°C培养60 min。

※培养时请密封培养板，以防止液体蒸发。

（4）用酶标仪在450 nm处检测吸光度。

（5）用标准曲线测定样品中总NADP+/NADPH和NADPH的量。

※如果原样品在检测前已稀释，可用稀释倍率乘以检测的数值。

※NADP+的量可用下列计算公式计算：总NADP+/NADPH-NADPH的量计算得到。

NADP+=总NADP+/NADPH-NADPH

实验例

细胞样品检测实验例 (加入抗癌药物Doxorubicin)

向Jucket细胞中 (3×106 cells)加入终浓度为500 nmol/l的Doxorubicin (Dox)，在培养24 h后检测NADP+/NADPH 比值和还原型/氧化型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)。用本试剂盒检测PBS清洗后的细胞的NADP+/NADPH比值，用 GSSG/GSH Quantification Kit II (货号：G263) 检测谷胱甘肽的比值。

在细胞内加入DOX后，产生的ROS(H2O2) 破坏了DNA、DNA修复酶 (PARP*) 被激活， 并且NADP+被其消耗。为了补充不足的NADP+，NADPH氧化酶被激活，结果在数据中则会表现为NADP+的增加。与此同时还原型谷胱甘肽 (GSH) 会被产生的ROS所消耗，因此GSH/GSSG的比值会下降。

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常见问题Q&A

Q1：该试剂盒可以检测多少个样本？
A1：

1622538792123681.jpg

*所有样品均测定3次（n=3）

上表中显示了当标准样品从2 μmol/l连续稀释，作出一条共计8个点（n=3）的标准曲线时可以检测的样品数量。如果分为2次检测，由于需要重复做一条标准曲线，因此样品检测的数量会更少。
Q2：可以单独购买过滤管吗？
A2：不可以，我们不单独出售过滤管。如果需要其他耗材，可以使用市场上售卖的过滤管。
Q3：工作液稳定吗？
A3：工作液无法长期保存。请在使用前配制工作液，由于工作液对光敏感请注意避光。该工作液在室温下可避光保存4小时。
Q4：样品颜色没有变化，是什么原因？
A4：样品中的NAD含量可能低于使用此试剂盒可测定的检测限度，在这种情况下，请增加细胞数，或者如果检测样品被稀释，则在检测前降低稀释比例。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269
谷氨酸的定量检测试剂盒
Glutamate Assay Kit-WST
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamate的定量

选择规格：
1set

凑单关联产品TOP5

NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

NO.2.    Glutamine Assay Kit-WST    谷氨酰胺的定量检测

NO.3.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.4.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

NO.5.    Mito-FerroGreen    铁离子荧光探针

试剂盒内含

1607220085966457.png

产品概述

谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成，而且还作为神经递质发挥重要作用，谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道，胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能，而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡，近年来针对xCT的癌症研究越来越多。

Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量，谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。

 

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操作步骤

只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。

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实验例

标准曲线的实验例：

样品中的谷氨酰胺浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酰胺标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酰胺浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。

1609314887231458.png

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

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铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

据报道通过弹性蛋白，抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡，即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中，确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示，通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少，抑制胱氨酸的摄取，从而导致谷胱甘肽的量减少。

image.png

Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例：

将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后，确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。

结果显示，SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少，细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。1612749142364629.png

<使用产品>

· 细胞内GSH：GSSG/GSH Quantification Kit II（货号：G263）

· 细胞内ROS：ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-（货号：R252）

· 细胞内ATP：ATP Assay Kit-Luminescence（货号：A550）

· 细胞内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（货号：K261）

<实验条件>

细胞：A549细胞 (1 x 106 cells) 　药物处理时间：48 h

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1622087244529743.png1622087268638819.png

参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma“.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量是多少？
A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

1609381817863934.png
Q2：配制后的Working solution可以保存多久？
A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

※Working solution配制后，避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。
Q3：是否可以定量D-Glutamate？
A3：该试剂盒是用于L-Glutamate定量，无法定量D-Glutamate。
Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？
A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5：待测样品可以保存吗？
A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。 但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。
Q6：为什么我的样品孔没有显色？
A6：样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。
Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？
A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

1622087017370785.png

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268
谷氨酰胺定量检测试剂盒
Glutamine Assay Kit-WST
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光防潮
运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamine的定量

选择规格：
1set

凑单关联产品TOP5

NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

NO.2.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.3.    Glutamate Assay Kit-WST    谷氨酸的定量检测

NO.4.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

NO.5.    Mito-FerroGreen    铁离子荧光探针

试剂盒内含

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产品概述

谷氨酰胺是TCA循环的中间体α-酮戊二酸的主要来源，并且是用于核酸和其他氨基酸合成及能量产生的重要物质。根据文献报道特别是在癌细胞中，谷氨酰胺作为底物可促进Glutaminolysis的生成，而Glutaminolysis是产生α-酮戊二酸的途径之一。同时Glutaminolysis还可以消除活性氧并减少氧化型谷胱甘肽。

Glutamine Assay Kit-WST是用于定量检测谷氨酰胺的试剂盒。无论是培养基内还是细胞内的谷氨酰胺均可以通过WST的还原反应进行定量，可检测的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酰胺进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酰胺标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酰胺的浓度。

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操作步骤

*向谷氨酰胺标准溶液和含有谷氨酰胺酶的样品孔中加入谷氨酰胺酶溶液，并在样品(不含谷氨酰胺酶溶液)的每个孔中加Reaction Buffer。

由下式算出检测样品中的谷氨酰胺浓度。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

1606455360524924.png

实验例

标准曲线的实验例：

样品中的谷氨酰胺浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酰胺标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酰胺浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。

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谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

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常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量。
A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 12个样品(参照下图)

谷氨酰胺标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

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＊当n=3时，至少需要240 μl(每孔40 μl×6孔)。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)
Q2：配制后的Working solution可以保存多久？
A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。
Q3：是否可以定量D-Glutamine？
A3：该试剂盒是用于L-Glutamine定量，无法定量D-Glutamine。
Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？
A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酰胺浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5：待测样品可以保存吗？
A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解液样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。
Q6：为什么我的样品孔没有显色？
A6：样品中的谷氨酰胺浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酰胺浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酰胺浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酰胺浓度调整到最低检测限以上。
Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？
A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

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