C12H18N2O5S
302.35
产品概述
Nitroso-PSAP是检测Fe(II)的高度敏感性比色试剂，能与Fe(II)形成绿色复合物 (λmax=756 nm, ε=4.5×104)。该试剂适合于测定血清中Fe、Co、Ni、Cu的水平，在同样的检测条件下，检测范围从5 ppb-5 ppm。Nitroso-PSAP可用于流动注射分析。Nitroso化合物的工作pH范围在5.6-10.1，Co、Cu、Ni复合物的摩尔吸光率和最大波长分别为4.0×104(490 nm)、2.8×104(429 nm)和2.6×104(394 nm)。
Spectral Data of Nitroso-PSAP-Metal Complex
C10H12FeN2NaO8･3H2O
421.09
特点：
● 定位线粒体
● 更深层次铁离子探究
产品概述
研究证实铁是生物体内量最多的过渡金属元素。其参与多种生理活动。近几年，细胞内的游离铁离子由于具有很高的反应性，和细胞损伤、死亡有一定的关联而得到了越来越多的关注。在细胞内游离铁离子以稳定的Fe2+和 Fe3+形式存在。从细胞内的还原环境，金属转运体及Fe2+的水溶性考虑，认为揭示细胞内Fe2+的行为比Fe3+更重要。Mito-FerroGreen是一种新型荧光探针，用于检测线粒体 (铁硫簇和血红素蛋白的合成场所) 内亚铁离子Fe2+。
该产品已在岐阜药科大学药物化学实验室的 永澤秀子 和 平山祐 博士的指导下开发。Mito-FerroGreen和Fe2+反应后的荧光强度上升不可逆，与Fluo-3（货号：F019）这类可以实时监测钙离子的荧光探针有所不同。
测定原理
产品特点
铁离子检测试剂的选择
可以根据自己的实验方法和实验仪器选择检测试剂
| FerroOrange | Mito-FerroGreen | |
| 细胞内分布 | 细胞内 | 线粒体 |
| 荧光特性 | λex : 543 nm、λem : 580 nm | λex : 505 nm、λem : 535 nm |
| 检测仪器 | 荧光显微镜 | 荧光显微镜 （FITC、GFP） |
| （滤镜） | ||
| 检测对象 | 活细胞 | 活细胞 |
| 染色次数 | 24 μg可染色35 mm dish 17块板 | 50 μg可染色35 mm dish 5块板 |
| （终浓度 1 μmol/l時） | （终浓度 5 μmol/l時） |
实验例
1.线粒体定位
为了确认Mito-FerroGreen的是否特异性地在线粒体内定位，与线粒体染色试剂（MitoBright Deep Red※）一同进行染色，实验结果证实了Mito-FerroGreen选择性地染色在线粒体内。
向HeLa细胞中添加5μmol/ l的Mito-FerroGreen和200 nmol/l的线粒体染色探针MitoBright Deep Red，并在CO2培养箱中培养30分钟，然后添加100μmol/ l的硫酸铁铵（II），并将混合后的细胞溶液在CO2培养箱中培养1小时后通过观察荧光。
Mito-FerroGreen
激发波长：488 nm
发射波长：500-565 nm
MitoBright Deep Red
激发波长：640 nm
发射波长：656-700 nm
2.线粒体内的铁离子荧光成像
在含有血清的MEM培养基中接种HeLa细胞，并加入Mito-FerroGreen，通过荧光检测HeLa细胞众线粒体内的二价铁（左图）。而在添加了铁离子的HeLa细胞中，观察到了Mito-FerroGreen的荧光明显增强（中间图）。在添加了铁螯合剂的细胞中，几乎未观察到Mito-FerroGreen的荧光（右图）。 以这种方式，证实了线粒体中铁含量的差异和荧光强度的差异是成相关性的。
3.对二价铁离子的高度选择性和高信号
向1ml 50mmol/l HEPES Buffer（pH7.4）中加入2μl 1mol/l Mito-FroGreen、2μl 10mmol/l各种金属以及20μl 1mg/ml酯化酶，在室温下反应1小时后测定荧光强度。
激发波长：500 nm
发射波长：535 nm
4.适用于通用滤光片
Mito-FerroGreen的激发波长为488nm，最大激发波长可达505nm。
向3ml 50 mmol/l HEPES Buffer (pH7.4) 中加入 6μl 1mol/l Mito-FroGreen、6μl 10mmol/l硫酸铵铁（Ⅱ）以及20μl 1mg/ml酯化酶。在37℃下反应1小时后检测荧光强度。
激发波长：500 nm
发射波长：535 nm
参考文献
1) T. Hirayama, S. Kadota, M. Niwa and H. Nagasawa, “A mitochondria-targeted fluorescent probe for selective detection of mitochondrial labile Fe(II)”, Metallomics., 2018, DOI: 10.1039/C8MT00049B
2) T. Issitt, E. Bosseboeuf, N. Winter, N. Dufton, G. Gestri, V. Senatore, A. Chikh, A. Randi, C. Raimondi, “Neuropilin-1 controls endothelial homeostasis by regulating mitochondrial function and iron-dependent oxidative stress via ABCB8”, iScience., 2018,DOI: 10.1016/j.isci.2018.12.005 .
3) E. E. Mon, F. Y. Wei, R. N. R. Ahmad, T. Yamamoto, T. Moroishi and K. Tomizawa, “Regulation of mitochondrial iron homeostasis by siderofexin 2 “, J Physiol Sci., 2018,doi:10.1007/s12576-018-0652-2.
4) M. Fujimaki, N. Furuya, S. Saiki, T. Amo, Y. Imamichi and N. Hattori, “Iron supply via NCOA4-mediated ferritin degradation maintains mitochondrial functions”, Mol. Cell. Biol.., 2019,doi: 10.1128/MCB.00010-19.
5) K. Tomita, M. Fukumoto, K. Itoh, Y. Kuwahara, K. Igarashi, T. Nagasawa, M. Suzuki, A. Kurimasa and T. Sato, “MiR-7-5p is a key factor that controls radioresistance via intracellular Fe2+ content in clinically relevant radioresistant cells.”, Biochem Biophys Res Commun.., 2019,doi: 10.1016/j.bbrc.2019.08.117.
6) Y. Wang and M. Tang, “PM2.5 induces ferroptosis in human endothelial cells through iron overload and redox imbalance”, Environ. Pollut., 2019, 264, doi: 10.1016/j.envpol.2019.07.105.
7) KF. Yambire, C. Rostosky, T. Watanabe, D. Pacheu-Grau, S. Torres-Odio,A. Sanchez-Guerrero,O. Senderovich, EG. Meyron-Holtz,I.Milosevic, J. Frahm, AP. West and N. Raimundo, “Impaired lysosomal acidification triggers iron deficiency and inflammation in vivo.”, Elife, 2019, 3, (8), doi:10.7554/eLife.51031.
8) H. Nishizawa, M. Matsumoto, T. Shindo, D. Saigusa, H. Kato, K. Suzuki, M. Sato, Y. Ishii, H. Shimokawa and K. Igarashi, “Ferroptosis is controlled by the coordinated transcriptional regulation of glutathione and labile iron metabolism by the transcription factor BACH1″, J. Biol. Chem., 2019,doi: 10.1074/jbc.RA119.009548.
9)Y. akashima, A. Hayano and B. Yamanaka, Metabolome analysis reveals excessive glycolysis via PI3K/AKT/mTOR and RAS/MAPK signaling in methotrexate-resistant primary CNS lymphoma-derived cells.”, Clin. Cancer Res., 2020, DOI:10.1158/1078-0432.
常见问题Q&A
| Q1：是否可以对酵母进行染色吗？ |
| A1：我们公司有酵母染色的实验例，染色的具体实验步骤请联系我们公司的销售人员。 |
| Q2：推荐使用的滤光片波长是多少？ |
| A2：检测时推荐的滤光片如下：
激发波长：450~500 nm 发射波长：515~550 nm |
规格性状
性状：本品溶于乙腈、甲醇、二甲醇。
纯度（HPLC）：90.0%以上
荧光光谱：适合测试
特点：
● 荧光法高敏检测胞内二价铁
● 适合于多种检测仪器
● 铁死亡常见指标之一
规格性状
性状：可溶于乙腈，甲醇和二甲基亚砜。
纯度（HPLC）：92.0%以上
荧光光谱：符合一致性
产品概述
铁是生物体内最丰富的过渡金属元素，它参与各种生理过程活动。 近年来，活细胞中的游离铁受到广泛关注， 游离铁最常以其稳定的氧化还原态存在，即亚铁离子 (Fe2+) 和铁离子 (Fe3+)。对研究者来说，在研究细胞内的还原环境，金属转运蛋白和Fe2+的水溶性时，了解Fe2+的行为比了解Fe3+的行为更为重要。FerroOrange作为一种新型的荧光探针，可对活细胞内的Fe2+进行荧光成像。FerroOrange和Fe2+反应后的荧光强度上升不可逆，与Fluo-3（货号：F019）这类可以实时监测钙离子的荧光探针有所不同。
原理
FerroOrange检测胞内Fe2+
图为将2 μl的1 mmol/l FerroOrange和2 μl的10 mmol/l的各种金属离子添加到1 ml的50 mmol/l HEPES缓冲液（pH 7.4）中，并在室温下反应1小时后测量的荧光强度。
荧光特性
Ex：543 nm Em：580 nm
与其他染料共染
FerroOrange与各种细胞内的染色试剂共染
用各种染色试剂染色HeLa细胞，清洗细胞。然后将FerroOrange添加到细胞中，并用荧光显微镜观察。
与ER染色试剂共染
＜检测条件＞
FerroOrange: Ex: 561 nm、Em: 570-620 nm
ER Tracker Green（ER染色试剂）: Ex: 488 nm、Em: 510-555 nm
标尺: 10 μm
与线粒体染色试剂共染
＜检测条件＞
FerroOrange: Ex: 561 nm、Em: 570-620 nm
MitoBright Deep Red（线粒体染色试剂）: Ex: 640 nm、Em: 650-700 nm
标尺: 10 μm
与高尔基体染色试剂的共染
＜检测条件＞
FerroOrange: Ex: 561 nm、Em: 570-620 nm
BODIPY FL（高尔基体染色试剂）: Ex: 488 nm、Em: 510-555 nm
标尺: 10 μm
铁离子试剂的选择
| FerroOrange | Mito-FerroGreen | |
| 存在部位 | 细胞内 | 线粒体 |
| 荧光特性 | λex : 543 nm、λem : 580 nm | λex : 505 nm、λem : 535 nm |
| 检测仪器 | 荧光显微镜、荧光酶标仪（Cy3） | 荧光显微镜（FITC、GFP） |
| 测定对象 | 活细胞 | 活细胞 |
| 检测次数 | 24μg可染色17次35mm dish （终浓度为1μmol/l） |
50μg可染色5次35mm dish （终浓度为5μmol/l） |
操作步骤
1.细胞接种于荧光培养皿中，在37℃，5% CO2培养箱中孵育过夜。
2.弃去上清液，并用HBSS或无血清培养基洗涤细胞3次。
3.更换含有药物的培养基，在37℃，5% CO2培养箱中孵育。
* 请根据药物特性优化孵育时间。
4.加入浓度为1 μmol/l的FerroOrange工作液，在37℃，5% CO2培养箱中孵育。
* 加入FerroOrange染色剂后请立即观察，不要洗涤。
5.在荧光显微镜下观察细胞。
高灵敏度检测胞内铁离子
使用HeLa细胞，通过FerroOrange确认细胞内Fe2+的变化
与对照组的细胞相比，用硫酸亚铁 (II) 铵处理的HeLa细胞的FerroOrange荧光强度增加。 相反，在用Bpy处理的细胞中，其荧光强度降低。
因此，证明FerroOrange与细胞内Fe2+反应。
A: 对照组
B: 铁剂·硫酸亚铁(II) 铵（终浓度100umol/l）处理
C: 铁螯合剂·2,2′-Bipyridyl (Bpy)（终浓度100umol/l）处理
检测条件 Ex/Em = 561 nm/570-620 nm 比例尺：20 μm
常见问题Q&A
| Q1:FerroOrange由于是活细胞荧光探针，如果铁死亡发生，导致细胞膜破裂后，荧光是否存在？ |
| A1:由于FerroOrange是活细胞探针，对死细胞无法发挥出探针的正常性能。 |
| Q2: FerroOrange只会检测游离铁吗？还是某些如铁硫蛋白里的结合铁，都可以检测吗？ |
| A2：FerroOrange只检测游离的二价铁 |
| Q3: 铁死亡研究中，Fe2+和Fe3+的检测哪个更重要。铁死亡的时候，总Fe都会变吗？还是说只有Fe2+/Fe3+之间的转化。 |
| A3:二价铁作为线粒体的所需物质在细胞质的“铁池”内积蓄，它在DNA合成，细胞周期调控，线粒体内ATP的产生等起重要作用。为了防止损伤细胞,多余的二价铁会与铁蛋白结合生成没有氧化还原性的三价铁并储存。或者通过膜铁转运蛋白排出到细胞外。 |
| Q4: FerroOrange能否用于固定处理之后的样本? |
| A4:不能用于石蜡切片。
试剂能尝试于温和条件下固定处理之后的样本，如多聚甲醛（PFA，终浓度3%）在4°C中培养10 min。与未固定的样本相比，固定20 min以上或室温固定后的样本的荧光强度会明显降低。请注意本探针可能很难于固定样本中使用，必须先进行染色，然后做尝试。 |
| Q5:本探针适合于什么检测方式？ |
| A5:见表格
我们建议使用绿色激光（Ex:532 nm）激发FerroOrange |
| Q6:染色时需要注意什么？ |
| A6：注意如下，
1.FerroOrange染色后的对培养基的更换。 染色后无需清洗工作液，通常血清中含有铁离子，请注意使用不含血清的培养基，所以染色后即使细胞外有残留的FerroOrange，但是因为细胞外没有血清中铁离子的影响，也不会产生背景荧光的问题。 2.对照实验。 为了检查铁检测的实验条件，我们建议准备加入铁螯合试剂Bpy(2,2`-bipyridine)或铁(硫酸铵铁(II))的样品,并观察FerroOrange荧光强度的变化。 3.细胞难以染色(灵敏度低)时的办法。 根据细胞种类的不同，染色程度也有差异。 使FerroOrange working solution浓度高于推荐的1 µmol/l进行染色。建议在1-5 µmol/l范围内染色。 |
| Q7:使用荧光酶标仪的操作步骤 |
| A7：请参考下面的实验例子进行测量。
<测定样品>。 样品A：无添加剂(仅HeLa细胞)。 样品B：添加了铁螯合试剂2,2`-bipyridyl(Bpy)的HeLa细胞。 样品C：添加铁(硫酸铵铁)的HeLa细胞。 <测量操作>。 1.在96孔黑板(透明底)上接种100 µl HeLa细胞悬液，使其达到10,000 cells/well，在37℃ 5%CO2 培养箱中过夜培养。 2.样品C的细胞用MEM(不含FBS)100 µl洗涤3次。 3.向样品C中添加100 μl硫酸铵铁(II)/MEM(不含FBS) (最终浓度: 100 µmol/l)，在37℃ 5%CO2培养箱中静置30分钟。 4.用100 µl HBSS洗涤所有孔的细胞3次。 5.向样品A和C中添加100 μl的1 µmol/l FerroOrange working solution ，向样品B中添加100 μl含有FerroOrange(最终浓度:1 µmol/l)和Bpy(最终浓度:100 µmol/l)的HBSS溶液，在37℃ 5%CO2培养箱中培养30分钟。 6.用多功能读板器检测各样品的荧光强度(Ex:543 nm,Em:580 nm)。 |
| Q8：推荐的滤光片 |
| A8: 激发滤光片:530-565 nm
发射滤光片:570-620 nm |
特点：
● 对二价铁离子的高度选择性和高灵敏度
● 适用于通用滤光片
研究证实铁是生物体内量最多的过渡金属元素。其参与多种生理活动。近几年，细胞内的游离铁离子由于具有很高的反应性，和细胞损伤、死亡有一定的关联而得到了越来越多的关注。在细胞内游离铁离子以稳定的Fe2+和 Fe3+形式存在。从细胞内的还原环境，金属转运体及Fe2+的水溶性考虑，认为揭示细胞内Fe2+的行为比Fe3+更重要。Mito-FerroGreen是一种新型荧光探针，用于检测线粒体 (铁硫簇和血红素蛋白的合成场所) 内亚铁离子Fe2+。
该产品已在岐阜药科大学药物化学实验室的 永澤秀子 和 平山祐 博士的指导下开发。Mito-FerroGreen和Fe2+反应后的荧光强度上升不可逆，与Fluo-3（货号：F019）这类可以实时监测钙离子的荧光探针有所不同。
测定原理
产品特点
铁离子检测试剂的选择
可以根据自己的实验方法和实验仪器选择检测试剂
| FerroOrange | Mito-FerroGreen | |
| 细胞内分布 | 细胞内 | 线粒体 |
| 荧光特性 | λex : 543 nm、λem : 580 nm | λex : 505 nm、λem : 535 nm |
| 检测仪器 | 荧光显微镜 | 荧光显微镜 （FITC、GFP） |
| （滤镜） | ||
| 检测对象 | 活细胞 | 活细胞 |
| 染色次数 | 24 μg可染色35 mm dish 17块板 | 50 μg可染色35 mm dish 5块板 |
| （终浓度 1 μmol/l時） | （终浓度 5 μmol/l時） |
实验例
1.线粒体定位
为了确认Mito-FerroGreen的是否特异性地在线粒体内定位，与线粒体染色试剂（MitoBright Deep Red※）一同进行染色，实验结果证实了Mito-FerroGreen选择性地染色在线粒体内。
向HeLa细胞中添加5μmol/ l的Mito-FerroGreen和200 nmol/l的线粒体染色探针MitoBright Deep Red，并在CO2培养箱中培养30分钟，然后添加100μmol/ l的硫酸铁铵（II），并将混合后的细胞溶液在CO2培养箱中培养1小时后通过观察荧光。
Mito-FerroGreen
激发波长：488 nm
发射波长：500-565 nm
MitoBright Deep Red
激发波长：640 nm
发射波长：656-700 nm
2.线粒体内的铁离子荧光成像
在含有血清的MEM培养基中接种HeLa细胞，并加入Mito-FerroGreen，通过荧光检测HeLa细胞众线粒体内的二价铁（左图）。而在添加了铁离子的HeLa细胞中，观察到了Mito-FerroGreen的荧光明显增强（中间图）。在添加了铁螯合剂的细胞中，几乎未观察到Mito-FerroGreen的荧光（右图）。 以这种方式，证实了线粒体中铁含量的差异和荧光强度的差异是成相关性的。
3.对二价铁离子的高度选择性和高信号
向1ml 50mmol/l HEPES Buffer（pH7.4）中加入2μl 1mol/l Mito-FroGreen、2μl 10mmol/l各种金属以及20μl 1mg/ml酯化酶，在室温下反应1小时后测定荧光强度。
激发波长：500 nm
发射波长：535 nm
4.适用于通用滤光片
Mito-FerroGreen的激发波长为488nm，最大激发波长可达505nm。
向3ml 50 mmol/l HEPES Buffer (pH7.4) 中加入 6μl 1mol/l Mito-FroGreen、6μl 10mmol/l硫酸铵铁（Ⅱ）以及20μl 1mg/ml酯化酶。在37℃下反应1小时后检测荧光强度。
激发波长：500 nm
发射波长：535 nm
类型: WAK-Fe2+
PACKTEST是最简单的水质测量仪器。
本产品可以通过以工厂排水和环境水为首, 用简单的操作测量各种测试水中的2价离子状态的铁(Fe2+)。
| 测量次数 | 50 |
|---|
| 测量原理 | 邻菲咯啉比色法 |
|---|---|
| 测量刻度 | 0.2, 0.5, 1, 2, 5, 10 mg/L |
| 测量时间 | 30 秒 |
| 是否可在海水中使用 | ○ |
| 内容物 | 软管 50个 (5个装的层压袋 10包), 标准色紙 (盒装) 1个, 使用说明 1张 |
| 包装外形 | 165L × 110W × 65H mm |
| 包装重量 | 大约 140 g |
PACKTEST 专用杯
