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规格

特性：该产物为无色至微黄色固体，可溶于二甲基亚砜和乙腈。

可溶于二甲基亚砜：试验成功

NMR光谱：试验成功

Calcein-AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，由于它在Calcein的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后，酯酶会将其水解为Calcein留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂 (如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate) 相比，Calcein-AM是最适合作为荧光探针去染活细胞的，因为它的细胞毒性很低。Calcein不会抑制任何的细胞功能如增殖或淋巴球的趋化性。使用了Calcein的活性检测的实验结果是十分可信并且与标准的51Cr-释放法所得结果相一致的。Calcein的激发和发射波长分别为490nm和515nm。

Calcein-AM可与PI结合使用，分别对活细胞和死细胞染色，可用于同时对活细胞和死细胞进行荧光染色。

*Caution* 

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*警告*

打开前请先轻敲试管，并小心打开。 在运输过程中，内装物可能已从试管底部移开。

Fig. 1  Cell staining mechanism

钙黄绿素-AM通过钙黄绿素的四个羧基的乙酰氧基甲基酯化（AM转化）而使其可透过细胞膜。钙黄绿素-AM本身几乎不显示荧光，但通过细胞内酯酶水解变成钙黄绿素。该钙黄绿素是不透膜的化合物，表现出强的黄绿色荧光（λex= 490 nm，λem= 515 nm）。羧基荧光素二乙酸盐（CFDA）和荧光素二乙酸盐（FDA）与荧光素-AM具有相同的荧光素骨架，被称为染色活细胞的染料。但是，这些化合物在显色后容易从细胞膜泄漏，这已成为使用中的问题之一。与这些染料相比，钙黄绿素-AM越来越多地用作显色后从细胞泄漏较少的染料。还已知它不抑制细胞功能，例如淋巴细胞增殖和白细胞趋化性。另外，钙黄绿素-AM在利用杀伤性T细胞和NK细胞的细胞毒性活性的测定中，与使用广泛使用的放射性同位素的51Cr释放方法得到相同的结果，因此细胞毒性较小。钙黄绿素-AM对活细胞染色，并用于在荧光显微镜和流式细胞仪下观察，但是当与死细胞染色染料组合使用时，常用于活细胞和死细胞的双重荧光染色。Papadopoulus等人使用Calcein-AM和Ethidium homodimer（EthD-1）进行双重染色，并使用两种染料的荧光波长差异通过流式细胞术研究细胞毒性。钙黄绿素-AM目前是用于染色活细胞的最有用的染料，因为它的细胞毒性较小，荧光后细胞泄漏较少。如上所述，目前正在使用放射性同位素的测量方法，但是从安全性和便利性的角度出发，期望使用荧光化合物的细胞研究的分析将继续进行。

λex=490 nm, λem=515 nm

1. 用1ml无水DMSO溶解1 mg Calcein-AM，制备成1 mmol/l的Calcein-AM母液，-20℃下密闭冷冻保存。

2. 用PBS将Calcein-AM母液稀释制成1-50 µM的Calcein-AM溶液(现配现用)。

3. 吸掉预培养好的细胞中的培养基，用合适的缓冲液清洗2-3次。^a)

4. 加入适量的Calcein-AM溶液，在37℃培养细胞15-30分钟。

5. 用PBS或适当的缓冲液洗涤细胞两次。

6. 用490 nm激发波长，515 nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。

a) 如果Calcein-AM很难进入细胞，可以使用表面活性剂，如Pluronic® F127。

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