货号：L248
细胞脂质过氧化物检测试剂盒
Liperfluo
储存条件：0-5度保存，避光，充氮气
运输条件：室温
分子式：C51H41N2O8P
分子量：840.85
特点：
特异性检测铁死亡相关的脂质过氧化
比BODIPY C11更适合于胞内定位
铁死亡常见指标之一
选择规格：50μg,50μg*5
关联产品TOP5
NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽
NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.4. Mito-FerroGreen 线粒体内亚铁离子检测
NO.5. ROS Assay Kit 活性氧检测
规格性状
性状：深红色结晶粉末或固体。
纯度（HPLC）：90.0%以上
核磁共振谱：符合一致性
<使用次数>每50µg可用5-50次
产品概述
Liperfluo是Spy-LHP的类似物，可用于检测脂质过氧化物 (LPO)，Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长)，因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团，因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光，但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。
特点：
1）能够成像和检测细胞中的脂质过氧化物
2）长波长激发，可以减少光损伤和自发荧光对细胞的影响
3）高度脂质过氧化物特异性
研究领域
在铁死亡研究中：
作为细胞死亡形式之一，在铁死亡研究中使用到Liperfluo
| 细胞种类
（铁死亡诱导剂） |
论文信息 |
| 人支气管上皮细胞（RSL3） | Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium. |
| 小鼠成纤维细胞(RSL3) | Oxidized arachidonic and adrenic PE s navigate cells to ferroptosis. |
| HeLa细胞(添Erastin或Brefeldin A) | Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells. |
原理
Liperfluo是Spy-LHP的类似物，可用于检测脂质过氧化物 (LPO)，Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长)，因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团，因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光，但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。
荧光特性
激发波长Ex：488 nm，发射波长Em：500-550 nm
操作步骤
1.在dish等容器中接种细胞并培养。
2.去除培养基后，用无血清培养基清洗一次。
3.加入合适浓度的Liperfluo工作液，在37℃培养30 min。
※请根据细胞种类，诱导药物等实验条件，摸索最佳的Liperfluo工作液浓度。
4.去除上清液后，用无血清培养基清洗2次。
5.用荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。
实验例
用激光共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞
1) 在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种HeLa细胞 (3.0×104个/孔、含血清MEM培养基)，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
2) 去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞1次。
3) 将200 μl用无血清MEM培养基稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。
4) 去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。
5) 均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的 t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。
6) 用共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。
用流式细胞仪检测HeLa细胞
1) 将HeLa细胞 (1.0×105个/孔、含血清MEM培养基) 接种至6孔板(Thermo公司) 中，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
2) 去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞1次。
3) 将2 ml用无血清MEM培养基稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入6孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。
4) 去除溶液，用2 ml HBSS清洗2次。
5) 均匀地加入2 ml用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP (tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。
6) 用胰酶消化细胞后，用含有血清的MEM培养基重悬细胞，移至管中并将培养基更换为HBSS。
7) 用流式细胞仪检测 (激发波长：488 nm，发射波长：515-545 nm)。
用Erastin诱导铁死亡细胞的荧光成像
1) 在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×105个/孔、含血清DMEM培养基)，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
2) 去除培养基，加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
3) 去除培养基，用200 μl HBSS清洗2次。
4) 去除HBSS，加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。
5) 去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。
6) 用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。
常见问题Q&A
Q1.文献实验方法：先加Liperfluo，后加药；说明书实验方法：先加药，后加探针， 哪种方法比较好？
A1: 都可以。
先加Liperfluo再加药
用共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞
（1）在μ-slide 8孔板中（ibidi公司）接种HeLa细胞（3.0×104个/孔、含血清MEM培养基），在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
（2）去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞一次。
（3）将200 μl无血清MEM培养基稀释后的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。
（4）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。
（5）均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。
（6）用共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。
先加药再加Liperfluo
（1）在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×105个/孔、含血清DMEM培养基)，
在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
（2）去除培养基，加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液，
在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
（3）去除培养基，用200 μl HBSS清洗2次。
（4）去除HBSS，加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液，
在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。
（5）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。
（6）用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。
Q2. Liperfluo如果按照文献进行，先加探针，后加药，荧光淬灭时间为2小时可能无法满足实验，希望延长荧光时间，是否有好的方法？或者是否可以加荧光防淬灭剂？
A2: 关于荧光抗淬灭剂：由于抗淬灭剂的作用原理，有可能无法在实验中使用。
其他的改善方法：
(1)如果褪色的原因是由光源照射造成的褪色。可以尝试减小光源强度进行观测。
(2)清洗操作后长时间放置可能会造成探针向细胞外漏出。可考虑不清洗直接观察。
Q3.Liperfluo由于是活细胞荧光探针，如果铁死亡发生，导致细胞膜破裂后，荧光是否存在？
A3:由于Liperfluo是活细胞探针，对死细胞无法发挥出探针的正常性能。
Q4：培养基中酚红或血清对实验有没有影响？此外，在背景高或荧光弱的情况下有没有改善意见？
A4:可用于酚红或含血清培养基。但是，如果背景高，请用PBS替换。
此外，当背景较高时，Liperfluo可能会被光自然氧化，培养时也请尽量遮光。
(溶解后请务必用铝箔等遮光)。
荧光强度弱的情况下，即使反应时间延长，背景也会变高，所以不推荐。
因此，建议调整设备 (荧光观察)的条件。
1.增强激发光的强度。
2.延长曝光时间。
Q5：悬浮和贴壁细胞都可以使用Liperfluo染色吗？是否可以染色固定细胞
A5:悬浮和贴壁细胞，都可以使用。
有实验经验的：HL-60细胞(悬浮细胞)，CHO细胞·SH-SY5Y细胞(贴壁细胞)等，固定的细胞不能染色。
参考文献
| 细胞种类 | 诱导剂 | 抑制剂 | Liperfluo终浓度和培养时间 | 检测仪器 | 期刊名 | 出版年 | 影响因子 | 论文题目(含原文链接) | 开放获取 |
| B16细胞(小鼠黑色素瘤细胞); HT-1080(人纤维肉瘤细胞) | Erastin; RSL3; IFNγ | Ferrostatin-1; Liproxstatin-1 | 10 μM; 37℃ 30 min or 1h | 流式细胞仪 | Nature | 2019 | 42.778 | CD8+ T cells regulate tumour ferroptosis during cancer immunotherapy | N |
| HBE(人支气管上皮样细胞) | RSL3 | Ferrostatin-1 | 10 μM; 30 min | 荧光显微镜 | The Journal of Clinical Investigation | 2018 | 11.864 | Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium | Y |
| RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) | RSL3 | Ferrostatin-1 | 10 μM; 30 min | 荧光显微镜 | Nature Chemical Biology | 2020 | 12.587 | Redox lipid reprogramming commands susceptibility of macrophages and microglia to ferroptotic death | N |
| MEF(小鼠胚胎成纤维细胞) | RSL3 | Liproxstatin-1 | 10 μM; 30 min | 荧光显微镜 | Nature Chemical Biology | 2016 | 12.587 | Oxidized arachidonic and adrenic PEs navigate cells to ferroptosis | N |
| NCI-ADR/Res (NAR) 人卵巢腺癌细胞 | RSL3; Arachidonic Acid | – | 10 μM; 30 min | 荧光显微镜 | Biomaterials | 2019 | 10.317 | Triggered ferroptotic polymer micelles for reversing multidrug resistance to chemotherapy | N |
| 4T1细胞(小鼠乳癌细胞) | RSL3 | – | 10 μM | 荧光显微镜 | ACS Applied Materials & Interfaces | 2019 | 8.758 | Boosting the Ferroptotic Antitumor Efficacy via Site-Specific Amplification of Tailored Lipid Peroxidation | N |
| BMDM(小鼠骨髓来源的巨噬细胞) | SiO2 & TiO2 nanoparticles | – | 20 μM | 流式细胞仪 | Particle and Fibre Toxicology | 2017 | 7.546 | SiO2 and TiO2 nanoparticles synergistically trigger macrophage inflammatory responses | Y |
| 3T3-L1 adipocytes(小鼠脂肪细胞) | GluOC(未羧基化的骨钙素) | – | – | 荧光显微镜 | Cell Death and Disease | 2018 | 6.304 | Osteocalcin triggers Fas/FasL-mediated necroptosis in adipocytes via activation of p300 | Y |
| Hacat(人永生化角质形成细胞) | 长波紫外线(UVA)照射 | – | 5 μM in PBS; 37℃ 30 min | 荧光显微镜 | Free Radical Biology and Medicine | 2017 | 6.170 | Blue light-induced oxidative stress in live skin | N |
| SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) | 24S-OHC(人24s羟基胆固醇) | – | – | 流式细胞仪 | Free Radical Biology and Medicine | 2015 | 6.170 | New aspects of 24(S)-hydroxycholesterol in modulating neuronal cell death | N |
| OEC-M1(人口腔上皮细胞) | Erastin; RSL3; 零价铁(ZVI)纳米颗粒 | Lipoxstatin, Ferrostatin-1,10-phenanthroline; DFO | 10 μM; 30 min | 荧光显微镜 | Biomaterials Science | 2018 | 6.183 | Assessment of zero-valent iron-based nanotherapeutics for ferroptosis induction and resensitization strategy in cancer cells | N |
| Murine T cells(鼠T细胞) | NKAP-deficient(NF-κB激活蛋白缺乏) | Ferrostatin-1 | 10 μM in HBSS; 37℃ 30 min | 流式细胞仪 | The Journal of Immunology | 2019 | 4.886 | Murine T Cell Maturation Entails Protection from MBL2, but Complement Proteins Do Not Drive Clearance of Cells That Fail Maturation in the Absence of NKAP | Y |
| THP-1(人髓系白血病单核细胞);(1×105 cells/mL) | AAPH(2,2′-偶氮二异丁基脒二盐酸盐) | H2 gas(氢气) | 5 μM; 30 min | 流式细胞仪 | Scientific Reports | 2016 | 3.998 | Molecular hydrogen regulates gene expression by modifying the free radical chain reactiondependent generation of oxidized phospholipid mediators | Y |
| PMVECs(肺微血管内皮细胞) | LPS(脂多糖) | Prdx6-D140A-knock-in mice | 10 μM; 30 min | 荧光显微镜 | Lung Cellular and Molecular Physiology | 2019 | 4.406 | Genetic inactivation of the phospholipase A2 activity of peroxiredoxin 6 in mice protects against LPS-induced acute lung injury | Y |
| HepG2(人肝癌细胞) | AAPH(2,2′-偶氮二异丁基脒二盐酸盐) | – | 10 μM; 30 min | 荧光显微镜 | Journal of Agricultural and Food Chemistry | 2019 | 4.192 | Novel Fluorescence-Based Method To Characterize the Antioxidative Effects of Food Metabolites on Lipid Droplets in Cultured Hepatocytes | N |
| 4T1细胞(小鼠乳癌细胞); HT1080(人纤维肉瘤细胞) | WO3/Pt nanoparticles | – | 20 μM; 37℃ 30 min | 荧光显微镜 | Nanotechnology | 2016 | 3.551 | WO3/Pt nanoparticles promote light-induced lipid peroxidation and lysosomal instability within tumor cells | N |
| SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) | AAPH(2,2′-偶氮二异丁基脒二盐酸盐) | – | 20 μM; 37℃ 15 min | 荧光显微镜/流式细胞仪 | RSC Advances | 2012 | 3.119 | A novel fluorescent probe with high sensitivity and selective detection of lipid hydroperoxides in cells | N |
| Burkitt’s Lymphoma(Burkitt淋巴瘤细胞) | Artesunate(青蒿琥酯); Erastin | DFO; Liproxstatin-1; Ferrostatin-1 | 5 μM in PBS; 37℃ 30 min | 流式细胞仪 | Biochemical and Biophysical Research Communications | 2019 | 2.985 | Artesunate activates the ATF4-CHOP-CHAC1 pathway and affects ferroptosis in Burkitt’s Lymphoma | N |
| Horse breed stallions(种马精子) | UV light; Fe | – | 1 μM; 37℃ 30 min | 流式细胞仪 | Animal Reproduction Science | 2019 | 1.660 | Effects of media and promoters on different lipid peroxidation assays in stallion sperm | N |
| Human hair(人头发) | UV radiation | – | – | 荧光显微镜 | Cosmetics | 2018 | – | Mechanism of Cuticle Hole Development in Human Hair Due to UV-Radiation Exposure | Y |
| HeLa(人宫颈癌细胞) | BFA, Erastin | Ferrostatin-1; Liproxstatin-1 | 5 µM | 荧光显微镜 | Communications Biology | 2018 | 4.165 | Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells | Y |
| THP-1(人髓系白血病单核细胞) | TBHB(叔丁基过氧化氢) | H2 gas(氢气) | 5 µM; 30 min | 流式细胞仪 | Canadian Journal of Physiology and Pharmacology | 2019 | 1.946 | Molecular hydrogen suppresses free radical-induced cell death by mitigating fatty acid peroxidation and mitochondrial dysfunction | N |
| HEI-OC1(耳蜗毛细胞) | RSL3 | DFO; Liproxstatin-1; Ferrostatin-1 | 5 μM; 37℃ 30 min | 荧光显微镜 | Journal of Cellular and Molecular Medicine | 2020 | 4.486 | Inhibition of ferroptosis protects House Ear Institute-Organ of Corti 1 cells and cochlear hair cells from cisplatin-induced ototoxicity | Y |
| SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) | 6-OHDA | Ferrostatin-1 | 5 μM; 37℃ 30 min | 荧光显微镜 | Molecular Neurobiology | 2020 | 4.500 | Activation of p62-Keap1-Nrf2 Pathway Protects 6-Hydroxydopamine-Induced Ferroptosis in Dopaminergic Cells | Y |
| HEI-OC1(耳蜗毛细胞);鼠新生耳蜗毛细胞 | RSL3 | Liproxstatin-1 | 5 μM; 37℃ 30 min | 荧光显微镜 | Oxidative Medicine and Cellular Longevity | 2020 | 5.076 | Liproxstatin-1 Protects Hair Cell-Like HEI-OC1 Cells and Cochlear Hair Cells against Neomycin Ototoxicity | Y |
| BV2 Microglial(小鼠小胶质细胞) | GQDs(石墨烯量子点) | DFO; Liproxstatin-1; Ferrostatin-1 | 10 μM; 37℃ 30 min | 荧光显微镜 | Particle and Fibre Toxicology | 2020 | 7.546 | Induction of ferroptosis in response to graphene quantum dots through mitochondrial oxidative stress in microglia | Y |
| HL-60(人骨髓细胞白血病细胞) | RSL3 | – | 10 µM; 1 h | 荧光显微镜 | Cell Death and Differentiation | 2020 | 10.717 | Oxygenated phosphatidylethanolamine navigates phagocytosis of ferroptotic cells by interacting with TLR2 | Y |
| Brain slices from LN229TAZ(4SA)(人脑胶质瘤切片) | CD45- | – | 10 μM; 37℃ 4 h | 荧光显微镜 | Nature Communications | 2020 | 12.121 | Neutrophil-induced ferroptosis promotes tumor necrosis in glioblastoma progression | Y |
| BeWo(人胎盘绒膜癌细胞) | PLA2G6敲除; GPX4敲除 | – | 10 μM; 37℃ 30 min | 荧光显微镜 | Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America | 2020 | 9.412 | PLA2G6 guards placental trophoblasts against ferroptotic injury | N |
| B16-F10(小鼠皮肤黑色素瘤细胞) | Erastin | – | 10 μM; 37℃ 30 min | 流式细胞仪 | iScience | 2020 | 4.447 | Chemically Programmed Vaccines: Iron Catalysis in Nanoparticles Enhances Combination Immunotherapy and Immunotherapy-Promoted Tumor Ferroptosis |
Y |