Kit | Lumiprobe官网中国授权代理商

CIL同位素代理,体内丙氨酸甲基标记试剂盒

中文名称	体内丙氨酸甲基标记试剂盒
英文名称	IN VIVO ALANINE METHYL LABELING KIT
分子式	Na
纯度：	98%

货号	规格	目录价/活动价
CDLM-8805-KIT	EA	¥17700.00 / 无

CIL同位素代理,EPA改良方法8280套件

中文名称	EPA改良方法8280套件
英文名称	EPA MODIFIED METHOD 8280 "STARTER KIT"
分子式	Na
纯度：	98%

货号	规格	目录价/活动价
EDF-8280-M-KIT	1 KIT	¥70100.00 / 无

CIL同位素代理,EPA方法8280套件

中文名称	EPA方法8280套件
英文名称	EPA METHOD 8280 "STARTER KIT"
分子式	Na
纯度：	98%

货号	规格	目录价/活动价
EDF-8280-KIT	1 KIT	¥59900.00 / 无

CIL同位素代理,美国EPA方法1614套件

中文名称	美国EPA方法1614套件
英文名称	US EPA METHOD 1614"STARTER KIT"
分子式	Na
纯度：	98%

货号	规格	目录价/活动价
EO-1614-KIT	1 KIT	¥32100.00 / 无

CIL同位素代理,美国EPA方法23套件

中文名称	美国EPA方法23套件
英文名称	US EPA METHOD 23 "STARTER KIT"

货号	规格	目录价/活动价
EDF-23-KIT	1 KIT	¥50000.00 / 无

CIL同位素代理,EN-1948 二噁英/呋喃套件

中文名称	EN-1948 二噁英/呋喃套件
英文名称	EN-1948 DIOXIN/FURAN "STARTER KIT"
分子式	Na
纯度：	98%

货号	规格	目录价/活动价
EDF-1948-KIT	1 KIT	¥50400.00 / 无

CIL同位素代理,EN-1948-4 WHO(DIOXIN-LIKE)PCB"STARTER KIT"

中文名称	EN-1948-4 WHO(DIOXIN-LIKE)PCB"STARTER KIT"
英文名称	EN-1948-4 WHO(DIOXIN-LIKE) PCB "STARTER KIT"
分子式	Na
纯度：	98%

货号	规格	目录价/活动价
EC-1948-4W-KIT	1 KIT	¥32100.00 / 无

CIL同位素代理,EN-1948-4 MARKER(非二噁英样)PCB"STARTER KIT"

中文名称	EN-1948-4 MARKER(非二噁英样)PCB"STARTER KIT"
英文名称	EN-1948-4 MARKER(NON-DIOXIN-LIKE)PCB "STARTER KIT"
分子式	Na
纯度：	98%

货号	规格	目录价/活动价
EC-1948-4M-KIT	1 KIT	¥31400.00 / 无

CIL同位素代理,EN-1948-4 PCB "STARTER KIT"

中文名称	EN-1948-4 PCB "STARTER KIT"
英文名称	EN-1948-4 PCB "STARTER KIT"
分子式	Na
纯度：	98%

货号	规格	目录价/活动价
EC-1948-4-KIT	1 KIT	¥57600.00 / 无

illumina MiSeq Reagent Kit v2 试剂盒

产品名称：illumina MiSeq Reagent Kit v2 试剂盒

产品货号：MS-102-2003

产品品牌： illumina

英文名称：MiSeq Reagent Kit v2 (500-cycles)

规格：

大输出：8.5 Gb（500个循环数MiSeq Reagent Kit v2）、5.1 Gb（300个循环数MiSeq Reagent Kit v2）、1.2 Gb（300个循环数MiSeq Reagent Micro Kit v2）、0.850 Gb（50个循环数MiSeq Reagent Kit v2）、0.5 Gb（500个循环数MiSeq Reagent Nano Kit v2）、0.3 Gb（300个循环数MiSeq Reagent Nano Kit v2）

每次运行获得的大read数多达1500万

核酸类型 DNA, RNA

试剂类型簇生成, 双端测序, 边合成边测序

技术测序

系统兼容性研究模式下的MiSeqDx ,研究模式下的MiSeq FGx, MiSeq , MiSeq

产品特点：

1.改良化学过程后，循环时间更快、片段更长、输出更多

2.双表面成像实现的片段数是v1试剂盒单表面成像的两倍

3.使用500次循环的试剂盒可扩展片段长度

4.选择较适合您应用的循环次数（50、300或500）

与升级的MiSeq系统结合使用，MiSeq试剂盒v2的双表面成像可使每个流动槽的通量翻倍。MiSeq试剂盒v2提供可生成较长片段长度的500次循环格式，以及广受欢迎的50次循环和300次循环格式。

MiSeq试剂盒v2有标准、Micro和Nano三种配置，能满足特定项目需求和可扩展输出量。

所有MiSeq试剂组件均采用RFID编码，并与MiSeq系统智能交互，以验证与用户定义的应用程序的兼容性。

该产品也可作为Illumina Advantage（TG）产品提供。Illumina Advantage大规模测序产品具有特定批次的出货和测试，延长的保质期和先进的变更通知，可提高实验室效率。

产品名称：illumina MiSeq Reagent Kit v2 试剂盒

产品货号：MS-102-2003

产品品牌： illumina

英文名称：MiSeq Reagent Kit v2 (500-cycles)

Cellartis 肝细胞培养Kit 现货

产品名称：Cellartis 肝细胞培养Kit 现货

产品货号：Y10050

品牌货号产品描述

CellArtis Y30010 DEF-CSTM 500 Culture System，DEF-CSTM 500培养系统，人iPS和人ES增殖用

CellArtis Y40010 iSTEMTm 小鼠ES培养基

CellArtis Y40030 GS2-M@小鼠 iPS/ES干细胞培养基

CellArtis Y40002 Neural Differentiation Medium: NDiff 227，神经分化培养基NDiff 227

CellArtis Y00185 Human iPS cell line P11025 Kit，人iPS细胞系P11025培养Kit

CellArtis Y40050 Human Neural Cortex Stem Cell Line Kit，人皮质神经干细胞培养Kit

CellArtis Y10050 Cellartis@ Cardiomyocytes (from ChiSPC22) Kit，人iPS细胞来源心肌细胞培养Kit

CellArtis Y10075 NDiff N2-AF ，人、小鼠ES细胞及神经干细胞培养基添加剂

CellArtis Y40110 STEM121，STEM121@标记人细胞质的小鼠单克隆抗体

CellArtis Y40410 STEM121与人体细胞，细胞质蛋白质反应

产品名称：Cellartis 肝细胞培养Kit 现货

产品货号：Y10050

产品货号：LL-0001 lifeline 成纤维培养液套装大量现货

产品名称: lifeline 成纤维培养液套装大量现货

产品货号：LL-0001

产品品牌：lifeline

产品产地：美国

产品规格：1KIT/套

用途范围：细胞培养

产品描述：

FibroLife ®无血清是用于成纤维细胞的无血清培养优化的确定的培养基。FibroLife ®无血清支持这些细胞在无血清环境的速率等于或大于补充有2%至10%FBS培养基更大的生长。

产品推荐：

产品名称	产品货号	产品规格
FibroLife成纤维细胞无血清培养套装	LL-0001	1kit
VascuLife EnGS内皮细胞培养套装	LL-0002	1kit
VascuLife VEGF内皮细胞培养套装	LL-0003	1kit
DermaLife K角质细胞培养套装	LL-0007	1kit
FibroLife S2成纤维细胞培养套装	LL-0011	1kit
RenaLife™上皮细胞培养套装	LL-0025	1kit
油红O染色试剂盒	LL-0052	1kit

常用抗生素小分子化合物Kit-1

品牌：JinPan | 货号：IK-AB-1-12*10mg

常用抗生素小分子化合物Kit-1

产品简介

单位	套
储存条件	-20℃
规格	1210mg 121mL(10mM) 12*50mg

CAS号	产品货号	产品名称	分子式	分子量	对应靶点	产品描述
69-52-3	IA0340	Ampicillin Sodium；氨苄青霉素钠	C₁₆H₁₈N₃NaO₄S	371.39	Bacterial	是一种广谱β-内酰胺类抗生素，可对抗多种革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。
3810-74-0	IS0360	Streptomycin Sulfate；硫酸链霉素	₂(C₂₁H₃₉N₇O₁₂)·3(H₂SO₄)	1457.38	Bacterial	是一种氨基糖苷类抗生素，能够抑制蛋白质的合成。
25389-94-0	IK0030	Kanamycin Sulfate；硫酸卡那霉素	C₁₈H₃₆N₄O₁₁·H₂SO₄	582.58	Bacterial	为氨基糖甙类广谱抗生素，抗菌谱和新霉素相似，主要与细菌核糖体30S亚单位结合，抑制细菌蛋白质合成。
56-75-7	IC0320	Chloramphenicol；氯霉素	C₁₁H₁₂Cl₂N₂O₅	323.13	Bacterial	是一种广谱抗生素。
108321-42-2	IG0010	G-418 Disulfate；遗传霉素	C₂₀H₄₄N₄O₁₈S₂	692.71	Bacterial	是一种氨基糖苷类抗生素，是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。通过抑制转座子Tn601，Tn5的基因，干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成，对原核和真核等细胞产生毒素。当neo基因被整合进真核细胞DNA后，则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA，从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达，使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。
13292-46-1	IR0110	Rifampicin；利福平	C₄₃H₅₈N₄O₁₂	822.94	Bacterial	是一种有效的广谱抗生素，具有抗流感病毒活性。
1397-89-3	IA0320	Amphotericin B；可溶性两性霉素B	C₄₇H₇₃NO₁₇	924.08	Fungal	是针对多种真菌病原体的多烯抗真菌 (fungal) 剂。它与麦角甾醇不可逆地结合，导致膜完整性破坏并最终导致细胞死亡。
1263-89-4	IP0080	Paromomycin Sulfate；硫酸巴龙霉素	C₂₃H₄₇N₅O₁₈S	713.71	Parasite	为氨基糖甙类广谱抗生素，对革兰氏阴性杆菌、抗酸杆菌均有良好抑菌活性。
1405-41-0	IG0770	Gentamicin sulfate；硫酸庆大霉素	C₂₁H₄₃N₅O₇·H₂SO₄	575.67	Bacterial	为氨基糖苷类抗生素。对各种革兰阴性细菌及革兰阳性细菌都有良好的抗菌作用，作用机制是与细菌核糖体30S亚单位结合，抑制细菌蛋白质的合成
1405-10-3	IN0130	Neomycin Sulfate；硫酸新霉素	C₂₃H₅₂N₆O₂₅S₃	908.88	Bacterial	是氨基糖苷类抗生素。
113-98-4	IP0140	Penicillin G Potassium；青霉素G钾	C₁₆H₁₇KN₂O₄S	372.48	Bacterial	是一速效青霉素家族抗生素。
64-75-5	IT0130	Tetracycline Hydrochloride；盐酸四环素	C₂₂H₂₄N₂O₈·HCl	480.9	Bacterial	是一种广谱抗生素。四环素通过阻止氨酰基-tRNA与细菌核糖体的结合来抑制细菌蛋白质合成。
本套装精选了数种实验室常备的抗生素，可用于鉴定药物靶标的相关研究。客户也可根据自己的需求灵活定制专属Kit。 1. 具有良好的生物活性，包含了抗细菌、抗真菌、抗原生动物的数种经典的实验室常用抗生素 2. 可用于鉴定、筛选等操作 3. 均为现货 4. 客户可根据自己的实验需求灵活定制Kit：规格、套装组成、产品种类、数量、形式（溶液/干粉）均可定制。

备注：

以上数据均来自公开文献, Solarbio暂未进行独立验证, 仅供参考。

These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

Bacstain- Bacterial Viability Detection Kit – CTC/DAPI试剂盒货号：BS09

细菌活力检测试剂盒-CTC/DAPI

Bacstain- Bacterial Viability Detection Kit – CTC/DAPI

商品信息

储存条件：4度保存，避光

运输条件：室温

1set

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生物被膜形成量/抑制能力检测试剂盒

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材料表面生物被膜形成能力检测试剂盒

Bacstain- CTC Rapid Staining Kit (for Microscopy)试剂盒

细菌染色– CTC快速染色试剂盒

Biofilm TestPiece Assay Kit货号：B606

材料表面生物被膜形成能力检测试剂盒

商品信息

储存条件：冷暗处保存

运输条件：常温

选择规格：

24tests

活动进行中

规格性状

产品概述

产品特点

检测实例

注意事项

Biofilm关联产品

参考文献

常见问题Q&A

活动进行中

订购满5000元，200元礼品等你拿

凑单关联产品TOP5

NO.1. Microbial Viability Assay Kit-WST 微生物活性检测

NO.2. Biofilm Formation Assay 生物被膜形成量/抑制能力检测

NO.3. Biofilm Viability Assay 生物被膜药物杀伤效果检测

NO.4. CTC 细菌计数、染色

NO.5. Bacstain- CTC Rapid Staining Kit 细菌活力检测

规格性状

・TestPiece Holder ×1

・Crystal Violet Solution 50 ml ×1

产品概述

生物被膜 (Biofilm)是一种主要由细菌体外的多糖组成的膜状复合体，一般在含水的潮湿固体表面形成。生物被膜被认为是医疗设备中的细菌污染、龋齿、牙周病和食物中毒的主要原因，同时也是工业领域中金属腐蚀、排水管道污染的罪魁祸首。因此，开发可以抑制生物被膜形成的材料成为近年来备受关注的一个研究领域。

Biofilm TestPiece Assay Kit可以通过结晶紫(Crystal Violet)染色法对材料表面的生物被膜形成能力进行评价。试剂盒中内含同仁化学研究所原创的材料样品检测片(TestPiece)固定盖。由于材料样品被固定在孔板盖上，因此不需要传统检测方法中的清洗和染色操作、避免了生物被膜脱落所造成的误差。而且，使用多孔板进行检测可以一次检测多个样品，大大提高了检测效率。

结晶紫(Crystal Violet)染色法

1982年，Pedersen通过对比结晶紫(Crystal Violet)的吸光度与各种微生物生成的生物被膜的干燥重量，发现两者呈线性相关。因此结晶紫染色法作为最经典的生物被膜检测法一直沿用至今。

TestPiece Holder上检测片的加载方法

产品特点

特点① 检测时间大幅缩短

传统检测方法的一大弊端就是需要一个孔一个孔的反复清洗操作。而本试剂盒采用全新的TestPiece Holder 可以更便捷的进行多样品对检测。

特点② 减小复孔间的孔间差

传统法将检测片放置于烧杯等容器的底部，清洗时非常容易造成生物被膜的脱落，进而导致检测结果的孔间差大、再现性差等问题。

本试剂盒采用TestPiece Holder固定检测片，操作过程中不易造成生物被膜的脱落，可以获得更稳定的实验数据。

与传统法的比较

菌种：Staphylococcus aureus NBRC13276

复孔数： n=8

检测实例

各种材料检测片表面的生物被膜形成的比较

使用本试剂盒数值化检测各种材料检测片(聚苯乙烯[PS]、聚丙烯[PP]、纤维增强复合材料[FRP]、不锈钢[SUS]、玻璃[GL]、硅材料[SLC])的金黄葡萄球菌的生物被膜形成量。

注意事项

Biofilm TestPiece Assay Kit(货号：B606)不含24孔板

本试剂盒内含TestPiece Holder(检测片固定盖)和染色试剂溶液(Crystal Violet溶液)，不包含检测用的24孔板。

推荐使用下面型号的24孔板。

Falcon® 24 Well Clear Flat Bottom, TissueCulture-Treated Multiwell Cell Culture Plate with Lid. Product Number: 353047.

或直接从同仁化学研究所购买配套用24孔板(限量销售)。

24-well Plate（Falcon Product Number: 353047）

专门用于Biofilm TestPiece Assay Kit(B606)检测的24孔板(8片装)，不单独销售。每购买一个Biofilm TestPiece Assay Kit (B606)，建议购买8个24-well Plate 。

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使用针形孔板盖(Pin Plate)检测生物被膜

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Biofilm Viability Assay Kit

Biofilm Formation Assay Kit的特长和操作

Biofilm Viability Assay Kit的特长和操作

参考文献

常见问题Q&A

Q：是否可以使用指定的24孔板以外的孔板？

A：虽然各个公司生产的24孔板在形状和尺寸上的差别很小，但是建议使用指定的Falcon^®24-well plate。TestPiece Holder是以该型号孔板为基准设计和生产的。

Q：使用过的TestPiece Holder是否可以回收再利用？

A：由于存在杂菌污染的可能性，不建议回收再利用。

Q：目前有过检测实例的菌种有哪些？

A：有过实际检测案例的菌种有：　・Staphylococcus aureus（金黄葡萄球菌）

・Pseudomonas aeruginosa（绿脓杆菌）

・Escherichia coli（大肠杆菌）

以上菌种的详细培养条件等请参考产品说明书。

转染试剂——HilyMax货号：H357

阳离子脂质体转染试剂

HilyMax

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

·脂质体转染试剂，毒性低

·胞慢病毒转染率高

·实验案例丰富

选择规格：

0.5 ml

1 ml

凑单关联产品TOP5

NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.2. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

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NO.5. Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 乳酸脱氢酶(LDH)检测

试剂盒内含

1 ml HilyMax Reagent 1 tube×1

Lipoform Buffer 1.0 mL×1

产品概述

HilyMax 是Dojindo公司研发的一种新型阳离子脂质体基因转染试剂，可用于高效转染多种细胞系及siRNA。HilyMax具有不受培养基中血清影响，转染过程不需更换培养基等特点。另外HilyMax试剂中不含影响转染效率的成分。

产品特性

应用：基因转染

特点：

1.实验操作简单

2.可用于贴壁细胞和悬浮细胞的瞬转及稳转。

3.适用于含血清的的培养基，毒性低，转染效率高且稳定。

4.适用于SiRNA的转染实验。

5.与同类进口产品相比，价格较低。

订购前请来电咨询各细胞系的相关条件优化

各细胞系GFP转染实例

实验操作

基本操作：转染步骤（24孔板）^a)

1．细胞准备

贴壁细胞：转染前一天，调整细胞浓度在0.5 ml的培养基中预先接种40%-90%的汇合细胞^b），转染前将细胞悬液接种至24孔板。

悬浮细胞：转染前一天，调整细胞浓度至每0.5 ml的培养基中0.1-1.6×10⁶的细胞，细胞悬液接种至24孔板。

2．形成DNA-HilyMax转染复合物^c）

添加不含血清的培养基至消毒离心管。^d)

添加质粒DNA（0.5-1，5μg）至离心管，使用移液器充分混合。

添加HilyMax至离心管，使用移液器充分混合，推荐的DNA（μg）与HilyMax的使用比率为1:2-1:6。

在室温下培养15分钟^e)

3．添加转染复合物至细胞：在步骤1准备好的培养板上，每孔中添加DNA-HilyMax转染复合物。

4．培养：在37℃下放置于CO₂培养箱培养。^f)

5．检测：确保转染后24至72小时，基因的活性

a)实验用量需要根据培养板大小而改变，请参考说明书“不同培养板转染状况”部分。

b)培养基中血清成分不会影响转染效果。

c)DNA及HilyMax的参考密度见表1。

d)培养基中的血清及抗生素会影响DNA-HilyMax转染复合物的形成。Opti-MEM, DMEM和MEM不会影响转染效果，请使用其他培养基来检验转染效率。

e)培养时间超过30分钟会造成转染效率偏低。

f)转染后更换培养基可以有效地提高转染效率，降低某些细胞系的毒性。

转染复合物中DNA与HilyMax的使用量：

表1：表明了不同细胞密度下推荐的DNA和HilyMax量。如果转染效率较低，请适当提高HilyMax的量；

如果毒性过高，请适当降低HilyMax的使用量。

表2：表明了不同大小培养板的系数。这些系数是在24孔板下计算得出的，表1中DNA和HilyMax的数据可以乘上这些系数。

不同培养板转染状况：

表3：不同培养板适合的培养基、DNA的使用量以及DNA和HilyMax混合比率列。

NIH3T3, HEK293, CHO, HeLa及COS-7推荐转染条件：

NIH3T3, HEK293, CHO, HeLa及COS-7在24孔板培养的最适转染条件显示在表4中，每种细胞系DNA和HilyMax溶液最适量及其密度以及转染实验的基本操作。

若使用其他培养板请参考表3。

转染后培养基的更换：

转染后更换培养基可以有效地提高NIH3T3, HEK293, CHO, HeLa及COS-7的转染效率（请见表图）。

这五种细胞系转染后2到4小时更换培养基可以获得更高的转染率。

表4：五种细胞的实例

24孔板上转染发生于80%汇合细胞中， DNA和 HilyMax 分别为 1μg和3-7μl。转染1至8小时后,更换新的培养基

有详细操作方案的细胞种类：

（欢迎来电或邮箱索取各细胞系操作优化条件）

・A549 Cell ・HepG2 Cell ・MDCK Cell ・Caco2 Cell ・K562 Cell

・Neuro2a Cell ・Vero Cell ・CHO Cell ・L6 Cell ・NIH3T3 Cell

・HEK293 Cell ・LNCap Cell ・PC3 Cell ・HeLa Cell ・MCF7 Cell ・PC12 Cell

技术情报

使用HilyMax及I社产品转染率对比

使用HilyMax及R社产品Luciferase表达比较

★细胞系：用于HEK293、NIH3T3、CHO、HeLa、COS-7转染效果较好，具体请参考下列图表（实验案例）

★DNA：用于纯化质粒DNA（A280/A260=1.7-1.9）推荐转染的DNA浓度为0.15-1.0 mg/ml。转染中DNA的最佳使用量取决于细胞的类型及细胞密度。

★HilyMax：转染时HilyMax的最佳使用量取决于细胞的类型及细胞密度。若HilyMax使用量过低会致使转染效率低，而使用量过高则会产生较强的毒性，请在第一次实验时把DNA（μg）与HilyMax的使用比率控制在1:1-1:6之间。

★细胞密度：推荐的转染细胞密度为40%-90%的汇合细胞，最佳细胞密度取决于细胞类型。

★转染后培养基的更换：在转染后更换培养基可以提高转染效率，还可降低一些细胞系的毒性。推荐转染2到4小时后更换培养基

HilyMax的使用准备:

添加1.0 ml Lipoform缓冲液于HilyMax试剂中，使用涡旋器振荡混合30秒。请检查HilyMax试剂是否完全溶解，如果溶液中仍有部分不溶残留物，需继续振荡或使用移液器充分混匀，直到完全溶解。

提醒：转染效率与细胞种类、细胞浓度以及DNA与HilyMax的混合比例等情况有关，请参照以下优化条件操作。

储存注意事项：

试剂盒保存在0-5℃

添加过Lipoform缓冲液的HilyMax溶液在-20℃下可以储存6个月。

若经常使用， HilyMax溶液可放置于在0-5℃下，请在1-2个月内用完。

解冻开启过的HilyMax溶液，需使用涡旋器和移液器使其充分混匀。

HilyMax溶液在反复冷冻和解冻后会有小部分出现不溶，但这并不会影响转染效果。

参考文献

1. Mammalian polymerase h promotes alternativeNHEJ and suppresses recombination, Nature, 2015, 518, 254-257

2. A combinatorial F box protein directed pathway controls TRAF adaptor stability to regulate inflammation,Nature Immunology, 2013, 14, 470-479

3. F-box protein FBXL2 targets cyclin D2 for ubiquitination and degradation to inhibit leukemic cell proliferation,Blood, 2012, 119(13), 3132-3141

4. Dual Roles of Notch in Regulation of Apically Restricted Mitosis and Apicobasal Polarity of Neuroepithelial Cells,Neuron, 2011, 69, 215-230

5. Facile target validation in an animal model with intracellularly expressed monobodies,Nature Chemical Biology, 2018, 14, 895-900

6. Living functional hydrogels generated by bioorthogonal cross-linking reactions of azidemodified cells with alkyne-modified polymers, Nature Communications, 2018, 9, 2195

7. Structural insights into the competitive inhibition of the ATP-gated P2X receptor channel,Nature Communications, 2017, 8(1), 876

8. Critical roles of nardilysin in the maintenance of body temperature homoeostasis,

Nature Communications, 2014, 5, 3224

9. Relative motions between left flipper and dorsal fin domains favour P2X4 receptor activation，Nature Communications, 2014, 5, 4189

10. Rhythmic binding of Topoisomerase I impacts on the transcription of Bmal1 and circadian period,Nucleic Acids Research, 2012, 40(19), 9482-9492

11. MEF/ELF4 transactivation by E2F1 is inhibited by p53, Nucleic Acids Research, 2011, 39(1), 76-88

12. CD52 as a molecular target for immunotherapy to treat acute myeloid leukemia with high EVI1 expression,Leukemia, 2011, 25, 921-931

13. Druggable negative allosteric site of P2X3 receptors, Proc. Natl. Acad. Sci., 2018, 115(19), 4939-4944

14. PARP-1-dependent recruitment of cold-inducible RNA-binding protein promotes double-strand break repair and

genome stability, Proc. Natl. Acad. Sci., 2018, 115(8), E1759-E1768

15. Enhancement of β-catenin activity by BIG1 plus BIG2 via Arf activation and cAMP signals,

Proc. Natl. Acad. Sci., 2016, 113(21), 5946-51

16. Transcriptome analysis of distinct mouse strains reveals kinesin light chain-1 splicing as an amyloid-β accumulation

modifier, Proc. Natl. Acad. Sci., 2014, 111(7), 2638-43

17. Arf guanine nucleotide-exchange factors BIG1 and BIG2 regulate nonmuscle myosin IIA activity by anchoring myosin

phosphatase complex, Proc. Natl. Acad. Sci., 2013, 110(34), E3162-70

18. EDEM Function in ERAD Protects against Chronic ER Proteinopathy and Age-Related Physiological Decline in

Drosophila, Developmental Cell, 2017, 41, 652-664

19. MicroRNA-200a promotes anoikis resistance and metastasis by targeting YAP1 in human breast cancer,

Clinical Cancer Research, 2013, 19(6), 1389-99

20. Long noncoding RNA ELIT-1 acts as a Smad3 cofactor to facilitate TGF-β/Smad signaling and promote

epithelial-mesenchymal transition, Cancer Research, 2019, 79(11), 2821-2838

21. Loss of NDRG2 Expression Confers Oral Squamous Cell Carcinoma with Enhanced Metastatic Potential,

Cancer Research, 2017, 77(9), 2363-2374

常见问题Q&A

Q1、基因转染后需要更换培养基吗？

A1、如果您想让细胞毒性更低或者转染效率更高一些，建议更换培养基。但是有些细胞（如CHO细胞）案例，更换培养基不会影响毒性和转染率。

Q2、转染效果不好的情况下，应当考虑调整哪些方面？（DNA量，HilyMax量，复合物形成比，时间等）

A2、<细胞毒性低>

转染效率极低的情况下，可以增加DNA量，或是DNA（μg）：HilyMax（μL）=1:5～1:9。

可以提高转染效率。

<细胞毒性高>

可以减少DNA量或HilyMax量。

Q3、说明书中写了保存条件为“冷藏”和“冷冻”两种。怎么保存比较好呢？一开始就冷冻，一直冷藏是不行的吗？

A3、未开封、未使用时请“冷藏保存”，试药和缓冲液混合溶解后请“冷冻保存”。即使在未开封的状态下冷冻保存，质量也没有问题，但是使用时需要将冷冻的Lipoform Buffer融化。

另外，溶解后如果在2~3周内用完的话，即使“冷藏保存”也不会影响性能。超过数周使用时，请务必“冷冻保存”。

Q4、DNA-Hilymax 转染复合物培养是否超过30分钟？

A4、超过30分钟的培养会造成过低的转染率。

Q5、DNA和Hilymax的量是否为最优比率？

A5、 DNA和Hilymax的量的比率会较大影响转染效率，请参考表1优化转染。某些条件下，增大DNA或HIlymax的使用量会提高转染效率，如果转染效率仍很低，那么优化后请改变DNA(ug)：Hilymax(ul)比率至1：7-1：9或把DNA量提高到1.5-2倍。若毒性过强，请降低Hilymax在DNA-Hilymax转染复合物中的比率。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06

脂滴荧光检测（深红色）

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red

商品信息

储存条件：在冷暗处保存

运输条件：室温

特点：

● 高特异性脂滴定位

● 可流式定量检测

● 多种颜色可供选择

选择规格：

1set

凑单关联产品TOP5

NO.1. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.3. Iron Assay Kit -Colorimetric- 组织总铁含量及二价铁含量检测

NO.4. Lipid Droplet Assay Kit-Blue 脂滴荧光检测（蓝色）

NO.5. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测

试剂盒内含

概述

同仁化学研究所研发的Lipid Droplet Assays Kit-Blue＆Deep Red试剂盒，与油红O和尼罗红不同，只需简单操作即可选择性的检测LDs。与尼罗红相比试剂盒中的染色剂，具有更好的选择性，从而将荧光背景降低到最小值。此外，试剂盒中的Loading Buffer可维持检测过程中细胞的状态完好。本试剂盒可使用流式细胞仪检测活细胞或固定细胞，也可用于荧光酶标仪进行高通量检测。

原理

脂滴(脂肪滴，Lipid droplets, LDs)由中性脂肪组成，主要包括甘油三酯和胆固醇酯，其外层被一层单层磷脂分子包裹。而且脂滴不仅在脂肪细胞中存在，在真核生物中也普遍存在。最新的研究表明，以前认为脂滴仅是一个简单的脂质储存器，但最近的研究表明其在调节脂质代谢¹⁾，自噬²⁾和细胞衰老³⁾等方面都起着重要作用，因此需要进一步详细地研究脂滴形成·成长·融合·分解的机制。Lipi系列探针是高脂肪亲油性小分子探针，可在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。Lipi探针染色后，无须洗涤即可观察到脂滴。

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

特点

特点1：定量专用试剂盒

试剂盒包含所需的工作液和缓冲液、可以简便实现定量脂滴。

特点2：大幅度缩短操作，活细胞也可以使用

Lipid Droplet Assay Kit中使用的荧光染料可用于活细胞和固定细胞。因此，与使用比色法试剂相比可以大大缩短检测所需的时间。此外，由于染料不会沉积在孔板上，所以可以提高实验的重现性。

实验例

实验例1：孔板检测实验例

将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到A549细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。

<检测条件>

Blue：Ex: 376 – 386 nm、 Em: 435 – 455 nm

Deep Red ：Ex: 623 – 633 nm、 Em: 649 – 669 nm

实验例2：流式细胞术的实验例

将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到HeLa细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。

< 检测条件>

Blue：Ex: 405 nm、 Em: 425 – 475 nm

Deep Red ：Ex: 640 nm、 Em: 650 – 670 nm

脂肪滴产品选择指南

	产品名称	规格	货号
成像(成像) 脂滴荧光探针	Lipi-Blue	10 nmol	LD01
	Lipi-Green	10 nmol	LD02
	Lipi-Red	100 nmol	LD03
	Lipi-Deep Red	10 nmol	LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Blue	1 set	LD05
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red	1 set	LD06

Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05

脂滴荧光检测（蓝色）

Lipid Droplet Assay Kit-Blue

商品信息

储存条件：在冷暗处保存

运输条件：室温

特点：

● 高特异性脂滴定位

● 可流式定量检测

● 多种颜色可供选择

选择规格：

1set

凑单关联产品TOP5

NO.1. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.2. Lipid Droplet Assay Kit-Blue 脂滴荧光检测（蓝色）

NO.3. Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red 脂滴荧光检测（深红色）

NO.4. Glucose 葡萄糖摄取检测

NO.5. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测

试剂盒内含

概述

原理

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

特点

特点1：定量专用试剂盒

试剂盒包含所需的工作液和缓冲液、可以简便实现定量脂滴。

特点2：大幅度缩短操作，活细胞也可以使用

实验例

实验例1：孔板检测实验例

<检测条件>

Blue：Ex: 376 – 386 nm、 Em: 435 – 455 nm

Deep Red ：Ex: 623 – 633 nm、 Em: 649 – 669 nm

实验例2：流式细胞术的实验例

< 检测条件>

Blue：Ex: 405 nm、 Em: 425 – 475 nm

Deep Red ：Ex: 640 nm、 Em: 650 – 670 nm

脂肪滴产品选择指南

	产品名称	规格	货号
成像(成像) 脂滴荧光探针	Lipi-Blue	10 nmol	LD01
	Lipi-Green	10 nmol	LD02
	Lipi-Red	100 nmol	LD03
	Lipi-Deep Red	10 nmol	LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Blue	1 set	LD05
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red	1 set	LD06

Lipi-Green试剂货号：LD02

脂滴检测（绿色）

Lipi-Green

商品信息

储存条件：在冷暗处保存

运输条件：室温

特点：

● 高特异性脂滴定位

● 可进行组织脂滴成像

● 多种颜色可供选择

选择规格：

10nmol

凑单关联产品TOP5

NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.2. Calcein-AM/PI Double Staining Kit 活死细胞双染

NO.3. Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric- 细胞凋亡检测

NO.4. DALGreen – Autophagy Detection 细胞自噬荧光探针

NO.5. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽

概述

Lipi系列探针是高脂肪亲脂性小分子探针，其在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。活细胞和固定细胞中的脂滴都可以使用本试剂清楚地观察。

原理

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

脂滴的染色例

在活细胞状态下，用油酸诱导HeLa细胞后，用不同颜色的Lipi系列荧光探针检测

检测条件：

* Lipi-Blue ：Ex： 405 nm, Em： 450–500 nm

* Lipi-Green：Ex： 488 nm, Em：500–550 nm

* Lipi-Red：Ex： 561 nm, Em： 565–650 nm

* Lipi-Deep Red：Ex： 640 nm, Em： 650–700 nm

染色条件：

在HeLa细胞培养基中加入200 μmol/l油酸，过夜培养后，用PBS清洗细胞，并分别加入不同颜色的Lipi探针(Lipi-Blue/Green/Deep Red：0.1 μmol/l、Lipi-Red： 1 μmol/l) 染色15 min后观察。

如何制备油酸溶液

请参考Q&A“油酸溶液的制备和加入细胞的方法”。

与竞争品比较

Lipi系列荧光探针大幅度地改善了现有脂滴染色试剂存在的问题 (如选择性，滤波器的适应性，荧光滞留性)。而且 Lipi系列荧光探针也适用于多重染色实验，可选颜色更多。

同仁化学试剂

其他品牌（T公司）

Lipi-Blue

Lipi-Green

Lipi-Red

Lipi-Deep Red

Oil Red O

(比色)

Nile Red

试剂B

活细胞染色

〇

固定细胞染色

〇

对脂肪滴的选择性
(低背景)

〇

△

与其他试剂的共染色*1

〇

〇^*2

〇

n.d.

×^*3

〇

活细胞内的滞留性(24h)

〇

n.d.

*1. 关于共染色时推荐的荧光滤光片，您可以参考网页下方Q&A“共染时推荐的荧光滤光片”。

*2. 与绿色荧光共染色时，推荐使用550 nm以下的绿色荧光滤光片。

*3. 用GFP的滤光片(500~540 nm)时会串色。

产品特点

特点1：与抗体检测方法高度相似

用4％PFA固定HepG2细胞后，用100 nmol/l Lipi-Green染色。然后在脂滴膜上用抗ADFP抗体荧光标记，免疫染色，该抗体可以特异性标记脂滴膜上的蛋白质 (Adipophilin; ADFP)。实验证明Lipi-Green与脂滴上蛋白质ADFP的定位高度相关。

<检测条件>

Lipi-Green：Ex：405 nm / Em:450-500 nm，

抗ADFP抗体(Alexa Fluor 647)：Ex：640 nm / Em:650-700 nm

特点2：高特异性定位脂滴

在HeLa活细胞中加入油酸，并用100 nmol/l Lipi-Green和100 nmol/l Nile Red（T公司）共染。右下图中黄色荧光部分为Lipi-Green 和Nile Red共染上的部分，结果显示Nile Red会染上脂滴以外的其它细胞质。

<检测条件>

Lipi-Green： Ex: 488 nm / Em: 500 – 550 nm

Nile Red：Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

特点3：荧光在细胞中滞留时间长

分别用Lipi系列、Nile Red和市售的试剂B染色HepG2细胞，观察在培养30 min和24 h时的荧光图像。

实验证实Lipi-Blue和Lipi-Green在培养24 h后虽然荧光强度有所降低，但仍有荧光。而Lipi-Red，Lipi-Deep Red，Nile Red和市售试剂B在培养24 h后几乎无荧光，不适合长时间的实时成像观察。

实验例

实验例1：脂肪细胞的脂滴成像

用Lipi系列染色3T3-L1前脂肪细胞，可以清楚地检测出脂肪细胞中的脂质。

<脂肪细胞染色实验例>

(1)将3T3-L1细胞(1.5×10⁴cells/孔)接种在µ-Plate 96孔板（ibidi）的各孔中，并在37℃ 5% CO₂培养箱内培养。

(2)按照常规方法诱导分化为脂肪细胞。

(3)去除上清液，用DMEM（25 mmol/l葡萄糖, 10% FBS, 无酚红）洗涤两次。

(4)加入用DMEM（25 mmol/l葡萄糖，10％FBS，无酚红）制备的每种染料的工作溶液，并在37℃下培养24 h。

(5)用荧光显微镜观察。

※试剂浓度：各2.5 µmol/l

实验例2：脂肪组织的脂滴成像

用4%PFA固定小鼠肝脏脂肪组织(冰冻切片)后用Lipi系列染色，比较幼鼠(6周龄)和老年小鼠(31周龄)的脂滴成像图像，发现肝脏脂肪组织中的脂滴量有很大差异。

<组织样品的染色实验例>

(1)向小鼠肝脏脂肪组织(冰冻切片)中加入4%PFA(PBS)，在室温下静置5 min。

(2)用PBS清洗后，加入各浓度的Lipi系列working solution（PBS），在4℃下静置24 h。

(3)用PBS清洗后，用落射型荧光显微镜进行荧光观察。

※工作液浓度：2.5 µmol/l(Lipi-Blue、Lipi-Green、Lipi-Deep Red)、25 µmol/l(Lipi-Red)

实验例3：利用高内含成像技术对药物引起的脂质性肝脏毒性的研究

将普萘洛尔（交感神经β受体阻断剂）加入人肝癌细胞系（HepG2细胞）后，用荧光显微镜观察脂肪滴的变化。通过荧光图像中脂肪滴的数量、面积和荧光强度的变化分析脂肪滴的积累情况。

脂肪滴的荧光成像

1661310799(1).jpg

细胞核(Blue)： Ex. 385 nm/Em. 460 nm
脂肪滴 (Green)：Ex. 475 nm/Em. 535 nm

药物处理对脂肪滴积累的分析

通过分析荧光图像中的细胞数量和脂肪滴的面积、数量和荧光强度来了解细胞积累脂肪滴的情况。结果显示，脂肪滴的数量和面积随着普萘洛尔浓度的增加而上升，在浓度超过20μmol/l的条件下，脂肪滴的形成非常明显。DS-Qi2荧光显微镜可在一次拍摄中捕捉到广泛的细胞区域，而NIS-Elements软件的EDF模块可对所有脂肪滴进行更详细的定量数据统计分析。

1661310898(1).jpg

<检测仪器>

高内涵成像系统(HTC)

(尼康：https://www.microscope.healthcare.nikon.com/zh_CN/products/high-content-imaging)

“有关染色操作、详细的分析方法等请参考尼康网站的 “Application Notes: Hepatotoxicity test of drug-induced lipidosis using high-content imaging”。

Lipi系列荧光图谱

脂肪滴产品种类的检测方法

	产品名称	规格	货号
成像(成像) 脂滴荧光探针	Lipi-Blue	10 nmol	LD01
	Lipi-Green	10 nmol	LD02
	Lipi-Red	100 nmol	LD03
	Lipi-Deep Red	10 nmol	LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Blue	1 set	LD05
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red	1 set	LD06

常见问题Q&A

Q1：油酸溶液的制备和加入细胞的方法

A1：我们按照以下步骤制备和使用油酸溶液。
<油酸储存溶液>
必要的试剂
·BSA(牛血清白蛋白)
·油酸
·0.1 mol/l Tris-HCl(pH8.0)
制备步骤
1)在0.1 mol/l Tris-HCl（pH8.0）中加入BSA并溶解（BSA：浓度0.14 g/ml）。
2)在容器(一次性的离心管)中加入油酸后，加入步骤^1）得到的BSA溶液，使用涡旋振荡器进行混合(油酸浓度：4 mmol/l)。*1
3)用孔径为0.22 µm的注射式过滤器(PTFE)过滤步骤²⁾的混合溶液。
4)每次使用后冷藏保存。*2
* 1 油酸和BSA溶液混合可能导致液体混浊，继续摇动让油酸和BSA形成复合物使混浊会消失。
* 2 将所需量的油酸储备溶液加入到实验使用的培养基中，用于将油酸加入到细胞中。
<加入细胞的方法>
1)将细胞在37℃ 5%CO₂培养箱内培养24 h。
2)用加入了油酸储备溶液的培养基(油酸的终浓度200 µmol/L)替换，再培养24 h。
3)然后按照说明书对脂滴进行荧光染色观察。

Q2：共染时推荐的荧光滤光片。

Q3：检测不到荧光信号的应对方法是什么？

Q4如果没有检测到荧光信号，可能会有几个因素。
请确认以下内容，并根据情况考虑优化条件。
1.激发·发射波长与染料的荧光特性不一致。
确认说明书上的荧光图谱和您仪器的激发和发射波长是否匹配。
2.染色条件不是最合适的。
[试剂浓度]
确认工作液的浓度是否在以下范围内。
Lipi-Blue，Lipi-Green：0.1-0.5μmol/l
Lipi-Red：1-5μmol/l
*如果在上述条件下仍未检测到荧光信号，请提高染色浓度。
Lipi-Blue，Lipi-Green：1-2μmol/l
Lipi-Red：10-20μmol/l
[染色时间]
-一般是30min，如没有荧光信号可以延长染色时间至1-2 h。
3.固定条件不适合。
根据细胞种类不同，染色前后的固定操作可能会导致无法染色或灵敏度减弱。
在这种情况下，“请参考Q&A：是否可以对固定细胞进行染色？。
4.脂滴小，难以确认。
根据细胞的不同，可能会有脂滴很小难以确认的情况。
这种情况下，我们建议在高倍率的显微镜下确认，或用油酸处理细胞作为阳性对照进行评估。

Q4：是否可以对固定细胞进行染色?

A4：可以染色，固定细胞的染色步骤有以下注意事项：
※请用多聚甲醛 (PFA) 固定细胞，不建议用甲醇等醇类固定细胞，因为可能会影响脂滴的结构。
※部分细胞种类染色后，如果在固定细胞过程中出现无染色或染色强度不够的情况，需要摸索最佳固定条件。
○细胞染色后固定实验例 (以HepG2细胞为例)
1. 将HepG2细胞接种在µ-Slide 8孔板上，并在37℃ 5% CO2培养箱中过夜培养。
2. 去除培养基，用PBS清洗2次。
3. 在细胞中加入用PBS配制的Lipi工作液，在37℃培养箱中培养15 min。
4. 去除上清液，用PBS清洗2次。
5. 加入4% PFA (在PBS中)，在室温固定5 min。
6. 去除上清液，用PBS清洗后，在荧光显微镜下观察。
○细胞染色前固定实验例 (以HeLa细胞为例)
1. 将HeLa细胞接种在µ-Slide 8孔板上，并在37℃ 5% CO2培养箱中过夜培养。
2. 去除培养基，用PBS清洗2次。
3. 加入4% PFA (在PBS中)，在室温固定5 min。
4. 去除上清液，用PBS清洗2次。
5. 在细胞中加入用PBS配制的Lipi工作液，在37℃培养箱中培养30 min。
6. 去除上清液，用PBS清洗后，在荧光显微镜下观察。

Q5：Lipi-Green可以用流式细胞仪检测吗？

A5：Lipi-Green不能用于流式，但Lipi-Blue或Lipi-Deep Red可以用。

我们还特别准备了可以便于定量检测的试剂盒。

产品名称货号

Lipid Droplet Assay Kit – Blue LD05

Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red LD06

Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒货号：C542

活死细胞双染试剂盒

Calcein-AM/PI Double Staining Kit

商品信息

储存条件：-20度保存

运输条件：室温

选择规格：

500 tests

3000 tests

凑单关联产品TOP5

NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.2. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.3. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.5. ROS Assay Kit 活性氧检测

试剂盒内含

500 次 3000 次

・Calcein-AM Reagent 200 μg x 1 1 mg x 1

・PI Stock Solution (1.5 mmol/l) 200 μl x 1 1 ml x 1

・DMSO 200 μl x 1 1 ml x 1

产品概述

Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒内含两种染料：Calcein-AM和Propidium Iodide (PI)。这个试剂盒可在荧光显微镜下同时观察在同一个细胞培养皿中的活细胞和死细胞。Calcein-AM可透过细胞膜，通过活细胞内的酯酶作用脱去AM基团，产生的Calcein (钙黄绿素) 发出强绿色荧光，因此活细胞在荧光显微镜下可被检测到绿色荧光。另一方面PI可以通过受损的细胞膜进入到死细胞内并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光，因此死细胞会被检测到红色荧光。除了用荧光显微镜外，也有报道可以用流式细胞仪和荧光酶标仪来进行定量检测。

荧光特性

Calcein-AM : λex=490 nm , λem=515 nm

PI : λex=530 nm , λem=580 nm

染色例

细胞染色实例

（a）（b）（c）

a) Calcein-AM染FTC细胞（活细胞单染）

b) PI染HCT116细胞（死细胞单染）

c) Calcein-AM、PI染MHD-1 细胞（活死细胞双染）

最佳浓度摸索

由于不同细胞种类、细胞浓度的染色条件不同，我们建议自行摸索一下Calcein-AM和PI的最适浓度。

Calcein-AM和PI的最佳浓度是根据不同的细胞种类而定，通过以下的操作，我们可以找到不同细胞染色试剂的最佳浓度：

1. 通过在0.1%皂苷或0.1-0.5%毛地黄皂苷中培养10 min或通过在70%乙醇中培养30 min制备死细胞。

2. 用0.1-10 μM PI溶液染死细胞，以便找到仅针对细胞核染色而不对细胞质染色的PI浓度。

3. 用0.1-10 μM Calcein-AM溶液染死细胞，以便找到不对细胞质染色的Calcein-AM浓度，再以此浓度的Calcein-AM对活细胞染色以检验活细胞是否被染色。

操作步骤

以HeLa细胞为例

制备1 mmol/l的Calcein-AM储存液

【500 次】

将200 μl DMSO加入到含200 μg Calcein-AM粉末的管中，用移液器吹打溶解。

【3000 次】

将1 ml DMSO加入到含1 mg Calcein-AM粉末的管中，用移液器吹打溶解。

※Calcein-AM储存液需要避光，在-20℃密封保存。

制备染色工作液

将Calcein-AM储存液和PI储存液恢复至室温后使用。

在5 ml的PBS（-）中加入10 μl Calcein-AM储存液和15 μl PI储存液，混匀制成工作液。此时Calcein-AM的浓度为2 μmol/l，而PI的浓度为4.5 μmol/l。

染色步骤

1、用Trypsin-EDTA消化细胞。

2、通过离心收集细胞（1,000 rpm，3 min）。

3、去除上清液，加入PBS（-）制备细胞悬液（10⁵ – 10⁶ cells/ml为宜）。

4、重复步骤2和步骤3数次以消除培养基中的酯酶活性。

5、取100 μl 染色工作液与200 μl 细胞悬液混合，在37℃培养15 min。

6、在490±10 nm激发波长下同时观察黄绿色荧光的活细胞和红色荧光的死细胞。另外用545 nm激发波长单独观察死细胞。

注意事项

1、由于本试剂盒中的Calcein-AM Reagent 粉末和PI Stock Solution量很少，有可能会粘在盖子或管壁上，开封前请先涡旋以使其振落下来。

2、由于Calcein-AM储存液对潮气敏感，请在使用后密闭Calcein-AM储存液的盖子。如果不能一次用完，建议分装保存，例如分装成10 μl/管，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。

3、配制好的染色工作液请在当天使用。

4、 PI有疑似致癌性，使用前应注意以下几点：

1）使用时请带好手套，口罩，防护眼镜等，不要接触到或呼吸到。

2）当PI不慎接触到皮肤时，请立刻用大量的水冲洗。

3）处理方法

清洗容器的清洗液和废液请按照实验室的有毒有害物质的处理方法进行处理，或按照以下方法处理：

・用UV照射的方法进行分解

・用次氯酸钠氧化分解后，进行中和处理

Carboxy-PTIO试剂货号：C348

2-(4-Carboxyphenyl)-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide, sodium salt

CAS号：148819-93-6

商品信息

储存条件：-20度保存,避光

运输条件：室温

分子式：

C₁₄H₁₆N₂NaO₄

分子量：

299.28

选择规格：

10mg

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Glutamate Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光，防潮

运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamate的定量

选择规格：

1set

凑单关联产品TOP5

NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. Glutamine Assay Kit-WST 谷氨酰胺的定量检测

NO.3. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.5. Mito-FerroGreen 铁离子荧光探针

试剂盒内含

产品概述

谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成，而且还作为神经递质发挥重要作用，谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道，胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能，而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡，近年来针对xCT的癌症研究越来越多。

Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量，谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。

操作步骤

　只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。

实验例

标准曲线的实验例：

样品中的谷氨酰胺浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酰胺标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酰胺浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

据报道通过弹性蛋白，抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡，即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中，确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示，通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少，抑制胱氨酸的摄取，从而导致谷胱甘肽的量减少。

Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例：

将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后，确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。

结果显示，SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少，细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。

<使用产品>

· 细胞内GSH：GSSG/GSH Quantification Kit II（货号：G263）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

· 细胞内ROS：ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-（货号：R252）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

· 细胞内ATP：ATP Assay Kit-Luminescence（货号：A550）

· 细胞内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（货号：K261）

<实验条件>

细胞：A549细胞 (1 x 10⁶ cells) 　药物处理时间：48 h

参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma“.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量是多少？

A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

Q2：配制后的Working solution可以保存多久？

A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

※Working solution配制后，避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。

Q3：是否可以定量D-Glutamate？

A3：该试剂盒是用于L-Glutamate定量，无法定量D-Glutamate。

Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？

A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。

Q5：待测样品可以保存吗？

A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6：为什么我的样品孔没有显色？

A6：样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。

Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268

谷氨酰胺定量检测试剂盒

Glutamine Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光，防潮

运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamine的定量

选择规格：

1set

凑单关联产品TOP5

NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.3. Glutamate Assay Kit-WST 谷氨酸的定量检测

NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.5. Mito-FerroGreen 铁离子荧光探针

试剂盒内含

产品概述

谷氨酰胺是TCA循环的中间体α-酮戊二酸的主要来源，并且是用于核酸和其他氨基酸合成及能量产生的重要物质。根据文献报道特别是在癌细胞中，谷氨酰胺作为底物可促进Glutaminolysis的生成，而Glutaminolysis是产生α-酮戊二酸的途径之一。同时Glutaminolysis还可以消除活性氧并减少氧化型谷胱甘肽。

Glutamine Assay Kit-WST是用于定量检测谷氨酰胺的试剂盒。无论是培养基内还是细胞内的谷氨酰胺均可以通过WST的还原反应进行定量，可检测的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酰胺进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酰胺标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酰胺的浓度。

操作步骤

*向谷氨酰胺标准溶液和含有谷氨酰胺酶的样品孔中加入谷氨酰胺酶溶液，并在样品(不含谷氨酰胺酶溶液)的每个孔中加Reaction Buffer。

由下式算出检测样品中的谷氨酰胺浓度。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

实验例

标准曲线的实验例：

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量。

A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 12个样品(参照下图)

谷氨酰胺标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

＊当n=3时，至少需要240 μl(每孔40 μl×6孔)。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

Q2：配制后的Working solution可以保存多久？

A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

Q3：是否可以定量D-Glutamine？

A3：该试剂盒是用于L-Glutamine定量，无法定量D-Glutamine。

Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？

A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酰胺浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。

Q5：待测样品可以保存吗？

A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解液样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6：为什么我的样品孔没有显色？

A6：样品中的谷氨酰胺浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酰胺浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酰胺浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酰胺浓度调整到最低检测限以上。

Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291

Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

Iron Assay Kit -Colorimetric-

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 适合组织检测

● 配有标准品，可定量二价、三价铁含量

● 吸光度法

选择规格：

50tests

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NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.4. ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- ROS检测

NO.5. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽

试剂盒内含

产品概述

铁是生物体内最重要的金属元素之一，生物体内铁元素的含量虽少，但有着重要的生理作用。近年来，随着铁死亡概念的提出，细胞内铁离子的代谢过程的研究逐渐成为了研究热点。同仁化学研究所开发的 Iron Assay Kit-Colorimetric-试剂盒是一套操作简便的比色法铁离子检测试剂盒。与其他市面上的检测试剂盒相比，可以在更短的时间内进行快速检测。通过比较组织裂解液中的铁离子探针 3-(2-Pyridyl)-5,6-bis(5-sulfo-2-furyl)-1,2,4-triazine, disodium salt的吸光度与还原成二价铁离子的三价铁标准品的吸光度，即可确定组织样品中的二价铁含量。同时，还可以通过试剂盒中的还原剂将样品中的三价铁还原成二价铁，以确定总铁含量，进而计算出样品中三价铁的含量。

原理

金属离子选择性

加标回收实验

实验例

组织样品中的Fe²⁺和 Fe³⁺的检测

1. 称量 100 mg肝脏组织。

2. 加入 1 ml冷 PBS，移液器吹打 20次， Vortex振荡 10 s 14,000 RPM离心 4 min，去除上清。

3. 将样品转移至研钵，加入液氮充分研磨成粉末后，加入 1.3 ml Assay Buffer，回收至微管中。

4. 将含有样品的微管置于超声波水浴中 5 min。（为防止样品温度上升，每 1 min间隔置于冰浴上 20 s）。

5. 16,000 g离心 10 min，除去不溶物。

6. 取 1300 μl上清液，每管分别加入 400 μl上清液，制成二价铁样品、总铁样品、样品空白。

7. Standard管中加入 Reducer solution。（参考图 2 H管 30 μl、 G~C管 20 μl、 B管 40 μl、 A管 20 μl）。

二价品样品管中加入 20 μl Assay Buffer。

总铁样品管中加入 20 μl Reducer solution。

样品空白管中加入 20 μl Assay Buffer。

将所有的 Standard管、样品管、样品空白管 37 培养 15 min。

8. 参考表 1和表 2，加入至 96孔板中 37 培养 60 min，检测 593 nm处的吸光度。

9. 将酶标仪数据拷贝至 “Iron Assay Kit – Excel表 ”，自动计算出二价铁和三价铁浓度。

NA损伤定量试剂盒——DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号：DK02

DNA损伤定量试剂盒

DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

•可以检测基因组DNA样品的碱基位点数量

•采用方便的比色法检测

•检测范围：40个碱基位点/ 1×10⁵ 碱基对DNA

选择规格：

20 samples

订购满5000元，200元礼品等你拿

凑单关联产品TOP5

NO.1. Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric- 细胞凋亡检测

NO.2. Cell Viability Assay Kit 细胞增殖/毒性检测

NO.3. ECGreen-Endocytosis Detection 外泌体细胞膜检测

NO.4. Cellular Senescence Detection Kit 细胞衰老检测

NO.5. Cellular Senescence Plate Assay Kit 细胞衰老培养板检测

试剂盒内含

产品概述

DNA的氧化损伤是由于DNA与活性氧 (ROS) 尤其是羟自由基之间的相互作用造成的。由超氧阴离子和过氧化氢通过Fenton反应产生的羟自由基在DNA中产生多重修饰。羟自由基对脱氧核糖基团的氧化攻击将导致DNA释放自由碱基，产生链断裂、各种糖修饰以及单个无碱基位点 (AP位点) 。事实上AP位点是由ROS产生的损伤的主要类型。醛反应性探针 (ARP；N’-氨氧基甲基羰基肼-D-生物素) 特异性地与AP位点的开环上的醛基反应。通过这个反应可以检测到导致醛基形成的DNA修饰。用过量ARP试剂反应后，DNA上的所有AP位点均用生物素做了标签。可以用亲和素-生物素法，用连接到亲和素上的过氧化物酶或碱性磷酸酶做比色法检测来对这些带有生物素标签的AP位点进行计数。DNA损伤定量试剂盒包含用于检测每1×10⁵个碱基对中1-40个AP位点的所有必需溶液。

＊本试剂盒仅适用于基因组DNA中无碱基位点 (Abasic Sites)的检测。

原理

DNA损伤在除了复制过程中的DNA聚合酶错误外，保留有机体遗传信息的DNA在体内还受到环境辐射，紫外线，化学物质（如烷基化剂）和代谢物（如活性氧）的破坏，接收。如果这些错误和伤害得不到适当的修复，它们将导致突变，从而导致癌症和衰老。

DNA损伤部位有修复结构，其中之一就是去除碱修复。此时，将出现一个称为AP位点的基础位点（apurinic/apyrimidinic位点）。换句话说，AP位点的检测是可以测量DNA损伤位点的有效方法。

ARP（N’-氨基氧基甲基羰基肼基-D-生物素）是已知可以与该AP位点进行生物素特异结合的试剂。-Nucleostain-DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting-是一种可以通过使用ARP将DNA生物素化并固定在96孔微板上，可以简单地定量样品DNA中的AP 位点的试剂盒。

该试剂盒包含具有与AP位点的标准DNA，并且可以使用HRP标记的链霉亲和素通过生物素检测方法对AP位点进行定量。

使用方法请看实验例。

*冷藏保存中或恢复到室温时，有时会在管状管中看到水滴状的液粒。

这是由干燥防止剂液粒化而成的，产品的性能没有问题。

＊本套装中含有加入了溶液的试剂组件。

溶液可能会粘附在试管或瓶盖的内壁上，因此在打开前应先摇匀

技术信息

除试剂盒以外必要的物品

・10μl，200μl，1 ml微量移液器（可变型）

・200μl多通道移液器（可变型）

・培养箱（37℃）

・酶标仪

・0.5 ml，1.5 ml离心管

・离心机

・DNA纯化试剂盒

・纸巾

本公司出售各种DNA纯化试剂盒。

Get pureDNA Kit-Cell, Tissue(Code：GK03)

关于DNA提纯的问题，请咨询同仁化学。

操作方法

常见问题Q&A

Q1: 是否可以创建40个以上AP位点/ 100,000个标准溶液？

A1:该试剂盒的标准DNA是0-40个AP位点/ 100,000ARP-DNA。但我们已经准备了多达50个AP站点/ 100,000个的ARP-DNA（暂时没有做到更多）。从理论上讲，可以制备更多的ARP-DNA，但这么做的话我们无法保证和保持校准线的线性程度。

如果要检测更高浓度的碱基损伤，但样品DNA没有相同浓度的损伤，您可以用0AP 位点-DNA（测定范围内稀释）后再进行测定，之后再换算实际AP数比较好。

Q2: AP位点是DNA的一个基本损伤位点，被用作氧化应激的指标，除了AP位点之外，还有其他氧化应激指标吗？

A2：我们创建了一个文档，概述了氧化应激的各种标记物。

从实验者的角度，描述了每种氧化应激标记的特性和检测样品的处理方法，因此请参考以下文档（日文）。

https://www.dojindo.co.jp/technical/beginner/stressmarker.pdf

Q3:建议在DNA的纯度为吸光度为1.8以上进行检测。是否能够测量至1.5？

A3:因为吸光度在1.5内没有做过类似实验，所以暂时无法确认。

我们用吸光度为1.6～1.7的DNA进行检测，但不能看到很大的变化。

所以推荐1.8或更高。

纯度低的话可能意味着蛋白质污染。低纯度蛋白质具有阻断作用，可能使DNA粘附在板上。

请使用尽可能高的纯度，因为它可能会阻止这种情况

Q4:是否可以存储提取的DNA而无需将其转换为ARP？

A4:存储是不可取的，因为这会增加AP位点的数量。（冷藏和冷冻）

如果要在不进行ARP化的情况下进行存储，请使用乙醇沉淀，制粒并冷冻保存。AP站点确实是容易发生剪切的部位。

但是，如果以catallist free的状态保存的话，即使在3’侧有断开也不会影响ARP的检测。

相反，如果提取的DNA储存在非冷冻状态的环境中，

由自然产生的去除碱形成的AP位点是一个更重要的问题。

所以在这种情况下，如果你的样品在正确存储标准DNA是可以进行修饰的。

ARP修饰后AP位点稳定，建议提取后迅速进行APR处理。

Q5:这个试剂盒可以检测什么？

A5：您可以定量DNA中的AP位点。AP位点是[apurinic / appyrimidinic site]的缩写，作用于受损的DNA。一般在去除碱修复过程中会出现。DNA的损伤除了复制时DNA polymerase的错误之外，还受到紫外线，化学物质（如烷基化剂）和代谢物（如活性氧）的影响。

通过测定AP位点可以检测DNA损伤。

Q6:这个试剂盒能测定的样品数量是多少？

A6：20samples为20个样品。

每个Filtration Tube都有20个samples。

因为一个样品一般使用一个Filtration Tube，所以这个Tube的数量即是可测定的样品数。

20samples的测定用的板也是1块板。

Q7:96孔板和过滤管中有溶液剩余，请告诉我废弃的方法

A7:多余的溶液请在确认以下成分信息后，按照政策规定的废弃规则废弃。

<配套试剂成分>

・ARP-DNA standard solution（稀释水后废弃，不含有害成分）

・ARP solution（稀释后作废，不含有害成分）

・DNA binding solution（稀释水后废弃，不含有害成分）

・Washing buffer（稀释水后废弃，不含有害成分）

・HRP-Striptavidin（稀释水后废弃，不含有害成分）

・TE buffer（可溶于水，EDA・2NA 0.1%以下）

・Substrate solution（稀释水后废弃，不含有害成分）

氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II货号：G263

氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒

GSSG/GSH Quantification Kit II

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 细胞、组织样品均可检测

● 操作更加简单

● 试剂盒稳定性高

选择规格：

100 test

氧化应激与自由基检测方案

凑单关联产品TOP5

NO.1. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.2. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.4. ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- ROS检测

NO.5. Calcein-AM/PI Double Staining Kit 活死细胞双染检测

概述

谷胱甘肽 (γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸) 是体内的一种三肽化合物，它参与抗氧化和药物代谢的过程，还是谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽S-转移酶、巯基转移酶等的底物。谷胱甘肽通常以还原型状态(GSH) 存在，但是GSH在氧化应激的作用下会转化为氧化型状态 (GSSG)。因此GSH/GSSG的比值被认为是氧化应激研究的一个重要指标。

优势

1）可以进行氧化型谷胱甘肽（GSSG）、还原型谷胱甘肽（GSH）的分类定量。

2）操作简单，且可以同时检测多个样品。

操作步骤

详见说明书

注意事项

试剂开封后各溶液的保存方法及保存时间

Substrate Working Solution：溶解后在-20℃可保存2个月

GSH Standard Solution：溶解后在-20℃可保存2个月

GSSG Standard Solution：溶解后在-20℃可保存2个月

Enzyme Working Solution：稀释后在4℃可保存2个月

Coenzyme Working Solution：用超纯水溶解后在-20℃可保存2个月

Masking Solution：用乙醇溶解后在4℃可保存2个月

其他材料

酶标仪（405或415 nm）、20 µl和200 µl移液器，多通道移液器、 96孔板、 5-磺基水杨酸 (SSA) 溶液（点击购买）、乙醇

常见问题Q&A

Q1:如何计算GSH浓度？

A1:根据标准曲线得到总谷胱甘肽（GSH+GSSG）的浓度，使用以下公式计算GSH浓度。
GSH浓度=总谷胱甘肽浓度-GSSG浓度×2
GSSG（氧化型谷胱甘肽）相当于两分子的GSH（还原型谷胱甘肽）。
因此，通过将GSSG浓度加倍从而得到GSH浓度。

Q2:是否可以通过添加Masking Reagent来掩盖源自GSSG的GSH？

A2:加入酶/辅酶之后，由GSSG产生的GSH先与DTNB反应，而还原为GSSG。GSSG生成的GSH不会被屏蔽。

Q3:本试剂盒与谷胱甘肽定量试剂盒（货号：T419）有什么区别？

A3:本试剂盒可以分别检测GSSG和GSH，而总谷胱甘肽定量试剂盒（T419）则无法实现。作为氧化应激指标的GSH和GSSG的比例更加受引研究人员关注。

Q4:显色效果弱怎么办？

A4:考虑以下原因：

原因1）本试剂盒的测量范围是0.5 μmol/l及以上，测量样品中所含的谷胱甘肽的量可能小于该值。

对策）本试剂盒无法测量不符合测量范围的样品，请考虑其他方法检测。例如HPLC方法。

也可以通过降低预处理的稀释率或增加样品量来增加检测样品的浓度。

注意：为了加强显色效果而延长显色时间，则无法获得标准曲线。

原因2）可能含有抑制荧光的物质。例如：与SH基团反应的化合物（马来酰亚胺）会干扰测量结果。

对策）由于无法通过预处理等去除这些化合物，因此请在不含有此类物质的情况下再检测。

原因3）反应中的pH值低，有可能抑制显色。

对策）1、测量时，请确保SSA浓度为1％或更低。当SSA浓度为1％或更高时，会抑制显色效果。

2、如果含有其他酸性物质，则在测量前用三乙醇胺等将其中和至pH 7，或将它们稀释至约1％或更低的酸浓度下进行反应。

Q5:该试剂盒可以检测多少样品？

A5:本试剂盒可以进行100次检测（使用1块96孔板）
当n=3时，可以检测9个样品。（样品未染色）
如果仅测量谷胱甘肽的总量，可以检测25个样品。
样品的布局例：通道1～6是GSSG浓度测定，通道7～12是总谷胱甘肽浓度测定。

Q6:样品中有大量谷胱甘肽，如何稀释样品？

A6:用0.5％5-磺基水杨酸（SSA）水溶液稀释。
测量时样品中的SSA浓度应为0.5至1％。
如果SSA浓度高，则反应过程中的pH值会呈酸性，这可能会影响吸光度。

Q7:通过测量GSSG与GSH的比例可以得到什么？

A7:谷胱甘肽通常在体内以还原形式（GSH）存在，
因为它通过刺激（例如氧化应激）转化为氧化形式（GSSG）
GSH与GSSG之比是氧化应激的指标。

ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-试剂货号：R252

ROS检测

ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

商品信息

储存条件：-20度保存

运输条件：室温

选择规格：

100tests

凑单关联产品TOP5

NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.2. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.3. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.4. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽

NO.5. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

试剂盒内含

产品概述

ROS Reactive Oxygen Species 主要是在线粒体中合成 ATP时所产生的高活性氧簇。ROS对细胞内的信号传导和吞噬作用等免疫机能起着重要的作用。另一方面， ROS对DNA和蛋白质的氧化作用也是各种疾病和细胞衰老的原因之一。

最近的研究发现，由二价铁所诱发的芬顿反应所引起的一种新的细胞死亡方式（铁死亡，Ferroptosis）的研究领域里 ROS也被广泛关注，检测 ROS的需求和意义也在不断升高 1)。目前在检测 ROS时，使用最多的试剂是DCFH-DA。但是 DCFH-DA往往有灵敏度低、样品荧光与背景的差别不明显等问题。本试剂盒是一种高灵敏度的ROS检测试剂盒，而且配套使用本试剂盒内附带的 Buffer，可以在相对更低的细胞毒性下对 ROS进行高灵敏度检测。

荧光特性

技术信息

与市面现有试剂的比较

活性氧反应的选择性

高灵敏度DCFH-DA与常规DCFH-DA对活性氧（ROS）的反应性相同。
另外，由于具有与DCFH-DA相同的荧光特性（λex：505nm，λem：525nm），因此能够以相同的激发/荧光波长进行检测。

检测灵敏度的比较

用DCFH-DA和ROS检测试剂盒-高灵敏度DCFH-DA-分别对过氧化氢（1×10 ⁴细胞/ ml）处理的HeLa细胞进行染色，并比较细胞内ROS的荧光结果。结果显示，在任何检测仪器中，同仁化学ROS检测试剂盒-高灵敏度DCFH-DA都以比DCFH-DA拥有更高的灵敏度。

（1）荧光显微镜检测

<检测条件>
Ex.488 nm / Em.500 -560 nm
细胞种类：HeLa细胞

（2）使用荧光酶标仪检测

<检测条件>
Ex.490-520 nm / Em.510-540 nm
细胞种类：HeLa细胞

（3）使用流式细胞仪检测

<检测条件>
FITC激发电压：215 V
细胞种类：HeLa细胞

实验例

一.Erastin处理的A549细胞的内在性ROS的检测

1. 向 ibidi 8-well plate中接种A549细胞 (1××10⁴ cells/ml, DMEM, 10% fetal bovine serum, 1% penicillin-37°C 、 5% CO2培养箱内过夜培养。

2. 去除培养基，加入用 DMEM培养基稀释好的 50 μμmol/l的 Erastin溶液， 37°C 、 5% CO₂培养箱过夜培养。

3. 去除上清，HBSS清洗 2次，加入 Highly Sensitive DCFH-DA Dye working solution 37°C 、 5% CO₂培养箱培养 30 min。

4. 去除Working solution HBSS清洗 2次，再次加入 HBSS，用荧光显微镜观察。

二.LPS处理的巨噬细胞内源性ROS的检测

用LPS（脂多糖）处理的RAW264.7细胞中细胞内ROS的变化的荧光成像结果显示，LPS处理可增加细胞内ROS。

<检测条件>
细胞内ROS（高灵敏度DCFH-DA染料）：Ex. 488 nm / Em.500 -560 nm

<实验操作>
1.在ibidi 8孔板中接种RAW264.7细胞（3×104细胞，DMEM，10％胎牛血清，1％青霉素-链霉素）
2.培养箱（37℃，5％）过夜培养
3.除去培养基，用HBSS洗涤细胞两次，然后添加用DMEM培养基稀释的500 ng / ml LPS
4.培养箱（37°C，5％CO2）孵育20小时
5.除去上清液，用HBSS洗涤细胞两次，然后添加高灵敏度DCFH-DA染料工作液。
6.培养箱（37°C，5％CO2）培养30分钟
7.培养30分钟后除去工作溶，用HBSS洗涤细胞两次后再添加HBSS并用荧光显微镜观察。

三.柳氮磺吡啶(SSZ)引起的细胞内代谢变化

向A549细胞添加已知抑制胱氨酸/谷氨酸转运蛋白（xCT）的柳氮磺吡啶（SSZ）之后，确认了细胞内的ROS、ATP、α-谷氨酸（α-KG）、谷胱甘肽（GSH）的变化和谷氨酸释放量的变化。

结果显示，由于SSZ的添加，细胞内的ATP、谷胱甘肽（GSH）以及谷氨酸的释放量减少，细胞内的α-谷氨酸和ROS增加。

常见问题Q&A

Q1:请告诉我一个试剂盒可以测多少个样品？

A1:可以测量的样品数量请参考以下内容。
・96-well plate：1块
・ibidi8-well plate：6块
・35mm dish：5块
・6-well plate：5孔

Q2:有没有可以用作阳性对照的实验例？

A2：使用说明书上记载了经过过氧化氢处理的HeLa细胞的检测实验例。

Q3:Highly Sensitive DCFH-DA working solution可以用Loading Buffer以外的溶液配置吗?

A3:为了减轻染色时对细胞的损伤，推荐使用附带的Loading Buffer配置，Hanks’HEPES和HBSS也可以进行制备。如果用培养基进行制备时请使用无血清培养基。

Q4:染色后的清洗可以使用PBS代替HBSS吗？

A4：为了减轻对细胞的损伤推荐HBSS。如果手头没有HBSS的话，建议用培养基清洗。

Q5:用荧光显微镜检测时有什么注意事项吗？

A5：染料与ROS反应并氧化后发出荧光。如果激发光持续照射，则染料会被氧化，背景会上升，因此，在获取荧光成像图像时，请先调整明场环境下的焦点和参数，然后再获取荧光图像。

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号：R253

耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：常温

特点：

● 可长时间持续观测ROS水平

● 染色后可PFA固定和免疫共染色

● 可用于多种仪器的检测

选择规格：

100tests

规格性状

产品概述

ROS（Reactive Oxygen Species）主要是在线粒体中合成ATP时所产生的高活性氧簇。适量的ROS对细胞内的信号传导以及免疫机能都有促进作用，而过量的ROS对DNA和蛋白质所造成的氧化作用是导致多种疾病和细胞衰老的原因之一。

常见的细胞内ROS检测方法是利用DCFH-DA进入细胞内被ROS氧化后会发出荧光的特性进行检测。然而，DCFH-DA有灵敏度较低、染色后易从细胞内漏出、观察光所引起的自发荧光¹⁾等问题。

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-克服了上述问题，是一种比DCFH-DA灵敏度更高、进入细胞后可以与蛋白质结合抑制向细胞外漏出的荧光探针。更重要的是，它可以抑制由观察光所引起的自发荧光，可以更准确的反映细胞内ROS水平。另外，使用试剂盒内附带的Buffer进行观察，可以在尽量不伤害细胞的状态下检测细胞内的ROS。

1) M. Afzal, et al., “Method to overcome photoreaction, a serious drawback to the use of dichlorofluorescin in evaluation of reactive oxygen species” BBRC, 2003, 304, 619–624.

常见问题

相同实验条件下，检测结果的重现性差、由观察光引起荧光探针自发荧光的假阳性等问题是ROS检测的常见问题。而本试剂盒可以有效地解决上述问题。

选择性对比

Photo-oxidation Resistant DCFH-DA对各种活性氧(ROS)的选择性与DCFH-DA的选择性基本相同。另外，由于荧光特性（λex：505 nm; λem：525 nm）也相同，可以使用DCFH-DA相同的检测波长或Filter。

性能比较表

同仁化学研究所的ROS荧光探针与市面上常见的ROS荧光探针的性能比较。

关联产品：ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-试剂 ←

抑制观察光造成的自发氧化

在未经任何刺激的正常HeLa细胞中，使用Photo-oxidation Resistant DCFH-DA染色细胞后，每5分钟观察一次细胞。结果显示，与一般的DCFH-DA相比，Photo-oxidation Resistant DCFH-DA可以改善观察光所引起的荧光探针的自氧化(假阳性)。

<实验条件>

细胞系：HeLa(未经任何刺激，正常状态)

荧光显微镜(BZ-X800, KEYENCE)

GFP Filter: Ex= 450 – 490 nm, Em = 500 – 550 nm

拍摄时间间隔: 5 min

拍摄曝光时间: 1.5 sec

染色后的细胞固定

一般的荧光探针在细胞固定后容易泄漏到细胞外造成荧光强度降低，而用本试剂盒染色HeLa细胞并加入过氧化氢后，用PFA进行细胞固定，然后通过荧光观察发现固定后的荧光强度几乎没有变化，而且染料基本都滞留在细胞内。

检测灵敏度的比较

利用LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型，比较Photo-oxidation Resistant DCFH-DA与一般的DCFH-DA检测ROS的区别。从实验结果可以看出，同仁化学研究所的探针的灵敏度更高。

① 荧光显微镜检测

<检测条件>

GFP Filter: Ex = 450 – 490 nm, Em = 500 – 550 nm)

② 荧光酶标仪检测

<检测条件>

Ex = 490 – 520 nm, Em = 510 – 540 nm

③ 流式细胞仪检测

<检测条件>

Ex = 488 nm, Em = 515 – 545 nm)

检测例

LPS诱导后，细胞内ROS水平的监测

用ROS Assay Kit –Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-染色RAW264.7细胞后，加入脂多糖(LPS)刺激细胞并开始实时监测细胞内的ROS水平。通过对检测结果的数值化分析可以看出，在LPS诱导10小时后，胞内的ROS水平明显开始升高。

<检测条件>

细胞内ROS Photo-oxidation Resistant DCFH-DA Dye）

GFP Filter (Ex = 450 – 490 nm, Em = 500 – 550 nm)

<实验步骤>

1. 将RAW264.7细胞(2×105 cells/ml, DMEM, 10% fetal bovine serum, 1% penicillin-streptomycin)接种于黑色96-well孔板中。

2. 37℃、5% CO2培养箱过夜培养。

3. 去除培养基，用HBSS清洗细胞2次，添加Photo-oxidation Resistant DCFH-DA Dye Working solution。

4. 37℃、5% CO2培养箱内培养30 min。

5. 去除培养基，用HBSS清洗细胞2次，添加Highly Sensitive DCFH-DA Dye Working solution。

6. 37℃、5% CO2培养箱内培养30 min。

7. 去除培养基，用HBSS清洗细胞2次。添加含有500 ng/ml LPS的DMEM培养基，用荧光显微镜观察。

8. 每隔1小时检测荧光强度并绘制荧光强度/时间的曲线图。

与线粒体标记物Tom 20的共染色

使用本试剂盒染色HeLa细胞后加入过氧化氢，与Tom 20抗体进行免疫共染色，实现了胞内ROS水平与线粒体的形态的同时观察。该实验证明了本试剂盒可以完美解决传统ROS荧光探针无法用于免疫荧光染色的问题。

<检测条件>

激光共聚焦显微镜

(蓝) DAPI: Ex = 405 nm, Em = 450-495 nm

(绿) Photo-oxidation Resistant DCFH-DA: Ex = 488 nm, Em = 500-550 nm

(紫) Alexa Fluor 647: Ex = 633 nm, Em = 640-700 nm

Scale bar：10 µｍ

FAQ

Q：每个试剂盒可以检测多少个样品？

A：可检测的样品数请参考下列信息：

・ 96-well plate：1块板
・ ibidi 8-well plate：6块板
・ 35 mm dish：5块
・ 6-well plate：5个孔

Q：是否有可作为“阳性对照”的实验例？

A：产品的使用说明书中的“实验例2”有过氧化氢刺激HeLa的检测实例。请参考说明书实验例2的步骤1-5。

Q：是否可以使用Loading buffer以外的缓冲液来配制Working solution？

A：为了减小观测时对细胞的损伤，建议尽量使用Loading buffer来配制。另外，也可以使用 Hanks’ HEPES或HBSS来配制。如果需要用培养基配制，请使用无血清培养基。

Q：清洗细胞时，是否可以用PBS替代HBSS？

A：为了减小对细胞的损伤，建议尽量使用HBSS。如果手头没有HBSS，建议用培养基清洗细胞。

Q：在使用流式细胞仪检测时，建议在哪一步将贴壁细胞剥落？

A：参照使用说明书，建议在步骤6(药物刺激后并用HBSS清洗细胞之后)，将细胞剥离(胰酶消化)。胰酶消化后重新加入培养基，离心后用HBSS清洗1次，再次离心去上清之后，用HBSS重悬细胞用于检测

超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311

超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒-WST

SOD Assay Kit

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 可以检测细胞、组织等多种样品

● 准确性和灵敏度高

● 可以测定100%SOD抑制率

选择规格：

100tests

凑单关联产品TOP5

NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.2. ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- ROS检测

NO.3. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽

NO.4. Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric 细胞凋亡检测

NO.5. DMPO 超氧阴离子和羟自由基检测

产品概述

超氧化物歧化酶 (SOD) 是一种重要的抗氧化酶，它可以催化超氧阴离子 (O₂^–) 的歧化反应，生成过氧化氢和单质氧。目前有很多种直接或间接地测量SOD活性的方法，在这些方法中，使用硝基蓝四唑 (氮蓝四唑NitroblueTetrazolium ，简称NBT) 的一种间接测量方法因其便捷、简单的使用方法而被广泛应用。但是NBT法存在一些缺点，例如生成的甲臜 (Formazan dye) 的水溶性较低，会和黄嘌呤氧化酶的还原型发生反应等问题。SOD检测试剂盒-WST^®提供了更为简便的检测SOD的方法，它是利用同仁学研究所研发的高度水溶性四唑盐WST^®-1(2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺酸苯基)-2氢-四唑盐,二钠盐)，能与超氧阴离子(O₂^–) 反应生成一种水溶性的染料。WST^®-1被超氧阴离子还原的比率与黄嘌呤氧化酶的活性线性相关，并且会被SOD所抑制 (见下图，即红色区域SOD反应优先发生，SOD反应完后蓝色区域WST^®-1反应才能发生)。因此SOD或者SOD类似物的IC50(50%的抑制浓度)就能用比色法来测定。

特点
1)可以测定100%SOD抑制率。
2)不需要甲醛溶解操作，操作简单。
3)一次可以进行多样本的测定。
4)由于灵敏度高，可以提高样品的稀释倍率，所以可以抑制干扰物质带来的影响。

检测原理

所需设备和材料

2-20 µl和20-200 µl的可调式移液器、多通道移液器，酶标仪（450 nm）、96孔板、37℃培养箱

操作步骤

用96孔板，制作样品到检测可在1小时内完成

抑制曲线

Cu,Zn-SOD的抑制曲线

实验例

高知大学的岛村等人对石茶制作的每一步都测定了其SOD活性。据报道，在制造过程中和微生物相关的需氧发酵和厌氧发酵极大地增加了SOD样活性，并且在发酵过程中抗氧化能力随着茶提取物成分的变化而改变。

“ 石茶生产过程中儿茶素含量和超氧阴离子清除活性的变化”，日本食品科学技术学会学报，55（12），640

L：新鲜树叶

SL：蒸煮的树叶

PFL：预发酵（有氧条件下发酵几天）树叶

FL：发酵（在厌氧条件下发酵数天）树叶

DL：晒干（数天）树叶

食品抗氧化能力的检测

我们知道，许多由呼吸和各种外在因素产生的活性氧，会降低机体功能，促进各种疾病的发病和老化。
有越来越多对这此类现象的防御机制(抗氧化能力)的文章出现，关于利用食品所具有的抗氧化能力维持健康、预防疾病的研究也备受关注。

常见问题Q&A

Q1：“1 Unit”的定义是什么？

A1：1 Unit是指样品中的还原性染料（如细胞色素C，WST-1，NBT或XTT）与超氧阴离子之间的比色反应，50%被抑制时的点。例如如果不含任何SOD的样品溶液的O.D.值为1.0的话，那么另一个O.D.值为0.5的样品则被定义为具有1个单位的酶活性。可以使用这个单位来确定样品中的

SOD活性。使用不同染料或方法检测SOD活性，它们之间不具有可比性。

Q2：我能使用SOD标准品来确定样品溶液的SOD活性吗？

A2：可以。制备标准曲线，确定样品溶液的SOD活性。SOD Bovine Erythrocytes

（CAS# 9054-89-1，EC 1.15.1.1）能够从Sigma（Catalog# S2525）购得。

Q3：是否可以用动力学法来测定SOD活性？

A3：可以。因为在20分钟内的生色比率是保持一致的，可以测量直线上升阶段5分钟内的斜率来测定SOD活性。

Q4：如果样品自身带有较深的颜色，这样的样品可以使用吗？

A4：可以。稀释样品可以减小干扰，将样品孔的O.D.值减去Blank 2的O.D.值就可以扣除本底的颜色。但是如果样品溶液的SOD活性过低是不能检测出的。

Q5：如何能够制备更多的Dilution Buffer？

A5：Dilution Buffer为PBS。请按以下浓度配制：137 mM NaCl，2.7 mM KCl，

1.47 mM KH₂PO₄， 8.1 mM Na₂HPO₄，pH 7.4。

Q6：使用该试剂盒能否分别检测Mn-SOD和Cu/Zn-SOD？

A6：可以。要单独检测Mn-SOD活性，可以添加KCN阻断Cu/Zn-SOD活性。向样品中加入

1 mM的KCN可以完全阻断Cu/Zn-SOD活性。要测定Cu/Zn-SOD的活，可以用总的SOD活性减去Mn-SOD活性，就可以得到。

Q7：怎样保存样品？

A7：在-80℃可以保存1年。

Q8：能否使用该试剂盒检测超氧化物阴离子的水平？

A8：不必用这个试剂盒，可以使用WST-1来检测超氧化物。但是必须有一个检测样品溶液中超氧化物量的标准。因为超氧化物不稳定，而且会和其它物质反应，要确定系统中生成的超氧化物的总量是比较困难的。试剂盒中的黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系可以被用作检测每个样品中超氧化物相对生成量的标准。

R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK23

藻红蛋白标记试剂盒-氨基

R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

选择规格：

3samples

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NO.1. Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 乳酸脱氢酶(LDH)检测

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NO.4. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.5. Lipi-Blue 脂滴检测（蓝色）

试剂盒内含

产品概述

藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。R-藻红蛋白(R-PE)是一种藻胆蛋白，它在578nm附近有红色荧光，激发波长为488nm。R-Phycoerythrin Labeling Kit-NH₂能够简便快速地制备被R-PE标记的IgG，NH₂-reactive R-PE（该试剂盒的成分之一）具有一个活性的酯基团，不需任何活化能够轻易地与靶分子中的氨基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube用来快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了包括标记产物的储存液等用于R-PE标记的所需的全部试剂。

*R-PE: R-Phycoerythrin(R-藻红蛋白)

原理

荧光特性

操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者R-Phycoerythrin-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。

3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

标记IgG操作概述

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。^b）

（3）完成离心后，将10μl Reaction buffer加入到NH₂-reactive R-PE中并用移液枪吹打使其溶解。

（4）将含有NH₂-reactive R-PE的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。

（6）将190μl WS buffer加入到过滤管中并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）

a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记后产物的浓度为1.4-1.8mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2个R-PE分子。没有被结合的R-PE可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。

d）通常R-PE标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

产品优势

1）R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

常见问题Q&A

Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？

A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。

Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？

A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了

Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。

当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

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PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

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离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？

A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm

B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物

A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。

Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？

A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。

Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。

Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子

A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。

Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？

A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。

Q10:标记产物能保存多久？

A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 555 Labeling Kit试剂盒货号：LK35

HiLyte Fluor 555快速标记试剂盒（微量）

Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 555 Labeling Kit

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

选择规格：

3samples

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Isothiocyanobenzyl-EDTA（ITCBE）

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商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

选择规格：

3samples

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ARP(Aldehyde Reactive Probe)试剂货号：A305

N-(Aminooxyacetyl)-N’-biotinylhydrazine

CAS号：139585-03-8

商品信息

储存条件：-20度保存

运输条件：室温

分子式：

C₁₂H₂₁N₅O₄S

分子量：

331.39

选择规格：

10mg

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在线小工具

实验工具|稀释计算器|摩尔浓度计算器

Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit试剂盒货号：LK37

生物素快速标记试剂盒（微量）

Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

选择规格：

3samples

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Isothiocyanobenzyl-EDTA试剂

Isothiocyanobenzyl-EDTA（ITCBE）

ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red试剂盒货号：EX03

外泌体膜染色试剂-深红色

ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：室温

特点：

● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集

● 回收率高

● 多种颜色可供选择

选择规格：

5samples

凑单关联产品TOP5

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NO.5. ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green 外泌体膜染色试剂-绿色

试剂盒内含

概述

近年来研究发现，外泌体作为细胞外囊泡（Extracellular vesicle; EV）的一种，与癌症的恶化与转移密切相关，外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信，细胞摄入外泌体时的示踪技术非常重要，然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点（1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子，造成背景增高）。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料，并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色，可满足多重染色在内的各种实验需求。

技术情报

更准确地观察外泌体的动态

常用于染色外泌体的膜染色染料(S公司产品P)，染料本身会引起凝集，产生不来源于外泌体的荧光聚点，导致外泌体的性质变化和背景上升等问题¹⁾²⁾。

ExoSparkler系列中使用的染料(Mem Dye-Green，Red，Deep Red)不会引起荧光凝集，也几乎不影响外泌体的性质，因此可以更准确地观察外来体的动力学。

参考文献

1) Mehdi Dehghani et al.,“Exosome labeling by lipophilic dye PKH26 results in significant increase in vesicle size”.bioRxiv., 2019, doi:10.1101/532028.

2) Pužar Dominkuš P et al.,“PKH26 labeling of extracellular vesicles: Characterization and cellular internalization of contaminating PKH26 nanoparticles.”Biochim Biophys Acta Biomembr., 2018, doi: 10.1016/j.bbamem.2018.03.013.

特点

特点1:荧光染料不会在细胞外聚集

将使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，并用荧光显微镜观察进入细胞内的外泌体。

结果，在用产品P(绿色或红色)染色的外泌体中，发现了疑似染料聚集的细胞外荧光亮点。

Mem Dye-Deep Red(紫)：Ex： 640 nm/ Em： 640-760 nm

S公司 P产品(绿)：Ex： 561 nm/ Em： 560-620 nm

S公司 P产品(红)：Ex： 640 nm/ Em： 650-700 nm

实验条件

通过超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为10 µg)，使用不同荧光染料染色后，添加到HeLa细胞(1.25×10⁴cells)中，孵育24小时，观察清洗后的荧光图像。

通过NTA (Nanoparticle Tacking Analysis)技术检测发现，Dojindo的Mem Dye-Deep Red没有荧光聚集现象，而P产品（绿色或红色）发现了可疑的100-500 nm粒径的粒子。

*检测装置：LM10-HSBFT 14（Nanosight公司生产）

与Mem-Dye溶液相比，P产品溶液的粒径也发生变化

另外，Mem Dye-Green, Red和Mem Dye-Deep Red一样，也没有发现荧光聚集的现象。

特点2：对外泌体的性质几乎没有影响

比较使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P（绿色或红色）染色前后的外泌体，通过测定NTA（纳米粒子跟踪分析）和zeta电位以确认外泌体的性质是否变化。

结果，确认使用产品P（绿色或红色）会因染色而引起的外泌体的变化。

而Mem-Dye系列（Green、Red、Deep Red）对外泌体的性质几乎没有影响。

对外泌体颗粒直径的影响

制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液，对10 µg(蛋白质量)的外泌体进行染色后进行了NTA(纳米粒子跟踪分析)。

结果，用Mem-Dye系列染色的外泌体与未染色的外泌体，粒子数以及粒子直径几乎没有影响(下图左)，但在产品P染色前后，粒子数和粒子直径有明显的变化(下图右)。

＊检测装置：LM10-HSBFT 14 (Nanosight公司生产)

对外泌体膜电位的影响

制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液，并对10 µg(蛋白质含量)的外泌体进行染色后测定Zeta电位。

结果证实，使用Mem-Dye系列染色与使用产品P染色比较，使用Mem-Dye引起的Zeta电位变化会小很多

＊检测装置：Zetasizer Nano ZSP(Malvern Panalytical公司生产)

参考文献

Takashi Shimomura et al., “New Lipophilic Fluorescent Dyes for Exosome Labeling: Monitoring of Cellular Uptake of Exosomes”.bioRxiv., 2020, doi:10.1101/2020.02.02.931295.

特点3：外泌体的标记和纯化一步到位

ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。

纯化方法(未反应染料的去除)的比较

ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管，与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比，能够以更高的回收率纯化外泌体。

	回收率
		过滤管（本试剂盒）	50%
凝胶过滤法	10%
		※本公司的实施例：通过NTA技术（纳米颗粒跟踪分析）比较提取前后的外泌体粒子数

关于使用过滤管进行纯化的有效性，常见问题是：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？详见Q&A。

特点4：多种颜色选择

ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。

■实验条件

超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×10⁴ cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。

■观察条件

Green: Ex： 488 nm / Em： 490-540 nm

Red: Ex： 561 nm / Em： 570-640 nm

Deep Red: Ex： 640 nm / Em： 640-760 nm

产品名称	容量	货号
外泌体膜荧光染色试剂盒
（绿色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green	5 samples	EX01
（红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red	5 samples	EX02
（深红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red	5 samples	EX03
外泌体蛋白荧光染色试剂盒
（绿色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green	5 samples	EX04
（红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red	5 samples	EX05
（深红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red	5 samples	EX06
*纯化的外泌体(超离心法)，蛋白质：1-10 µg/sample，粒子数：10-100×10^8个/sample

实验例

外泌体的定位随时间而变化

■实验条件

通过超速离心法纯化的外泌体（蛋白质量为10 µg）用Mem Dye-Deep Red（外泌体膜染色试剂）染色，并加入到用溶酶体染色试剂染色的HeLa细胞（1.25×10⁴细胞）中，在1小时和4小时后观察到荧光图像。

结果表明，随着时间的推移Mem Dye-Deep Red的荧光点(紫色)与溶酶体的定位(绿色)重叠(白色)，外泌体的定位随时间的变化而变化。

观察条件：

Mem Dye-Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm

溶酶体染色试剂： Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm

常见问题Q&A

Q1：纯化外泌体建议用什么方法？

A1：一般我们推荐使用超速离心法纯化外泌体。但是，免疫沉淀法和磁珠法纯化的外泌体也有过成功染色的实例。
目前，聚合物沉淀法纯化的外泌体由于有聚合物的残留会影响外泌体的染色，所以无法使用本试剂盒。

Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？

A2：我们公司在做染色后外泌体进入细胞的实验时，使用过MEM（Minimum Essential Medium）和DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）。目前我们公司一直采用的含血清培养基进行外泌体实验，暂时无法推荐无血清培养基。

Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？

A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。

Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？

A5:虽然在过滤膜上可以观察到颜色的残留，但是我们公司通过下面的实验验证了过滤膜上的回收产物里不含未反应的染料。
<实验条件>
超速离心法纯化的①含有外泌体（蛋白质含量10 µg）的缓冲液和②单纯缓冲液，分别按照试剂盒说明书记载的步骤进行染色操作。染色后的产物加入到HeLa细胞中（1.25×10⁴cells），4小时后进行荧光观察。
结果显示，单纯缓冲液染色后的回收产物加入到细胞后，没有观察到荧光，进而可证明回收产物中没有残留的染料。

① Exosome + Buffer

② Only Buffer

Fluorescent images at 4 h incubation

Detection conditions

Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm

Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm

Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm

ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red试剂盒货号：EX02

外泌体膜染色试剂-红色

ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光防潮

运输条件：室温

特点：

● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集

● 回收率高

● 多种颜色可供选择

选择规格：

5samples

凑单关联产品TOP5

NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.2. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.3. Calcein-AM/PI Double Staining Kit 活死细胞双染

NO.4. Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric- 细胞凋亡检测

NO.5. Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 乳酸脱氢酶(LDH)检测

试剂盒内含

概述

技术情报

更准确地观察外泌体的动态

ExoSparkler系列中使用的染料(Mem Dye-Green，Red，Deep Red)不会引起荧光凝集，也几乎不影响外泌体的性质，因此可以更准确地观察外来体的动力学。

参考文献

1) Mehdi Dehghani et al.,“Exosome labeling by lipophilic dye PKH26 results in significant increase in vesicle size”.bioRxiv., 2019, doi:10.1101/532028.

特点

特点1:荧光染料不会在细胞外聚集

将使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，并用荧光显微镜观察进入细胞内的外泌体。

结果，在用产品P(绿色或红色)染色的外泌体中，发现了疑似染料聚集的细胞外荧光亮点。

Mem Dye-Deep Red(紫)：Ex： 640 nm/ Em： 640-760 nm

S公司 P产品(绿)：Ex： 561 nm/ Em： 560-620 nm

S公司 P产品(红)：Ex： 640 nm/ Em： 650-700 nm

实验条件

通过超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为10 µg)，使用不同荧光染料染色后，添加到HeLa细胞(1.25×10⁴cells)中，孵育24小时，观察清洗后的荧光图像。

通过NTA (Nanoparticle Tacking Analysis)技术检测发现，Dojindo的Mem Dye-Deep Red没有荧光聚集现象，而P产品（绿色或红色）发现了可疑的100-500 nm粒径的粒子。

*检测装置：LM10-HSBFT 14（Nanosight公司生产）

与Mem-Dye溶液相比，P产品溶液的粒径也发生变化

另外，Mem Dye-Green, Red和Mem Dye-Deep Red一样，也没有发现荧光聚集的现象。

特点2：对外泌体的性质几乎没有影响

比较使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P（绿色或红色）染色前后的外泌体，通过测定NTA（纳米粒子跟踪分析）和zeta电位以确认外泌体的性质是否变化。

结果，确认使用产品P（绿色或红色）会因染色而引起的外泌体的变化。

而Mem-Dye系列（Green、Red、Deep Red）对外泌体的性质几乎没有影响。

对外泌体颗粒直径的影响

制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液，对10 µg(蛋白质量)的外泌体进行染色后进行了NTA(纳米粒子跟踪分析)。

＊检测装置：LM10-HSBFT 14 (Nanosight公司生产)

对外泌体膜电位的影响

制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液，并对10 µg(蛋白质含量)的外泌体进行染色后测定Zeta电位。

结果证实，使用Mem-Dye系列染色与使用产品P染色比较，使用Mem-Dye引起的Zeta电位变化会小很多

＊检测装置：Zetasizer Nano ZSP(Malvern Panalytical公司生产)

参考文献

Takashi Shimomura et al., “New Lipophilic Fluorescent Dyes for Exosome Labeling: Monitoring of Cellular Uptake of Exosomes”.bioRxiv., 2020, doi:10.1101/2020.02.02.931295.

特点3：外泌体的标记和纯化一步到位

ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。

纯化方法(未反应染料的去除)的比较

ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管，与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比，能够以更高的回收率纯化外泌体。

	回收率
		过滤管（本试剂盒）	50%
凝胶过滤法	10%
		※本公司的实施例：通过NTA技术（纳米颗粒跟踪分析）比较提取前后的外泌体粒子数

关于使用过滤管进行纯化的有效性，常见问题是：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？详见Q&A。

特点4：多种颜色选择

ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。

■实验条件

超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×10⁴ cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。

■观察条件

Green: Ex： 488 nm / Em： 490-540 nm

Red: Ex： 561 nm / Em： 570-640 nm

Deep Red: Ex： 640 nm / Em： 640-760 nm

产品名称	容量	货号
外泌体膜荧光染色试剂盒
（绿色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green	5 samples	EX01
（红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red	5 samples	EX02
（深红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red	5 samples	EX03
外泌体蛋白荧光染色试剂盒
（绿色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green	5 samples	EX04
（红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red	5 samples	EX05
（深红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red	5 samples	EX06
*纯化的外泌体(超离心法)，蛋白质：1-10 µg/sample，粒子数：10-100×10^⁸个/sample

常见问题Q&A

Q1：纯化外泌体建议用什么方法？

Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？

Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？

A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。

Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？

① Exosome + Buffer

② Only Buffer

Fluorescent images at 4 h incubation

Detection conditions

Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm

Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm

Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm

ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green试剂盒货号：EX01

外泌体膜染色试剂-绿色

ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green

商品信息

储存条件：0-5度保存,避光

运输条件：室温

特点：

● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集

● 回收率高

● 多种颜色可供选择

选择规格：

5 samples

凑单关联产品TOP5

NO.1. ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red 外泌体膜染色试剂-红色

NO.2. Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 乳酸脱氢酶(LDH)检测

NO.3. ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red 外泌体膜染色试剂-深红色

NO.4. ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green 外泌体蛋白质染色-绿色

NO.5. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测

试剂盒内含

概述

技术情报

更准确地观察外泌体的动态

ExoSparkler系列中使用的染料(Mem Dye-Green，Red，Deep Red)不会引起荧光凝集，也几乎不影响外泌体的性质，因此可以更准确地观察外来体的动力学。

参考文献

1) Mehdi Dehghani et al.,“Exosome labeling by lipophilic dye PKH26 results in significant increase in vesicle size”.bioRxiv., 2019, doi:10.1101/532028.

特点

特点1:荧光染料不会在细胞外聚集

将使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，并用荧光显微镜观察进入细胞内的外泌体。

结果，在用产品P(绿色或红色)染色的外泌体中，发现了疑似染料聚集的细胞外荧光亮点。

Mem Dye-Deep Red(紫)：Ex： 640 nm/ Em： 640-760 nm

S公司 P产品(绿)：Ex： 561 nm/ Em： 560-620 nm

S公司 P产品(红)：Ex： 640 nm/ Em： 650-700 nm

实验条件

通过超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为10 µg)，使用不同荧光染料染色后，添加到HeLa细胞(1.25×10⁴cells)中，孵育24小时，观察清洗后的荧光图像。

通过NTA (Nanoparticle Tacking Analysis)技术检测发现，Dojindo的Mem Dye-Deep Red没有荧光聚集现象，而P产品（绿色或红色）发现了可疑的100-500 nm粒径的粒子。

*检测装置：LM10-HSBFT 14（Nanosight公司生产）

与Mem-Dye溶液相比，P产品溶液的粒径也发生变化

另外，Mem Dye-Green, Red和Mem Dye-Deep Red一样，也没有发现荧光聚集的现象。

特点2：对外泌体的性质几乎没有影响

比较使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P（绿色或红色）染色前后的外泌体，通过测定NTA（纳米粒子跟踪分析）和zeta电位以确认外泌体的性质是否变化。

结果，确认使用产品P（绿色或红色）会因染色而引起的外泌体的变化。

而Mem-Dye系列（Green、Red、Deep Red）对外泌体的性质几乎没有影响。

对外泌体颗粒直径的影响

制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液，对10 µg(蛋白质量)的外泌体进行染色后进行了NTA(纳米粒子跟踪分析)。

＊检测装置：LM10-HSBFT 14 (Nanosight公司生产)

对外泌体膜电位的影响

制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液，并对10 µg(蛋白质含量)的外泌体进行染色后测定Zeta电位。

结果证实，使用Mem-Dye系列染色与使用产品P染色比较，使用Mem-Dye引起的Zeta电位变化会小很多

＊检测装置：Zetasizer Nano ZSP(Malvern Panalytical公司生产)

参考文献

Takashi Shimomura et al., “New Lipophilic Fluorescent Dyes for Exosome Labeling: Monitoring of Cellular Uptake of Exosomes”.bioRxiv., 2020, doi:10.1101/2020.02.02.931295.

特点3：外泌体的标记和纯化一步到位

ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。

纯化方法(未反应染料的去除)的比较

ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管，与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比，能够以更高的回收率纯化外泌体。

	回收率
		过滤管（本试剂盒）	50%
凝胶过滤法	10%
		※本公司的实施例：通过NTA技术（纳米颗粒跟踪分析）比较提取前后的外泌体粒子数

关于使用过滤管进行纯化的有效性，常见问题是：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？详见Q&A。

特点4：多种颜色选择

ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。

■实验条件

超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×10⁴ cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。

■观察条件

Green: Ex： 488 nm / Em： 490-540 nm

Red: Ex： 561 nm / Em： 570-640 nm

Deep Red: Ex： 640 nm / Em： 640-760 nm

产品名称	容量	货号
外泌体膜荧光染色试剂盒
（绿色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green	5 samples	EX01
（红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red	5 samples	EX02
（深红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red	5 samples	EX03
外泌体蛋白荧光染色试剂盒
（绿色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green	5 samples	EX04
（红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red	5 samples	EX05
（深红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red	5 samples	EX06
*纯化的外泌体(超离心法)，蛋白质：1-10 µg/sample，粒子数：10-100×10^⁸个/sample

常见问题Q&A

Q1：纯化外泌体建议用什么方法？

Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？

Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？

A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。

Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？

① Exosome + Buffer

② Only Buffer

Fluorescent images at 4 h incubation

Detection conditions

Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm

Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm

Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268

谷氨酰胺定量检测试剂盒

Glutamine Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光，防潮

运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamine的定量

选择规格：

1set

凑单关联产品TOP5

NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.3. Glutamate Assay Kit-WST 谷氨酸的定量检测

NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.5. Mito-FerroGreen 铁离子荧光探针

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

*向谷氨酰胺标准溶液和含有谷氨酰胺酶的样品孔中加入谷氨酰胺酶溶液，并在样品(不含谷氨酰胺酶溶液)的每个孔中加Reaction Buffer。

由下式算出检测样品中的谷氨酰胺浓度。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

实验例

标准曲线的实验例：

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量。

A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 12个样品(参照下图)

谷氨酰胺标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

＊当n=3时，至少需要240 μl(每孔40 μl×6孔)。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

Q2：配制后的Working solution可以保存多久？

A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

Q3：是否可以定量D-Glutamine？

A3：该试剂盒是用于L-Glutamine定量，无法定量D-Glutamine。

Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？

Q5：待测样品可以保存吗？

A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解液样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6：为什么我的样品孔没有显色？

Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

NAD/NADH检测试剂盒

NAD/NADH Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光防潮

运输条件：室温

特点：

● 数据可靠，不会与NADP及NADPH反应

● 同一样品可以用Lactate Assay Kit-WST（货号：L256）测定上清液中乳酸含量

● 只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管

● 享有显色底物WST专利

选择规格：

100 tests

凑单关联产品TOP5

NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. Glucose Assay Kit-WST 葡萄糖检测

NO.3. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.4. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测

NO.5. Lipi-Green 脂滴检测（绿色)

试剂盒内含

概述

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)是参与糖酵解、电子转移系统和TCA循环等细胞主要代谢途径氧化还原反应的重要辅助因子。NAD以氧化型NAD⁺和还原型NADH的形式存在于细胞中。维持适当的NAD⁺和NADH水平对细胞功能至关重要。此外最近的研究表明NAD⁺水平的下降与衰老相关，NAD⁺的量被认为是衰老相关研究的一个标志。

NAD/NADH检测试剂盒可以定量细胞中NAD⁺/NADH、NADH和NAD⁺的量，并测量它们的比值。细胞内NADH水平可以通过试剂盒内含的Extraction Buffer裂解细胞并在加热后选择性地定量检测。而细胞内的NAD⁺水平则可以通过总的NAD⁺/NADH总量减去NADH量计算得到。

原理

技术情报

NAD⁺和NADH的分别检测

分别测定NAD⁺和NADH的操作步骤

*只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管

用试剂盒内的提取缓冲液及去除蛋白质用的微量管，能简便地制备细胞裂解液。通过加热细胞裂解液能单独检测细胞内的NADH量。而细胞内的NAD⁺量则可以通过总NAD⁺/NADH量减去NADH量的计算得到。

在本试剂盒中，当n=3时，可以测量12个样品和8个标准品。当使用超过12个样品时，您需要准备单独的微量管。

使用NAD⁺/NADH作为指标的研究

细胞中NAD⁺和NADH的量被评估为重要的代谢指标，用于了解受药物管理和基因重组影响的癌细胞和线粒体功能。最近已经明确了长寿相关的受体与NAD⁺的含量密切相关。越来越多的人将其评估为肥胖，糖尿病和细胞分化等生物学状况的标志物。

检索来源：Google Scholar

检索关键词：

NAD/NADH : “NAD/NADH”

线粒体：“NAD/NADH”Mitochondria

癌：“NAD/NADH”Cancer

肥胖：“NAD/NADH”Obesity

孔板检测中数据的可靠性

可以通过同时测量该试剂盒中包含的标准溶液来进行定量分析。如果样品中NAD⁺/NADH的总含量高于2 μmol/l，则可以通过稀释样品进行评估。在下面的实验中，使用细胞数相差2倍的HeLa细胞，来确定NAD⁺和NADH的数量和比率。

使用增殖培养的HeLa细胞（2.5×10⁵，5.0×10⁵个细胞），从标准曲线中得到细胞内NAD⁺和NADH的量。最终NAD⁺的量和NADH的量会随着细胞数而改变，但是即使细胞数改变，NAD⁺和NADH量的比率也不变。

经确认，将2-Deoxy-D-glucose加入到HeLa 细胞后，代谢活性发生了变化。

用乳酸检测试剂盒检测的实验例

向HeLa细胞（1×10⁶细胞）中加入2-Deoxy-D-glucose，终浓度为6 mmol/l，培养24小时后测定乳酸量和NAD⁺/NADH比。用Lactate Assay Kit-WST（货号：L256）测定上清液中乳酸含量，去除上清后用本试剂盒检测细胞中的NAD⁺/NADH比。

最终加入2-Deoxy-D-glucose抑制了细胞内糖酵解系统，并导致乳酸量的减少和NAD⁺/NADH比率的增加。

操作步骤

(1) 按照上图，在每孔中分别加入50 μl的标准液和样品溶液。

※为了获得准确的数据，建议每个样品做3个复孔。

(2) 在每孔中加入50 μl Working Solution。

※由于在加入Working Solution后酶会立刻反应，请用多通道移液器以减少由于加液时间延迟而导致的实验误差。

(3) 在37℃培养60 min。

※培养时请密封培养板，以防止液体蒸发。

(4) 用酶标仪在450 nm处检测吸光度。

(5) 用标准曲线测定样品中总NAD⁺/NADH和NADH的量。

※如果原样品在检测前已稀释，可用稀释倍率乘以检测的数值。

※NAD⁺的量可用总NAD⁺/NADH的量-NADH的量计算得到

NAD⁺= 总NAD⁺/NADH-NADH

标准曲线

常见问题Q&A

Q1：试剂盒可以测量多少个样本？

A1：

*所有样品均测定3次（n=3）

上表中显示了当标准样品从2 μmol/l连续稀释，作出一条共计8个点（n=3）的标准曲线时可以检测的样品数量。如果分为2次检测，由于需要重复做一条标准曲线，因此样品检测的数量会更少。

Q2：是否可以使用450 nm以外的滤光片进行测量？

A2：也可以使用490 nm的滤光片，但是吸光度会低于在450 nm处的吸光度。当用不同滤光片检测时，校准曲线如下：

Q3：可以单独购买过滤管吗？

A3：不可以，我们不单独出售过滤管。如果需要其他耗材，可以使用市场上售卖的过滤管。

Q4：工作液稳定吗？

A4：工作液无法长期保存。请在使用前配制工作液，由于工作液对光敏感请注意避光。该工作液在室温下可避光保存4小时。

Q5：样品颜色没有变化，是什么原因？

A5：样品中的NAD含量可能低于使用此试剂盒可测定的检测限度，在这种情况下，请增加细胞数，或者如果检测样品被稀释，则在检测前降低稀释比例。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

谷氨酸的定量检测试剂盒

Glutamate Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光，防潮

运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamate的定量

选择规格：

1set

凑单关联产品TOP5

NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. Glutamine Assay Kit-WST 谷氨酰胺的定量检测

NO.3. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.5. Mito-FerroGreen 铁离子荧光探针

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

　　只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。

实验例

　　标准曲线的实验例：

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例：

结果显示，SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少，细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。

<使用产品>

· 细胞内GSH：GSSG/GSH Quantification Kit II（货号：G263）

· 细胞内ROS：ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-（货号：R252）

· 细胞内ATP：ATP Assay Kit-Luminescence（货号：A550）

· 细胞内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（货号：K261）

<实验条件>

细胞：A549细胞 (1 x 10⁶ cells) 　药物处理时间：48 h

参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量是多少？

A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

Q2：配制后的Working solution可以保存多久？

A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

※Working solution配制后，避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。

Q3：是否可以定量D-Glutamate？

A3：该试剂盒是用于L-Glutamate定量，无法定量D-Glutamate。

Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？

Q5：待测样品可以保存吗？

A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6：为什么我的样品孔没有显色？

A6：样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。

Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号：CK18

细胞活性（ATP检测）

ATP Assay Kit-Luminescence

商品信息

储存条件：0-5°C

运输条件：常温

特点：

● 操作简便，检测仅需10分钟

● 灵敏度高，微量细胞也可检测

● 悬浮细胞和原代细胞适合

选择规格：

200 tests

活动进行中

订购满5000元，300元礼品等你拿

凑单关联产品TOP5

NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.2. Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 乳酸脱氢酶(LDH)检测

NO.3. Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric- 细胞凋亡检测

NO.4. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.5. ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- ROS检测

产品原理

ATP是生物体内最直接的能量来源，在肌肉收缩、代谢反应、主动运输等方面被广泛使用，甚至被称作生物体内的能量货币。同仁化学研究所开发的Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒是一种通过Luciferase来确定细胞中的腺苷三磷酸（ATP）的细胞增殖-毒性检测试剂盒。

本试剂盒只需将各试剂混合后加入孔板，10 分钟后即可检测。不需要去除培养基、清洗细胞等复杂的操作。此外，本试剂盒还有诸如发光的半衰期在3 小时以上、数据的重现性高、兼容96孔板、384孔板的多样品检测等诸多优点。

图1. Cell Counting Kit Luminescence 检测原理

实验注意事项

检测方法：多功能酶标仪

检测结果：化学发光值

注意：该试剂盒只能比较实验组对照组结果，但是不能完全定量检测

（试剂盒内不含标准品）

实验操作步骤

1. 白色 96 孔板中，每孔加入 100 μl 细胞悬液（白色 384 孔板，每孔加入 25 μl 细胞悬液）。

*为了获得更准确的检测结果，建议每个实验组至少设置三个复孔（n=3）。

2. 各孔中加入 100 μl Working solution（白色 384 孔板，每孔加入 25 μl Working solution）。

*气泡会对实验结果产生影响，如果孔中有气泡请尽量清除。使用电动移液器时，建议使用反向吸液模式(RevPIP Mode)。

*加入 Working solution 后，建议用酶标仪的振荡混匀功能震荡 2 min。由于光照会影响检测结果，如果必须在有光源的地方震荡，建议用铝箔纸包覆孔板。

3. 将孔板静置于温度设定在 25℃的酶标仪内 10 min。

*如果酶标仪没有温度设定的功能，请将孔板至于 25℃培养箱或 25℃左右室温下，避光培养 10 min。

*为了保证发光信号的稳定性，建议此处的培养时间不要低于 10 min。

4. 检测发光值（RLU）。

CCK-L，仪器检测实验例，详见如下：（实验例仅供参考）

细胞内ATP活性检测（CCK-L）的仪器设置

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06

脂滴荧光检测（深红色）

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red

商品信息

储存条件：冷暗处保存

运输条件：室温

特点：

● 高特异性脂滴定位

● 可流式定量检测

● 多种颜色可供选择

选择规格：

1set

凑单关联产品TOP5

NO.1. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.3. Iron Assay Kit -Colorimetric- 组织总铁含量及二价铁含量检测

NO.4. Lipid Droplet Assay Kit-Blue 脂滴荧光检测（蓝色）

NO.5. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测

试剂盒内含

概述

原理

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

特点

特点1：定量专用试剂盒

试剂盒包含所需的工作液和缓冲液、可以简便实现定量脂滴。

特点2：大幅度缩短操作，活细胞也可以使用

实验例

实验例1：孔板检测实验例

<检测条件>

Blue：Ex: 376 – 386 nm、 Em: 435 – 455 nm

Deep Red ：Ex: 623 – 633 nm、 Em: 649 – 669 nm

实验例2：流式细胞术的实验例

< 检测条件>

Blue：Ex: 405 nm、 Em: 425 – 475 nm

Deep Red ：Ex: 640 nm、 Em: 650 – 670 nm

脂肪滴产品选择指南

	产品名称	规格	货号
成像(成像) 脂滴荧光探针	Lipi-Blue	10 nmol	LD01
	Lipi-Green	10 nmol	LD02
	Lipi-Red	100 nmol	LD03
	Lipi-Deep Red	10 nmol	LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Blue	1 set	LD05
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red	1 set	LD06

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261

α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：常温

特点：

● 检测结果的重现性好

● 可作为线粒体活性的指标

● 多角度了解细胞代谢变化

选择规格：

100tests

规格性状

100 tests

・Fluorescent Dye
・α-KG Standard
・Enzyme Mix
・Coenzyme
・Assay Buffer
・lysis Solution
・Control Buffer
・ALT Solution
・Reaction Buffer

×1
300 μl×1
×1
×1
6.5 ml×1
2 ml×1
25 ml×1
35 μl×1
5 ml×1

产品概述

α-酮戊二酸(α-KG)是TCA循环中重要的中间体。它被作为进入TCA循环的葡萄糖代谢物增加的指标以及谷氨酰胺代谢(Glutaminolysis,一种谷氨酰胺底物与α-KG反应的通路)增加的指标。α-KG在神经递质谷氨酸和γ-氨基丁酸（GABA）的产生中起着重要作用，不仅如此它还担负着一定的清除细胞内的活性氧的功能，是非常重要的细胞代谢指标之一。

检测原理

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric可以定量检测α-酮戊二酸(α-KG)。通过检测反应生成的试卤灵(Resorufin)的荧光(Ex：530 – 560 nm、Em：580 – 600 nm)对细胞内的α-KG进行定量。另外，本试剂盒还可以通过使用96孔板进行多样品检测。

检测操作

整个操作过程，从细胞的前处理到荧光酶标仪检测，只需要按照操作说明书的步骤添加试剂即可检测细胞内α-酮戊二酸(α-KG)的浓度。而且，本试剂盒专门针对同类型检测方法中普遍存在的结果重现性差的问题进行了优化，即使是第一次做α-KG检测实验的科研人员也可以放心使用。

► 结果重现性高的两个秘诀

1) 样品的前处理

同类型的检测试剂盒在样品前处理时需要微量的pH调节、过滤膜过滤等操作，这是导致结果重现性差的原因之一。而同仁化学研究所的α-KG检测试剂盒，只需要按照说明书添加试剂，可以大幅减少前处理过程中产生的操作误差。

2) α-Ketoglutarate的检测

其他检测试剂盒使用与上图相同的原理，但是由于①和②的两步反应同时在96孔板里进行，这是造成误差的另一个重要原因。而同仁化学研究所的试剂盒将这两步反应分开进行，进一步降低了误差。

标准曲线的作成例

本试剂盒附带α-KG的标准品，可以通过制作标准曲线来定量的检测样品中的α-KG浓度。如果样品中的α-KG浓度高于20 μmol/l，请预先稀释样品再检测。

图片5.jpg

实验例

Doxorubicin(DOX)刺激引起的细胞内代谢变化

阿霉素(Doxorubicin, DOX)可以作用于细胞周期的G2/M期，停止细胞的增殖并且细胞衰老，利用DOX作用于A549细胞，会导致胞内α-KG浓度增加。另外通过SG 03 Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal检测细胞衰老、C548 Cell Cycle Assay Solution Deep Red / C549 Cell Cycle Assay Solution Blue检测细胞周期、MT09 JC-1 MitoMP Detection Kit检测线粒体膜电位的结果如下：

图片8.png

Sulfasalazine(SSZ)引起的细胞内代谢变化

Sulfasalazine(SSZ)可以抑制细胞的胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)。用SSZ刺激A549细胞后，细胞内的α-KG、ATP、GSH、细胞放出的谷氨酸等变化用下列方法进行了检测。结果发现，SSZ刺激后细胞内的ATP、谷胱甘肽(GSH)、谷氨酸的放出量均减少，而细胞内的α-KG和ROS水平增加。

<使用产品>

・细胞内ATP：CK18 Cell Counting Kit-Luminescence

・细胞内GSH：G263 GSSG/GSH Quantification Kit II

・细胞内ROS：R252 ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

・胞外谷氨酸：G269 Glutamate Assay Kit-WST

<实验条件>

细胞：A549细胞(1 x 106 cells) 暴露时间： 48 h

图片5.png

NASH诱导小鼠的肝脏组织的代谢变化

NASH(非酒精性脂肪肝)的病变组织中有ATP、α-KG、NAD的量减少的特点。使用4周龄的高脂肪食物投喂(引发NASH)的1型糖尿病模型小鼠(STAM模型)的肝脏组织，检测其中的ATP、α-KG、NAD水平的变化。结果显示，NASH诱导后10周龄的小鼠组中ATP、α-KG、NAD的浓度降低。

※详细的实验步骤请参考FAQ“是否有检测组织的实验例

<使用产品>

・组织内ATP：CK18 Cell Counting Kit-Luminescence

・组织内NAD：N509 NAD/NADH Assay Kit-WST

常见问题Q&A

Q1：每个试剂盒可以检测所少个样品？

A1：如果标准曲线和样品都采用3个复孔来计算，可以检测12个样品。具体的96孔板的样品孔排列实例请见说明书。

Q2：是否可以用黑色孔板以外的孔板（透明板或白色板）？

A2：用透明板或白色板无法准确的绘制标准曲线，请使用黑色96孔板进行实验

Q3：检测时样品没有显色，可能的原因有哪些？

A3：本试剂盒对α-KG的检测范围是0.2 μmol/l以上，样品中的α-KG浓度如果低于0.2 μmol/l无法检测出来。可以尝试降低样品前处理时的稀释倍率。

Q：配置好的Working Solution能否保存？

A：配置好的Working solution无法保存，请现配现用。另外，Working solution遇光不稳定，配制好后请用铝箔纸包裹避光。※避光、室温的条件下可保存2小时左右。

Q：检测样品是否可以保存？

A：操作说明书上的“—定量细胞内α-KG的样品制备—”的步骤5中得到的前处理样品在-20℃可以保存10天。冷冻保存后的样品会发生沉淀，请离心后取上清作为检测样品。※加入20 μl Lysis solution, 吹打混匀后8,000xg离心10 min，取上清。

Q：是否有组织样品的检测实例？

A：有小鼠肝脏组织的检测实例。

具体的实验步骤如下：

碱性提取法提取的肝脏样品中的代谢指标检测

1.取大约100 mg小鼠肝脏组织样品加至500μl预冷的0.5 mol/ KOH水溶液中。

※必须使用经过灌流操作完全脱血的组织样品，否则残留的血液会影响检测结果。

2.用Dounce型组织研磨器研磨肝脏组织。

3.将研磨后的样品回收至微管中，用500μl预冷的0.5 mol/ KOH水溶液清洗研磨器，并将清洗后的液体也

一起转移到回收样品的微管中(共约1 ml)。

4.向回收样品的微管中加入1 ml预冷的超纯水，充分混合后在冰浴上静置5 min(共约2 ml)。

※由于溶液的粘性较高，有时会出现离心后难以分离的情况。此时，用25 g左右的细针头注射器不断

吸取/推出(大约20-30次)，直到可以顺畅的吹打溶液为止。

5.离心机12,000xg，4 ℃离心5 min。

α-KG检测用样品的制备

6.取900μl上一步操作(步骤5)得到的溶液，加入200μl 1mol/l KH2PO4水溶液进行中和，混匀后在冰浴上

静置5 min。

7.离心机12,000xg，4 ℃离心5 min，取1 ml上清液至新的微管中作为检测样品。

<检测时的注意事项>

※组织提取的样品无法保存，请在当天内完成检测。

※枪头中残留的样品溶液时造成误差的原因之一，吸取样品溶液时尽量缓慢，减少枪头中残留的样品溶液。

※在稀释标准品和样品的时候，使用0.5 mol/l KOH水溶液和1mol/l KH2PO4水溶液按照9:5比率混合的溶液。

<检测实例>

诱导非酒精性脂肪肝的小鼠肝脏组中α-KG量的变化

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

葡萄糖检测试剂盒

Glucose Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光防潮

运输条件：室温

特点：

● 细胞上清液和细胞样品均适用

● 稳定性好

●可使用酶标仪高通量筛选

选择规格：

50 tests

200 tests

代谢

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒

凑单关联产品TOP5

NO.1. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测

NO.2. Glucose Uptake Probe-Green 葡萄糖摄取检测

NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.4. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.5. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

试剂盒内含

	50 tests	200 tests
Dye Mixture	×1	×1
葡萄糖标准品（10 mmol/l）(红盖)	150 μl×1	600 μl×1
酶(绿盖)	×1	×1
Assay Buffer	3.5 ml×1	14 ml×1
Reconstitution Buffer(蓝盖)	350 μl×1	1.4 ml×1

概述

葡萄糖是一种提供体内能量来源的最重要的物质，也是一种主要能量代谢指标。它不仅是糖尿病和肥胖研究的糖代谢指标，在癌症研究中，也常和乳酸一起作为体内细胞代谢的检测指标。最新的研究表明，抑制与葡萄糖代谢和脂质代谢有关的酶的活性，可以抑制癌细胞的生长。

葡萄糖检测试剂盒（Glucose Assay Kit-WST）可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖，通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖，适合用96孔板检测，可以同时检测多个样品。

原理

*本试剂盒可以检测细胞上清液^＊的葡萄糖的含量，通过检测WST甲赞的吸光度来测定。另外，试剂盒里有葡萄糖标准液，可以制作标准曲线，测定样品中的葡萄糖浓度。

*要测定细胞上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“是否有检测细胞上清液以外的实验例?”。

操作步骤

制作葡萄糖标准曲线

可以用试剂盒中的葡萄糖标准液制作出葡萄糖标准曲线，然后通过标准曲线求出样品中的葡萄糖浓度。当葡萄糖浓度在0.5 mmol/l以上时，可以通过稀释样品进行检测。

实验例

用Phloretin抑制葡萄糖的摄取

1. 制备所需浓度Phloretin的Jurkat细胞悬液 (5×10⁵ cells/ml，在RPMI培养基中含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素)。

2. 在6孔板中接种1×10⁶ cells/孔的细胞悬液，在37℃，5% CO₂培养箱中过夜培养。

3. 将细胞悬液转移到锥形管中，在1,500 rpm离心5 min。

4. 吸取100 µl上清液至1.5 ml微型管中，用超纯水稀释30倍。

5. 按照葡萄糖标准液的制备方法制备葡萄糖标准液。

6. 在96孔板中分别加入50 µl的样品或葡萄糖标准液。

7. 在每孔中加入50 µl工作液。

8. 在37℃培养箱中培养30 min。

9. 用酶标仪检测450 nm处的吸光度，根据葡萄糖的标准曲线计算样品的葡萄糖浓度。

实验例1.jpg

Phloretin抑制葡萄糖的摄取

实验证实，细胞培养基上清液中的葡萄糖摄入量减少与Phloretin (一种葡萄糖转运抑制剂)浓度之间有依存关系。

常见问题Q&A

Q1：是否可以检测2-Deoxy-D-glucose？

A1：可以检测2-Deoxy-D-glucose。

Q2：Working Solution的稳定性如何？

A2：Working Solution无法保存，请现配现用。由于对光不稳定，因此配制后请避光，在室温和避光条件下可保存4小时（当Working Solution在曝光下，溶液颜色会由红色变为橙色，背景升高）。

Q3：当有还原性物质存在时是否还可以用这个试剂盒检测？

A3：如果样品中含有还原性的物质，则也会和WST染料发生显色，此时无法准确定量葡萄糖浓度。实验中如遇到以上情况，可以设定药物对照（不含细胞含药物的培养基+试剂）作为背景对照，并从标准曲线和样品的吸光度中减去它。

Q4：是否有检测细胞上清液以外的实验例?

A4：有测定细胞内葡萄糖的实验例。操作详情，请参考常见问题FAQ“Q5”。其他的样品没有实验例。

Q5：是否可以检测细胞内葡萄糖？

A5：细胞内葡萄糖也可以检测，请参考下面的样品制备步骤。

请准备「0.1%Triton X-100水溶液」和「滤膜（分子量：10KD ）」

（1）将细胞^*1悬液收于1.5 ml微量管中。

※测定所需的细胞数，需要根据细胞种类进行调整。
HepG2细胞和Jurkat细胞的测量结果如下图所示
（2）在300×g下离心5分钟，去除上清液。
(3)加入300 µl PBS，重悬细胞，在300×g下离心5分钟，除去上清液。
(4)加入250 µl细胞溶解液^*2(0.1%Triton-X)，裂解细胞后，在12,000×g离心5分钟。
(5)将操作(4)的上清液200 µl转移到超滤膜过滤管(分子量：10K)中，以12,000×g离心10分钟。
※当测定样品为n=3时，总共需要150 µl以上(50 µl×3)。
※离心后的滤液不超过150 µl时，请延长离心时间。
(6)将通过操作(5)得到的滤液作为测定样品。
然后按照使用说明书，测定葡萄糖浓度。
※测定试样在标准曲线范围内(0-0.5 mmol/l)内，请适当用细胞溶解液稀释，用于测定。
*1 为了检测0.02 mmol/l以上的葡萄糖，HepG2细胞数量为1×10⁵cells以上，Jurket细胞需要2×10⁶ cells以上的细胞数量。
*2 细胞溶解液中含有SDS会抑制显色，因此不能使用含有SDS的缓冲液。

Q6:一个试剂盒可以检测样品的数量。

A6：制备标准曲线和样品（n=3）时，可以检测的样品数量如下所示。

样品数.jpg

标准曲线：8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)

96孔板排列示意图（n=3）

Q7:可以测量L-Glucose吗？

A7：本产品用于β-D-Glucose测量，不能测量L-Glucose。

参考文献

No	检测对象	文献
1	小鼠血清	Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes, FASEB J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR
2	链霉菌	Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus, J. Biosci.Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002
3	HCT116细胞	Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nat. Metab., 2020, 2(1), 81
4	P388白血病细胞	2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cell, Oncol. Lett., 2020, 20(1), 962-966
5	小鼠精子细胞	Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation, capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi: 10.1007/s00018-020-03683-9

*要测定细胞培养上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“是否有除检测细胞上清液以外的样品检测实验例”。

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒

Glycolysis/OXPHOS Assay Kit

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：常温

特点：

●酶标仪即可检测，无需昂贵的检测仪器

●试剂盒包含所有所需试剂 All in One Kit

●详尽的操作手册

选择规格：

50tests

规格性状

微信截图_20211227153025.png

产品概述

很多癌细胞都是主要依靠糖酵解途径产生ATP，而近年来的研究发现，如果抑制癌细胞的糖酵解途径，细胞中的主要能量代谢会从糖酵解途径向线粒体的氧化磷酸化途径转移。对于这一现象的研究，有望成为新的抗癌药物研发的靶点，并且在细胞衰老、神经退行性疾病等其他疾病的治疗和药物研发的工作中也具有潜力，因此而备受瞩目。

本试剂盒通过酶标仪就可以方便快捷的检测糖酵解能、细胞代谢途径转移、细胞对糖酵解途径和氧化磷酸化途径的依赖程度。试剂盒中包含所有所需的试剂，可大幅减少实验前的准备工作和时间。

微信截图_20211227153549.png

三种评价方式

用Oligomycin抑制氧化磷酸化(OXPHOS)的ATP合成，或者用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)抑制糖酵解(Glycolysis)的ATP合成，然后通过检测ATP的量(发光法)和Lactate的量(吸光度法)对下图中的①~③进行评价。

实验例

对糖酵解抑制剂(2-DG)处理后的HeLa细胞进行糖酵解能评价和代谢途径转移评价。糖酵解能评价(左图)的结果可以看出，HeLa细胞经过糖酵解抑制剂作用后，糖酵解能明显降低。而代谢途径转移评价的结果(右图)可以看出，糖酵解抑制剂作用后，HeLa细胞内的代谢途径开始向氧化磷酸化转移，由线粒体产生的ATP明显增加。

微信截图_20220107095600.png

常见问题Q&A

Q：一个试剂盒可以检测多少个样品？

A：按照每个样品3个复孔计算，可检测的样品数请见下表：

※以上是按照不做预实验，最多可能检测的样品数量。

※Lactate Assay时，如果培养基内含有血清，建议单独检测含有血清的培养基，作为背景空白扣除。

※以上是先做预实验，再做正式实验时，最多可能检测的样品数量。

※Lactate Assay时，如果培养基内含有血清，建议单独检测含有血清的培养基，作为背景空白扣除。

糖酵解能评价(Lactate Assay)的孔板设置例(n=3时)

(左：不做预实验；右：做预实验)

代谢途径转移评价(ATP Assay)的孔板设置例(n=3时)

(左：不做预实验；右：做预实验)

代谢途径依赖程度评价的孔板设置例(n=3时)

(左：ATP Assay；右：Lactate Assay)(不做预实验)

代谢途径依赖程度评价的孔板设置例(n=3时)

(左：ATP Assay；右：Lactate Assay)(做预实验)

Q：在做糖酵解能评价时，实验孔与空白孔(只含培养基)的吸光度没有变化，是什么原因？有哪些改善方法？

A：可能的原因是细胞释放的乳酸量过少，建议提高细胞数，增加培养时间(3小时⇒5小时)。

Q：是否需要通过使用蛋白质定量分析使乳酸和ATP浓度正常化？

A：Oligomycin和2-DG处理5小时的检测结果，用蛋白定量校正和不校正的结果几乎没有变化。但是，如果检测中使用其他药物时，请预先确认该药物是否会对细胞数和蛋白质的量有影响，然后再用本试剂盒检测。

需要用蛋白质定量进行校正的时候，请参考下图中的步骤。

※在进行蛋白质定量校正的时候，由于ATP Assay的试剂的原因，不能使用ATP Assay或Lactate Assay检测时使用的细胞，请额外专门准备蛋白质定量用的细胞悬液。

Q：Lactate Assay时，是否可以用450 nm以外的滤光片检测？

A：如果没有450 nm的滤光片，可以用490 nm滤光片检测，不过检测得到的吸光度的值要比450 nm检测时低。

Q：发光信号是否稳定？

A：发光信号在3小时以内都稳定。不过，发光信号会受温度和光照影响，如果不能立即检测的话，请在避光和25℃环境下静置。

Q：检测时是否可以用白色96孔板以外的孔板？

A：黑色和透明孔板都会造成发光强度的降低，透明孔板还会导致背景升高。因此建议使用白色96孔板。

Q: ATP检测时用的发光法，检测波长为多少？

A：由于P是通过萤光素检测，所以检测波长为556 nm。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

谷氨酸的定量检测试剂盒

Glutamate Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamate的定量

选择规格：

1set

凑单关联产品TOP5

NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. Glutamine Assay Kit-WST 谷氨酰胺的定量检测

NO.3. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.5. Mito-FerroGreen 铁离子荧光探针

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。

实验例

标准曲线的实验例：

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例：

结果显示，SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少，细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。

<使用产品>

· 细胞内GSH：GSSG/GSH Quantification Kit II（货号：G263）

· 细胞内ROS：ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-（货号：R252）

· 细胞内ATP：ATP Assay Kit-Luminescence（货号：A550）

· 细胞内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（货号：K261）

<实验条件>

细胞：A549细胞 (1 x 10⁶ cells) 　药物处理时间：48 h

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量是多少？

A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

Q2：配制后的Working solution可以保存多久？

A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

※Working solution配制后，避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。

Q3：是否可以定量D-Glutamate？

A3：该试剂盒是用于L-Glutamate定量，无法定量D-Glutamate。

Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？

Q5：待测样品可以保存吗？

A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6：为什么我的样品孔没有显色？

A6：样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。

Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268

谷氨酰胺定量检测试剂盒

Glutamine Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光防潮

运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamine的定量

选择规格：

1set

凑单关联产品TOP5

NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.3. Glutamate Assay Kit-WST 谷氨酸的定量检测

NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.5. Mito-FerroGreen 铁离子荧光探针

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

*向谷氨酰胺标准溶液和含有谷氨酰胺酶的样品孔中加入谷氨酰胺酶溶液，并在样品(不含谷氨酰胺酶溶液)的每个孔中加Reaction Buffer。

由下式算出检测样品中的谷氨酰胺浓度。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

实验例

标准曲线的实验例：

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量。

A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 12个样品(参照下图)

谷氨酰胺标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

＊当n=3时，至少需要240 μl(每孔40 μl×6孔)。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

Q2：配制后的Working solution可以保存多久？

A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

Q3：是否可以定量D-Glutamine？

A3：该试剂盒是用于L-Glutamine定量，无法定量D-Glutamine。

Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？

Q5：待测样品可以保存吗？

A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解液样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6：为什么我的样品孔没有显色？

Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号：CK18

细胞活性（ATP检测）

ATP Assay Kit-Luminescence

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 操作简便，检测仅需10分钟

● 灵敏度高，微量细胞也可检测

● 悬浮细胞和原代细胞适合

选择规格：

200 tests

凑单关联产品TOP5

NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.2. Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 乳酸脱氢酶(LDH)检测

NO.3. Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric- 细胞凋亡检测

NO.4. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.5. ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- ROS检测

产品原理

图1. Cell Counting Kit Luminescence 检测原理

实验注意事项

检测方法：多功能酶标仪

检测结果：化学发光值

注意：该试剂盒只能比较实验组对照组结果，但是不能完全定量检测

（试剂盒内不含标准品）

实验操作步骤

1. 白色 96 孔板中，每孔加入 100 μl 细胞悬液（白色 384 孔板，每孔加入 25 μl 细胞悬液）。

*为了获得更准确的检测结果，建议每个实验组至少设置三个复孔（n=3）。

2. 各孔中加入 100 μl Working solution（白色 384 孔板，每孔加入 25 μl Working solution）。

*气泡会对实验结果产生影响，如果孔中有气泡请尽量清除。使用电动移液器时，建议使用反向吸液模式(RevPIP Mode)。

*加入 Working solution 后，建议用酶标仪的振荡混匀功能震荡 2 min。由于光照会影响检测结果，如果必须在有光源的地方震荡，建议用铝箔纸包覆孔板。

3. 将孔板静置于温度设定在 25℃的酶标仪内 10 min。

*如果酶标仪没有温度设定的功能，请将孔板至于 25℃培养箱或 25℃左右室温下，避光培养 10 min。

*为了保证发光信号的稳定性，建议此处的培养时间不要低于 10 min。

4. 检测发光值（RLU）。

CCK-L，仪器检测实验例，详见如下：（实验例仅供参考）

细胞内ATP活性检测（CCK-L）的仪器设置

参考文献

编号	文献	年	IF
1	Impact of the combined timing of PD-1/PD-L1 inhibitors and chemotherapy on the outcomes in patients with refractory lung cancer, ESMO Open,2021, 6(2):100094	2021	6.5
2	SIRT3-Mediated SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells ,Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732	2021	5.3

线粒体膜电位检测试剂盒—JC-1 MitoMP Detection Kit货号：MT09

线粒体膜电位检测试剂盒

JC-1 MitoMP Detection Kit

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 灵敏度高

● 易上手

● 多种仪器均可检测

选择规格：

1set

易溶解

可使用于各种仪器

专用成像缓冲液

更多线粒体检测方案（点击查看）

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NO.2. ROS Assay Kit 活性氧检测

NO.3. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.4. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽

NO.5. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测

试剂盒内含

产品概述

细胞中的线粒体作为有氧呼吸产生ATP的主要场所，是体内重要的细胞器之一，常被用于早期细胞毒性、氧化应激、细胞凋亡等研究中¹⁾。线粒体活性的降低与机能失调，已被证实与癌症、衰老、神经退行性疾病 (如阿尔兹海默症、帕金森病等) 等密切相关²⁾³⁾。

JC-1是一种被广泛使用的小分子线粒体膜电位探针，依赖于线粒体膜电位在线粒体中聚集，染料伴随聚集过程，荧光从绿色 (530 nm) 变为红色 (590 nm)。当线粒体发生去极化，红/绿荧光强度比值降低。以往的研究者反映，JC-1不易溶于水并有大量沉淀产生。但与其他公司的产品不同，同仁化学研究所研制的JC-1试剂解决了这一问题，避免了沉淀的产生。同时使用试剂盒中配制的成像缓冲液 (Imaging Buffer)，可大幅降低荧光背景并在检测过程中保护细胞不受损伤。

当JC-1工作液的浓度为2 μmol/l, 每次用量为100 μl时，可以检测500次。

产品特点

1.为什么要检测线粒体膜电位

线粒体不仅是细胞内产生能量的场所，它还与癌症、衰老、阿尔兹海默症、帕金森等神经变异性疾病密切相关。因此，针对线粒体状态的研究非常重要，其中线粒体膜电位的变化经常被作为重要的指标之一检测。

当线粒体正常、膜电位差保持不变时，JC-1会聚集并发出红色荧光，而当膜电位降低时，JC-1会作为单体存在并发出绿色荧光。红色和绿色荧光强度的变化可以作为检测线粒体状态的指标。

2.初次使用也很容易上手

3.去极化的检测实例

使用去极化剂carbonylcyanide-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone（FCCP）对HeLa细胞进行处理，用本试

剂盒进行检测。可以发现与未加药物的细胞相比，加药组细胞的红色荧光明显减少。

实验条件

JC-1浓度： 2 μmol/l in MEM, 染色时间30 min

FCCP浓度：100 μmol/l， FCCP处理时间1 h

检测条件

Green : Ex 488 nm/ Em 500-550 nm;

Red : Ex 561 nm/ Em 560-610 nm;

标尺: 20 μm

操作步骤

实验例

1.诱导凋亡的实验例

1.1 荧光显微镜

通过荧光颜色的改变判断由凋亡导致的线粒体膜电位的变化。

检测条件

Green: Ex 488 nm / Em 500-550 nm

Red : Ex 561 nm / Em 560-610 nm

标尺: 80 μm

1.2 流式细胞仪

定量分析单个细胞的膜电位变化

检测条件

Green: Ex 488 nm / Em 515-545 nm

Red : Ex 488 nm / Em 564-604 nm

1.3 酶标仪

确认孔板中吸光度来判断线粒体膜电位的变化

检测条件

Green: Ex 485 nm / Em 525-545 nm

Red : Ex 535 nm / Em 585-605 nm

2.诱导自噬的实验例

使用表达Parkin的HeLa细胞，分别使用线粒体自噬试剂盒（Mitophagy Detection Kit：MD01）和线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1 MitoMP Detection Kit： MT09）来观察添加和不添加CCCP（羰基氰化物间氯苯）的线粒体状态的变化。

结果证明在未经CCCP处理的细胞中几乎未检测到线粒体自噬的发生，并且线粒体膜电位正常维持。而在添加了CCCP的细胞中，证实了线粒体膜电位的降低（JC-1的红色荧光的降低）和线粒体的自噬（Mtphagy染料的荧光的增强）。

<检测条件>

线粒体自噬检测

Ex：561 nm，Em：570-700 nm

线粒体膜电位检测

绿色Ex：488 nm，Em：500-550 nm

红色Ex：561 nm，Em：560-610 nm

实验条件

1.将Parkin质粒导入HeLa细胞

使用HilyMax（货号：H357）将Parkin质粒引入HeLa细胞中（Parkin质粒/HilyMax试剂：0.1 μg/0.2 μl）

然后过夜培养，收集细胞进行以下检测。

2.自噬检测

向表达Parkin的HeLa细胞中添加0.1 μmol/l Mtphagy工作溶液，并在37°C下孵育30分钟。然后将细胞用HBSS洗涤，加入10 μg/ml CCCP/MEM溶液，并在37℃下孵育2小时。荧光显微镜下观察处理后的细胞。

3.线粒体膜电位检测

将10 μg/ml的CCCP/MEM溶液添加至表达Parkin的HeLa细胞中，并在37℃下孵育1.5小时。加入4 μmol/l的JC-1工作溶液使终浓度至2 μmol/l，并将细胞溶液在37℃下孵育30分钟。孵育后将细胞用HBSS洗涤，加入成像缓冲液，在荧光显微镜下观察细胞。

3.线粒体膜电位与细胞周期关联性

将已知能在细胞周期的G2/M期起作用以终止细胞增殖并诱导细胞衰老的阿霉素（DOX）加入A549细胞后，

使用细胞周期检测试剂盒蓝色（产品代码：C549）/深红色（产品代码：C548）后检测。

结果证实了A549细胞的细胞周期确实发生了变化，同时用细胞衰老检测试剂盒–SPiDER-βGal（产品代码：SG03）证实了细胞产生衰老，实验证实了线粒体膜电位会发生变化。

参考文献

文献No.	检测对象	检测仪器	引用
1)	细胞（U2OS, HeLa）	荧光显微镜	T. Namba, “BAP31 regulates mitochondrial function via interaction with Tom40 within ER-mitochondria contact sites “, Sci Adv., 2019, 5, (6), 1386.
2)	细胞（Neuron）	荧光显微镜	I. Kawahata, L. Luc Bousset, R. Melki and K. Fukunaga , “Fatty Acid-Binding Protein 3 is Critical for α-Synuclein Uptake and MPP+-Induced Mitochondrial Dysfunction in Cultured Dopaminergic Neurons “, Int J Mol Sci., 2019, 20, 5358.
3)	细胞（3T3L1, C2C12）	流式细胞仪	M. Kurano, K. Tsukamoto, T. Shimizu, H. Kassai, K. Nakao, A. Aiba, M. Hara and Yatomi , “Protection Against Insulin Resistance by Apolipoprotein M/Sphingosine 1-Phosphate “, Diabetes, 2020, DOI: 10.2337/db19-0811.
4)	细胞	流式细胞仪	T. Nechiporuk, S.E. Kurtz, O. Nikolova, T. Liu, C.L. Jones, A. D. Alessandro, R. C. Hill, A. Almeida, S. K. Joshi, M. Rosenberg, C. E. Tognon, A. V. Danilov, B. J. Druker, B. H. Chang, S. K McWeeney and J. W. Tyner , “The TP53 Apoptotic Network Is a Primary Mediator of Resistance to BCL2 Inhibition in AML Cells.”, Cancer Discov, 2019, 9,
5)	细胞	荧光显微镜	G. Yang, M. Fan, J. Zhu, C. Ling, L. Wu, X. Zhang, M. Zhang, J. Li, Q. Yao, Z. Gu and X. Cai, “A multifunctional anti-inflammatory drug that can specifically target activated macrophages massively deplete intracellular H2O2 and produce large amounts CO for a highly efficient treatment of osreoarthritis” , Biomaterials, 2020, doi:10.1016/j.biomaterials.2020.120155.
6)	细胞（ARPE-19)	荧光显微镜	J. H. Quan, F. F. Gao, H. A. Ismail, J. M. Yuk, G. H. Cha, J. Q. Chu and Y. H. Lee, “Silver Nanoparticle-Induced Apoptosis in ARPE-19 Cells Is Inhibited by Toxoplasma gondii Pre-Infection Through Suppression of NOX4-Dependent ROS Generation”, Int J Nanomedicine , 2020, 15, 3695–3716.

常见问题Q&A

Q1: 本试剂盒可以检测多少次？

A1:大概的使用次数请参考下表：

检测装置	容器	使用次数	液量
流式细胞仪	–	100次	0.5 ml/次
荧光显微镜荧光酶标仪	35 mm dish	25次	2 ml/孔
	8孔Chamber Slide	30次	200 μl/孔
	96孔板	5次	100 μl/孔

Q2：在JC-1染色后，可以使用PBS代替HBSS洗涤吗？

A2：我们建议使用HBSS来减少对细胞的损伤。如果您手边没有HBSS的话，建议使用培养基洗净。

Q3：可以使用含血清的培养基吗？

A3：在清洗细胞和Working Solution中可以使用含血清的培养基。在观察荧光时建议使用Imaging Buffer。如果一定要使用含血清的培养基的话，建议不要加酚红。

Q4：染色后细胞固定或者固定后进行染色可以实现吗？

A4：细胞固定操作会使得线粒体去极化，所以染色前后均不能进行细胞固定。

Q5：处理后的样品与对照组相比较，红和绿两种荧光值都增加（或减少）了，结果该如何解释？

A5：请先比较实验组和对照组的荧光比值，两者相比，荧光比越低，线粒体膜电位越低。

用荧光之比进行结果分析的理由。

JC-1由于膜电位依存性地在细胞中积蓄，根据细胞的状态，每个细胞的JC-1的浓度有可能不同。

由于对照组和实验组处理样品的细胞状态不同，JC-1的累积浓度不同。)

另外，在线粒体膜电位较高的状态下，JC-1会聚集在一起，使荧光从绿色转移到红色。

该聚集体的量取决于膜电位的程度，因此可以用红/绿之比来比较样品之间的线粒体膜电位。

森永生科学研究所株式会社,Food allergen test kit range,Morinaga

Food allergen test kit

Food allergen test kit

Food allergen test kit range

Food Allergen ELISA KitⅡ

A quantitative test kit baseed on enzyme-linked immunoassay with high sensitivity.

To minimize a false negative risk, our original extraction solution is used in this kit.

The extraction solution enables the kit to dissolve target proteins from both raw and processed matrix.

All ELISA KitⅡ use the same extraction buffer and show a common extraction procedure.

Analytes:

Egg
Beta-lactoglobulin
Casein
Wheat/Gluten
Buckwheat
Peanut (regular sensitivity)
Peanut (high sensitivity)
Soy
Crustacean
Hazelnut
Sesame

Rapid Test ProⅡ

A qualitative test kit based on lateral flow with high sensitivity.

Rapid Test ProⅡ uses the same extraction solution as Food Allergen ELISA KitⅡ.

Still, the kit is an easy to use on site tool and all reagents are ready to use, the kit is highly adept at minimizing a false negative risk because of our original extraction solution.

Analytes:

Egg
Casein
Gluten
Buckwheat
Peanut
Soy

Rapid Test Easy

A qualitative test kit based on lateral flow with the easiest handling.

Rapid Test Easy can use for environmental samples, such as swab and rinse water.

The kit cannot test food materials, but a single step for test swab and rinse water.

No other test kit on the market has such a simple procedure as Rapid Test Easy.

Analytes:

Egg
Casein
Gluten
Buckwheat
Peanut
Soy
Crustacean

Why are those test kits required?

What is food allergen?

Under construction

Why is a food alleregn management required?

Under construction

How do we control food allergen contamination?

Under construction