货号：G264
葡萄糖检测试剂盒
Glucose Assay Kit-WST
储存条件：0-5度保存，避光防潮
运输条件：室温
选择规格：50 tests,200 tests
特点：
细胞上清液和细胞样品均适用
稳定性好
享有显色底物WST专利
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试剂盒内含
| 50 tests | 200 tests | |
| Dye Mixture | ×1 | ×1 |
| 葡萄糖标准品（10 mmol/l）(红盖) | 150 μl×1 | 600 μl×1 |
| 酶(绿盖) | ×1 | ×1 |
| Assay Buffer | 3.5 ml×1 | 14 ml×1 |
| Reconstitution Buffer(蓝盖) | 350 μl×1 | 1.4 ml×1 |
概述
葡萄糖是一种提供体内能量来源的最重要的物质，也是一种主要能量代谢指标。它不仅是糖尿病和肥胖研究的糖代谢指标，在癌症研究中，也常和乳酸一起作为体内细胞代谢的检测指标。最新的研究表明，抑制与葡萄糖代谢和脂质代谢有关的酶的活性，可以抑制癌细胞的生长。
葡萄糖检测试剂盒（Glucose Assay Kit-WST）可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖，通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖，适合用96孔板检测，可以同时检测多个样品。
原理
操作步骤
制作葡萄糖标准曲线
可以用试剂盒中的葡萄糖标准液制作出葡萄糖标准曲线，然后通过标准曲线求出样品中的葡萄糖浓度。当葡萄糖浓度在0.5 mmol/l以上时，可以通过稀释样品进行检测。
实验例
用Phloretin抑制葡萄糖的摄取
1. 制备所需浓度Phloretin的Jurkat细胞悬液 (5×105 cells/ml，在RPMI培养基中含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素)。
2. 在6孔板中接种1×106 cells/孔的细胞悬液，在37℃，5% CO2培养箱中过夜培养。
3. 将细胞悬液转移到锥形管中，在1,500 rpm离心5 min。
4. 吸取100 µl上清液至1.5 ml微型管中，用超纯水稀释30倍。
5. 按照葡萄糖标准液的制备方法制备葡萄糖标准液。
6. 在96孔板中分别加入50 µl的样品或葡萄糖标准液。
7. 在每孔中加入50 µl工作液。
8. 在37℃培养箱中培养30 min。
9. 用酶标仪检测450 nm处的吸光度，根据葡萄糖的标准曲线计算样品的葡萄糖浓度。
Phloretin抑制葡萄糖的摄取
实验证实，细胞培养基上清液中的葡萄糖摄入量减少与Phloretin (一种葡萄糖转运抑制剂)浓度之间有依存关系。
常见问题Q&A
Q1：是否可以检测2-Deoxy-D-glucose？
A1：可以检测2-Deoxy-D-glucose。
Q2：Working Solution的稳定性如何？
A2：Working Solution无法保存，请现配现用。由于对光不稳定，因此配制后请避光，在室温和避光条件下可保存4小时（当Working Solution在曝光下，溶液颜色会由红色变为橙色，背景升高）。
Q3：当有还原性物质存在时是否还可以用这个试剂盒检测？
A3：如果样品中含有还原性的物质，则也会和WST染料发生显色，此时无法准确定量葡萄糖浓度。实验中如遇到以上情况，可以设定药物对照（不含细胞含药物的培养基+试剂）作为背景对照，并从标准曲线和样品的吸光度中减去它。
Q4：测定细胞培养上清液时的注意事项。
A4：在细胞培养上清液的样品中，可能会含有蛋白质的样品，如细胞裂解物和血浆等。我们建议先去除蛋白，以避免背景上升的影响。
Q5：是否可以检测细胞内葡萄糖？
A5：细胞内葡萄糖也可以检测，请参考下面的样品制备步骤。
（1）将细胞*1悬液收于1.5 ml微量管中。
※测定所需的细胞数，需要根据细胞种类进行调整。
HepG2细胞和Jurkat细胞的测量结果如下图所示
（2）在300×g下离心5分钟，去除上清液。
(3)加入300 µl PBS，重悬细胞，在300×g下离心5分钟，除去上清液。
(4)加入250 µl细胞溶解液*2(0.1%Triton-X)，裂解细胞后，在12,000×g离心5分钟。
(5)将操作(4)的上清液200 µl转移到超滤膜过滤管(分子量：10K)中，以12,000×g离心10分钟。
※当测定样品为n=3时，总共需要150 µl以上(50 µl×3)。
※离心后的滤液不超过150 µl时，请延长离心时间。
(6)将通过操作(5)得到的滤液作为测定样品。
然后按照使用说明书，测定葡萄糖浓度。
※测定试样在标准曲线范围内(0-0.5 mmol/l)内，请适当用细胞溶解液稀释，用于测定。
*1 为了检测0.02 mmol/l以上的葡萄糖，HepG2细胞数量为1×105cells以上，Jurket细胞需要2×106 cells以上的细胞数量。
*2 细胞溶解液中含有SDS会抑制显色，因此不能使用含有SDS的缓冲液。
Q6:一个试剂盒可以检测样品的数量。
A6：制备标准曲线和样品（n=3）时，可以检测的样品数量如下所示。
标准曲线：8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)
96孔板排列示意图（n=3）
Q7:可以测量L-Glucose吗？
A7：本产品用于β-D-Glucose测量，不能测量L-Glucose。
参考文献
| No | 检测对象 | 文献 |
| 1 | 小鼠血清 | Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes, FASEB J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR |
| 2 | 链霉菌 | Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus, J. Biosci.Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002 |
| 3 | HCT116细胞 | Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nat. Metab., 2020, 2(1), 81 |
| 4 | P388白血病细胞 | 2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cell, Oncol. Lett., 2020, 20(1), 962-966 |
| 5 | 小鼠精子细胞 | Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation, capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi: 10.1007/s00018-020-03683-9 |
*要测定细胞培养上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“测定细胞培养上清液以外的样品时的注意事项”。