标签： puromycin

Puromycin Dihydrochloride ；嘌呤霉素二盐酸盐

品牌：JinPan | 货号：IP1280-25mg

Puromycin Dihydrochloride ；嘌呤霉素二盐酸盐

产品简介

CAS 58-58-2
中文名称 嘌呤霉素二盐酸盐
英文名称 Puromycin dihydrochloride
别名 二氢氯化嘌呤毒素;Stillomycin
纯度 HPLC≥98%
单位 支
分子式 C22H31Cl2N7O5
分子量 544.43
外观（性状） White to light yellow Solid
储存条件 Powder : -20℃, 2 years;In solvent(母液): -20℃, 1 month; -80℃, 6 months
溶解性 Soluble in Water
EC EINECS 200-387-8
MDL MFCD00012691
SMILES OC[C@@H]1[C@@H](NC([C@@H](N)CC2=CC=C(OC)C=C2)=O)[C@H]([C@H](N3C=NC4=C3N=CN=C4N(C)C)O1)O.[H]Cl.[H]Cl
描述 Puromycin是一种抑制 protein synthesis 的氨基糖苷类抗生素。(Puromycin is an aminoglycoside antibiotic that inhibits protein synthesis.)
靶点 Bacterial
通路 Anti-infection
生物活性 Puromycin dihydrochloride是嘌呤霉素的二盐酸盐。 Puromycin是一种抑制 protein synthesis 的氨基糖苷类抗生素。[1-3]
In Vitro 嘌呤霉素在氨酰基-sRNA形成后阻断蛋白质合成，同时它导致小肽的积累。这两种效应似乎都是由于核糖体结合的肽基-sRNA的分裂，导致不完整肽链的释放[1]。嘌呤霉素是氨酰基-tRNA的3末端的类似物，通过与生长的多肽链非特异性连接而导致翻译过早终止。嘌呤霉素具有两种抑制作用模式。第一种是通过作为受体底物，其攻击P位点中的肽基-tRNA以形成新生肽。第二种是通过与氨酰基-tRNA竞争结合A位点[2]。当以最小量使用时，嘌呤霉素掺入新合成的蛋白质直接反映体外mRNA翻译的速率。嘌呤霉素免疫检测是放射性氨基酸标记的有利替代方案。它允许通过免疫荧光显微镜直接评估单细胞中的翻译活性，并通过荧光激活细胞分选直接评估异质细胞群[3]。
数据来源文献 [1]. Nathans D, et al. Puromycin inhibition of protein synthesis: incorporation of puromycin intopeptide chains. Proc Natl Acad Sci U S A. 1964 Apr;51:585-92.

[2]. Miyamoto-Sato E, et al. Specific bonding of puromycin to full-length protein at the C-terminus. Nucleic Acids Res. 2000 Mar 1;28(5):1176-82.

[3]. Schmidt EK, et al. SUnSET, a nonradioactive method to monitor protein synthesis. Nat Methods. 2009 Apr;6(4):275-7

规格 5mg 10mM*1mL in Water 10mg 25mg

Puromycin是一种抑制 protein synthesis 的氨基糖苷类抗生素。

使用本产品的应用案例（仅供参考）

In Vitro

Cell（OC cells，2 μg/mL  puromycin）

PCNP expression plasmid and empty vector, the PCNP shRNA (sh-PCNP group) and scramble shRNA (sh-Scb group) and were transfected into OC cells with Lipofectamine 3000 Transfection Reagent to construct stable cell lines. They were screened, respectively, by G418 (Solarbio, Shanghai, China) at a concentration  of 800 μg/mL and puromycin (Solarbio, Shanghai, China) at a concentration of 2 μg/mL. 

来源文献：Dong P, Fu H, Chen L, Zhang S, Zhang X, Li H, Wu D, Ji X. PCNP promotes ovarian cancer progression by accelerating β-catenin nuclear accumulation and triggering EMT transition. J Cell Mol Med. 2020 Jul;24(14):8221-8235. doi: 10.1111/jcmm.15491. Epub 2020 Jun 16. PMID: 32548978; PMCID: PMC7348179.

备注：
以上数据均来自公开文献, Solarbio暂未进行独立验证, 仅供参考。
These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

嘌呤霉素

品牌：JinPan | 货号：P8230-25mg

嘌呤霉素

产品简介

英文名称 Puromycin
CAS 58-58-2
别名 二盐酸嘌呤霉素；嘌呤霉素盐酸盐
单位 支
纯度 ≥99%
分子式 C22H29N7O5·2HCl
分子量 544.44
外观（性状） 白色至浅黄色粉末
储存条件 -20℃
危险代码 R:22
有效期 4年
溶解性 50 mg/mL in water
规格 25mg 100mg

说明：蛋白质合成抑制剂。抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。

嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。

嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。

溶解性：溶于水，参考浓度50mg/ml。

使用方法

1.建议使用浓度

哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定；

大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。

2.溶解方法

用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液，经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的储存液。

3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例）

嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线（kill curve）。

1） Day 1：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜；

2） Day 2：a）准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL，至少5个梯度）；b）往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基；之后37℃孵育细胞；

3） Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。

4） 根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基；

5） 每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非转导细胞的药物最低浓度。

4. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选

等转染含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。

1）细胞转染48h后，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。

注意：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。

2）每隔2-3天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。

3）筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。注意：每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。

4）转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中，用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放。

  备注：产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。

备注：
以上数据均来自公开文献, Solarbio暂未进行独立验证, 仅供参考。

These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

嘌呤霉素_抗生素（生化试剂）_生化试剂_索莱宝-专业生化试剂网上商城 (solarbio.com)

P8230，JinPan代理，Puromycin/嘌呤霉素

品牌：JinPan | 货号：P8230 有效期 4年
溶解性 50 mg/mL in water
别名 二盐酸嘌呤霉素；嘌呤霉素盐酸盐
英文名称 Puromycin
CAS 58-58-2
分子式 C22H29N7O5·2HCl
分子量 544.44
储存条件 -20℃
危险代码 R:22
纯度 PURITY: ≥99%
外观（性状） 白色粉末
单位 支
说明：蛋白质合成抑制剂。抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。
嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。
嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。
溶解性：溶于水，参考浓度50mg/ml。
使用方法
1.建议使用浓度
哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定；
大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。
2.溶解方法
用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液，经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的储存液。
3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例）
嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线（kill curve）。

1） Day 1：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜；
2） Day 2：a）准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL，至少5个梯度）；b）往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基；之后37℃孵育细胞；
3） Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。
4） 根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基；
5） 每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非转导细胞的药物最低浓度。
4. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选
等转染含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。
1）细胞转染48h后，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。
注意：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。
2）每隔2-3天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。
3）筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。注意：每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。
4）转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中，用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放。
备注：产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。