ICG（吲哚菁绿）是一种花青颜料，也用于肝功能和肝储备测试的色素负载测试中，并且在近红外区域具有荧光。激发波长在774nm附近，荧光波长在805nm附近，并且具有即使在体内使用也不容易被血红蛋白干扰的荧光特性。因此，期望将其应用于使用近红外荧光的体内荧光成像。 ICG标记试剂盒-NH₂是用于标记具有氨基基团的蛋白质（尤其是抗体）的试剂盒。套件随附的NH₂-Reactive以及已发布的荧光素标记套件–NH₂（代码：LK01），HiLyte Fluor^TM 555标记套件–NH₂（代码：LK14），HiLite Fluor^TM 647标记套件–NH₂（代码：LK15）由于ICG在分子中具有活性酯，因此仅通过与具有氨基的分子混合即可形成稳定的共价键。当将ICG标记在蛋白质上时，可以使用随附的过滤管轻松去除抑制标记反应和未反应的NH₂反应性ICG的低分子量化合物（例如Tris）。对于ICG标记的IgG，荧光波长为774/805nm。

该试剂盒包含标记所需的试剂和用于储存准备好的ICG标记产品的溶液。

使用注意事项:

如果样品中含有分子量>10,000的物质 (多肽、其它蛋白等)，有阻碍标记反应的可能性。在标记前需要先纯化，如果样品是抗体，可用 IgG Purification Kit (AP01，AP02)纯化，如果样品中有小的不溶物质，离心后取上清液来标记。

操作步骤：

a) 蛋白溶液量要≤100ul，如果抗体浓度<0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总蛋白量达到50-200ug。

b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，继续离心5min或提高转速。

c) NH₂-Reactive ICG在管子的底部，加10ul DMSO到管子的底部，用移液器反复吹打溶解。由于NH₂-Reactive ICG会被DMSO中的水分水解，在制备好NH₂-Reactive ICG溶液后马上进行第4步操作。

d) 如果蛋白总量达到200ug，请加入全部NH₂-Reactive ICG溶液。

e) 我们推荐用WS Buffer保存标记产物，但也可以根据下一步实验要求选择合适的缓冲液。

1）标记的物质可以在大约2个小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）标记的物质可以用所附的保存溶液保存。

图. 小鼠尾静脉注射ICG抗体的荧光成像图小鼠皮下肿瘤模型在注射了ICG抗体 (50ug) 48h后，有明显的迹象表明抗体在肿瘤中有选择性地聚集。

仪器：活体成像仪 (Clairvivo OPT，岛津制作所)

小鼠：BALB/c(nu/nu) 纯合子裸小鼠 (母，11周)

肿瘤细胞：HeLa细胞 (在右腋皮下移植后4周)

检测条件：Ex=785nm，Em=845/55nm

抗体：整合素α2抗体 曝光时间：10s