货号：MT13
线粒体膜电位检测试剂盒
MT-1 MitoMP Detection Kit
运输条件：室温
特点：
固定后仍可检测
荧光滞留性强
灵敏度高
选择规格：1set
产品概述
线粒体利用氧气合成ATP，从而产生细胞所需的能量，是重要的细胞器之一。线粒体活性低下和机能障碍与癌症、老化、阿尔茨海默病、帕金森病等神经变性疾病密切相关。因此，线粒体膜电位（MMP）作为线粒体相关疾病的一个有希望的靶点已被广泛研究。
产品特点
解决传统试剂的三个问题
观察线粒体膜电位时，使用JC-1、TMRE、TMRM，但由于PFA不可固定、容易淬灭，数据的再现性等问题。MT-1 MitoMP Detection Kit是克服了这些问题的线粒体膜电位的检测试剂。
并且，通过本试剂盒中包含的Imaging Buffer，可以在抑制了荧光背景和对细胞的损伤的状态下进行观察。
①固定后也可检测
由于微小的细胞状态的变化，也会造成线粒体膜电位发生变化，所以取得数据的重现性需要特别注意。通用的线粒体膜电位检测试剂（JC-1、TMRE）如果对细胞进行固定处理的话会失去荧光，所以需要使用活细胞进行迅速的测定。MT-1即使进行染色后进行PFA固定操作，也能保持荧光，因此可以进行高重复性的实验。
②可监控
没有进行药物刺激的细胞通过各种试剂染色，确认了荧光强度的变化。结果，JC-1和TMRE在染色后约10分钟左右荧光强度下降，MT-1仍保持了一定的荧光强度
③高灵敏度
线粒体膜电位的细微变化在JC-1中有难以检测的情况，在这种情况下，使用四甲基罗丹明乙酯（TMRE）监测MMP。MT-1可提供与TMRE同等的检测灵敏度。
与各种试剂的比较
实验例
1.通过去极化的实验例
通过线粒体去极化剂的cyanide-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone (FCCP)处理HeLa细胞，用该试剂观察膜电位的变化。
结果，确认了FCCP处理的细胞线粒体膜电位下降的情况。
2.凋亡诱导细胞线粒体膜电位的变化
预先在MT-1中染色的HL60细胞中添加Etoposide，诱导凋亡后，与Annexin V、FITC Conjugate一同染色，并通过流式细胞仪检测。
结果发现Annexin V-FITC产生的荧光强度变化（绿色荧光强度的增加）确认了凋亡的发生，以及从MT-1产生的荧光强度变化（红色荧光强度的降低）发现了线粒体膜电位的变化。
常见问题Q&A
Q1:使用荧光显微镜检测时需要注意什么？
A1:请尽量减少激发光照射时间并提高检测灵敏度。
细胞长期暴露于激发光内可能导致细胞损伤和荧光染料降解，请优化检测时间。
Q2：MT-1检测后可以固定吗？
A2：应使用4%多聚甲醛（PFA）固定，且不能与（Triton X-100、NP-40等）一起使用，因为这可能导致染泄漏。
Q3：固定后可以对细胞染色吗？
A3：由于MT-1在线粒体中的积累取决于线粒体膜电位，因此固定后不适用于染色。
Q4：是否需要做阳性对照？
A4：作为阳性对照，可在技术手册中找到使用FCCP（羰基氰化物-对三氟甲氧基苯腙）的实验例。
Q5：优化染色条件时，应使用何种浓度的MT-1染料
A5：MT-1染料的浓度建议稀释1000倍。但在优化染色条件时，请参考以下内容。
<荧光强度弱>
请优化以下浓度：稀释500-1000倍。
<观察到非特异性吸附>
请优化以下浓度：稀释1000至2000倍。
Q6:我可以使用缓冲液来制备MT-1工作溶液吗？
A6:可以使用Hanks的HEPES和HBSS。也可以使用MEM、RPMI和含10%FBS的MEM制备。
Q7：添加MT-1工作液后，可以不清洗直接上机检测吗？
A7：染色后，无需清洗即可观察样品。但我们不建议在不清洗的情况下长期观察它们，因为它们可能具有细胞毒性。
我们建议去除上清液并用培养基替换。
Q8：MT-1染色后，是否可以用PBS代替HBSS来清洗？
A8：我们建议使用HBSS来减少细胞损伤。如果您没有HBSS，我们建议使用培养基来代替清洗。
参考文献
N. Okada, T. Yako, S. Nakamura, M. Shimazawa, H. Hara, “Reduced mitochondrial complex II activity enhances cell death via intracellular reactive oxygen species in STHdhQ111 striatal neurons Q1 with mutant huntingtin”, 2021, doi:10.1016/j.jphs.2021.09.001.