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Nucleolus Bright Red试剂货号：N512

Nucleolus Bright Red试剂货号：N512
核仁荧光染色试剂-红色
Nucleolus Bright Red
商品信息
储存条件：冷暗处保存
运输条件：室温

特点：

● 高特异性核仁定位

● 可通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

● 两种颜色可供选择

选择规格：
60 nmol

凑单关联产品TOP5

NO.1.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.2.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST    乳酸脱氢酶(LDH)检测

NO.3.    Fura2-AM    细胞内钙离子检测

NO.4.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测

NO.5.    Lactate Assay Kit-WST    乳酸检测

荧光特性

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产品概述

Nucleolus Bright是一种选择性与RNA结合并产生荧光的小分子荧光染料，只需在固定细胞中加入试剂即可成像。虽然Nucleolus Bright也会和在核仁以外存在的RNA反应，不过核仁作为细胞内RNA最多存在rRNA的产生场所，荧光尤为强烈。

成像时，通过与核染色试剂DAPI[产品货号：D523]共染色，可以更清楚地确认核仁。有关详细信息，请参阅使用说明书中的实验例。

原理

核仁是不带膜的核内结构体，也是核糖体生物合成的起点。核仁中存在许多核糖体RNA(rRNA)，并且是 rRNA基因转录以及合成加工的场所。由于蛋白质合成的早期阶段在核仁中进行，因此核仁的变化被认为与多种细胞活动有关。核仁的形态变化已被公认为判断癌症的指标之一，近年来也有一系列的报道论述了核仁应激与DNA损伤、自噬、病毒感染和细胞衰老的关系，因此核仁在这些方面的研究也受到越来越多的关注。

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核仁染色试剂的比较

最大激发波长 最大发射波长 MeOH固定后染色 PFA固定后染色 活细胞染色
Nucleolus Bright Green 513 nm   538 nm 〇 〇 △※
Nucleolus Bright Red 537 nm 605 nm 〇 〇 △※

※希望通过活细胞进行评价时，请咨询公司技术支持。

产品特点

特点1：清晰地观察核仁

用4％ PFA或MeOH固定HeLa细胞后，用PBS洗净后用1％ Triton X-100进行破膜处理，加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色

试剂 (DAPI) 并培养，然后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实DAPI染色的细胞核内 (蓝色)有数个核仁存在。

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<染色条件>

・PFA 固定

细胞在4％PFA室温下浸泡5 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

・MeOH 固定

细胞在冷的MeOH中浸泡1 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

<检测条件>

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

特点2：核仁定位

用4％PFA固定WI-38细胞后，用抗Fibrillarin一抗和荧光标记的二抗免疫染色，并加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色试剂

(DAPI) ，培养后，用落射式荧光显微镜 (Keyence，BZ-X710) 观察。

结果证实Nucleolus Bright Green和Nucleolus Bright Red与核仁标记物(Dense Fibrillar Component)的染色部位一致。

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＜检测条件＞

Nucleolus Bright Green：Ex: 450-490 nm / Em: 500-550 nm

Nucleolus Bright Red：Ex: 533-548 nm / Em: 570-640 nm

DAPI：Ex: 340-380 nm / Em: 435-485 nm

Anti-Fibrillarin 抗体：Ex: 590-650 nm / Em: 668-733 nm

特点:3：与核仁相关的领域的报告示例

相关领域 概要 文献
评论(衰老）    关于各种参与细胞功能的核仁，
包括与癌症和早老症的已知关系、
特别是关于衰老的核仁功能。		 V. Tiku, A.   Antebi, “Nucleolar Function in Lifespan Regulation.”, Trends Cell Biol.,   2018, 28(8), 662.
细胞衰老    由于与抑制衰老有关的蛋白质缺损、
核仁数量的减少和核仁总面积的加。		 H. Tanaka,   S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M.   Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent   Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep.,2017, 18(9), 2148.
细胞衰老     由于rRNA加工因子的枯竭导致
核仁肥大化，
同时SA-βGal和p16表达增加。		 K.   Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, N. Katagiri, M. Tsuchiya, N. Goto, R.   Furumai, A. Murayama, J. Yanagisawa, K. Kimura, “Perturbation of ribosome   biogenesis drives cells into senescence through 5S RNP-mediated p53   activation.”, Cell Rep., 2015, 10(8), 1310.
自噬    通过抑制RNA聚合酶的转录，
确认自噬的诱导和核仁的形状变化。		 N. Katagiri,   T. Kuroda, H. Kishimoto, Y. Hayashi, T. Kumazawa and K. Kimura, “The   nucleolar protein nucleophosmin is essential for autophagy induced by   inhibiting Pol I transcription”, Scientific Reports, 2015, 8903, DOI:   10.1038/srep08903.

衰老细胞的评价例

将不同传代数的WI-38细胞用4％ PFA固定后，用PBS洗净并用1％ Triton X-100进行破膜处理，然后加入Nucleolus Bright Green或

Red和核染色试剂 (DAPI)，培养后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实第3代细胞 (P3) 中的一个细胞核内存在多个核仁，而第18代细胞 (P18) 中核仁变大并成为一体。

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<染色条件>

细胞在4％ PFA室温下浸泡5 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

＜检测条件＞

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

产品实验例

实验例：通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

使用共聚焦定量细胞成像仪 (横河电机株式会社 CQ1)对衰老细胞的定量分析。

将传代数不同的WI-38细胞固定后，分别用Nucleolus Bright Green和DAPI染色核仁，并用共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

通过图像对核仁进行分析

用共聚焦定量细胞成像仪在405nm处拍摄细胞核图像，在488nm处拍摄核仁体像，通过分析软件Cell Pathfinder识别各个细胞核内的核仁，并计算出其数量。

1613715296471660.png

横河电机CQ1拍摄条件

使用板：96孔板

物镜：40倍

激发波长：

405nm（DAPI）：蓝色

488nm（Nucleolus Bright Green）：绿色

视野：16视野

<解析图像>

蓝框线：核

红框线：核仁

核仁数分析

在传代数较多的细胞中，得到了1个细胞核中只有1个核仁的比例增加，而2个及以上核仁的比例减少的结果。该结果与下述论文中衰老的WI-38细胞中核仁数的减少(论文中的Table3)*1，以及通过SETD8敲低诱导衰老的细胞核仁的变化(论文中的Figure4D)*2得到了相同的结果。

1606358872798301.png

*1 P. M. Bemiller, L. Lee, “Nucleolar changes in senescing WI-38 cells”, Mech. Ageing Dev., 1978, 8 , 417.

*2 H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep., 2017, 18(9), 2148.

常见问题Q&A

Q1：可以染色活细胞吗？
A1：本试剂建议用于固定细胞染色，不建议用活细胞染色。如果您想用活细胞染色，请联系我们的技术支持。

Nucleolus Bright Green试剂货号：N511

Nucleolus Bright Green试剂货号：N511
核仁荧光染色试剂-绿色
Nucleolus Bright Green
商品信息
储存条件：避光，在冷暗处保存
运输条件：室温
选择规格：
60 nmol

产品概述

Nucleolus Bright是一种选择性与RNA结合并产生荧光的小分子荧光染料，只需在固定细胞中加入试剂即可成像。虽然Nucleolus Bright也会和在核仁以外存在的RNA反应，不过核仁作为细胞内RNA最多存在rRNA的产生场所，荧光尤为强烈。

成像时，通过与核染色试剂DAPI[产品货号：D523]共染色，可以更清楚地确认核仁。有关详细信息，请参阅使用说明书中的实验例。

原理

核仁是不带膜的核内结构体，也是核糖体生物合成的起点。核仁中存在许多核糖体RNA(rRNA)，并且是 rRNA基因转录以及合成加工的场所。由于蛋白质合成的早期阶段在核仁中进行，因此核仁的变化被认为与多种细胞活动有关。核仁的形态变化已被公认为判断癌症的指标之一，近年来也有一系列的报道论述了核仁应激与DNA损伤、自噬、病毒感染和细胞衰老的关系，因此核仁在这些方面的研究也受到越来越多的关注。

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核仁染色试剂的比较

最大激发波长 最大发射波长 MeOH固定后染色 PFA固定后染色 活细胞染色
Nucleolus Bright Green 513 nm 538 nm 〇 〇 △※
Nucleolus Bright Red 537 nm 605 nm 〇 〇 △※

※希望通过活细胞进行评价时，请咨询公司技术支持。

产品特点

特点1：清晰地观察核仁

用4％ PFA或MeOH固定HeLa细胞后，用PBS洗净后用1％ Triton X-100进行破膜处理，加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色

试剂 (DAPI) 并培养，然后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实DAPI染色的细胞核内 (蓝色)有数个核仁存在。

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<染色条件>

・PFA 固定

细胞在4％PFA室温下浸泡5 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

・MeOH 固定

细胞在冷的MeOH中浸泡1 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

<检测条件>

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

特点2：核仁定位

用4％PFA固定WI-38细胞后，用抗Fibrillarin一抗和荧光标记的二抗免疫染色，并加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色试剂

(DAPI) ，培养后，用落射式荧光显微镜 (Keyence，BZ-X710) 观察。

结果证实Nucleolus Bright Green和Nucleolus Bright Red与核仁标记物(Dense Fibrillar Component)的染色部位一致。

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＜检测条件＞

Nucleolus Bright Green：Ex: 450-490 nm / Em: 500-550 nm

Nucleolus Bright Red：Ex: 533-548 nm / Em: 570-640 nm

DAPI：Ex: 340-380 nm / Em: 435-485 nm

Anti-Fibrillarin 抗体：Ex: 590-650 nm / Em: 668-733 nm

特点:3：与核仁相关的领域的报告示例

相关领域 概要 文献
评论(衰老）    关于各种参与细胞功能的核仁，
包括与癌症和早老症的已知关系、
特别是关于衰老的核仁功能。		 V. Tiku, A.   Antebi, “Nucleolar Function in Lifespan Regulation.”, Trends Cell Biol.,   2018, 28(8), 662.
细胞衰老    由于与抑制衰老有关的蛋白质缺损、
核仁数量的减少和核仁总面积的加。		 H. Tanaka,   S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M.   Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent   Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep.,2017, 18(9), 2148.
细胞衰老     由于rRNA加工因子的枯竭导致
核仁肥大化，
同时SA-βGal和p16表达增加。		 K.   Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, N. Katagiri, M. Tsuchiya, N. Goto, R.   Furumai, A. Murayama, J. Yanagisawa, K. Kimura, “Perturbation of ribosome   biogenesis drives cells into senescence through 5S RNP-mediated p53   activation.”, Cell Rep., 2015, 10(8), 1310.
自噬    通过抑制RNA聚合酶的转录，
确认自噬的诱导和核仁的形状变化。		 N. Katagiri,   T. Kuroda, H. Kishimoto, Y. Hayashi, T. Kumazawa and K. Kimura, “The   nucleolar protein nucleophosmin is essential for autophagy induced by   inhibiting Pol I transcription”, Scientific Reports, 2015, 8903, DOI:   10.1038/srep08903.

衰老细胞的评价例

将不同传代数的WI-38细胞用4％ PFA固定后，用PBS洗净并用1％ Triton X-100进行破膜处理，然后加入Nucleolus Bright Green或

Red和核染色试剂 (DAPI)，培养后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实第3代细胞 (P3) 中的一个细胞核内存在多个核仁，而第18代细胞 (P18) 中核仁变大并成为一体。

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<染色条件>

细胞在4％ PFA室温下浸泡5 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

＜检测条件＞

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

产品实验例

实验例：通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

使用共聚焦定量细胞成像仪 (横河电机株式会社 CQ1)对衰老细胞的定量分析。

将传代数不同的WI-38细胞固定后，分别用Nucleolus Bright Green和DAPI染色核仁，并用共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

通过图像对核仁进行分析

用共聚焦定量细胞成像仪在405nm处拍摄细胞核图像，在488nm处拍摄核仁体像，通过分析软件Cell Pathfinder识别各个细胞核内的核仁，并计算出其数量。

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横河电机CQ1拍摄条件

使用板：96孔板

物镜：40倍

激发波长：

405nm（DAPI）：蓝色

488nm（Nucleolus Bright Green）：绿色

视野：16视野

<解析图像>

蓝框线：核

红框线：核仁

核仁数分析

在传代数较多的细胞中，得到了一个细胞核中只有一个核仁的比例增加，而两个及以上核仁的比例减少的结果。该结果与下述论文中衰老的WI-38细胞中核仁数的减少(论文中的Table3)*1，以及通过SETD8敲低诱导衰老的细胞核仁的变化(论文中的Figure4D)*2得到了相同的结果。

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*1 P. M. Bemiller, L. Lee, “Nucleolar changes in senescing WI-38 cells”, Mech. Ageing Dev., 1978, 8 , 417.

*2 H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep., 2017, 18(9), 2148.

荧光特性

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常见问题Q&A

Q1：可以染色活细胞吗？
A1：本试剂建议用于固定细胞染色，不建议用活细胞染色。如果您想用活细胞染色，请联系我们的技术支持。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504
细胞膜染色试剂—绿色
PlasMem Bright Green
商品信息
储存条件：-20度保存，避光防潮
运输条件：室温
选择规格：
100 μl

产品特性

细胞膜起着分隔细胞内和细胞外的作用，并且与细胞的移动和生长、神经信号的传达等细胞功能密切相关。因此，细胞膜的异常与各种细胞状态异常所造成的疾病（如离子通道病Channelopathy）有很密切的关联，被认为是非常重要的生物标记物之一。

由于操作简便并且可用于活细胞染色，小分子荧光探针是最常用的细胞膜染色方法。但是小分子荧光探针普遍存在细胞内停留时间短、水溶性差的问题。而PlasMem Bright是一种克服了现有小分子荧光探针问题的产品。 用PlasMem Bright观察细胞膜时，可以在染色后的1天以上进行长时间的荧光观察。

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与其他公司产品的比较

PlasMem Bright系列产品克服了现有市面上的细胞膜染色试剂的诸多缺点（细胞毒性高、停留时间短、不同实验系的兼容性差）。并且分别有Green/ Red两种产品，方便多重染色时自由选择。

产品名 细胞

毒性

 染色后

的清洗

 含血清

培养基

 停留

时间

 染色后

的固定
PlasMem Bright 低 不需要 可使用 24 h 可以(PFA)
S公司 产品P – 需要 不可使用 – 可以
T公司 产品D – 需要 可使用 – 不可以
T公司 产品C – 需要 可使用 1.5 h 可以(PFA)

*通过细胞核染色试剂染色后，神经细胞的形态变化(凝集)的比较得出的结论

细胞膜上的停留时间

使用各种细胞膜染色试剂进行染色HeLa细胞，经过24 h培养后对各染色试剂的荧光图像进行比较。结果发现，与其他公司的细胞膜染色试剂相比，PlasMem Bright系列产品的染色时间更长，膜上的停留时间也更长。

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实验例

实验例：ES细胞群内部的细胞膜染色

将小鼠ES细胞在涂有明胶的玻璃底皿中培养4天，并将获得的细胞群，用PlasMem Bright Green（200倍稀释）染色15分钟，并使用共聚焦显微镜（Zeiss：LSM710）中观察。

结果，细胞群内部的细胞膜也可以用PlasMem Bright Green可视化观察。

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<观察条件>

细胞膜（PlasMem Bright Green【绿】）：Ex.488 nm/Em.500-560 nm.

*此实验例由庆应义塾大学医学院的石津 大嗣老师提供。

实验例：轴突神经细胞形态和线粒体定位的观察

由神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分化诱导的神经细胞，分别用PlasMem Bright Green (绿)、MitoBright LT Red (红)、Hoechst 33342 (蓝) 进行染色。可以鲜明的观察到细胞的形状以及轴突内的线粒体。

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（比例尺：200 μm）

<观察条件>

细胞膜（PlasMem Bright Green【绿】）：Ex.488 nm/Em.500-560 nm。

线粒体（MitoBright LT Red【红】）：Ex.561 nm/Em.560-620 nm。

细胞核（Hoechst33342【蓝】）：Ex.405 nm/Em.400-450 nm。

<实验步骤>

（1）诱导神经芽细胞（SH-SY5Y）为神经细胞。

（2）去除上清液，添加使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green、Hoechst 33342（终浓度：5μg/ml）以及MitoBright LT Red（终浓度0.1 μmol/l）。

（3）培养30分钟。

（4）去除上清液，添加HBSS。

（5）使用荧光显微镜观察。

实验例：神经芽细胞（SH-SY5Y）中的线粒体检测

分别用PlasMem Bright Green (绿)、MitoBright LT Red (红)、Hoechst 33342 (蓝) 对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y进行染色，用共聚焦显微镜获得3D图像。可以鲜明的观察到细胞形态以及线粒体和细胞核的情况。

image.png

（比例尺：10 μm）

<观察条件>

细胞膜（PlasMem Bright Green【绿】）：Ex.488 nm/Em.500-560 nm。

线粒体（MitoBright LT Red【红】）：Ex.561 nm/Em.560-620 nm。

细胞核（Hoechst33342【蓝】）：Ex.405 nm/Em.400-450 nm。

<实验步骤>

（1）使用HBSS清洗SH-SY5Y细胞。

（2）添加使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green、Hoechst 33342（终浓度：5μg/ml）以及MitoBright LT Red（终浓度0.1 μmol/l）。

（3）培养10分钟。

（4）使用HBSS清洗细胞2次

（5）使用荧光显微镜观察。

  实验例：脑源性小鼠神经母细胞瘤的延时成像

使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green，染色N1E-115细胞30分钟并进行延时成像时，可以清楚地观察到神经细胞内树突和突起中的变化。

<培养条件>

・细胞：N1E-115细胞（脑源性小鼠神经母细胞瘤）

・培养基：5％FBS，1％含谷氨酰胺的D-MEM（低葡萄糖）

・培养设备：35 mm 玻璃底皿

<拍摄条件>

・成像设备：带培养箱的荧光显微镜

・拍摄时间：1小时，拍摄间隔：2分钟

*此实验例由芝浦理工大学系统科学与工程学院的涌澤 充 様、福井 浩二教授提供。

 实验例：与外泌体共染色

向PlasMem Bright Green染色的HeLa细胞中加入外泌体膜荧光染色试剂盒(ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red)染色的外泌体。可以观察到，由活细胞的细胞膜产生的内体(Endosome)中的外泌体，以及没有摄入外泌体的内体。另外，即使在固定染色的细胞之后，也可以像活细胞一样使存在于细胞膜来源的囊泡（内体）中的外泌体可视化。

image.png

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(比例尺：5 μm）

image.png

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(比例尺：10 μm）

<观察条件>

细胞膜 (PlasMem Bright Green, 绿)  Ex. 488 nm / Em. 500-560 nm。

外泌体 (ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red, 红)  Ex. 561 nm / Em. 560-620 nm。

 

<实验步骤>

（1）接种Hela细胞，24小时培养。

（2）去除上清液，添加使用培养基稀释的PlasMem Bright Green（100倍稀释）。

（3）培养10分钟。

（4）使用HBSS清洗细胞3次。

（5）添加175 μlMEM培养基与ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red染色过的Exosome溶液25 μl。

（6）在CO2培养箱中过夜培养。

（固定情况下）细胞使用HBSS清洗2次后添加4%PFA，培养15分钟后，使用HBSS清洗细胞2次。

（7）使用共聚焦显微镜观察

 实验例：烟草BY2细胞的膜染色

用PlasMemBright Green (200倍稀释)染色烟草BY2细胞5分钟，清洗后每5分钟拍摄一次并进行长时间观察。实验中可以清晰的观察到BY2细胞膜的荧光以及细胞分裂所形成的细胞板。

(数据由名古屋大学栗原大辅老师友情提供)

<检测条件>

・转盘式共聚焦显微镜观察

・Ex: 488 nm; Em: 520/35 (502.5-537.5 nm)

・图中的时间按照00:00 (小时:分钟)表示

 

 实验例：拟南芥根的染色

用PlasMemBright Green (200倍稀释)染色拟南芥根15分钟，采用Z轴景深连续拍照的方法进行荧光观察，可以清晰的观察到立体的细胞膜分布情况。

 

(数据由名古屋大学栗原大辅老师友情提供)

<检测条件>

 

・转盘式共聚焦显微镜观察，Z轴摄影

・Ex: 488 nm; Em: 520/35 (502.5-537.5 nm)

关联产品

 

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常见问题Q&A

Q1:   是否可以用固定化细胞？
A: 可以用4% 多聚甲醛(PFA)进行固定。

但是请注意不可以改变细胞膜的渗透性，否则会操造成没有荧光。
Q2:  是否可以进行动态荧光成像？
A:可以。   但是请注意将激发光保持在最低水平并提高检测灵敏度。另外，长时间的激发光照射可能会对细胞造成伤害，也更容易使荧光染料分解，请考虑采用时间间隔等方法尽量避免。
Q3:   在配制Working solution的时候是否可以用无血清培养基或Buffer进行稀释？
A: 可以。
Q1:  染色后清洗细胞时建议使用什么？
A: 无血清培养基、PBS、HBSS等各种缓冲液均可以使用。
Q4:   添加Working solution后，是否可以马上观察？
A:添加后马上观察也可以。操作手册上的步骤是加入试剂后培养5 min再观察。
Q5:   细胞膜以外的地方也有被染色的情况，请问是什么原因？
A: 感觉观察到细胞膜以外也被染色的情况，可能有如下两个原因

1) 细胞膜上的试剂，随着时间的推移，通过细胞内吞作用进入细胞内。

请参考本产品网页上“细胞膜上的停留时间”的部分，有染色后24 h的照片。

2）荧光成像时的焦点在底面(细胞底部的接触面)上，如下图A。

荧光成像时的焦点请尽量像下图B那样调整Z轴的高度。

image.png

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PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505
细胞膜染色试剂—红色
PlasMem Bright Red
商品信息
储存条件：-20度保存，避光防潮
运输条件：室温
选择规格：
100 μl

产品特性

细胞膜起着分隔细胞内和细胞外的作用，并且与细胞的移动和生长、神经信号的传达等细胞功能密切相关。因此，细胞膜的异常与各种细胞状态异常所造成的疾病（如离子通道病Channelopathy）有很密切的关联，被认为是非常重要的生物标记物之一。

由于操作简便并且可用于活细胞染色，小分子荧光探针是最常用的细胞膜染色方法。但是小分子荧光探针普遍存在细胞内停留时间短、水溶性差的问题。而PlasMem Bright是一种克服了现有小分子荧光探针问题的产品。 用PlasMem Bright观察细胞膜时，可以在染色后的1天以上进行长时间的荧光观察。

与其他公司产品的比较

PlasMem Bright系列产品克服了现有市面上的细胞膜染色试剂的诸多缺点（细胞毒性高、停留时间短、不同实验系的兼容性差）。并且分别有Green/ Red两种产品，方便多重染色时自由选择。

产品名 细胞

毒性

 染色后

的清洗

 含血清

培养基

 停留时间 染色后

的固定
PlasMem Bright 低 不需要 可使用 24 h 可以(PFA)
S公司 产品P – 需要 不可使用 – 可以
T公司 产品D – 需要 可使用 – 不可以
T公司 产品C – 需要 可使用 1.5 h 可以(PFA)

细胞膜上的停留时间

使用各种细胞膜染色试剂进行染色HeLa细胞，经过24 h培养后对各染色试剂的荧光图像进行比较。结果发现，与其他公司的细胞膜染色试剂相比，PlasMem Bright系列产品的染色时间更长，膜上的停留时间也更长。

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实验例

 

实验例：通过悬浮细胞观察内吞作用对温度依赖性的变化

本实验使用ECGreen内吞检测试剂（产品代码：E296）和PlasMem Bright Red染色，对Jurkat细胞内吞时对温度的依赖性变化

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<检测条件>

内体检测(ECGreen, 绿色): Ex. 405 nm / Em. 500 – 560 nm

细胞膜检测 (PlasMem Bright Red,红色): Ex. 561 nm / Em. 560 – 700 nm

<实验步骤>

（1）在样品管中加入Jurkat细胞悬液（10%FBS，RPMI）并在4℃或37℃孵育30min。

（2） 使用步骤（1）配置的细胞悬浮液将ECGreen溶液稀释1000倍。

（3） 4℃或37℃孵育30min。

（4） 用HBSS清洗细胞两次。

（5） 加入含有PlasMem Bright Red（100倍稀释）的培养基，悬浮细胞。

（6） 将悬浮液转移到成像板上，并使用共聚焦显微镜观察细胞。

实验例：神经细胞的形态和轴突内线粒体局部观察

由神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分化诱导的神经细胞，分别用PlasMem Bright Red (红)、MitoBright LT Green (绿)、Hoechst 33342 (蓝) 进行染色。可以鲜明的观察到细胞的形状以及轴突内的线粒体。

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 实验例：观察巨噬细胞摄入外泌体

使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS (Wako)提取人牙龈组织的间质干细胞(GMSC)产生的外泌体，并使用ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green (货号：EX01)进行染色。然后将其加入由人类外周血单核细胞(PBMC)分化的人类巨噬细胞中，用PlasMem Bright Red对巨噬细胞进行染色。

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(数据由九州大学附属医院 口腔功能修复科 福田隆男老师友情提供)

 

＜检测条件＞
外泌体（Mem Dye – Green）：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
细胞膜（PlasMem Bright Red）： Ex. 561 nm / Em. 560 – 700 nm
细胞核（DAPI）：Ex. 345 nm / Em. 455 nm

＜实验操作＞
1. 将多聚赖氨酸包被载玻片(poly-L-lysine coated slides)放置在24 孔板中进行外周血单个核细胞(PBMC)的分化诱导(7 days)。
2. 根据ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green的操作说明书对10 µg的外泌体进行染色。
3. 将标记好的外泌体，按照1 µg/mL添加到24孔板中，培养3 h。

4. 用PBS清洗细胞1次。
5. 添加用培养基配置好的PlasMem Bright Red (1/100稀释)，在CO2培养箱内静置15 min。
6. 用PBS清洗细胞3次。
7. 用4% PFA，室温下固定15 min。
8. 用PBS清洗细胞3次。
9. 用含DAPI的封片剂 (Invitrogen：ProLong™ Gold Antifade Mountant with DAPI)进行封片。
10. 激光共聚焦显微镜LSM 700 confocal microscope (Carl Zeiss) 观察。

 

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常见问题Q&A

Q1:   是否可以用固定化细胞？
A: 可以用4% 多聚甲醛(PFA)进行固定。

但是请注意不可以改变细胞膜的渗透性，否则会操造成没有荧光。
Q2:  是否可以进行动态荧光成像？
A:可以。   但是请注意将激发光保持在最低水平并提高检测灵敏度。另外，长时间的激发光照射可能会对细胞造成伤害，也更容易使荧光染料分解，请考虑采用时间间隔等方法尽量避免。
Q3:   在配制Working solution的时候是否可以用无血清培养基或Buffer进行稀释？
A: 可以。
Q1:  染色后清洗细胞时建议使用什么？
A: 无血清培养基、PBS、HBSS等各种缓冲液均可以使用。
Q4:   添加Working solution后，是否可以马上观察？
A:添加后马上观察也可以。操作手册上的步骤是加入试剂后培养5 min再观察。
Q5:   细胞膜以外的地方也有被染色的情况，请问是什么原因？
A: 感觉观察到细胞膜以外也被染色的情况，可能有如下两个原因

1) 细胞膜上的试剂，随着时间的推移，通过细胞内吞作用进入细胞内。

请参考本产品网页上“细胞膜上的停留时间”的部分，有染色后24 h的照片。

2）荧光成像时的焦点在底面(细胞底部的接触面)上，如下图A。

荧光成像时的焦点请尽量像下图B那样调整Z轴的高度。

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