Taq DNA聚合酶的分类欢迎咨询

Taq DNA聚合酶有几种,除了普通扩增用的Taq DNA聚合酶外,还有以下几种特意性Taq DNA聚合酶
a,保真性的一个通用标准是错配率,错配率越低保真性越好。普通 Taq 酶的错配率在 10 -5 碱基 / 循环数,而高保真 Taq 酶错配率可降到 10 -6 数量级,大大降低了出错的可能性;它适合对 PCR 保真性要求较高的实验,如基因筛选、测序、突变检测等等。高保真 Taq 酶的保真原理是:高保真 Taq 酶具有 3‘ 到 5’ 核酸外切酶的活性。目前市面上主要有两类产品:一类是混合型的高保真酶,将带有 Proofreading 活性的酶与普通 Taq 酶(用于提高扩增效率)混合起来;另一类是单一型的高保真酶。
b,热启动Taq酶(高特异Taq酶):在 PCR *个循环变性之前,有一个升温的过程,引物和模板会有一些非特异性配对,如果这时 Taq 酶发挥活性,就很容易产生非特异性扩增,由于循环初期模板量非常少,产生的非特异性条带经过后面的指数扩增,就会严重干扰目的片段的扩增,甚至导致特异性条带不能扩出;而热启动 Taq 酶是必需经过高温才能激活的酶,因此在初始循环的变性之前它没有活性,不会产生非特异性扩增,这就大大提高了 PCR 扩增的特异性。
c,高耐热Taq酶: 对于有些模板变性温度较高,需要时间较长,可能要求高耐热性 Taq 酶,如 NEB 公司的 Vent 和 Deep Vent DNA 聚合酶系列,两者都是从海底火山口分离出来后克隆的,是普通 Taq 酶耐热性的三倍以上,前者在 95°C 半衰期近 7 小时, 100°C 近 2 小时;而后者分别为 23 小时和 8 小时。
d,超长片段扩增Taq酶:对于作基因组图谱、测序及分子遗传学研究的科研人员,可能会用到超长片段的扩增, Clontech 公司的 Advantage Genomic 系列混有 Tth DNA 聚合酶, Proofreading 酶和热启动抗体,对复杂模板可扩增 10kb 片段,简单模板可达 40kb 。

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谈一谈TaqDNA聚合酶的选择窍门欢迎咨询

常见的DNA聚合酶如Taq、Phanta、Pfu、KOD、Primerstar、Klenow、Bst、Phi29等等。根据耐热性来分可分为耐热酶和常温酶。耐热聚合酶如Taq、Pfu、KOD、Primerstar等,常温聚合酶包括Klenow、Bst、Phi29等。根据保真度来分,高保真聚合酶Pfu、KOD、Phanta等,普通聚合酶Taq等。

那么根据实验目的选择合适的TaqDNA聚合酶。比如:常规的PCR扩增和菌液鉴定,长度小于5kb的片段,保真度要求不高,使用TaqDNA聚合酶扩增即可。选用Mix的形式,混样更加简单,操作更加便捷。如果混样泡沫多,想灭掉泡沫的话,推荐大家使用Green Taq Mix。想要获得较高的产量,可以选择Taq Plus DNA聚合酶,相对于TaqDNA聚合酶扩增性能更强。
1
选择热启动酶降低非特异性扩增
在使用TaqDNA聚合酶进行扩增时,有时会出现非特异性扩增,可能的原因可以从模板、引物、体系、程序中一一排查。如模板是否被污染,引物特异性如何,Mg2+浓度偏高等等,其中一个不可忽视的原因是DNA聚合酶的种类是否合适。如果排查了其它原因仍旧有非特异性产物,可以选择热启动酶重新实验,即可有效减少或消除体系中其它产物的积累。常用的热启动酶分为两类:一类是化学法修饰的热启动酶,如Ace Taq ,预变性95℃5-10min即可释放酶活;一类是抗体法修饰的热启动酶,如Champagne Taq ,预变性95℃30s即可释放酶活。使用时注意预变性时间,方能获得满意的扩增效果。
2
选择Lamp扩增长片段
大于5Kb的长片段又该如何扩增呢?如果实验对保真度的需求不高,那么就可以使用LAmp DNA聚合酶。其保真度是Taq酶的6倍,可扩增超过20Kb的基因组、cDNA片段,对于低拷贝、低纯度、以及不同GC含量的模板都具有很高的成功率。
3
选择高保真酶快速扩增
如果实验对保真度要求较高,在选择TaqDNA聚合酶的时候就需要使用高保真酶,如Pfu、KOD、Primerstar、Phanta等。前三者都属于*代高保真酶,已在市场中广泛使用。

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金畔生物试剂,Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

高产量、平台通用的qPCR专用预混液

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

较高的扩增平台值:扩增产量大幅度提升,拥有较高扩增平台值

灵敏度与特异性:采用的Taq Pro DNA Polymerase是经过升级改造的、基于抗体法修饰的新一代热启动聚合酶,配以针对 qPCR 优化的合适Buffer以及特异性促进因子,有效避免引物二聚体和非特异性扩增的产生

广泛的平台适用性:特殊的ROX参比染料,适用于所有qPCR仪,无需在不同的仪器上调整ROX浓度

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

较高的扩增平台值

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

图1

 

以 Hela cDNA 为模板,使用 Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix(Vazyme #Q712) 预混液以及其他品牌染料法qPCR 试剂,在同样反应条件下扩增 6 个不同的基因。结果显示,在不同扩增体系上,与同类产品相比,Vazyme #Q712 预混液灵敏度高,扩增产物产量高,拥有较高的平台值。

 

灵敏度与特异性平衡

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

图2

 

图 A 是将 pUC19 质粒进行 8 个 10 倍梯度稀释,图 B 是根据图 A 的 CT 值得出的标准曲线。第 8 个梯度中质粒拷贝数浓度约为 6 copies/4 μl,使用 Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix(Vazyme #Q712) 预混液对各稀释梯度中的 pUC19 进行检测,每孔模板使用量为4 μl。结果显示,Vazyme #Q712 预混液在宽广的模板量区间内具有优异的线性关系,可以检测出个位数拷贝的待测模板,灵敏度较高。

 

图 C 是以HeLa 细胞cDNA为模板,使用Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix(Vazyme #Q712) 预混液以及其他品牌染料法 qPCR 试剂,在相同条件下测试24个体系,检测扩增特异性。统计结果显示:Vazyme #Q712预混液能够检测超过92%(22/24) 的目标基因。

 

平台通用

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

图3

 

使用 Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix(Vazyme #Q712) 在不同类型的 qPCR 仪(机 型:ABI Stepone、ABI QuantStudio 3、Roche LightCycler 480)上扩增基因,定量结果优异。说明Vazyme #Q712预混液仪器适用性广,无需针对不同仪器调整ROX浓度。

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix为SYBR GreenⅠ嵌合荧光法进行 qPCR 反应的专用预混液。本产品采用的Taq Pro DNA Polymerase是经过升级改造的、基于抗体法修饰的新一代热启动聚合酶,具有特异性强、检测灵敏度高、扩增产量高等诸多优点。配以针对qPCR优化的合适Buffer以及特异性促进因子,较大地提高了qPCR扩增产量,拥有较高平台值,适用于进行高特异性、高灵敏度的qPCR扩增。Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix含有特殊的ROX Reference Dye,适用于所有qPCR仪器,无需在不同的qPCR仪器上调整 ROX 的浓度。

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

-30 ~ -15℃避光保存,Master Mix解冻后可于2 ~ 8℃避光条件下稳定存放6个月;≤ 0℃运输。

-20℃存放18个月;37℃存放9天;25℃存放一个月;可冻融30次。

金畔生物试剂,Taq Pro HS Universal Probe Master Mix

Taq Pro HS Universal Probe Master Mix

通用型超敏高耐受探针法检测试剂

Taq Pro HS Universal Probe Master Mix

优异的扩增灵敏度:经过升级改造提升模板亲和力的新一代热启动DNA聚合酶,搭配精心优化的缓冲体系,提高了低浓度模板的检测灵敏度

强大的杂质耐受力:在血液相关的杂质样本中,能够保持良好的扩增性能

支持快速程序:兼容快速程序,提高检测效率

平台通用:适用于不同的qPCR仪器

Taq Pro HS Universal Probe Master Mix

Taq Pro HS Universal Probe Master Mix是一款适用于DNA模板(如DNA病毒)的探针法qPCR专用预混液。核心组分Taq Pro HS DNA Polymerase是基于抗体法修饰,经过升级改造提升模板亲和能力的新一代热启动DNA聚合酶。搭配针对qPCR系统优化的合适Buffer,显著提高了扩增特异性和低拷贝基因的检测灵敏度,能够在宽广的定量范围内得到优异的扩增线型,对靶基因进行准确定量、检测,重复性好,可信度高。对于模板类型、模板GC含量和引物Tm值等具有广泛的兼容性,同时具有良好的杂质耐受性能,适用多种检测场景。本产品是一款2 × 预混液,只需额外加入引物、探针、模板即可,使用方便,同时兼容快速程序,缩短检测时间。本产品中含有特殊的ROX Passive Reference Dye,适用于所有qPCR仪器,无需在不同的仪器上调整ROX的浓度。

Taq Pro HS Universal Probe Master Mix

组分

QN113-01

(500 rxn / 20 μl reaction)

QN113-02

(2,500 rxn / 20 μl reaction)

2 × Taq Pro HS Universal Probe Master Mix

5 × 1 mL

1 × 25 mL

Taq Pro HS Universal Probe Master Mix

-30 ~ -15℃保存。运输条件: ≤0℃。

 

金畔生物试剂,Taq Pro HS U+ Probe Master Mix

Taq Pro HS U+ Probe Master Mix

基于 Heat-labile UDG 防污染系统的超敏高耐受探针法检测试剂

Taq Pro HS U+ Probe Master Mix

优异的扩增灵敏度:经过升级改造提升模板亲和力的新一代热启动DNA聚合酶,搭配精心优化的缓冲体系,提高了低浓度模板的检测灵敏度

dUTP/UDG防污染系统:引入dUTP/Heat-labile UDG防污染系统,在室温条件下即可发挥作用,去伪存真,确保结果真实可靠

强大的杂质耐受力:在血液相关的杂质样本中,能够保持良好的扩增性能

支持快速程序:兼容快速程序,提高检测效率

Taq Pro HS U+ Probe Master Mix

1.优异的扩增灵敏度

Taq Pro HS U+ Probe Master Mix

分别以HCV质粒、λDNA为模板,使用Taq Pro HS U+ Probe Master Mix(Vazyme #QN112)预混液以及其他品牌探针法qPCR试剂,在同样反应条件下进行扩增。结果显示,与同类产品相比,Vazyme #QN112 预混液具有更高的扩增灵敏度。

 

2.强大的杂质耐受能力

Taq Pro HS U+ Probe Master Mix

针对血液样本的扩增,选择人类全血以及与血液保存的相关物质(EDTA、柠檬酸钠)作为杂质背景,使用Taq Pro HS U+ Master Mix(Vazyme#QN112)对模板进行扩增。结果可见,与同类产品相比Vazyme#QN112具有强大的杂质耐受能力,可应对血液提取样本的扩增。

 

3.支持快速程序

Taq Pro HS U+ Probe Master Mix

使用Taq Pro HS U+ Master Mix(Vazyme#QN112)预混液,分别以标准和快速程序对多个体系进行检测,由结果可知Vazyme#QN112可以兼容快速程序,满足快速检测要求。

Taq Pro HS U+ Probe Master Mix

Taq Pro HS U+ Probe Master Mix是一款针对于探针法qPCR的专用试剂。核心成分Taq Pro HS DNA Polymerase是基于抗体法修饰,经过升级改造提升模板亲和能力的新一代热启动DNA聚合酶。搭配系统优化的合适Buffer,显著提高了扩增特异性和低拷贝基因的检测灵敏度。对于模板类型、模板GC含量和引物Tm值等具有广泛的兼容性,同时具有良好的杂质耐受性能,适用多种检测场景。能够在宽广的定量范围内得到良好的标准曲线,对靶基因进行准确定量、检测,重复性好,可信度高。此外,TaqᅠProᅠHSᅠU+ᅠProbe Master Mix中引入了dUTP/Heat-labile UDG防污染系统,高效清除PCR产物的污染,保证结果的准确性。同时,本试剂兼容快速程序, 节省检测时间。

Taq Pro HS U+ Probe Master Mix

Taq Pro HS U+ Probe Master Mix

Taq Pro HS U+ Probe Master Mix

-30 ~ -15℃保存。运输条件: ≤0℃。

金畔生物试剂,Taq Pro HS Probe Master Mix

Taq Pro HS Probe Master Mix

超敏高耐受探针法检测试剂

Taq Pro HS Probe Master Mix

优异的扩增灵敏度:经过升级改造提升模板亲和力的新一代热启动DNA聚合酶,搭配精心优化的缓冲体系,提高了低浓度模板的检测灵敏度

强大的杂质耐受力:在血液相关的杂质样本中,能够保持良好的扩增性能

支持快速程序:兼容快速程序,提高检测效率

Taq Pro HS Probe Master Mix

Taq Pro HS Probe Master Mix是一款适用于DNA模板(如DNA病毒)的探针法qPCR专用预混液。核心组分Taq Pro HS DNA Polymerase是基于抗体法修饰,经过升级改造提升模板亲和能力的新一代热启动DNA聚合酶。搭配针对qPCR系统优化的合适Buffer,显著提高了扩增特异性和低拷贝基因的检测灵敏度,能够在宽广的定量范围内得到优异的扩增线型,对靶基因进行准确定量、检测,重复性好,可信度高。对于模板类型、模板GC含量和引物Tm值等具有广泛的兼容性,同时具有良好的杂质耐受性能,适用多种检测场景。本产品是一款2 × 预混液,只需额外加入引物、探针、模板即可,使用方便,同时兼容快速程序,缩短检测时间。

Taq Pro HS Probe Master Mix

Taq Pro HS Probe Master Mix

Taq Pro HS Probe Master Mix

-30 ~ -15℃保存。运输条件: ≤0℃。