标签： DNA

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术,Bsu DNA 聚合酶,大片段,#M0330L

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – DNA 处理（DNA 标记、末端平齐化等）

Bsu DNA 聚合酶，大片段

#M0330L 1,000 units

#M0330S 200 units

特性

·随机引物法标记
·cDNA 第二条链的合成
·单个 dA 的加尾
·链置换的 DNA 合成 

概述

Bsu DNA 聚合酶，大片段保留了嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus subtilis） DNA 聚合酶 I 的 5´→3´ 聚合酶活性，但是缺失了 5´→3´ 核酸外切酶结构域，该大片段自身缺失 3´→5´ 核酸外切酶活性。 

来源

重组的 E. coli 菌株，携带有嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DNA 聚合酶 I 基因（起始于第 297 个密码子，因而缺失了 5´→3´ 核酸外切酶结构域）。 

浓度

5,000 units/ml。 

热失活

75℃ 20 分钟。 

注意事项

由于缺乏3 ´ → 5 ´ 核酸外切酶活性，Bsu DNA 聚合酶，大片段不能切除 3´ 未配对的突出末端，因而不适用于生成平齐末端。
25℃ 时 Bsu DNA 聚合酶，大片段 保留 50% 的活性，是同温度下 Klenow 片段（3´→5´ exo–）的两倍。 

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NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 修复蛋白,拓扑异构酶 I（E. coli）,#M0301L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

拓扑异构酶 I（E. coli）

#M0301L 500 units

#M0301S 100 units

特性

 识别错配 DNA
 催化负超螺旋 DNA 松弛 

概述

拓扑异构酶 I（E. coli）催化负超螺旋 DNA 的松弛。拓扑异构酶 I 也参与 DNA 螺旋化的形成和解旋以及将两条互补的单链 DNA 环耦合为双链 DNA 环。完整的全酶分子量为 97 kDa。 

来源

克隆有 topA 基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X CutSmart 反应缓冲液
[50 mM KAc，20 mM Tris-Ac，10 mM Mg(Ac)2，100 μg/ml BSA（pH 7.9 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。 

质保声明

拓扑异构酶 I 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位指在 25 μl 反应体系，37℃ 条件下，15 分钟内能催化超过 95% 的 0.5 μg pUC19 RF I 型（负超螺旋）DNA 松弛所需要的酶量。DNA 超螺旋化通过不含溴化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。 

浓度

5,000 units/ml 和 15,000 units/ml。 

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NEB代理,DNA聚合酶与扩增技术,链霉亲和素,#N7021S

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – DNA 处理（DNA 标记、末端平齐化等）

链霉亲和素

#N7021S 1 mg

Description

A 52.8 kDa non-glycosylated protein with a very high affinity for biotin. Due to its high affinity for biotin, it is used to bridge biotinylated probes and biotinylated enzymes. 

Properties and Usage

Usage Concentration

1 mg/ml

Excitation

0nm

Storage Temperature

-20°C

Storage Conditions

140 mM NaCl
8 mM sodium phosphate
2 mM potassium phosphate
10 mM KCl

pH 7.4 @ 25°C 

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  • Phototope®-Star Detection Kit

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 修复蛋白,T7 核酸内切酶 I ,#M0302L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

T7 核酸内切酶 I

#M0302L 1,250 units

#M0302S 250 units

特性

 识别错配 DNA
 分解四方向交叉 DNA 或分支 DNA
 检测或切割异源二聚体 DNA 和切刻 DNA
 随机切割线性 DNA 进行 shot-gun 克隆

概述

T7 核酸内切酶 I 识别并切割不完全配对 DNA、十字型结构 DNA、Holliday 结构或交叉 DNA、异源双链 DNA 或者以更慢的速度切割含切刻的双链 DNA。该酶切割错配碱基 5´ 端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。 

来源

重组 E. coli 菌株，其携带有麦芽糖结合蛋白（MBP）和 T7 核酸内切酶 I 的编码基因。

反应条件

1X NEBuffer 2
[50 mM NaCl，10 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2 ，1 mM DTT（pH 7.9 @ 25℃）]，37℃ 温育。 

质保声明

T7 核酸内切酶 I 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

单位定义

1 单位指在 50 μl 反应体系，37℃ 条件下，1 小时将 90% 以上的 1 μg 超螺旋十字型结构的 pUC（AT）* 转化成 90% 以上的线性结构所需要的酶量。
* pUC（AT）来自 pUC19，在其 EcoRI 和 PstI 位点之间的多克隆位点处有修改。 

浓度

10,000 units/ml。 

注意事项

T7 核酸内切酶 I 是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的 DNA 底物。切割特定底物时，必须控制酶量和反应时间。
反应温度超过 42℃ 时，会增加非特异性核酸酶活性。 

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NEB代理,DNA聚合酶与扩增技术,cDNA 合成,ProtoScript® cDNA 第一链合成试剂盒,#E6300L

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – cDNA 合成

ProtoScript® cDNA 第一链合成试剂盒

#E6300L 150 次反应

#E6300S 30 次反应

相关产品

mRNA 磁性分离试剂盒

特性

 提供酶混合液与反应混合液，建立反应更加便捷
 适合各种需求的 PCR
 不同起始量的 RNA 都能高效反转录
 合成至少 5 kb 长度的 cDNA 

概述

 ProtoScript cDNA 第一链合成试剂盒含有两种经过优化的混合液，ProtoScript 酶混合液与 ProtoScript 反应混合液。ProtoScript 酶混合液含 M-MuLV 反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂；ProtoScript 反应混合液含 dNTP 与经过优化的缓冲液。该试剂盒还包括两种优化的反转录引物和无核酸酶污染的水。锚定的 Oligo-dT 引物 [d(T)23VN] 迫使引物与 polyA 尾的起始端退火。经过优化的随机引物混合液能随机并持续性的与整个 RNA 模板配对，包括 mRNA 与无 polyA 尾的 RNA。合成的第一链 cDNA 产物长度可超过 13.0 kb。该试剂盒曾用名为 M-MuLV cDNA 第一链合成试剂盒。

ProtoScript cDNA 第一链合成试剂盒组分

– 10X ProtoScript 酶混合液
– 2X ProtoScript 反应混合液
– 随机引物混合液（60 μM）、Oligo d(T)23VN 引物（50 μM）**、无核酸酶污染的水
** Oligo d(T)23VN 和随机引物混合液含有 1 mM dNTP
NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , cDNA 合成

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 修复蛋白,核酸内切酶 IV#M0304L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

核酸内切酶 IV

#M0304L 5,000 units

#M0304S 1,000 units

特性

 单细胞凝胶电泳（彗星试验）
 碱洗脱
 碱解旋 

概述

核酸内切酶 IV 能够作用于 DNA 分子上的几种氧化性损伤。该酶是一个脱嘌呤/脱嘧啶（AP）核酸内切酶，水解 DNA 上的完整 AP 位点。切割 AP 位点 5´ 端的第一个磷酸二酯键，产生 3´ 羟基和 5´ 脱氧核糖磷酸末端。该酶也具有 3´ 二酯酶活性，能从 DNA 的 3´ 末端释放磷酸甘油醛、完整的脱氧核糖 5´ -磷酸和磷酸。 

来源

克隆有 Endo IV 基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X NEBuffer 3
[100 mM NaCl，50 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT（pH 7.9 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活：85℃ 加热 20 分钟。

质保声明

核酸内切酶 IV 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。更多信息请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能切割 1 pmol 含一个 AP 位点* 的 34 mer 寡核苷酸双链所需要的酶量。更多信息请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。
* AP 位点的创建方法如下：37℃ 条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）处理 10 pmol 含一个尿嘧啶碱基的 34 mer 寡核苷酸双链 2 分钟。 

彗星试验的推荐稀释倍数

1:104～1:105。详细步骤见 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

浓度

10,000 units/ml。 

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NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术,ProtoScript® II cDNA 第一链合成试剂盒,#E6560L

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – cDNA 合成

ProtoScript® II cDNA 第一链合成试剂盒

#E6560L 150 次反应

#E6560S 30 次反应

相关产品

mRNA 磁性分离试剂盒
小鼠 RNase 抑制剂
随机引物混合液

特性

 提供酶混合液与反应混合液，建立反应更加便捷
 适合各种需求的 PCR
 不同起始量的 RNA 都能高效反转录
 合成至少 10 kb 长度的 cDNA
 2 管装混合液方便使用 

概述

 ProtoScript II cDNA 第一链合成试剂盒含有两种经过优化的混合液，ProtoScript II 酶混合液与ProtoScript II 反应混合液。酶混合液含 ProtoScriptII 反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂，反应混合液含dNTP 与经过优化的缓冲液。protoScript II 反转录酶是重组的 M-MuLV 反转录酶，降低了 RNase H 活性且提高了热稳定性。与野生型 M-MuLV 反转录酶相比，ProtoScript II 可在更高的温度下合成第一链 cDNA。该酶活性温度高达 50℃，且具有特异性高、cDNA 产量高的特点。
该试剂盒还提供两种优化的反转录引物和无核酸酶污染的水。Oligo-dT 引物 [d(T)23VN] 能与poly(A)尾的起始端退火；优化的随机引物混合液能随机并持续性的与整个 RNA 模板配对，包括mRNA 和无 polyA 尾的 RNA。第一链 cDNA 合成长度可达 10 kb。

ProtoScript II cDNA 第一链合成试剂盒组分

– 10X ProtoScript II 酶混合液
– 2X ProtoScript II 反应混合液

– 随机引物混合液（60 μM）、Oligo d(T)23VN 引物（50 μM）**、无核酸酶污染的水

**Oligo d(T)23 VN 和随机引物混合液包含 1 mM dNTP 

如需稳定扩增不同种类的 DNA 模板，推荐使用 OneTaq® DNA 聚合酶或 Q5® 超保真 DNA 聚合酶。

 

 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 修复蛋白,核酸内切酶 V #M0305S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

核酸内切酶 V

#M0305S 250 units

特性

 切割含脱氧次黄嘌呤核苷的寡核苷酸
 切割错配 

概述

核酸内切酶 V 是在 E. coli 中发现的一种 DNA 修复酶。它识别 DNA 中的脱氧次黄嘌呤核苷，即脱氧腺苷的去氨基产物。核酸内切酶 V，也称为脱氧次黄嘌呤核苷 3´ 内切酶，识别含脱氧次黄嘌呤核苷（无论配对与否）的双链或单链 DNA。也可识别含脱碱基（AP）位点或尿素、碱基错配、插入/缺失错配、发夹结构、未配对 loop 环、折叠 flaps 和类 -Y 型结构的 DNA，但是识别后者的能力不如前者。普遍认为核酸内切酶 V 发挥 DNA 修复功能时，还需另外一种蛋白的存在，因为它不能切除 DNA 上的脱氧次黄苷或受损碱基。
核酸内切酶 V 对错配脱氧次黄嘌呤核苷 3´ 端第二个磷酸二酯键进行切割，产生一个 3´ 羟基、5´ 磷酸的切刻。 

来源

重组 E. coli 菌株，携带有 Endo V 基因与编码麦芽糖结合蛋白（MBP）基因的融合基因。融合蛋白纯化后具有生物活性。该蛋白含 223 个氨基酸，分子量为 24.9 kDa。 

反应条件

1X NEBuffer 4
[50 mM KAc，20 mM Tris-Ac，10 mM Mg(Ac)2 ，1 mM DTT（pH 7.9 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。 

质保声明

核酸内切酶 V 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

单位定义

1 单位指在 10 μl反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内能够切割 1 pmol 含单脱氧次黄嘌呤核苷位点* 的 34 mer 寡核苷酸双链所需要的酶量。

* 脱氧次黄嘌呤核苷位点的制备：合成 34 mer 寡核苷酸双链时，在其一条链的中间掺入脱氧次黄嘌呤核苷（dI）碱基。 

浓度

10,000 units/ml。 

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NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , cDNA 合成,M-MulV 反转录酶,#M0253L

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – cDNA 合成

M-MulV 反转录酶

#M0253L 50,000 units

#M0253S 10,000 units

特性

·合成 cDNA
·RNA 测序
·RT-PCR 

概述

莫洛尼氏鼠白血病病毒（M-MuLV）反转录酶是一种 RNA 介导的 DNA 聚合酶。该酶能以 RNA（合成 cDNA 时）或单链 DNA 做模板由引物起始合成一条互补的 DNA。M-MuLV 反转录酶无 3´→5´ 核酸外切酶活性。 

来源

 重组 E. coli 菌株，携带有从 M-MuLV 中克隆的反转录酶基因。

反应条件

 1X M-MuLV 反转录酶反应缓冲液 [50mM Tris-HCl（pH 8.3 @ 25℃），75 mM KCl，3 mMMgCl2，10 mM DTT]，加入 dNTPs（不随酶提供），37-42℃ 温育。热失活：65℃ 20 分钟。

质保声明

 无核酸内切酶、外切酶和 RNase 污染。

单位定义

 1 单位指以 poly（rA）为模板、oligo（dT）为引物，在 37℃ 条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入形成酸不溶物所需要的酶量。

浓度

 200,000 units/ml。

NEB代理,T4 PDG 嘧啶二聚体糖基化酶,T4 核酸内切酶 V,#M0308S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

T4 PDG 嘧啶二聚体糖基化酶（T4 核酸内切酶 V）

#M0308S 2,000 units

特性

 DNA 损伤研究
 单细胞凝胶电泳（彗星实验） 

概述

T4 PDG（T4 嘧啶二聚体糖基化酶）既有 DNA 糖基化酶活性，又有 AP 裂解酶活性。16 KD 的蛋白质可识别因紫外线照射引起的 cis-syn 型环丁烷嘧啶二聚体。该酶切割嘧啶二聚体的 5´ 端糖苷键，同时其内切酶活性切割 AP 位点上的磷酸二酯键。 

来源

含有编码 T4 denV 基因质粒的 E. coli 菌株。 

反应条件

1X T4 PDG 反应缓冲液
[25 mM Na2PO4（pH 7.2 @ 25℃），100 mM NaCl，1 mM EDTA，1 mM DTT]。加入 100 μg/ml BSA，37℃ 温育。 

质保声明

T4 嘧啶二聚体糖基化酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位指 20 μl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟内使超过95% 的 0.5 μg 经紫外线照射诱变的超螺旋 pUC19 DNA 变成切刻型质粒的酶量。切刻可通过琼脂糖凝胶电泳来检测。诱变后的质粒 DNA 平均含有 3-5 个嘧啶二聚体。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

浓度

10,000 units/ml。 

注意事项

为取得最佳使用效果，建议温育时间不超过 30 分钟。

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NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 修复蛋白,PreCR® 修复混合液 #M0309L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

PreCR® 修复混合液

#M0309L 150 次反应

#M0309S 30 次反应

相关产品

beta-Nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+)

特性

 用于 PCR 反应、微阵列分析和其它 DNA 技术

 操作简便
 不损伤模板 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 修复蛋白

概述

PreCR 修复混合液是一种鸡尾酒式的酶混合试剂，用于在 PCR 反应、微阵列分析或其它 DNA 技术之前，修复受损的 DNA 模板。PreCR 修复混合液作用于多种受损 DNA，包括那些阻碍 PCR 反应的损伤（如：缺嘌呤/缺嘧啶点、胸腺嘧啶二聚体、切刻和缺口）和经诱导而发生突变的位点（如：脱氨基胞嘧啶和 8－氧鸟嘌呤）。此外，它将去除 DNA 3´ 末端的多种半基团而保留羟基基团。PreCR 修复混合液不能修复所有抑制和干扰 PCR 的损伤。PreCR 修复混合液可以与任何一种嗜热聚合酶配合使用。

来源

混合液中每一种重组蛋白都来自 E.coli 菌株的表达。 

应用

在 PCR 或其它 DNA 技术之前修复 DNA。 

试剂组成

1X PreCR 修复混合液
10X ThermoPol 反应缓冲液
100X NAD+ 溶液
对照模板（紫外损伤的 λDNA）
对照模板使用的 PCR 引物

纯化的 BSA 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 修复蛋白
使用 PreCR 修复混合液修复不同类型的 DNA 损伤。胶图显示了经过 PreCR 修复混合液处理（+）和未经处理（-）的受损 DNA 的扩增结果。DNA 损伤的类型已经在图上方给出。注意：热处理 DNA 为 99℃ 温育 3 分钟。Marker M 是 2- Log DNA Ladder (NEB ＃3200)。

DNA 损伤类型
NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 修复蛋白

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,人源烷基腺嘌呤 DNA 糖基化酶hAAG,#M0313S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

人源烷基腺嘌呤 DNA 糖基化酶（hAAG）

#M0313S 500 units

特性

 单细胞凝胶电泳（彗星试验）
 碱洗脱
 碱解旋 

概述

人类烷基腺嘌呤 DNA 糖基化酶（hAAG）作用于烷基化和氧化了的 DNA 损伤位点，包括 3-甲基腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、1,N6-乙烯基腺嘌呤和次黄嘌呤。hAAG 催化 N-糖苷键的水解断裂，释放受损碱基。hAAG 也被称作甲基嘌呤 DNA 糖基化酶（MPG）或 3-甲基腺嘌呤－DNA 糖基化酶（ANPG）。 

来源

克隆有截短型人类 AAG 基因的 E. coli 菌株。 

反应条件

1X ThermoPol 反应缓冲液
[10 mM KCl，10 mM (NH4)2S04，20 mM Tris-HCl，2 mM MgS04，0.1% Triton X-100（pH 8.8 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。 

质保声明

人类烷基腺嘌呤 DNA 糖基化酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位是指在 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时从 1 pmol 含有单一脱氧次黄嘌呤核苷位点的 34 mer 寡核苷酸双链产生一个 AP 位点所需的酶量。

浓度

10,000 units/ml。 

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

关于该酶性质和产品应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375。 

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , cDNA 合成,WarmStart®RTx 反转录酶,#M0380L

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – cDNA 合成

WarmStart®RTx 反转录酶

#M0380L 250 次反应

#M0380S 50 次反应

特性

 RT-LAMP
 cDNA 合成
 要求在室温下建立的 RT 反应 

概述

WarmStart® RTx 反转录酶是一种依赖 RNA 的 DNA 聚合酶，它利用核酸适配体技术，通过共价键作用结合到聚合酶上，从而抑制 RTx 在 40℃ 以下的活性。WarmStart RTx 以 RNA（cDNA 合成）或单链 DNA 作为模板合成互补 DNA 链。RTx 酶适用于扩增反应中 RNA 的检测，特别适用于 LAMP（环介导等温扩增）实验。WarmStart 特性是：特别适用于高通量反应，室温下建立反应，并提高扩增反应的一致性和特异性。RTx 反转录酶包含完整的 RNase H 活性。 

来源

 重组 E. coli 菌株，携带有基因工程改造的RTx 基因。

反应条件

25 μl 反应体系中包括：1X 等温扩增反应缓冲液、模板、引物、dNTPs 和 0.25-0.5 μl WarmStart RTx 反转录酶，50-55℃ cDNA 合成或者直接 65℃ 进行一步法 RT-LAMP。热失活：80℃ 10分钟。

质保声明

 无核酸内切酶、外切酶和 RNase 污染。

单位定义

1 单位指 50 μl 反应体系中，以 poly(rA)•oligo(dT)18 为模板，50℃ 条件下，20 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入酸不溶性物中所需要的酶量。

浓度

 15,000 units/ml。

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , cDNA 合成,Induro™ 反转录酶,#M0681L

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – cDNA 合成

Induro™ 反转录酶

#M0681L 10,000 units

#M0681S 4,000 units

产品特性

• 反转录延伸能力强，可快速获得大量长片段 cDNA

• 强大的抑制剂耐受能力，使 cDNA 合成更稳定
• 适用于 RNA直接测序和长片段 cDNA 测序
• 热稳定性更强，高温条件下合成 cDNA 更稳定
• 与源自逆转录病毒的反转录酶保真度相当

产品描述

体验新型反转录酶，感受II 型内含子编码的反转录酶带来的超强反转录活性

Induro 反转录酶是由 II 型内含子编码的反转录酶，在 RNA 反转录合成 cDNA 过程中，展示出更强持续合成能力、热稳定性，以及抑制剂耐受能力。特别适用于长转录本、复杂二级结构，以及含有抑制成分的 RNA 样品反转录合成 cDNA。Induro 反转录酶提升了长转录本的 5′ 端测序覆盖度，因此适用于 RNA-seq 应用，例如：RNA 直接测序、长片段 cDNA 测序。

 

图 1：Induro 反转录酶的持续合成能力强，能够快速高效合成 cDNA

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , cDNA 合成

Induro 反转录酶能够在 55℃ 条件下，5 分钟内合成 12 kb cDNA 全长产物。以体外转录获得的不同长度且带有 Poly (A) 尾的 RNA 作为模板 (1 kb、4 kb、8 kb 或 12 kb)，验证全长 cDNA 反转录效果。验证全长 cDNA 的合成效果。首先，合成第一链 cDNA，随后，用 NaOH 水解 RNA 链，然后，将 cDNA 产物等分，分别加入 5´ 特异性引物合成全长双链 cDNA。最后，在琼脂糖凝胶上加入等体积的双链 cDNA 产物进行检测。

 

图 2：Induro 反转录酶热稳定性能卓越，能够在更高反应温度下稳定合成

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , cDNA 合成

Induro 反转录酶能够在 45°C-60°C条件下，10 分钟内合成 12 kb cDNA 全长产物。以体外转录获得的不同长度且带有 Poly (A) 尾的 RNA 作为模板 (1 kb、4 kb、8 kb 或 12 kb)，验证全长 cDNA 的合成效果。首先，合成第一链 cDNA，随后，用 NaOH 水解 RNA 链，然后，将 cDNA 产物等分，分别加入 5´ 特异性引物合成全长双链 cDNA。最后，在琼脂糖凝胶上加入等体积的双链 cDNA 产物进行检测。

 

图 3：Induro 反转录酶合成长片段 cDNA 时，产量最高

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , cDNA 合成

转录本长度 ≥8 kb 时，Induro 反转录酶合成的 cDNA 产量最高。以体外转录获得的不同长度且带有 Poly (A) 尾的 RNA 作为模板 (1 kb、4 kb、8 kb 或 12 kb) 。首先，合成第一链 cDNA，随后，水解 RNA 链，加入 5´ 特异性引物合成第二链 cDNA

 

图 4：Induro 反转录酶能够以复杂的人 RNA 为模板，反转录合成长片段 cDNA

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , cDNA 合成

Induro 反转录酶能够以人总 RNA 为模板，分别在 50°C、55°C 或 60°C 条件下，经 10 分钟孵育，合成 >14 kb cDNA 产物。第一链 cDNA 合成后，将产物等分，使用 LongAmp® Taq 2X 预混液 (NEB #M0287) 进行 PCR。

 

图 5：Induro 反转录酶耐受抑制剂的能力比 TGIRT 更强

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , cDNA 合成

与 TGIRT®-III酶 (T) 相比，Induro 反转录酶 (I) 对 RNA 生物样品中常见的抑制成分耐受力更强。在 20 μ 反转录体系中加入 1 μg 长度为 8 kb 的 RNA 体外转录产物（含 poly A）和 oligo dT23VN。所有反应组分（包含 RT 酶）在冰上混合均匀后，加入抑制剂。Induro 的反转录条件为：55°C 10 min，95°C 1 min。TGIRT 的反转录条件为：60℃ 60 min，95℃ 1 min。图中抑制剂含量为其在第一链 cDNA 合成体系中的终浓度。之后加入 5´ 特异性引物合成第二链。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 修复蛋白,南极热敏 UDG,#M0372L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

南极热敏 UDG

#M0372L 500 units

#M0372S 100 units

特性

 去除 PCR 残存污染
去除单链或双链 DNA 尿嘧啶碱基
 

概述

南极热敏 UDG (尿嘧啶-DNA 糖基化酶)能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶，产生的缺嘧啶位点，在高温或高 pH 下，极易水解断裂。升高温度和 pH 都会影响其水解活性。该产品对高温敏感，50℃ 以上就可以将酶完全失活。 

来源

克隆有来自嗜冷海洋细菌（psychrophilic marine bacterium）UDG 基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X 标准 Taq 反应缓冲液
[10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1.5 mM MgCl2（pH 8.3 @25℃）]，37℃ 温育。
热失活：50℃ 加热 5 分钟。 

质保声明

南极热敏 UDG 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

单位定义

1 单位指每分钟催化 60 pmol 尿嘧啶从含尿嘧啶的双链 DNA 上释放所需要的酶量。检测条件为：50 μl 标准 Taq 反应缓冲液中，37℃ 条件下，30 分钟从含 0.2 μg DNA（104-105 cpm/μg）的反应体系中释放 [3H]-尿嘧啶的量来确定活性。 

浓度

1,000 units/ml。 

注意事项

南极热敏 UDG 在多数 PCR 反应缓冲液中均有活性，但活性受高离子强度（＞ 100 mM）抑制。 

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

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NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 修复蛋白,切割错配核酸内切酶 I#M0678S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

切割错配核酸内切酶 I

#M0678S 4,000 units

产品特点

 NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 修复蛋白

• DNA 核酸内切酶
• 催化切割一些 DNA 错配（T:T，G:G 和 G:T）
• 在两条链上错配碱基 5’端的第三个磷酸二酯键处切割，切割后产生 5 bp 粘性末端，含 3′-OH 和 5′- 磷酸
• 对于 T 错配切割效果最好；无法识别所有类型的 DNA 错配

产品描述

切割错配核酸内切酶 I 是一种依赖 Mg2+ 的 DNA 核酸内切酶，可特异切割错配碱基对（T:T、G:G 和 T:G 错配）。切割错配核酸内切酶 I 在两条链上错配碱基 5’端的第三个磷酸二酯键处切割，切割后产生 5 bp 粘性末端。切割错配核酸内切酶 I 优先切割的 DNA 错配为:T:T、G:G 和 T:G，也可轻松切割 T:I、G:I 和 G:U 错配。此外，实验证明：切割错配核酸内切酶 I 在 T:C 类型的 DNA 错配中可在含 T 的链上形成切刻。该酶还能切割 DNA:RNA 杂交链上的 T:G 和 T:U 错配，但其切割效率低于 DNA:DNA 错配。

 

图 1.切割错配核酸内切酶 I 能够切割双链 DNA 上的 T:T、G:T 和 G:G 错配
NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 修复蛋白

（A）构建四个在同一位点包含特定突变质粒（p1-p4），使用差异磷酸化引物（正向或反向）扩增生成 8 个双链 PCR 片段，长度约 672 bp （ds1-ds8）。经 Monarch PCR & DNA 纯化试剂盒（NEB #T1030）纯化后，使用 5 units Lambda 核酸外切酶，经37℃孵育 60 分钟，以特异性降解双链片段中的磷酸化链（2.2 µg），从而产生一系列单链（正链/负链），同一位点碱基为 A/T/C/G。随后使用 Monarch PCR & DNA 纯化试剂盒（NEB #T1030）对这些单链片段（ss1-ss8）进行纯化。

（B）将纯化后的含有 A/T/C/G 的单链片段进行混合，可形成精准配对的 DNA（绿色 √ 框）或含单碱基错配的双链片段（黄色 × 框）。为了生含错配碱基的双链，在下述条件下，选择特定的正/反义链进行混合：在 1X NEBuffer 2.1 中重新退火，加热至 95℃，再冷却至室温。上述实验可产生 8 种 DNA 错配（A:A、A:C、A:G、C:C、C:T、G:G、G:T、T:T）。（C）如下方法检测该酶切割 dsDNA 中特定错配的能力：在 200 ng 含错配的 dsDNA 中加入 80 units 切割错配核酸内切酶 I，37℃孵育 30 分钟。后将产物进行琼脂糖（1.2%）凝胶电泳并用溴化乙锭染色观察。

图 2.切割错配核酸内切酶 I 能够切割双链 DNA 上的 T:T、G:T 和 G:G 错配 

 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 修复蛋白

使用前端带有 FAM 荧光标记（蓝色示踪染料），末端带有 ROX 荧光标记（红色示踪染料）的双链 DNA 片段与80 units 切割错配核酸内切酶 I（+M0678）在 NEBuffer r2.1 中，37℃孵育 30 分钟，用于测定切割错配核酸内切酶 I 切割 dsDNA 中特定错配的能力。样品经毛细管电泳分析显示：酶解样品（+M0678 样品）与未经酶处理的样品（-M0678）相比，T:T、G:T 和 G:G 错配的底物峰发生偏移。此外，在 30 分钟内即可看到 T:C 错配中的含 T 链（蓝色链）出现一些轻微切割。该酶在 T:C 错配底物上的切刻活性随着时间的推移而增加（最多 18 小时，本数据未显示）。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , 重组酶,Cre 重组酶#M0298L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 重组酶

Cre 重组酶

#M0298L 250 units

#M0298M（高浓度5X）250 units

#M0298S 50 units

特性

 两个 loxP 位点之间 DNA 的切割
 含 loxP 位点 DNA 分子的融合
 loxP 位点之间 DNA 序列的翻转 

概述

Cre 重组酶是细菌噬菌体 P1 的 I 型拓扑异构酶，催化 loxP 位点间的 DNA 进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子，Cre 介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡。loxP 识别一个 34 bp 序列，其两端是两个 13 bp 的反向重复序列，中间是起定向作用的 8 bp 间隔区。重组产物根据 loxP 位点的位置和相对方向而不同，两个含单 loxP 位点的 DNA 将被融合。两个正向重复 loxP 位点间的 DNA 将以环状形式切割，而两个反向 loxP 位点间的 DNA 序列将被翻转。 

来源

纯化自重组 E. coli 菌株，其携带有编码细菌噬菌体 P1 的 Cre 重组酶的质粒，酶的 N 端添加了丙氨酸和甘氨酸残基。 

反应条件

1X Cre 重组酶反应缓冲液
[33 mM NaCl，50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM MgCl2]，37℃ 温育。
热失活：70℃ 加热 10 分钟。 

单位定义

1 单位指在 50 μl 反应体系，37℃ 条件下，30 分钟使 0.25 μg 的 pLox2+ 对照 DNA 产生最大位点特异性重组所要的酶量。最大重组可以通过琼脂糖凝胶电泳分析或通过反应物转化后进行氨苄抗性平板筛选。 

浓度

1,000 units/ml 和15,000 units/ml

注意事项

建议进行琼脂糖凝胶电泳前，将 Cre 重组酶反应混合物于 70℃ 温育 10 分钟。

由于 Cre 重组酶反应是一个动态平衡过程，用 loxP2+ 对照底物仅有 20-30%发生重组。由于重组产物的量较少，故溴化乙锭染色后呈现微弱条带，同时伴有底物染色强度相应减弱。

延长温育时间不会提高重组效率，反而还可能导致大分子量重组产物的生成。

反应中增加 Cre 重组酶量将形成 loxP 依赖性 Cre-DNA 复合物，从而抑制重组反应。 

对照 DNA

线性化 pLox2+ 长 3,625 bp，距两端 400 bp 处各有一 loxP 位点。两 loxP 位点之间有一复制原点和一个氨苄青霉素抗性基因。loxP 位点之间的重组产生一个环状（2,787 bp）的氨苄青霉素抗性质粒（0.8% 琼脂糖凝胶电泳约 1.7 kb 大小）和一个 838 bp 长的 DNA 片段。 

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

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NEB代理,LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒,#E3010L

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒

#E3010L 100 rxns

#E3010S 25 rxns

相关产品

Luna 通用 qPCR 预混液

Luna 通用探针法 qPCR 预混液

特性

·15 分钟内完成 cDNA 第一链的合成

·与 Luna qPCR 预混液搭配使用，RT-qPCR 效果更优异

概述:

  LunaScript SuperMix 反转录试剂盒是经过优化的预混液，用于两步法 RT–qPCR 的第一步 cDNA 第一链合成。该预混液最具特色的是采用了耐热 Luna 反转录酶，可在高温下合成 cDNA。预混液中的小鼠 RNase 抑制剂可保护模板 RNA 不被降解。在预混液中同时含有 6 碱基随机引物和 poly-dT 引物，可覆盖全长目标 RNA。

 
此外，LunaScript SuperMix 反转录试剂盒含有可视蓝色示踪染料，在两步法 RT–qPCR 实验中起到提示作用。无论起始量是高达 1 μg 的总 RNA，还是低到单拷贝的总 RNA，使用该试剂盒进行反转录，都能获得稳定的、线性的和高灵敏度的检测结果。

LunaScript SuperMix 反转录试剂盒组分

–  LunaScript RT SurperMix

–  无反转录酶对照预混液 
–  无核酸酶水

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶,HpaII 甲基转移酶#M0214S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 甲基转移酶

HpaII 甲基转移酶

#M0214S 100 units     

识别位点

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶

概述

HpaII 甲基转移酶与 MspI 甲基转移酶识别序列相同，但对左侧序列中的内侧胞嘧啶（C5）进行甲基化。 

来源

重组 E. coli 菌株，携带有从副流感嗜血杆菌（Haemophilus parainfluenzae）（ATCC 49669）克隆的 HpaII 修饰基因。 

反应条件

1X HpaII 甲基转移酶缓冲液 + SAM
[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM EDTA，5 mM 2-巯基乙醇]。加入 80 μM SAM（随酶提供），37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。 

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能保护 1 μg λDNA 不被 HpaII 限制性内切酶切割所需要的酶量。 

浓度

4,000 units/ml。 

NEB代理,LunaScript® 反转录预混液试剂盒,无引物,#E3025L

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

LunaScript® 反转录预混液试剂盒（无引物）

#E3025L 100 rxn

#E3025S 25 rxn

产品特点

LunaScript® 反转录预混液试剂盒（无引物）是经过优化的 5X 预混液，包含除引物外第一链 cDNA 合成所需的所有组分。
·该 5X 预混液提供 Luna 反转录酶、dNTP 和小鼠 RNase 抑制剂。
·不含引物剂型可让用户更灵活的选择引物，以达到 cDNA 合成最佳效果
·15 分钟内即可完成第一链 cDNA 合成
·可用于第一链 cDNA 合成、两步法 RT-qPCR、两步法 RT-PCR以及 RNA-seq
·包含无干扰、可视化蓝色示踪染料，有助于减少加样错误
·提供 No-RT 对照预混液，增加实验可信度

产品说明

LunaScript® 反转录预混液试剂盒（无引物）包含经过优化后的 5X 预混液，以及除引物外第一链 cDNA 合成所需的所有组分。该预混液含有具备热稳定特性的 Luna 反转录酶，可在更高温下合成 cDNA。试剂盒还提供小鼠 RNase 抑制剂（保护模板 RNA 免受降解）和 dNTP。此外，组分中的蓝色示踪染料可为反转录和下游应用提供可视化示踪。
该预混液与随机引物、oligo dT 引物以及基因特异性引物兼容，让 cDNA 合成更灵活。LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）合成的 cDNA 产物可用于多种下游应用。在实时定量 PCR 中，建议使用混有随机引物及 oligo dT 的混合引物合成 cDNA。与 LunaScript SuperMix 反转录试剂盒（NEB #E3010）一样，无论是 1 μg 总 RNA 还是低拷贝 RNA，该预混液均能提供稳健、线性和灵敏的检测。如需合成长片段或全长 cDNA，则建议使用 oligo dT 引物。仅需 55℃ 孵育 10 分钟，LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）即可合成长达 9 kb 的 cDNA 产物。试剂盒还提供 No-RT 对照预混液，可快速建立对照反应体系。
图 1：三种 cDNA 合成试剂的区别：Supermix、预混液、cDNA 合成试剂盒
NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR
图 2：LunaScript 第一链 cDNA 合成时间最短，仅需 13 分钟
NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR
比较不同厂家的 cDNA 合成方案。LunaScript SuperMix 反转录试剂盒和 LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）所需反应时间最短，并可以耐受高温，降低 RNA 复杂二级结构的影响。
图 3：LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）支持多种下游应用
NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR
通过使用不同的引物（例如：随机引物混合液、d（T））23VN 引物或随机六聚体引物），LunaScript 反转录预混液试剂盒合成的 cDNA可适于不同下游应用（例如：RT-qPCR、RT-PCR 和 RNA-seq）。
图 4：在两步法 RT-qPCR 定量中，LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）功效稳健
 NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR
 A．使用随机引物混合液（NEB #S1330）和 LunaScript 反转录预混液（无引物）对1 µg 至 100 pg RNA 进行反转录，并进行两步法 RT-qPCR 检测，结果显示：与 LunaScript （NEB #E3010）一致，合成 cDNA 产量均展现出良好的线性度。
B．对于常规转录本，使用 d（T）23VN 引物获得的 cDNA 覆盖度与随机引物混合液一致。但对于长转录本（例如：SMG1），随机引物混合液能更好地覆盖靶基因 5´端，右下角图框所示：RT-qPCR 的靶基因位于 SMG1（16 kb）转录本的 5´端；与随机引物混合液（随机六聚体引物和 dT 锚定引物的混合物）相比，单独使用 dT 锚定引物（d（T）23VN）的 Cq 值延迟
图 5：在两步法 RT-qPCR 中，LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）性能更优异
NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR
A．根据各厂商产品说明书，使用几种市售第一链 cDNA 合成试剂盒将 1 μg–100 pg 人总 RNA 反转录成 cDNA，引物为随产品提供的随机引物。通过 8 个靶基因（丰度、长度和 GC 含
量不同）的 qPCR 结果对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用探针法 qPCR 预混液（NEB# M3004）对 cDNA 产物进行 qPCR 检测。结果评估了扩增效率和 ΔCq，其中 ΔCq 衡量低起始量检测和缺乏无模板对照（NTC）扩增（ΔCq=NTC 的平均 Cq-最低起始量的平均 Cq）。绿色框表示靶基因扩增表现（效率=90-110％，ΔCq≥3）。关于该可视化分析方法的详细信息，请在NEB 官网搜索“High-Throughput Data Analysis for qPCR”。
B．根据上述 4 个靶基因（两个经典内参基因和两个其它基因）的 Cq 值和上样量绘制曲线，结果显示：与其它商品化试剂盒相比，LunaScript 的 Cq 值最低。
图 6：在常规 PCR 或高保真 PCR 中，LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）能够合成不同长度范围 cDNA
 NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR

 使用 LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）将 1 μg Jurkat 总 RNA 反转录成 cDNA，引物为 d（T））23VN，使用标准反应条件 55℃ 孵育 10 分钟，95℃ 孵育 1 分钟。之后使用不同 PCR 扩增试剂对 cDNA 产物进行检测。对于 5 kb以内的常规应用，建议使用 OneTaq 2X 预混液（NEB #M0482）；对于高保真扩增，建议使用 Q5 热启动超保真 2X 预混液（NEB #M0494）；对于长片段高产量扩增，建议使用 LongAmp Taq 2X 预混液（NEB #M0287）（数据未显示）

NEB代理,Luna® Cell Ready 裂解模块,#E3032S

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

Luna® Cell Ready 裂解模块

#E3032S 100 rxns

特性

 ·仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除
 ·一次反应高效可裂解 10 至 10 万个细胞，适用于众多细胞系
 ·与其它 RNA 提取方法相比减少了样品损失，尤其对于低细胞起始量。
 ·兼容高通量应用，可在室温下进行细胞裂解
 ·与 Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒搭配使用时性能最佳：NEB＃E3005（染料法）或 NEB＃E3006（探针法） 
 ·提供完整的细胞裂解和一步法 RT-qPCR 试剂盒方案：NEB #E3030（染料法）或 NEB #E3031（探针法）

概述

   细胞培养常用于替代活体生物来分析基因表达或对治疗的反应。传统上使用柱提法或化学试剂法从处理过的细胞中提取和纯化 RNA.Luna Cell Ready 裂解模块无需进行传统的 RNA 提取步骤即可评估RNA表达水平，是一种快速、方便且灵敏的替代方案。该模块可同时进行细胞裂解、RNA 释放、基因组 DNA 去除，获得的细胞裂解物可直接使用Luna通用一步法 RT-qPCR 试剂盒进行 RT-qPCR 分析。与其它 Luna 产品一样，裂解缓冲液包含惰性蓝色示踪染料，使整个加样流程可视化。

下表列出的细胞系可使用 Luna Cell Ready 裂解模块裂解。这些细胞进行 5 log 梯度稀释（100000-10 细胞/50 µl 裂解反应），并取 1 ul 裂解产物进行 20 µl 体系的一步法 RT-qPCR 反应。每个细胞系的线性结果区域显示在最后一列。此外，经测试一些昆虫细胞系也能用上述裂解液裂解。

表一：经验证过的细胞系

细胞系

特性

菌种

50 ml 裂解体系中的细胞数量

A549

Adherent

H. sapiens, Lung, carcinoma

10 – 100,000

HEK293

Adherent

H. sapiens, Kidney

10 – 100,000

HeLa

Adherent

H. sapiens, Cervix, adenocarcinoma

10 – 100,000

HepG2

Adherent

H. sapiens, Liver, carcinoma

10 – 100,000

NCI-H460

Adherent

H. sapiens, Lung, carcinoma

10 – 100,000

SK-N-SH

Adherent

H. sapiens, Brain, Neuroblastoma

10 – 100,000

U2Os

Adherent

H. sapiens, Bone, osteosarcoma

10 – 10,000

Jurkat

Suspension

H. sapiens, T lymphocyte, leukemia

10 – 100,000

K-562

Suspension

H. sapiens, Lymphoblast, leukemia

10 – 1,000

图一：Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 实验流程

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR

Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I 和 Luna Cell Ready 蛋白酶的功能，可简单高效的进行细胞裂解，仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除。2 µl 裂解产物（相当于 0.2–4000 个细胞中的 RNA）即可实现 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。

试剂盒组分

随该产品提供的试剂

储存（°C）

浓度

Luna Cell Ready Lysis Buffer

-20

2 X

Luna Cell Ready RNA Protection Reagent

-20

25 X

Luna Cell Ready Protease

-20

25 X

Luna Cell Ready Stop Solution

-20

10 X

DNase I （RNase-free）

-20

10 X

 实验需要但不提供的试剂耗材

  •    磷酸盐缓冲液（PBS）
  •    目标特异性引物
  •    细胞
  •    Eppendorf 管
  •    PCR 联管
  •    PCR 板
  •    移液器和枪头（为减少交叉污染，应使用带滤芯的枪头）

    储存温度

 -20℃

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶,BamHI 甲基转移酶,#M0223L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 甲基转移酶

BamHI 甲基转移酶

#M0223L 500 units

#M0223S 100 units      

识别位点

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶

概述

BamHI 甲基转移酶能对左侧序列中的内侧胞嘧啶残基（N4）进行甲基化修饰。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有从解淀粉芽孢杆菌 H（Bacillus amyloliquefaciens）（ATCC 49763）克隆的 BamHI 修饰基因。 

反应条件

1X BamHI 甲基转移酶缓冲液 + SAM
[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM EDTA，5 mM DTT]。加入 80 μM SAM（随酶提供），37℃ 温育。 

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能保护 1 μg λDNA 不被 BamHI 限制性内切酶切割所需要的酶量。 

浓度

4,000 units/ml。 

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR,Luna® 通用 qPCR 预混液,#M3003E

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

Luna® 通用 qPCR 预混液

#M3003E 2500次反应

#M3003L 500次反应

#M3003S 200次反应

#M3003V 100次反应

#M3003X 1000次反应

相关产品：

南极热敏 UDG

特性

· 一种应用对应一种产品，简化选择
· 方便的预混液形式及易操作的实验步骤
· 肉眼可见的示踪染料避免加样失误
· Luna 系列产品经过严格的优化及检测以确保特异性、灵敏度、精确性及可重复性
· 独特校正染料，与多种 qPCR 设备兼容

概述

快速、灵敏、精确的实时荧光染料定量检测 DNA 和 cDNA

使用实时荧光染料定量 PCR 时，最常用的荧光染料是 SYBR® Green I，后者与双链 DNA 结合，检测每个 PCR 循环中的 DNA 扩增情况。Cq 值是循环数量值，即检测到的荧光信号超过背景本底信号域值所经历的循环数，该 Cq 值可用于评估两个或两个以上的样本之间的相对丰度，也可以与已知浓度系列稀释的标准曲线进行对比，读取样本绝对值。

NEB Luna Universal qPCR Master Mix 是经过优化的 2X 预混液，可以用于实时定量 PCR检测和目标 DNA 的定量，适用于具有 SYBR®/FAM 通道的大部分 qPCR 设备。预混液含有热启动 Taq DNA 聚合酶及独特校正染料，与一系列 qPCR 设备兼容；预混液中使用了 dUTP，以防止产物残留污染；预混液中还加有非荧光染料，便于建立反应时进行肉眼观察，该染料的光谱与 qPCR 荧光染料不重叠，因此不会影响到实时检测数值。

预混液为 2X，包含除了模板和引物以外，用于 PCR 扩增和定量检测的所有组分。可以使用商业化的 qPCR 分析引物，用 Luna qPCR 产品进行基因组 DNA 或者 cDNA 的定量分析。

图表一：NEB 的 Luna Universal qPCR Master Mix 为 qPCR 带来更高灵敏度及可重复性

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR

使用 Luna Universal qPCR Master Mix 检测目标中 GAPDH 基因的表达情况，模板为 6个分别 10 倍稀释的 Jurkat cDNA (20 ng – 0.2 pg),每个浓度的样品做8个复孔。cDNA 是使用 NEB Protoscript® II First Strand cDNA Synthesis Kit (NEB #E6560) 从 Jurkat 的总 RNA 反转录得来。

图表二：NEB 的 Luna Universal qPCR Master Mix 为不同来源的 DNA 都能提供更高灵敏度和精确度的检测和定量

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR

Luna Universal qPCR Master Mix 可以检测不同来源的基因组 DNA。使用 ABI 7500 快速荧光定量仪器，50 ng – 0.5 pg 的基因组 DNA 对目标进行实时定量检测。基因组 DNA使用传统的柱纯化方法纯化。无论从小鼠肾脏的基因组检测 ACTB 基因、烟草基因组 DNA 检测 psbB 基因、还是从酵母基因组 DNA 中检测 rdn18S，Luna 产品都有非常优秀的表现。

图表三：通过与市场上基于染料的 qPCR 试剂对比，NEB 的 Luna 产品体现出了更优的稳定性和特异性

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR

使用 NEB 公司和其它供应商的试剂，分别对来自于 Jurkat 基因组 DNA或 Jurkat cDNA不同丰度、长度和 GC 含量的 16-18 个目的基因进行检测（使用 Bio-Rad 机器检测 10 个基因组模板和 8 cDNA 模板，使用 ABI 的机器检测9个基因组模板和7 个 cDNA 模板）。每份检测结果由两个实验者根据厂商要求分别得到。使用反应效率、最低检测值以及无模板扩增来衡量结果（ΔCq = average Cq of lowest input – average Cq of non-template control）。此外，一致性、可重复性以及曲线的整体质量评估也作为实验的参考(标准分数)。上面的点状图展示了符合可接受的性能标准的百分比（绿框圈起来的点的标准分＞3）。不同厂商的结果如上图所示，从左到右分别是：NEB；Bio-Rad, SsoAdvanced™ Universal SYBR® Green Supermix； Roche, FastStart™ SYBR Green Master； QIAGEN, QuantiTect® SYBR Green PCR Kit； ABI, PowerUP™ SYBR Green Master Mix； Promega®, GoTaq® qPCR Master Mix。NEB 的Luna Universal qPCR Master Mix 表现优于所有其它供应商试剂的结果。

注释

 1.  引物设计

使用相关软件（如 Primer 3）设计 qPCR 引物时，在减少非特异性扩增和引物二聚体的情况下提高扩增成功率。引物的 GC 含量为 40–60% 可以保证最大的扩增效率。在可能的情况下，尽可能多的输入目标周围区域序列，以便引物序列设计更加完善。使用检索功能，检索相关数据库以避免非特异性扩增。如果模板是 cDNA ，在设计引物的时候可以跨内含子区域来避免基因组的非特异性扩增。相反，如果引物设计在内含子区域则可以保证基因组区域的特异性扩增。

2.  引物浓度

对于大多数模板来说，引物的终浓度 250 nM 就可以达到要求。如果需要的话，引物的浓度可以在 100–500 nM 之间优化。

3.  扩增子长度

为了确保 qPCR 结果的成功和一致性，PCR 效率的最大化非常重要。其中一方面就是设计短的 PCR 产物（70-200 bp）。如果反应产物超出范围，可能需要对实验进行优化（比如增加延伸时间等）

4.  模板准备及相关浓度

Luna qPCR 试剂与通过典型的核酸纯化方法纯化的 DNA 样本都兼容。制备好的 DNA 可以长期稳定储存在包含 EDTA 的缓冲液中（如 1X TE），实验时使用 TE buffer 或者水进行稀释。

一般来说，标准品和未知样品的浓度范围应该在 1 个拷贝到 106 个拷贝之间。如果是大型基因组样本（如人类或老鼠的 gDNA）一般浓度为 50 ng-1 pg。如果是小型基因组样本，可以参考使用1 个拷贝到 106 个拷贝的浓度。对于单一样本的稀释，样本中需要包含多个拷贝和空白对照。对于 cDNA 样本，可以使用 1 μg–0.1 pg 的 RNA 的反转录产物。cDNA 样本不需要纯化，但是在使用之前需要至少稀释 10 倍

5.  ROX 校正染料

有些实时定量设备建议使用校正染料（通常是 ROX）来校正由于气泡、微小的体积差别、管与管之间的差异及反应过程中尘埃或者微粒的自发荧光造成的反应差距。Luna Universal qPCR Master Mix 包含了通用型的校正染料，可以兼容不需要使用校正染料以及需要使用低浓度或者高浓度校正染料(ROX)的一系列的荧光定量检测仪器。因此，在使用这些仪器进行 qPCR 实验时，不需要额外的组分。

6.  预防污染

qPCR 是一种非常灵敏的检测方法，前个 qPCR 产物污染下一个样本会带来一系列的问题，如假阳性及灵敏度的下降。防止污染的最好办法就是严格按照程序操作，避免扩增后的开盖。为了进一步满足预防交叉污染的要求，Luna Universal qPCR Master Mix 中包含了 dUTP/dTTP，从而可以在扩增过程中将 U 掺入到 DNA 产物中。qPCR 前使用尿嘧啶 DNA 糖基化酶（UDG）进行预先处理，就可以水解含有尿嘧啶的产物，以防止污染后续试验。使用能够完全失活的 UDG 是至关重要的，否则 UDG 会破坏新合成的 qPCR 产物。

为了避免产物携带污染，在反应体系中加入终浓度为 0.025 units/μl 的南极热敏 UDG（NEB #M0372）。欲将污染的可能性降到最低，最好在室温下建立反应或者在变性步骤前加上

25℃ 温育 10 分钟

7.  反应条件设定

由于聚合酶的热启动性，在实验前不需要预热机器，也不需要在冰上加样。

如果使用96 孔板，建议使用 20 μl 反应体积。

如果使用 384 孔板，建议使用 10 μl 反应体积。在设定仪器的循环条件时，保证在延伸结束时包含一次读板并在循环结束后生成溶解曲线以分析产物的特异性。

大部分应用分析反应 40 个循环就可以，低起始量的样本可以反应 45 个循环。

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR,Luna® 通用探针法 qPCR 预混液,#M3004E

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

Luna® 通用探针法 qPCR 预混液

#M3004E 2500次反应

#M3004L 500次反应

#M3004S 200次反应

#M3004V 100次反应

#M3004X 1000次反应

相关产品

南极热敏 UDG

特性

·一种应用对应一种产品，简化选择
·方便的预混液形式及易操作的实验步骤
·肉眼可见的示踪染料避免加样失误
·Luna 系列产品经过严格的优化及检测以确保特异性、灵敏度、精确性及可重复性
·独特校正染料，与多种 qPCR 设备兼容

概述

  NEB Luna 通用 qPCR 预混液是经过优化的2X 预混液，用于实时定量 PCR 检测和目标 DNA 的定量，适用于具有 SYBR®/FAM 通道的大部分 qPCR仪器。

 

NEB Luna 通用探针法 qPCR 预混液是经过优化的2X 预混液，通过使用水解探针来进行实时定量PCR 检测和目标 DNA 的定量。
Luna 预混液中含有热启动 Taq DNA 聚合酶及独特校正染料，可以兼容多种仪器平台，包含需要ROX 染料校正的仪器。这意味着实验操作过程中不需要额外添加染料。预混液中包含 dUTP，qPCR前使用 NEB 的南极热敏 UDG 进行预处理以防止产物残留污染。预混液中还加有肉眼可见的蓝色染料，在向透明多孔 PCR 板中加样时起指示作用。快速、灵敏、精确的 Luna qPCR 产品必将成为您实时定量实验的首选。

luna产品选择表

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR

NEB代理,LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液,#M3010E

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液

#M3010E 2500 rxns

#M3010L 100 rxns

#M3010X 500 rxns

产品描述

该产品为不含 No-RT 对照和无核酶水的预混液剂型
LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 (NEB #E3010) 包含反转录预混液、No-RT 对照、无核酶水
适用于 ARTIC SARS-CoV-2 测序流程，是 NEBNext® ARTIC SARS-CoV-2 试剂盒中的组分之一。

特性

· 单管预混液剂型，包含：随机六聚体引物和 oligo-dT 引物、dNTP、小鼠 RNase 抑制剂，以及 Luna 反转录酶。
·15 分钟内即可完成第一链 cDNA 合成，
·新型热稳定型 Luna 反转录酶能够有效改善实验表现
·与 Luna qPCR 预混液 (NEB #M3003，M3004) 联合使用，提升 RT-qPCR 检测功效
·包含无干扰、可视化蓝色示踪染料，有助于减少加样错误
·无引物剂型货号为 NEB #E3025
·该产品为不含无核酶水和 No-RT 对照的预混液剂型
1.   Josh Quick 2020. nCoV-2019 sequencing protocol v3 (LoCost).
https://www.protocols.io/view/ncov-2019-sequencing-protocol-v3-locost-bp2l6n26rgqe/v3

概述

 LunaScript 反转录 SuperMix 为优化的反转录预混液，可用于第一链 cDNA 合成、扩增子测序，以及两步法 RT-qPCR。该预混液含有具备热稳定特性的 Luna 反转录酶，可在更高温下合成 cDNA。试剂盒还提供小鼠 RNase 抑制剂，以保护模板 RNA 免受降解。LunaScript 反转录 SuperMix 预混液含有随机六聚体引物，Oligo-dT 引物，可均匀覆盖整个 RNA 靶标。此外，预混液还包含蓝色染料，可在两步法 RT-qPCR 起到示踪作用。样品起始量从高达 1 µg 到低至单拷贝 RNA，均能得到稳健、线性和灵敏的检测结果。

LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物） (NEB #E3025) 包含除引物外，第一链 cDNA 合成所需的所有组分，适用于 RT-PCR、RNA-seq 及其它应用。该预混液与随机引物、oligo dT 引物以及基因特异性引物兼容，让 cDNA 合成更灵活。更多信息请点击 https://www.neb.cn/products/e3025-lunascript-rt-master-mix-kit-primer-free

与 LunaScript 试剂盒版本 (NEB #E3010) 相比，该 LunaScript 预混液版本不含无核酶水和 No-RT 对照。更多信息如下：

图 1：LunaScript 产品比较

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR

图 2：一步法和两步法 RT-qPCR 产品选择

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR

图 3：LunaScript® SuperMix 反转录预混液在两步法 RT-qPCR 实验中展现了出色的灵敏度、线性关系和重复性

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR

 

在 20 μl 反应体系中，使用 1 X LunaScript 反转录 SuperMix预混液，在标准反应条件下（25℃/2 分钟，55℃/10 分钟，95℃/1 分钟）将 RNA 反转录为 cDNA。然后使用 1 μl cDNA 作为模板和 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB＃M3003）进行 qPCR 定量，每种浓度做三个重复。
A. 将梯度稀释的 Jurkat 总 RNA（1 μg–1 pg）反转录为 cDNA，然后对 β-actin 进行 qPCR 定量。
B. ERCC 对照（External RNA Controls Consortium）mix1 RNA 包含 50 – 5×109 拷贝的ERCC00130（10 fg–~10 ng），反转录为 cDNA 后进行 qPCR 进行定量。

图 4：LunaScript 反转录 SuperMix 预混液可覆盖长转录本

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR

在标准反应条件（25℃/2 min、55℃/10 min、95℃/1 min）下，20 μl反应体系中，使用 1X LunaScript 反转录 SuperMix 预混液，将 Jurkat 总 RNA (1 μg – 1 ng) 反转录为 cDNA。取 1 μl cDNA 产物做为模板，使用 Luna 通用 qPCR 预混液 (NEB #M3003) 和覆盖 HERC1 整个 15.2 kb 转录本的 8 对引物，对 cDNA 覆盖度进行 qPCR 评估。结果显示：所有扩增靶标在每个上样浓度的重复实验中，均有良好扩增。

 

图 5：LunaScript 反转录 SuperMix 预混液对 RNA 靶标展现了出色的线性检测能力

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR

使用市售的 cDNA 合成预混液，根据各厂商产品说明书，将 100 pg–1 μg 人（Jurkat）总 RNA 反转录为 cDNA。然后通过 8 个靶标（丰度、长度和 GC 含量不同）的 qPCR 结果对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB＃M3003）或 Luna 通用探针法 qPCR 预混液（NEB＃M3004）进行 qPCR 检测。结果评估了扩增效率和 ΔCq，其中 ΔCq 衡量低起始量检测和缺乏无模板对照（NTC）扩增（ΔCq = NTC 的平均 Cq–最低起始量的平均 Cq）。绿色框表示目标扩增表现（效率 = 90-110％，ΔCq≥3）。
了解更多“Dots in Boxes”可视化荧光定量评价方法，请登陆：https://www.neb.cn/tools-and-resources/video-library/dots-in-boxes-visualization-of-qpcr-data

图 6：LunaScript 反转录 SuperMix 预混液的第一链 cDNA 合成时间最短，仅需 13 分钟。

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR

比较了不同厂家的 cDNA 合成方案。LunaScript 反转录 SuperMix 预混液需要的反应时间最短，并可以耐受高温，避免了 RNA 复杂二级结构的影响。

图 7：LunaScript 反转录 SuperMix 预混液在室温条件下稳定性极佳

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , qPCR & RT,qPCR

LunaScript 反转录 SuperMix 预混液与其它市售反转录产品在 25℃条件下放置 15 天，之后在说明书推荐反应条件下，以 100 pg–1 μg 人总 RNA (Jurkat) 为模板，反转录成为 cDNA。使用 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB＃M3003）对 8 个不同丰度、长度和 GC 含量的靶标进行 qPCR 检测。结果评估了扩增效率和 ΔCq，其中 ΔCq 衡量低起始量检测和缺乏无模板对照（NTC）扩增（ΔCq = NTC 的平均 Cq – 最低起始量的平均 Cq）。绿色框表示目标扩增表现（效率 = 90-110％，ΔCq≥3）。

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , PCR纯化,Monarch PCR & DNA 纯化试剂盒 (5 μg) ,#T1030L

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – PCR纯化

Monarch PCR & DNA 纯化试剂盒 (5 μg)

#T1030L 250次

#T1030s 50次

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Monarch DNA 漂洗缓冲液
Monarch DNA 洗脱缓冲液
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特性

 NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , PCR纯化

概述

 Monarch PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）是一款快速可靠的的纯化试剂盒，可从酶学反应中纯化和浓缩高达 5 μg 例如 PCR、酶切、连接和反转录产物。该方法减少结合、漂洗和洗脱过程中的温育和离心时间，5 分钟之内即可完成纯化实验。DNA 纯化结合缓冲液用于稀释样本以确保 DNA 在高盐环境下结合到专有的二氧化硅基质上。DNA 纯化漂洗缓冲液将酶、短链引物（≤40 nt）、变性剂和其它小分子量的反应成分（如核苷酸，DMSO，甜菜碱）去除，从而实现更低体积的洗脱，得到高浓度高纯度的 DNA。洗脱得到的 DNA 可以用于限制性酶切、DNA 测序、连接反应和其它酶学等下游实验。独特的纯化离心柱设计消除了液体残留及污染并且洗脱体积最低可至 6 μl。

应用

 • PCR 纯化

• 酶学反应纯化
• cDNA 纯化
• 标签纯化
• 质粒纯化

Monarch PCR & DNA 纯化试剂盒组成：

 – Monarch DNA 纯化离心柱（5 μg）

– Monarch DNA 结合缓冲液
– Monarch DNA 漂洗缓冲液
– Monarch DNA 洗脱缓冲液
使用 Monarch PCR & DNA 纯化试剂盒，您可以在
5 分钟内完成 DNA 纯化实验。

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液,Phusion HF 反应缓冲液套装,#B0518S

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

Phusion HF 反应缓冲液套装

#B0518S 6.0 ml

概述

Q5 与 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶随酶提供 Q5 反应缓冲液和 Q5 High GC Enhancer。
Taq 、Vent、Deep Vent、Bst 全长、Bst 大片段、Sulfolobus IV 和 Therminator DNA 聚合酶都随酶提供
10X ThermoPol 反应缓冲液，该缓冲液稀释成终浓度为 1X 时含有 2 mM MgSO4。另外还有不含Mg2+的
10X ThermoPol 反应缓冲液，用于要求 Mg2+ 浓度低于 2 mM 的反应。
Taq DNA 聚合酶随酶提供标准 Taq 反应缓冲液，可以替换 ThermoPol 反应缓冲液。
Bst 2.0 和 Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶都随酶提供等温扩增缓冲液。
Bst 3.0 DNA 聚合酶随酶提供等温扩增缓冲液 II。
Phusion 超保真 DNA 聚合酶随酶提供 5X Phusion HF缓冲液、5X Phusion GC 缓冲液、DMSO 和 50 mMMgCl2。

反应缓冲液成份

1X ThermoPol 反应缓冲液：
20 mM Tris-HCl，10 mM KCl，10 mM (NH4)2SO4，2 mM MgSO4 和 0.1% Triton X-100，pH 8.8 @ 25℃。
1X 标准 Taq 反应缓冲液：
10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1.5 mM MgCl2，pH 8.3 @25℃。
1X 等温扩增缓冲液：
20 mM Tris-HCl，10 mM (NH4)2SO4，50 mM KCl，2 mM  MgSO4，0.1% Tween-20，pH 8.8 @ 25℃。
1X 等温扩增缓冲液 II ：
20 mM Tris-HCl，10 mM (NH4)2SO4，150 mM KCl，2 mM MgSO4，0.1% Tween-20，pH 8.8 @ 25℃。

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液,Phusion GC 反应缓冲液套装,#B0519S

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

Phusion GC 反应缓冲液套装

#B0519S 6.0 ml

概述

Taq 、Vent、Deep Vent、Bst 全长、Bst 大片段、Sulfolobus IV 和 Therminator DNA 聚合酶都随酶提供

10X ThermoPol 反应缓冲液，该缓冲液稀释成终浓度为 1X 时含有 2 mM MgSO4。另外还有不含Mg2+的

10X ThermoPol 反应缓冲液，用于要求 Mg2+ 浓度低于 2 mM 的反应。

Taq DNA 聚合酶随酶提供标准 Taq 反应缓冲液，可以替换 ThermoPol 反应缓冲液。

Bst 2.0 和 Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶都随酶提供等温扩增缓冲液。

Bst 3.0 DNA 聚合酶随酶提供等温扩增缓冲液 II。

Phusion 超保真 DNA 聚合酶随酶提供 5X Phusion HF缓冲液、5X Phusion GC 缓冲液、DMSO 和 50 mMMgCl2。

1X ThermoPol 反应缓冲液：

20 mM Tris-HCl，10 mM KCl，10 mM (NH4)2SO4，2 mM MgSO4 和 0.1% Triton X-100，pH 8.8 @ 25℃。

1X 标准 Taq 反应缓冲液：

10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1.5 mM MgCl2，pH 8.3 @25℃。

1X 等温扩增缓冲液：

20 mM Tris-HCl，10 mM (NH4)2SO4，50 mM KCl，2 mM  MgSO4，0.1% Tween-20，pH 8.8 @ 25℃。

1X 等温扩增缓冲液 II ：

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , 克隆质粒 & DNA,Lambda DNA,#N3011L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆质粒 & DNA

Lambda DNA

#N3011L 1,250 μg

#N3011S 250 μg

特性

• 常用的 DNA 底物 

浓度

500 μg/ml 

分子量/长度

31.5 x 106 Da/48,502 bp 

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液,ThermoPol 反应缓冲液套装,#B9004S

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

ThermoPol 反应缓冲液套装

#B9004S 6.0 ml

概述

Q5 与 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶随酶提供 Q5 反应缓冲液和 Q5 High GC Enhancer。

OneTaq 与 OneTaq 热启动 DNA 聚合酶随酶提供OneTaq 标准与 GC 缓冲液和 OneTaq High GC Enhancer。

Taq、Vent 和 Deep Vent DNA 聚合酶都随酶提供10 X ThermoPol 反应缓冲液，该缓冲液稀释成终浓度为 1X 时含有 2 mM MgSO4。另外还有不含镁离子的 10X  ThermoPol 反应缓冲液，用于要求镁离子浓度低于 2 mM 的反应。

Taq DNA 聚合酶随酶提供标准 Taq 反应缓冲液，可以替换 ThermoPol 反应缓冲液。

LongAmp Taq DNA 聚合酶和 LongAmp 热启动 Taq DNA 聚合酶都随酶提供 LongAmp Taq 反应缓冲液。

Bst 2.0 和 Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶都随酶提供等温扩增缓冲液。

Hemo KlenTaq DNA 聚合酶随酶提供的 Hemo Klen-Taq 反应缓冲液经过优化设计，可以用于无需提取 DNA 的 PCR。
 

Phusion 超保真 DNA 聚合酶随酶提供 5X Phusion HF 缓冲液、5X Phusion GC 缓冲液、DMSO 和 50mM MgCl2。

反应缓冲液成份

1X ThermoPol 反应缓冲液：
20 mM Tris-HCl，10 mM KCl，10 mM (NH4)2SO4，2 mM MgSO4 和 0.1% Triton X-100，pH 8.8 @ 25℃。

1X 标准 Taq 反应缓冲液：
10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1.5 mM MgCl2，pH 8.3 @ 25℃。

1X LongAmp Taq 反应缓冲液：
60 mM Tris-SO4（pH 9.0 @ 25℃），20 mM (NH4)2SO4，2 mM MgSO4，3% 甘油，0.06% IGEPAL CA-630 和 0.05% Tween-20。

1X OneTaq 标准反应缓冲液：
20 mM Tris-HCl，22 mM NH4Cl，22 mM KCl，1.8 mM MgCl2，0.06% IGEPAL CA-630，0.05% Tween-20，pH8.9 @ 25℃。

1X OneTaq GC 反应缓冲液：
80 mM Tris-SO4，20 mM (NH4)2SO4，5% 甘油，5% DMSO，0.06% IGEPAL CA-630，0.05% Tween-20，pH 9.2 @ 25℃。

1X 等温扩增缓冲液：

20 mM Tris-HCl，10 mM (NH4)2SO4，15 mM KCl，2 mM MgSO4，0.1% Tween-20，pH 8.8 @ 25℃。

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液,ThermoPol II,不含镁离子,缓冲液套装,#B9005S

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

ThermoPol II（不含镁离子）缓冲液套装(已停产）

#B9005S 6.0 ml

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液,标准Taq反应缓冲液套装,#B9014S

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

标准Taq反应缓冲液套装

#B9014S 6.0 ml

概述

Taq 、Vent、Deep Vent、Bst 全长、Bst 大片段、Sulfolobus IV 和 Therminator DNA 聚合酶都随酶提供

10X ThermoPol 反应缓冲液，该缓冲液稀释成终浓度为 1X 时含有 2 mM MgSO4。另外还有不含Mg2+的

10X ThermoPol 反应缓冲液，用于要求 Mg2+ 浓度低于 2 mM 的反应。

 

Taq DNA 聚合酶随酶提供标准 Taq 反应缓冲液，可以替换 ThermoPol 反应缓冲液。

 

Bst 2.0 和 Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶都随酶提供等温扩增缓冲液。

 

Bst 3.0 DNA 聚合酶随酶提供等温扩增缓冲液 II。

 

Phusion 超保真 DNA 聚合酶随酶提供 5X Phusion HF缓冲液、5X Phusion GC 缓冲液、DMSO 和 50 mMMgCl2。

1X ThermoPol 反应缓冲液：

20 mM Tris-HCl，10 mM KCl，10 mM (NH4)2SO4，2 mM MgSO4 和 0.1% Triton X-100，pH 8.8 @ 25℃。

1X 标准 Taq 反应缓冲液：

10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1.5 mM MgCl2，pH 8.3 @25℃。

1X 等温扩增缓冲液：

20 mM Tris-HCl，10 mM (NH4)2SO4，50 mM KCl，2 mM  MgSO4，0.1% Tween-20，pH 8.8 @ 25℃。

1X 等温扩增缓冲液 II ：

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , 克隆质粒 & DNA,ΦX174 病毒 DNA #N3023L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆质粒 & DNA

ΦX174 病毒 DNA

#N3023L 250 μg

#N3023S 50 μg

特性

• 单链病毒 DNA 

浓度

1,000 μg/ml 

分子量/长度

1.7 x 106 Da/5,386 bases 

NEB代理,标准Taq(不含镁离子)反应缓冲液套装,#B9015S

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

标准Taq(不含镁离子)反应缓冲液套装

#B9015S 6.0 ml

概述

Taq 、Vent、Deep Vent、Bst 全长、Bst 大片段、Sulfolobus IV 和 Therminator DNA 聚合酶都随酶提供

10X ThermoPol 反应缓冲液，该缓冲液稀释成终浓度为 1X 时含有 2 mM MgSO4。另外还有不含Mg2+的

10X ThermoPol 反应缓冲液，用于要求 Mg2+ 浓度低于 2 mM 的反应。

 

Taq DNA 聚合酶随酶提供标准 Taq 反应缓冲液，可以替换 ThermoPol 反应缓冲液。

 

Bst 2.0 和 Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶都随酶提供等温扩增缓冲液。

 

Bst 3.0 DNA 聚合酶随酶提供等温扩增缓冲液 II。

 

Phusion 超保真 DNA 聚合酶随酶提供 5X Phusion HF缓冲液、5X Phusion GC 缓冲液、DMSO 和 50 mMMgCl2。

 

1X ThermoPol 反应缓冲液：

20 mM Tris-HCl，10 mM KCl，10 mM (NH4)2SO4，2 mM MgSO4 和 0.1% Triton X-100，pH 8.8 @ 25℃。

 

1X 标准 Taq 反应缓冲液：

10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1.5 mM MgCl2，pH 8.3 @25℃。

 

1X 等温扩增缓冲液：

20 mM Tris-HCl，10 mM (NH4)2SO4，50 mM KCl，2 mM  MgSO4，0.1% Tween-20，pH 8.8 @ 25℃。

 

1X 等温扩增缓冲液 II ：

 

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液,5-甲基化-dCTP,#N0356S

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

5-甲基化-dCTP

#N0356S 1 μmol

概述

dNTP 套装：
四种独立包装的超纯脱氧核苷三磷酸的溶液（dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP）。每种的浓度为 100 mM。

dNTP 混合液：
含相同摩尔数的超纯 dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP。每种的浓度为 10 mM。

rNTP 套装：
四种独立包装的核苷三磷酸溶液（ATP、CTP、GTP 和 UTP），pH 7.5，以钠盐形式存在。

rNTP 混合液：
含相同摩尔数的四种核苷三磷酸：rATP、rCTP、rGTP 和 rUTP。每种浓度为 25 mM（rNTP 总浓度相当于 100 mM）。

7-去氮-dGTP：
含有 5 mM 7-去氮-dGTP 的二锂盐溶液。

5-甲基-dCTP：
10 mM 溶液，pH 7.0。

dATP 溶液：

含有 100 mM dATP，pH 7.4 的钠盐溶液。

 

acyNTP 套装：
四种独立包装的 acyNTP （acyATP、acyCTP、acyGTP 和 acyTTP）。以干粉形式提供，加入 50 μl 蒸馏水或去离子水（Milli-Q®）后，acyNTP 的终浓度为 10 mM。

acyNTP 可作为链终止基团，因而可用于一般采用 ddNTP 的实验，如 DNA 测序和 SNP 分析。acyNTP 尤其适用于古生菌 DNA 聚合酶的反应，特别是 Therminator DNA 聚合酶。Therminator DNA 聚合酶经过基因工程改造后，拥有更强的掺入核苷酸类似物的能力，这些类似物的糖环发生了改变，如 rNTP，ddNTP，2´ 脱氧核苷酸，特别是 acy 碱基类似物。 

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NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,β-琼脂糖酶 I,#M0392L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 其它

β-琼脂糖酶 I

#M0392L 500 units

#M0392S 100 units

特性

 从琼脂糖凝胶中提取 DNA
 不含 DNase 和 RNase

概述

β-琼脂糖酶切割琼脂糖亚单位或未置换的新琼脂乙糖（3,6-酐-α-L-吡喃型半乳糖基-1-3-D-半乳糖）生成新琼脂-寡糖。β-琼脂糖酶 I消化琼脂糖，形成不能再成胶的碳水化合物分子，同时释放所俘获的 DNA。通常残留的碳水化合物分子或 β-琼脂糖酶 I 不会影响随后的限制性内切酶消化、连接反应及转化反应等 DNA 操作。

来源

重组 E. coli 菌株，此菌株的质粒上携带有 β-琼脂糖酶 I 的编码基因。 

反应条件

1X β-琼脂糖酶 I 反应缓冲液
[10 mM Bis Tris-HCl（pH 6.5 @ 25℃），1 mM EDTA]，42℃ 温育。 

注意事项

琼脂糖：由于在反应温度 42℃ 条件下，溶液必需呈液态，所以仅低熔点琼脂糖适合于用 β-琼脂糖酶 I 消化。
pH 敏感性：β-琼脂糖酶 I 在 pH 6.5 时有最适酶活力，在 pH 5.0-8.5 范围内可以保持 ＞ 75% 的酶活力。
盐敏感性：NaCl 或 Na2EDTA 浓度在 50 到 500 mM之间不影响 β-琼脂糖酶 I 活性。 

质保声明

β-琼脂糖酶 I 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

单位定义

1 单位指 42℃ 条件下，1 小时消化 200 μl 低熔点琼脂糖或 NuSieve 琼脂糖生成可溶性新琼脂-寡糖所需的酶量。

经 β-琼脂糖酶 I处理后乙醇沉淀的琼脂糖量 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , 其它

65℃ 条件下在含 1 mM Na2EDTA 的 10 mM Bis Tris-HCl 中熔化含 200 μl 1% 低熔点琼脂糖凝胶的样品，冷却到 42℃，加入 1 单位或 2 单位的 β-琼脂糖酶 I 反应不同时间。不能被消化的琼脂糖可通过加入终浓度为 250 mM 的 NaOAc 和 75% 的异丙醇，-70℃ 冷却来沉淀，沉淀后的琼脂糖可通过在 0.1 N 的 HCl中煮沸水解。碳水化合物含量以占 200 μl 未消化低熔点琼脂糖凝胶的百分比表示。

浓度

1,000 units/ml。 

热失活

95℃ 加热 2 分钟或 65℃ 15 分钟温育可使 50 单位的 β-琼脂糖酶 I 失活。β-琼脂糖酶 I 可以在 45-50℃ 保持几个小时的活性。反应体系中存在琼脂糖可以稳定 β-琼脂糖酶 I。 

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NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液,dGTP 溶液,#N0442S

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

dGTP 溶液

#N0442S 25 umol

特性

 Ÿ   HPLC 纯度≥99%

Ÿ   应用于不依赖连接的克隆（LIC）

Ÿ   本产品也在以下两种剂型中提供：dNTP 混合液（NEB #N0447）及 dNTP 套装（NEB #N0446）

产品说明

 dGTP 溶液为 100 mM 超纯 dGTP 的钠盐溶液，pH 7.5，共 0.25 ml，

稀释液

可使用无菌蒸馏水稀释，Milli-Q® 水稀释更佳，也可使用无菌 TE 稀释（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA（pH 7.5））稀释。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,TelN 端粒酶#M0651S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 其它

TelN 端粒酶    #M0651S 250 unit

识别位点

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , 其它

浓度

5,000 units/ml

概述

TelN 端粒酶分离自 N15 噬菌体，其在 TelN识别序列（56 bp）切割 dsDNA，并在切割位点形成共价封闭末端。

特点

分离自 N15 噬菌体
在 TelN 识别序列（56 bp）切割 dsDNA
在切割位点形成共价封闭末端

反应条件

 1X ThermoPol 反应缓冲液，30℃ 温育。

单位定义

 1 单位指在 50μl 1X ThermoPol 反应缓冲液体系中，30℃ 条件下，30 分钟切割 0.5μg BsaI 线性化 pMiniT-TelN 对照质粒（313 fmol TelN 识别位点）所需要的酶量。

热失活

75°C 加热5分钟。

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液,7-去氮-dGTP,#N0445L

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

7-去氮-dGTP

#N0445L 1.5 μmol

#N0445S 0.3 μmol

概述

dNTP 套装：
四种独立包装的超纯脱氧核苷三磷酸的溶液（dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP）。每种的浓度为 100 mM。

dNTP 混合液：
含相同摩尔数的超纯 dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP。每种的浓度为 10 mM。

rNTP 套装：
四种独立包装的核苷三磷酸溶液（ATP、CTP、GTP 和 UTP），pH 7.5，以钠盐形式存在。

rNTP 混合液：
含相同摩尔数的四种核苷三磷酸：rATP、rCTP、rGTP 和 rUTP。每种浓度为 25 mM（rNTP 总浓度相当于 100 mM）。

7-去氮-dGTP：
含有 5 mM 7-去氮-dGTP 的二锂盐溶液。

5-甲基-dCTP：
10 mM 溶液，pH 7.0。

dATP 溶液：

含有 100 mM dATP，pH 7.4 的钠盐溶液。

 

acyNTP 套装：
四种独立包装的 acyNTP （acyATP、acyCTP、acyGTP 和 acyTTP）。以干粉形式提供，加入 50 μl 蒸馏水或去离子水（Milli-Q®）后，acyNTP 的终浓度为 10 mM。

acyNTP 可作为链终止基团，因而可用于一般采用 ddNTP 的实验，如 DNA 测序和 SNP 分析。acyNTP 尤其适用于古生菌 DNA 聚合酶的反应，特别是 Therminator DNA 聚合酶。Therminator DNA 聚合酶经过基因工程改造后，拥有更强的掺入核苷酸类似物的能力，这些类似物的糖环发生了改变，如 rNTP，ddNTP，2´ 脱氧核苷酸，特别是 acy 碱基类似物。 

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NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液,dNTP 套装,#N0446S

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

dNTP 套装

#N0446S 每种 25 μmol

概述

dNTP 套装：
四种独立包装的超纯脱氧核苷三磷酸的溶液（dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP）。每种的浓度为 100 mM。

dNTP 混合液：
含相同摩尔数的超纯 dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP。每种的浓度为 10 mM。

rNTP 套装：
四种独立包装的核苷三磷酸溶液（ATP、CTP、GTP 和 UTP），pH 7.5，以钠盐形式存在。

rNTP 混合液：
含相同摩尔数的四种核苷三磷酸：rATP、rCTP、rGTP 和 rUTP。每种浓度为 25 mM（rNTP 总浓度相当于 100 mM）。

7-去氮-dGTP：
含有 5 mM 7-去氮-dGTP 的二锂盐溶液。

5-甲基-dCTP：
10 mM 溶液，pH 7.0。

dATP 溶液：

含有 100 mM dATP，pH 7.4 的钠盐溶液。

 

acyNTP 套装：
四种独立包装的 acyNTP （acyATP、acyCTP、acyGTP 和 acyTTP）。以干粉形式提供，加入 50 μl 蒸馏水或去离子水（Milli-Q®）后，acyNTP 的终浓度为 10 mM。

acyNTP 可作为链终止基团，因而可用于一般采用 ddNTP 的实验，如 DNA 测序和 SNP 分析。acyNTP 尤其适用于古生菌 DNA 聚合酶的反应，特别是 Therminator DNA 聚合酶。Therminator DNA 聚合酶经过基因工程改造后，拥有更强的掺入核苷酸类似物的能力，这些类似物的糖环发生了改变，如 rNTP，ddNTP，2´ 脱氧核苷酸，特别是 acy 碱基类似物。 

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NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液,rNTP 套装,#N0450L

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

rNTP 套装

#N0450L 每种 50 μmol

#N0450S 每种 10 μmol

概述

 rNTP 套装： 四种独立包装的核苷三磷酸溶液（ATP、 CTP、 GTP 和 UTP），pH 7.5，以钠盐形式存在。每种核苷酸 100 mM。

质保声明：

经验证无核酸酶污染，功能性纯度通过体外转录鉴定。

注意事项：

 为了确保其最佳活性，长期保存请分装后存于 -80℃。

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液,acyNTP 套装

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

acyNTP 套装

#N0460S 每种 0.5 μmol

概述

dNTP 套装：
四种独立包装的超纯脱氧核苷三磷酸的溶液（dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP）。每种的浓度为 100 mM。

dNTP 混合液：
含相同摩尔数的超纯 dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP。每种的浓度为 10 mM。

rNTP 套装：
四种独立包装的核苷三磷酸溶液（ATP、CTP、GTP 和 UTP），pH 7.5，以钠盐形式存在。

rNTP 混合液：
含相同摩尔数的四种核苷三磷酸：rATP、rCTP、rGTP 和 rUTP。每种浓度为 25 mM（rNTP 总浓度相当于 100 mM）。

7-去氮-dGTP：
含有 5 mM 7-去氮-dGTP 的二锂盐溶液。

5-甲基-dCTP：
10 mM 溶液，pH 7.0。

dATP 溶液：

含有 100 mM dATP，pH 7.4 的钠盐溶液。

acyNTP 套装：
四种独立包装的 acyNTP （acyATP、acyCTP、acyGTP 和 acyTTP）。以干粉形式提供，加入 50 μl 蒸馏水或去离子水（Milli-Q®）后，acyNTP 的终浓度为 10 mM。
acyNTP 可作为链终止基团，因而可用于一般采用 ddNTP 的实验，如 DNA 测序和 SNP 分析。acyNTP 尤其适用于古生菌 DNA 聚合酶的反应，特别是 Therminator DNA 聚合酶。Therminator DNA 聚合酶经过基因工程改造后，拥有更强的掺入核苷酸类似物的能力，这些类似物的糖环发生了改变，如 rNTP，ddNTP，2´ 脱氧核苷酸，特别是 acy 碱基类似物。 

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NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液,rNTP 混合液

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

rNTP 混合液

#N0466L 每种 50 μmol

#N0466S 每种 10 μmol

概述

dNTP 套装：
四种独立包装的超纯脱氧核苷三磷酸的溶液（dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP）。每种的浓度为 100 mM。

dNTP 混合液：
含相同摩尔数的超纯 dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP。每种的浓度为 10 mM。

rNTP 套装：
四种独立包装的核苷三磷酸溶液（ATP、CTP、GTP 和 UTP），pH 7.5，以钠盐形式存在。

rNTP 混合液：
含相同摩尔数的四种核苷三磷酸：rATP、rCTP、rGTP 和 rUTP。每种浓度为 25 mM（rNTP 总浓度相当于 100 mM）。

7-去氮-dGTP：
含有 5 mM 7-去氮-dGTP 的二锂盐溶液。

5-甲基-dCTP：
10 mM 溶液，pH 7.0。

dATP 溶液：

含有 100 mM dATP，pH 7.4 的钠盐溶液。

 

acyNTP 套装：
四种独立包装的 acyNTP （acyATP、acyCTP、acyGTP 和 acyTTP）。以干粉形式提供，加入 50 μl 蒸馏水或去离子水（Milli-Q®）后，acyNTP 的终浓度为 10 mM。

acyNTP 可作为链终止基团，因而可用于一般采用 ddNTP 的实验，如 DNA 测序和 SNP 分析。acyNTP 尤其适用于古生菌 DNA 聚合酶的反应，特别是 Therminator DNA 聚合酶。Therminator DNA 聚合酶经过基因工程改造后，拥有更强的掺入核苷酸类似物的能力，这些类似物的糖环发生了改变，如 rNTP，ddNTP，2´ 脱氧核苷酸，特别是 acy 碱基类似物。 

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NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液,3´-Biotin-GTP,#N0760S

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

3´-Biotin-GTP

#N0760S 0.5 μmol

Description:

 3´-Biotin-GTP can be used with the Vaccinia Capping System (NEB #M2080),to cap 5´ ends of tri- or di- phosphorylated RNA (1). This enables capture of the RNA 5´ ends using streptavidin.

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液

  • Supplied in: Ultrapure water as a Triethylammonium salt at pH 7.0
    Molecular Formula: C31H50N11O19P3S
    Molecular Weight: 1005.78 g/mol
    Extinction Coefficient: λ260 = ~11,700 Lmol-1 cm-1 

Proterties and Usage

 Storage Temperature

-20°C

NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术 , 核苷酸溶液和缓冲液,5´ -三磷酸腺苷,ATP,#P0756L

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 核苷酸溶液和缓冲液

5´ -三磷酸腺苷（ATP）

#P0756L 5.0 ml

#P0756S 1.0 ml

概述

5´ -三磷酸腺苷（ATP）:  浓度为 10mM

 

dNTP 套装：
四种独立包装的超纯脱氧核苷三磷酸的溶液（dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP）。每种的浓度为 100 mM。

dNTP 混合液：
含相同摩尔数的超纯 dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP。每种的浓度为 10 mM。

rNTP 套装：
四种独立包装的核苷三磷酸溶液（ATP、CTP、GTP 和 UTP），pH 7.5，以钠盐形式存在。

rNTP 混合液：
含相同摩尔数的四种核苷三磷酸：rATP、rCTP、rGTP 和 rUTP。每种浓度为 25 mM（rNTP 总浓度相当于 100 mM）。

7-去氮-dGTP：
含有 5 mM 7-去氮-dGTP 的二锂盐溶液。

5-甲基-dCTP：
10 mM 溶液，pH 7.0。

dATP 溶液：

含有 100 mM dATP，pH 7.4 的钠盐溶液。

 

acyNTP 套装：
四种独立包装的 acyNTP （acyATP、acyCTP、acyGTP 和 acyTTP）。以干粉形式提供，加入 50 μl 蒸馏水或去离子水（Milli-Q®）后，acyNTP 的终浓度为 10 mM。

acyNTP 可作为链终止基团，因而可用于一般采用 ddNTP 的实验，如 DNA 测序和 SNP 分析。acyNTP 尤其适用于古生菌 DNA 聚合酶的反应，特别是 Therminator DNA 聚合酶。Therminator DNA 聚合酶经过基因工程改造后，拥有更强的掺入核苷酸类似物的能力，这些类似物的糖环发生了改变，如 rNTP，ddNTP，2´ 脱氧核苷酸，特别是 acy 碱基类似物。 

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ProSpec-GM CSF Mouse

  • Description

  • GM CSF Mouse

  • Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor Mouse Recombinant
  • CYT-222

Catalogue number

CYT-222

Synonyms

CSF-2, MGI-1GM, GM-CSF, Pluripoietin-alpha, CSF2, GMCSF

Introduction

GMCSF is a cytokine that controls the production, differentiation, and function of granulocytes and macrophages. The active form of the protein is found extracellularly as a homodimer. This gene has been localized to a cluster of related genes at chromosome region 5q31, which is known to be associated with interstitial deletions in the 5q- syndrome and acute myelogenous leukemia. Other genes in the cluster include those encoding interleukins 4, 5, and 13.
GM-CSF stimulates the growth and differentiation of hematopoietic precursor cells from various lineages, including granulocytes, macrophages, eosinophils and erythrocytes.

Description

Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor Mouse Recombinant produced in E.Coli is a single, non-glycosylated, polypeptide chain containing 125 amino acids and having a molecular mass of 14285.35 Dalton.
GM-CSF Mouse is purified by proprietary chromatographic techniques.

Source

Escherichia Coli.

Physical Appearance

Sterile Filtered White lyophilized powder.

Formulation

GM-CSF Mouse was lyophilized with no additives.

Solubility

It is recommended to reconstitute the lyophilized Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor in sterile 20mM AcOH not less than 100µg/ml, which can then be further diluted to other aqueous solutions.

Stability

Lyophilized Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor although stable at room temperature for 3 weeks, should be stored desiccated below -18°C. Upon reconstitution GM-CSF should be stored at 4°C between 2-7 days and for future use below -18°C.
For long term storage it is recommended to add a carrier protein .
Please prevent freeze-thaw cycles.

Purity

Greater than 98.0% as determined by Analysis by RP-HPLC.
Analysis by -PAGE.

Amino acid sequence

The sequence of the first five N-terminal amino acids was determined and was found to be Met-Ala-Pro-Thr-Arg.

Biological Activity

The ED50 as determined by the dose-dependant stimulation of the proliferation of murine FDC-P1 cell line is < 0.2 ng/ml, corresponding to a Specific Activity of 5,000,000 IU/mg.

Protein content

GM-CSF quantitation was carried out by two independent methods
1. UV spectroscopy at 280 nm using the absorbency value of 0.765 as the extinction coefficient for a 0.1% solution. This value is calculated by the PC GENE computer analysis program of protein sequences .

2. Analysis by RP-HPLC, using a calibrated solution of GM-CSF as a Reference Standard.

References

1.Title:Multigene/multisubtype HIV-1 vaccine induces potent cellular and humoral immune responses by needle-free intradermal delivery.
Publication: Mol Ther. 2005 Dec;12:1197-205. Epub 2005 Aug 22. PMID: 16112909
Link: http://www.nature.com/mt/journal/v12/n6/full/mt20051405a.html
Applications: The Mouse GM-CSF used for 2 purposes:
1. As an adjuvant for DNA vaccine which included seven plasmids encoding nine HIV-1 proteins. The mice were injected with the DNA vaccine together with recombinant mouse GM-CSF. 2. Used in Elisa.

2.Title: Neospora caninum: cloning and expression of a gene coding for cytokine-inducing profilin. 
Publication: Exp Parasitol. 2010 Aug;125:357-62. Epub 2010 Mar 6. PMID: 20211619
Link: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S001448941000086X
Applications: Used for immunoblotting

3.Title: Intranasal Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Reduces the Aspergillus Burden in an Immunosuppressed Murine Model of Pulmonary Aspergillosis.
Publication: Antimicrob Agents Chemother. 2008 February; 52: 716–718.
Published online 2007 November 5
Link: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2224773/?tool=pmcentrez
Applications: GM-CSF as tested a therapeutic potential in a murine model of pulmonary aspergillosis. In summary, this pilot study indicates that GM-CSF administered intranasally may be a novel therapeutic approach for the prevention or treatment of pulmonary fungal infections and may augment the efficacies of antifungal agents.
GM-CSF was given intranasal.

4.Title: Dendritic Cell-Based Therapeutic Vaccination against Myeloma: Vaccine Formulation Determines Efficacy against Light Chain Myeloma
Publication: The Journal of Immunology February 1, 2009 vol. 182 no. 3 1667-1673
Link:
http://www.jimmunol.org/content/182/3/1667.full

5.Title:Pre-clinical Evaluation of a CEA DNA Prime/protein Boost Vaccination Strategy Against Colorectal Cancer.
Publication:Article first published online: 21 JUN 2007 DOI:10.1111/j.1365-3083.2007.01945.x

Scandinavian Journal of Immunology Volume 66, Issue 1, pages 43–51, July 2007
Link:http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1365-3083.2007.01945.x/full

6.Title:Intranasal Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Reduces the Aspergillus Burden in an Immunosuppressed Murine Model of Pulmonary Aspergillosis.
Publication: First published November 2007, doi: 10.1128/?AAC.00760-07 Antimicrob. Agents Chemother. February 2008 vol. 52 no. 2 716-718
Link:http://aac.asm.org/content/52/2/716.full

7. Title: O-glycosylated versus non-glycosylated MUC1-derived peptides as potential targets for cytotoxic immunotherapy of carcinoma.
Publications:  Clinical & Experimental Immunology 143.1 : 139-149.
Link: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1365-2249.2005.02965.x/epdf
8. Title: Novel Functions of Herbal Medicines in DendriticCells: Role of Amomi Semen in Tumor Immunity
Publications:  Microbiology and immunology 51.11 : 1121-1133.
Link: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1348-0421.2007.tb03998.x/epdf
9. Title: The Herbal Medicine Compound Falcarindiol from Notopterygii Rhizoma Suppresses Dendritic Cell Maturation
Publication:  Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 333.3 : 954-960.
Link: http://jpet.aspetjournals.org/content/333/3/954.full

Usage

ProSpec’s products are furnished for LABORATORY RESEARCH USE ONLY. The product may not be used as drugs, agricultural or pesticidal products, food additives or household chemicals.

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ProSpec-CTGF Human, HEK

  • Description

  • CTGF Human, HEK

  • Connective Tissue Growth Factor Human Recombinant , HEK
  • CYT-687

Catalogue number

CYT-687

Synonyms

CCN2, NOV2, HCS24, IGFBP8, MGC102839, CTGF.

Introduction

Connective Tissue Growth Factor belongs to the CCN family of proteins. The CCN family presently consists of six members in human also known as: Cyr61 , CTGF , Nov , WISP-1, 2 and 3 . The CCN genes encode secreted proteins associated with the Extracellular Matrix and cell membrane.
CCN proteins are matricellular proteins which are involved in the regulation of various cellular functions including: proliferation, differentiation, survival, adhesion and migration. They are expressed in derivatives of the three embryonic sheets and are implicated in the development of kidney, nervous system, muscle, bone marrow, cartilage and bone. During adulthood, they are implicated in wound healing, bone fracture repair, and pathologies such as: fibrosis, vascular ailments and tumorigenesis.
Full length secreted CCN proteins can show an antiproliferative activity, whereas truncated isoforms are likely to stimulate proliferation and behave as oncogenes.
The full length protein consists of four modules: Module I shares partial identity with the N-terminal part of the Insulin-like Growth Factor Binding Proteins .
Module II includes a stretch of 70amino acid residues – which shares sequence identity with the Von Willebrand Factor Type C repeat .
Module III contains sequences sharing identity with the Thrombospondin type 1 repeat , which is thought to be implicated in the binding of sulfated glycoconjugates and to be important for cell adhesion.
Module IV, also designated CT, is encoded by exon5. It is the leasts conserved one of the four domains at the level of nucleotide sequence, but it appears to be critical for several of the biological functions attributed to the CCN proteins. Module IV resembles the CT domain of several extracellular protein including, Von Willebrand’s factor and mucins. Sequence similarities to heparin-binding motifs are also found within this domain.
Proteolysis of the secreted full-length CCN proteins that has been reported in the case of CCN2 and CCN3 might result in the production of CCN-derived peptides with high affinity for ligands that full-length CNN proteins bind only poorly. Amino-truncated CCN2 isoforms were biologically active whereas no specific biological activity has been attributed to the truncated CCN3. Although the molecular processes underlying the production of these secreted isoforms is presently unknown, it is important to note that proteolysis occur at the same amino acid residues in both CCN2 and CCN3. An elevated expression of CCN2 has also been detected by Northern blotting in human invasive mammary ductal carcinomas, dermatofibromas, pyogenic granuloma, endothelial cells of angiolipomas and angioleiomyomas, and in pancreatic tumors. A study performed with chondrosarcomas representative of various histological grades established that CCN2 expression was closely correlated with increasing levels of malignancy.
In agreement with CCN2 playing a role in brain tumor angiogenesis, immunocytochemistry studies indicated that both glioblastoma tumor cells and proliferating endothelial cells stained positive for CCN2. In astrocytomas, CCN2 expression was particularly elevated in high grade tumors, with a marked effect of CCN2 on cell proliferation. Downregulation of CCN2 expression in these cells was associated with a growth arrest at the G1/S transition while over-expression of CCN2 induced a two-fold increase of the number of cells in the G1 phase. Gene profiling analysis allowed to identify a set of about 50 genes whose expression might account for the proliferative activity of CCN2 in these cells.
CCN2 was seen in a higher proportion of mononuclear cells of patients with acute lymphoblastic leukemia.

Description

The CTGF Human Recombinant produced in HEK293 cells, is 36kDa protein containing a total of 329 amino acid residues including a C-terminal 6×His tag.

Source

HEK293 cells.

Physical Appearance

Filtered colorless solution.

Formulation

CTGF filtered solution in 0.1M Citrate buffer pH 4.7 and 20% glycerol.

Stability

Store at 4°C if entire vial will be used within 2-4 weeks. Store, frozen at -20°C for longer periods of time.
For long term storage it is recommended to add a carrier protein .
Avoid multiple freeze-thaw cycles.

Amino acid sequence

QNCSGPCRCP DEPAPRCPAG VSLVLDGCGC CRVCAKQLGE LCTERDPCDP HKGLFCHFGS PANRKIGVCT AKDGAPCIFG GTVYRSGESF QSSCKYQCTC LDGAVGCMPL CSMDVRLPSP DCPFPRRVKL PGKCCEEWVC DEPKDQTVVG PALAAYRLED TFGPDPTMIR ANCLVQTTEW SACSKTCGMG ISTRVTNDNA SCRLEKQSRL CMVRPCEADL EENIKKGKKC IRTPKISKPI KFELSGCTSM KTYRAKFCGV CTDGRCCTPH RTTTLPVEFK CPDGEVMKKN MMFIKTCACH YNCPGDNDIF ESLYYRKMYG DMA HHHHHH.

Purity

Greater than 90.0% as determined by -PAGE.

Usage

ProSpec’s products are furnished for LABORATORY RESEARCH USE ONLY. The product may not be used as drugs, agricultural or pesticidal products, food additives or household chemicals.

Related Products

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ProSpec-EPO a Fc Human

  • Description

  • EPO a Fc Human

  • Erythropoietin-Alpha Fc-Chimera Human Recombinant
  • CYT-325

Catalogue number

CYT-325

Synonyms

EPO-a, EPO-alpha, Epoetin, EP, MGC138142.

Introduction

This gene is a member of the EPO/TPO family and encodes a secreted, glycosylated cytokine composed of four alpha helical bundles. The protein is found in the plasma and regulates red cell production by promoting erythroid differentiation and initiating hemoglobin synthesis. This protein also has neuroprotective activity against a variety of potential brain injuries and antiapoptotic functions in several tissue types.

Description

Erythropoietin-alpha Fc-Chimera Human Recombinant is produced in Chinese hamster ovary cells by recombinant DNA technology is a dimeric, glycosilated, polypeptide chain consisting of two mature human EPO molecules linked to the Fc portion of human IgG1. The Fc component contains the CH2 domain, the CH3 domain and hinge region, but not the CH1 domain of IgG1. As a result of glycosylation, the recombinant protein migrates with an apparent molecular mass of 140 kDa in non-reducing -PAGE.

Source

Chinese Hamster Ovary Cells.

Physical Appearance

Sterile Filtered White lyophilized powder.

Formulation

Each mg of lyophilized powder contains 1x PBS pH-7.4.

Solubility

It is recommended to reconstitute the lyophilized Erythropoietin in sterile 18MΩ-cm H2O not less than 100µg/ml, which can then be further diluted to other aqueous solutions.

Stability

Lyophilized Erythropoietin-a although stable at room temperature for 3 weeks, should be stored desiccated below -18°C. Upon reconstitution EPO-alpha should be stored at 4°C between 2-7 days and for future use below -18°C.
For long term storage it is recommended to add a carrier protein .
Please prevent freeze-thaw cycles.

Purity

Greater than 98.0% as determined by:
Analysis by RP-HPLC.
Analysis by -PAGE.

Biological Activity

The ED50 as determined by the dose-dependent stimulation of human megakaryoblastic leukemia cells is less than 2.0 ng/ml, corresponding to a Specific Activity of 5.0 x 105 IU/mg.

Usage

ProSpec’s products are furnished for LABORATORY RESEARCH USE ONLY. The product may not be used as drugs, agricultural or pesticidal products, food additives or household chemicals.

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ProSpec-EPO a Human

  • Description

  • EPO a Human

  • Erythropoietin-Alpha Human Recombinant
  • CYT-201

Catalogue number

CYT-201

Synonyms

Erythropoietin-Alpha, EPO-a, EPO-alpha, EP, MGC138142.

Introduction

This gene is a member of the EPO/TPO family and encodes a secreted, glycosylated cytokine composed of four alpha helical bundles. The protein is found in the plasma and regulates red cell production by promoting erythroid differentiation and initiating hemoglobin synthesis. This protein also has neuroprotective activity against a variety of potential brain injuries and antiapoptotic functions in several tissue types.

Description

Erythropoietin-alpha Human Recombinant is produced in Chinese hamster ovary cells by recombinant DNA technology is a single, polypeptide chain containing 166 amino acids and having a predicted molecular mass of 21,000 Dalton and apparent glycosylated molecular mass of 36-40kDa. EPO-a is purified by proprietary chromatographic techniques.

Source

Chinese Hamster Ovary Cells.

Physical Appearance

Sterile Filtered White lyophilized powder.

Formulation

Each mg of lyophilized powder contains 0.59 mg sodium citrate, 0.58 mg sodium chloride and 0.006 mg citric acid.

Solubility

It is recommended to reconstitute the lyophilized EPO-alpha in sterile 18MΩ-cm H2O not less than 100µg/ml, which can then be further diluted to other aqueous solutions.

Stability

Lyophilized Erythropoietin-a although stable at room temperature for 3 weeks, should be stored desiccated below -18°C. Upon reconstitution EPO-alpha should be stored at 4°C between 2-7 days and for future use below -18°C.
For long term storage it is recommended to add a carrier protein .
Please prevent freeze-thaw cycles.

Purity

Greater than 98.0% as determined by:
Analysis by RP-HPLC.
Analysis by -PAGE.

Amino acid sequence

APPRLICDSR VLERYLLEAK EAENITTGCA EHCSLNENIT VPDTKVNFYA WKRMEVGQQA VEVWQGLALL SEAVLRGQAL LVNSSQPWEP LQLHVDKAVS GLRSLTTLLR ALGAQKEAIS PPDAASAAPL RTITADTFRK LFRVYSNFLR GKLKLYTGEA CRTGDR.

Biological Activity

The Specific Activity was measured by Normocyth -aemic mice and was found to be 150,000 IU/mg.

References

1.Title:Zinc Transporters ZnT1 , Zip8 , and Zip10 in Mouse Red Blood Cells Are Differentially Regulated during Erythroid Development and by Dietary Zinc Deficiency1–3
Publication:Journal of Nutrition, doi:10.3945/jn.108.093575
Vol. 138, No. 11, 2076-2083, November 2008
© 2008 American Society for Nutrition J. Nutr. 138:2076-2083, November 2008
Link:http://jn.nutrition.org/content/138/11/2076.full

2.Title:Systemically delivered Erythropoietin transiently enhances adult hippocampal neurogenesis.
Publication:Article first published online: 7 MAY 2007 DOI:10.1111/j.1471-4159.2007.04684.x Journal of Neurochemistry  Volume 102, Issue 6, pages 1953–1965, September 2007.
Link:http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1471-4159.2007.04684.x/full

3.Title:ZINC TRANSPORTER EXPRESSION IN MATURE RED BLOOD CELLS AND
DIFFERENTIATING ERYTHROID PROGENITOR CELLS.
Publication:UNIVERSITY OF FLORIDA
© 2007 Moon-Suhn Ryu
Link:http://ufdcimages.uflib.ufl.edu/UF/E0/02/14/46/00001/ryu_m.pdf

4.Title:Cell Therapy with Human Renal Cell Cultures Containing Erythropoietin-Positive Cells Improves Chronic Kidney Injury.
Publication:First Published Online May 3, 2012 doi: 10.5966/sctm.2011-0048 Stem Cells Trans Med May 2012 vol. 1 no. 5 373-383
Link:http://stemcellstm.alphamedpress.org/content/1/5/373.full

Usage

ProSpec’s products are furnished for LABORATORY RESEARCH USE ONLY. The product may not be used as drugs, agricultural or pesticidal products, food additives or household chemicals.

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