NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶,EcoRI 甲基转移酶#M0211S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 甲基转移酶

EcoRI 甲基转移酶 #M0211S 10,000 units

识别位点

概述

EcoRI 甲基转移酶能对左侧序列中的内侧腺嘌呤残基（N⁶）进行甲基化修饰。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有从 E. coli RY 13（R.N. Yoshimori）克隆 EcoRI 修饰基因。

反应条件

1X EcoRI 甲基转移酶缓冲液 + SAM

[50 mM NaCl，50 mM Tris-HCl（pH 8.0 @ 25℃），10 mM EDTA]。加入 80 μM SAM（随酶提供），37℃ 温

育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能保护 1 μg λDNA 不被 EcoRI 限制性内切酶切割所需要的酶量。

浓度

40,000 units/ml。

注意事项

MgCl₂ 抑制 EcoRI 甲基转移酶活性。在存在 4 mM MgCl₂ 条件下，酶活只保留 50%。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶,HpaII 甲基转移酶#M0214S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 甲基转移酶

HpaII 甲基转移酶

#M0214S 100 units

识别位点

概述

HpaII 甲基转移酶与 MspI 甲基转移酶识别序列相同，但对左侧序列中的内侧胞嘧啶（C⁵）进行甲基化。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有从副流感嗜血杆菌（Haemophilus parainfluenzae）（ATCC 49669）克隆的 HpaII 修饰基因。

反应条件

1X HpaII 甲基转移酶缓冲液 + SAM
[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM EDTA，5 mM 2-巯基乙醇]。加入 80 μM SAM（随酶提供），37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能保护 1 μg λDNA 不被 HpaII 限制性内切酶切割所需要的酶量。

浓度

4,000 units/ml。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶,MspI 甲基转移酶,#M0215S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 甲基转移酶

MspI 甲基转移酶 #M0215S 100 units

识别位点

概述

MspI 甲基转移酶与 HpaII 甲基转移酶识别序列相同，但对左侧识别序列外侧胞嘧啶（C⁵）进行甲基化。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有从莫拉氏菌属（Moraxella species）（ATCC 49670）克隆的 MspI 修饰基因。

反应条件

1X MspI 甲基转移酶缓冲液 + SAM
[100 mM NaCl，50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM EDTA，5 mM 2-巯基乙醇]。加入 80 μM SAM（随酶提供），37℃ 温育。

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能保护 1 μg λDNA 不被 MspI 限制性内切酶切割所需要的酶量。

浓度

5,000 units/ml。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶,HhaI 甲基转移酶,#M0217S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 甲基转移酶

HhaI 甲基转移酶

#M0217S 1,000 units

识别位点

概述

HhaI 甲基转移酶能对左侧序列中的内侧胞嘧啶残基（C⁵）进行甲基化。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有从溶血嗜血杆菌（Haemophilus haemolyticus）（ATCC 10014）克隆的 HhaI 修饰基因。

反应条件

1X HhaI 甲基转移酶缓冲液 + SAM

[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM EDTA，5 mM 2-巯基乙醇]。加入 80 μM SAM（随酶提供），37℃温育。

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能保护 1 μg λDNA 不被 HhaI 限制性内切酶切割所需要的酶量。

浓度

25,000 units/ml。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶,TaqI 甲基转移酶,#M0219S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 甲基转移酶

TaqI 甲基转移酶 #M0219S 1,000 units

识别位点

概述

Taq I 甲基转移酶对左侧序列中的腺嘌呤残基（N⁶）进行甲基化。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有从水栖高温菌（Thermus aquatics）克隆的 Taq I 修饰基因。

反应条件

1X CutSmart Buffer + SAM

[50 mM KAc，20 mM Tris-Ac，10 mM Mg(Ac)₂，100 μg/ml BSA（pH 7.9 @ 25℃）]。加入 80 μM SAM（随酶提供），65℃ 温育。

注意事项

37℃ 条件下的活性为 25%。

单位定义

1 单位指在 20 μl 反应体系中，65℃ 条件下，1 小时能保护 1 μg λDNA 不被 Taq I 限制性内切酶切割所需要的酶量。

浓度

10,000 units/ml。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶,AluI 甲基转移酶,#M0220S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 甲基转移酶

AluI 甲基转移酶

#M0220S 100 units

识别位点

概述

AluI 甲基转移酶能对左侧序列中的胞嘧啶残基（C⁵）进行甲基化修饰。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有从藤黄节杆菌（Arthrobacter luteus）（ATCC 21606）克隆的 AluI 修饰基因。

反应条件

1X AluI 甲基转移酶缓冲液 + SAM

[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM EDTA，mM 2-巯基乙醇]。加入 80 μM SAM（随酶提供），37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能保护 1 μg λDNA 不被 AluI 限制性内切酶切割所需要的酶量。

浓度

5,000 units/ml。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶,dam 甲基转移酶,#M0222L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 甲基转移酶

dam 甲基转移酶

#M0222L 2,500 units

#M0222S 500 units

识别位点

概述

dam 甲基转移酶能对左侧序列中的腺嘌呤残基（N⁶）进行甲基化修饰。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有 pTP166 载体，该载体含有从 E. coli（M. Marinus）克隆的 dam 修饰基因。

反应条件

1X dam 甲基转移酶缓冲液 + SAM

[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM EDTA，5mM 2-巯基乙醇]。加入 80 μM SAM（随酶提供），37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能保护 1 μg λDNA 不被 MboI 限制性内切酶切割所需要的酶量。

浓度

8,000 units/ml。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶,HaeIII 甲基转移酶,#M0224S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 甲基转移酶

HaeIII 甲基转移酶

#M0224S 500 units

识别位点

概述

HaeIII 甲基转移酶能对左侧序列中的内侧胞嘧啶残基（C⁵）进行甲基化修饰。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有从埃及嗜血杆菌（Haemophilus aegyptius）（ATCC 11116）克隆的 HaeIII 修饰基因。

反应条件

1X HaeIII 甲基转移酶缓冲液 + SAM

[50 mM NaCl，50 mM Tris-HCl（pH 8.5 @ 25℃），10 mM DTT]。加入 80 μM SAM（随酶提供），37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能保护 1 μg λDNA 不被 HaeIII 限制性内切酶切割所需要的酶量。

浓度

10,000 units/ml。

注意事项

HaeIII 甲基转移酶能保护 DNA 不被 NotI切割。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶,CpG 甲基转移酶 (M.SssI),#M0226L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 甲基转移酶

CpG 甲基转移酶 (M.SssI)

#M0226L 500 units

#M0226M（高浓度5X）500 units

#M0226S 100 units

#M0226V 50 units

识别位点

特性

 阻止限制性内切酶的切割

 CpG 甲基化依赖性基因表达的研究

 研究探针序列特异性与 DNA 大沟的相互作用

 改变 DNA 的物理特性

 对 DNA 统一进行 [³H] 标记
 减少限制性内切酶的酶切位点数目，提高限制性内切酶的特异性

概述

CpG 甲基转移酶（M.SssI）能将双链二核苷酸识别序列 5´ …CG…3´ 中所有胞嘧啶残基（C⁵）甲基化。

来源

分离自重组的 E. coli 菌株，该菌株克隆有桑皱褶螺原体（Spiroplasma sp.）MQ1 菌株的 CpG 甲基转移酶基因。

反应条件

1X NEBuffer 2 + SAM

[50 mM NaCl，10 mM Tris-HCl，10 mM MgCl₂，1 mM DTT（pH 7.9 @ 25℃）]。加入 160 μM S-腺苷甲硫氨酸（SAM，随酶提供），37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。

注意

MgCl₂ 并不是必需的辅因子。Mg²⁺ 存在时，M.SssI 更倾向于分散甲基化，而不是连续甲基化，同时，会出现具有拓扑异构酶的活性。

质保声明

CpG 甲基转移酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

单位定义

1 个酶活单位定义为在 20 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能保护 1 μg λDNA 不被 BstUI 限制性内切酶切割所需要的酶量。

浓度

4,000 units/ml 和 20,000 units/ml（通过 λDNA检测）。

注意事项

CpG 甲基转移酶（M.SssI）可以特异性地模拟高等真核生物基因组的修饰模式，因而可用于研究高等真核生物体内胞嘧啶甲基化的功能。与哺乳动物甲基转移酶不同，CpG 甲基转移酶对未甲基化和半甲基化的 DNA 底物的甲基化效率相同，因此该酶是更为有效的 DNA 修饰工具。

只要限制性内切酶的识别位点含有 CG 序列或此二核苷酸的重叠序列，CpG 甲基转移酶均能有效地阻止其发挥切割活性。需要注意的是，CpG 甲基转移酶使 DNA 甲基化，而 E. coli 中的 Mcr 和 Mrr 的限制作用不受甲基化影响（详见 315-317 页），故应使用 Mcr^–、Mrr^– 的 E. coli 菌株（例如，NEB #C2925）作为转化的宿主菌。

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

关于该酶性质和产品应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶,GpC 甲基转移酶 (M.CviPI),#M0227L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 甲基转移酶

GpC 甲基转移酶 (M.CviPI)

#M0227L 1,000 units

#M0227S 200 units

识别位点

特性

 阻止限制性内切酶的切割

 改变 DNA 的物理特性
 对 DNA 统一进行 [³H] 标记

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶

概述

GpC 甲基转移酶（M.CviPI）能将双链二核苷酸识别序列 5´ …GC…3´ 中所有胞嘧啶残基（C⁵）甲基化。

来源

分离自重组的 E. coli 菌株，该菌株表达小球藻病毒（Chlorella virus）的甲基转移酶，该酶与麦芽糖结合蛋白（MBP）组成融合蛋白。

反应条件

1X GC 反应缓冲液 + SAM

[50 mM NaCl，50 mM Tris-HCl，10 mM DTT（pH 8.5 @ 25℃）]。加入 160 μM S-腺苷甲硫氨酸（SAM，随酶提供），37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。

注意

MgCl₂ 并不是必需的辅因子。

质保声明

GpC 甲基转移酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

单位定义

1 酶活单位定义为在 20 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时能保护 1 μg λDNA 不被 HaeIII 限制性核酸内切酶切割所需要的酶量。

浓度

4,000 units/ml，通过 λDNA 检测。

注意事项

胞嘧啶残基被甲基化后，可影响 DNA 的物理特性，如：降低 Z-DNA 形成的自由能，增加 DNA 的螺旋程度，改变 DNA 十字形突出的动力学特性。由于在化学测序过程中联氨的反应性降低，5-甲基胞嘧啶的位置易于确定下来。

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

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NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶,人 DNA胞嘧啶-5,甲基转移酶Dnmt1,#M0230L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 甲基转移酶

人 DNA（胞嘧啶-5）甲基转移酶（Dnmt1）

#M0230L 250 units

#M0230S 50 units

识别位点

停产通知

停产通知：该产品于2021年12月15日停产。

概述

Dnmt1 在半甲基化 DNA 的 5´…CG…3´ 位点甲基化胞嘧啶残基。现认为哺乳动物 Dnmt1 与癌症发生、胚胎发育和几种其它生物功能有关。在细胞循环 S 期的 DNA 复制阶段发生大量的甲基化。

来源

用杆状病毒表达系统表达人 Dnmt1 cDNA。

反应条件

1X Dnmt1 反应缓冲液

[50 mM Tris-HCl (pH 7.8), 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 5% 甘油]，加入 100 μg/ml BSA 和 160 μM SAM, 37℃温育。热失活：65℃ 20 分钟。

随酶提供的试剂

10X Dnmt1 反应缓冲液

100X BSA
32 mM S-腺苷甲硫氨酸（SAM）

质保声明

未检测到核酸内切酶、外切酶污染。

单位定义

1 单位指在 25 μl 反应体系中，37℃ 条件下 30 分钟催化 1 pmol 的甲基基团转移到多聚 dI.dC 底物上所需要的酶量。

浓度

2,000 units/ml

注意事项

议选用 M.Sssl（NEB #M0226）修饰和保护DNA，因该酶能同时有效地对未甲基化和半甲基化的底物 DNA 进行甲基化。

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NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 甲基转移酶,EcoGII 甲基转移酶,#M0603S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 甲基转移酶

EcoGII 甲基转移酶

#M0603S 200 units

概述：

EcoGII 甲基转移酶是非特异甲基转移酶，能对序列中任意腺嘌呤残基（N6）进行甲基化修饰。

来源：

重组 E. coli 菌株，该载体含有从 E. coliC227-11 克隆的 EcoGII 修饰基因。

反应条件：

1X CutSmart 缓冲液 + SAM [50 mM KAc，20 mM Tris-Ac，10 mM Mg(Ac)2，100 μg/ml BSA（pH 7.9 @ 25℃）]，加入 160 μMSAM（随酶提供），37℃ 温育。

热失活：65℃ 加热 10 分钟。

单位定义：

1 单位指在 20 μl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟能保护 100 ng FAM 标记 dsDNA 不被MboI 限制性内切酶切割所需要的酶量。

浓度：

5,000 units/ml

注意事项：

SAM 在 37℃（pH 7.5）条件下不稳定，温育超过 4 个小时需要补充新的 SAM。甲基化反应中，SAM 以 1:200 的比例稀释到终浓度为 160μM。EcoGII 甲基转移酶对盐敏感。确保 DNA 溶液的盐浓度很低或者确保总反应体系中 DNA 溶液仅占很低的比例。