Nunc Bio-Assay培养皿，低外形 Nunc™ BioAssay 方形培养皿
- 1857.00
目录价：
- 240845
货号
- Nunc
品牌
- CCP
产品线
选择其它规格
| 名称 | 货号 | 品牌 | 规格 | 价格 | 购买 |
|---|
| Nunc Bio-Assay培养皿，标准高度 | 240835 | Nunc | 16个/箱 | 联系微信：18301939375 |
- 商品详情
| 培养面积 | 478 sq. cm |
|---|---|
| 描述 | Low Profile, Non-Treated BioAssay Dish |
| Sterility | Sterile |
| 表面处理 | Non-treated |
| 高度（英制） | 20 in. |
| 高度（公制） | 20 mm |
| 每箱数量 | 20 |
| 形状 | Square |
| 每包 数量 | 5 |
| 工作容量（公制） | 215 mL |
| Unit Size | Case of 20 |
多功能 Thermo Scientific™ Nunc™ 方型生物测定培养皿提供细胞培养处理和未经处理表面选择，有助于筛选大量菌落、培养细菌和真菌或为其他培养容器提供包容环境。
标准高度培养皿：
●外部尺寸：245 x 245 x 25mm
●盖高：9.8mm
●提供未经处理或 Nunclon Delta 细胞处理表面选择
●光学透明且无菌
低型培养皿：
●外部尺寸：241 x 241 x 20mm
●盖高：10.3mm
●提供未经处理表面选择
●基因组筛选和菌落拣选的自动化仪器
。Thermo Scientific能够为客户提供一整套包括高端分析仪器、实验室装备、软件、服务、耗材和试剂在内的实验室综合解决方案。Fisher Scientific为卫生保健，科学研究，以及安全和教育领域的客户提供一系列的实验室装备、化学药品以及其他用品和服务。Thermo Fisher Scientific将努力为客户提供最为便捷的采购方案，为科研的飞速发展不断地改进工艺技术，提升客户价值，帮助股东提高收益，为员工创造良好的发展空间。
NuncBio-Assay培养皿，标准高度Nunc™BioAssay方形培养皿240835,赛默Thermo代理
Nunc Bio-Assay培养皿，标准高度 Nunc™ BioAssay 方形培养皿
- 4030.00
目录价：
- 240835
货号
- Nunc
品牌
- CCP
产品线
选择其它规格
| 名称 | 货号 | 品牌 | 规格 | 价格 | 购买 |
|---|
| Nunc Bio-Assay培养皿，低外形 | 240845 | Nunc | 20个/箱 | 联系微信：18301939375 |
- 商品详情
| 培养面积 | 500 sq. cm |
|---|---|
| 描述 | Standard Height, Non-Treated BioAssay Dish |
| Sterility | Sterile |
| 表面处理 | Non-treated |
| 高度（英制） | 25 in. |
| 高度（公制） | 25 mm |
| 每箱数量 | 16 |
| 形状 | Square |
| 每包 数量 | 4 |
| 工作容量（公制） | 225 mL |
| Unit Size | Case of 16 |
多功能 Thermo Scientific™ Nunc™ 方型生物测定培养皿提供细胞培养处理和未经处理表面选择，有助于筛选大量菌落、培养细菌和真菌或为其他培养容器提供包容环境。
标准高度培养皿：
●外部尺寸：245 x 245 x 25mm
●盖高：9.8mm
●提供未经处理或 Nunclon Delta 细胞处理表面选择
●光学透明且无菌
低型培养皿：
●外部尺寸：241 x 241 x 20mm
●盖高：10.3mm
●提供未经处理表面选择
●基因组筛选和菌落拣选的自动化仪器
。Thermo Scientific能够为客户提供一整套包括高端分析仪器、实验室装备、软件、服务、耗材和试剂在内的实验室综合解决方案。Fisher Scientific为卫生保健，科学研究，以及安全和教育领域的客户提供一系列的实验室装备、化学药品以及其他用品和服务。Thermo Fisher Scientific将努力为客户提供最为便捷的采购方案，为科研的飞速发展不断地改进工艺技术，提升客户价值，帮助股东提高收益，为员工创造良好的发展空间。
Biofilm TestPiece Assay Kit货号：B606
活动进行中
订购满5000元，200元礼品等你拿
凑单关联产品TOP5
NO.1. Microbial Viability Assay Kit-WST 微生物活性检测
NO.2. Biofilm Formation Assay 生物被膜形成量/抑制能力检测
NO.3. Biofilm Viability Assay 生物被膜药物杀伤效果检测
NO.4. CTC 细菌计数、染色
NO.5. Bacstain- CTC Rapid Staining Kit 细菌活力检测
规格性状
・TestPiece Holder ×1
・Crystal Violet Solution 50 ml ×1
产品概述
生物被膜 (Biofilm)是一种主要由细菌体外的多糖组成的膜状复合体，一般在含水的潮湿固体表面形成。生物被膜被认为是医疗设备中的细菌污染、龋齿、牙周病和食物中毒的主要原因，同时也是工业领域中金属腐蚀、排水管道污染的罪魁祸首。因此，开发可以抑制生物被膜形成的材料成为近年来备受关注的一个研究领域。
Biofilm TestPiece Assay Kit可以通过结晶紫(Crystal Violet)染色法对材料表面的生物被膜形成能力进行评价。试剂盒中内含同仁化学研究所原创的材料样品检测片(TestPiece)固定盖。由于材料样品被固定在孔板盖上，因此不需要传统检测方法中的清洗和染色操作、避免了生物被膜脱落所造成的误差。而且，使用多孔板进行检测可以一次检测多个样品，大大提高了检测效率。
结晶紫(Crystal Violet)染色法
1982年，Pedersen通过对比结晶紫(Crystal Violet)的吸光度与各种微生物生成的生物被膜的干燥重量，发现两者呈线性相关。因此结晶紫染色法作为最经典的生物被膜检测法一直沿用至今。
TestPiece Holder上检测片的加载方法
产品特点
特点① 检测时间大幅缩短
传统检测方法的一大弊端就是需要一个孔一个孔的反复清洗操作。而本试剂盒采用全新的TestPiece Holder 可以更便捷的进行多样品对检测。
特点② 减小复孔间的孔间差
传统法将检测片放置于烧杯等容器的底部，清洗时非常容易造成生物被膜的脱落，进而导致检测结果的孔间差大、再现性差等问题。
本试剂盒采用TestPiece Holder固定检测片，操作过程中不易造成生物被膜的脱落，可以获得更稳定的实验数据。
与传统法的比较
菌种：Staphylococcus aureus NBRC13276
复孔数： n=8
检测实例
各种材料检测片表面的生物被膜形成的比较
使用本试剂盒数值化检测各种材料检测片(聚苯乙烯[PS]、聚丙烯[PP]、纤维增强复合材料[FRP]、不锈钢[SUS]、玻璃[GL]、硅材料[SLC])的金黄葡萄球菌的生物被膜形成量。
注意事项
Biofilm TestPiece Assay Kit(货号：B606)不含24孔板
本试剂盒内含TestPiece Holder(检测片固定盖)和染色试剂溶液(Crystal Violet溶液)，不包含检测用的24孔板。
推荐使用下面型号的24孔板。
Falcon® 24 Well Clear Flat Bottom, TissueCulture-Treated Multiwell Cell Culture Plate with Lid. Product Number: 353047.
或直接从同仁化学研究所购买配套用24孔板(限量销售)。
24-well Plate（Falcon Product Number: 353047）
专门用于Biofilm TestPiece Assay Kit(B606)检测的24孔板(8片装)，不单独销售。每购买一个Biofilm TestPiece Assay Kit (B606)，建议购买8个24-well Plate 。
Biofilm关联产品
使用针形孔板盖(Pin Plate)检测生物被膜
| 生物被膜形成量/抑制能力检测试剂盒
Biofilm Formation Assay Kit |
生物被膜药物杀伤效果检测试剂盒
Biofilm Viability Assay Kit |
| Biofilm Formation Assay Kit的特长和操作 | Biofilm Viability Assay Kit的特长和操作
|
参考文献
常见问题Q&A
| Q：是否可以使用指定的24孔板以外的孔板？ |
| A：虽然各个公司生产的24孔板在形状和尺寸上的差别很小，但是建议使用指定的Falcon®24-well plate。TestPiece Holder是以该型号孔板为基准设计和生产的。 |
| Q：使用过的TestPiece Holder是否可以回收再利用？ |
| A：由于存在杂菌污染的可能性，不建议回收再利用。 |
| Q：目前有过检测实例的菌种有哪些？ |
| A：有过实际检测案例的菌种有： ・Staphylococcus aureus（金黄葡萄球菌）
・Pseudomonas aeruginosa（绿脓杆菌） ・Escherichia coli（大肠杆菌） 以上菌种的详细培养条件等请参考产品说明书。 |
Biofilm Viability Assay试剂盒货号：B603
凑单关联产品TOP5
NO.1. Microbial Viability Assay Kit-WST 微生物活性检测
NO.2. Biofilm Formation Assay 生物被膜形成量/抑制能力检测
NO.3. Biofilm TestPiece Assay Kit 材料表面生物被膜形成能力检测
NO.4. CTC 细菌计数、染色
NO.5. Bacstain- CTC Rapid Staining Kit 细菌活力检测
规格性状
・WST Solution 1 ml×1
・Electron Mediator Reagent 0.12 ml×1
・ 96-peg-Lid ×1
・96-well Plate ×10
在针状孔板盖(96-peg-Lid)的针状突起表面形成生物被膜
产品概述
生物被膜 (Biofilm)是一种主要由细菌体外的多糖组成的膜状复合体，可以在几乎所有的环境下广泛存在。医疗器具的细菌污染、龋齿、牙周炎等感染症等都与生物被膜的形成有关。由于生物被膜一旦形成，会对抗生素等药物产生抗性，进而引起严重的污染问题。因此，具有抑制生物被膜活性的药物和食品成分成为近年来的研究热点。
Biofilm Viability Assay Kit可以检测微生物的代谢活性。检测过程中，生物被膜在孔板盖的针形突起表面生长，所以在清洗和染色操作中生物被膜不易脱落。同时，通过使用多孔板，可以一次性进行多样品检测。
Biofilm Viability Assay Kit的特长和操作
检测原理
Biofilm Viability Assay Kit是通过检测生物被膜内的活细菌的代谢活性来评价药物对生物被膜内的微生物杀伤效果的试剂盒。NADH(NADPH)是一种参与微生物能量代谢的辅酶，它可以通过电子载体，将WST还原成有颜色的甲臜染料(Formazan)。通过检测这个还原能力，可以表征微生物的代谢活性。
操作
本试剂盒可以对生物被膜形成量和药物对生物被膜抑制能力进行检测。检测过程中，生物被膜在孔板盖的针形突起表面生长，所以在清洗和染色操作中生物被膜不易脱落。同时，通过使用多孔板，可以一次性进行多样品检测。
试剂盒选择
针对两种不同用途的试剂盒选择
使用针状孔板盖(96 Peg-Lid)的试剂盒一共有两款，分别通过结晶紫染色法和WST显色法进行检测，供您根据具体的需求自由选择。
两种试剂盒的选择方法
*不同的菌种，生物被膜的形成条件(培养基、培养时间等)也不相同。建议先使用Biolfilm Formation Assay Kit(关联产品)进行摸索。具体的摸索方法请参考FAQ “如何摸索生物被膜最佳实验条件”
*本试剂盒是由同仁化学研究所和日本福冈县工业技术中心—生物食品研究所共同开发。
检测实例
常见的生物被膜检测指标有两种：MBIC(Minimum Biofilm Inhibitory Concentrations,抑制生物被膜形成的最低浓度)和MBEC(Minimum Biofilm Eradication Concentrations,细菌生物被膜的最小清除浓度)。下面用各试剂盒分别检测对S.aureus(金黄葡萄球菌)的MBIC和MBEC。
Biofilm关联产品
用检测片评价抗菌材料对生物被膜的抑制能力
Biofilm TestPiece Assay Kit(货号：B606)
需要对抗菌材料的生物被膜抑制能力进行评价的时候，使用同仁化学研究所独自研发出的TestPiece Holder(检测片固定盖)可以大幅缩短检测时间，并且得到重现性更高的检测数据。
与传统法的比较
菌种：Staphylococcus aureus NBRC13276
复孔数： n=8
常见问题Q&A
| Q：加入显色试剂以后，培养多长时间比较合适？ |
| A：不同微生物种类，代谢活性不同，显色所需要的时间也不同。第一次检测时，建议每培养一定时间就检测一下吸光度，最长一般不超过24 h，以确定最佳培养时间。S. aureus和S. mutans两个菌种可以参考操作说明书的图2和图3。 |
| Q：是否可以使用450 nm以外的滤光片进行检测？ |
| A：440~480 nm范围内的滤光片均可使用。 |
| Q：做细菌被膜抑制药物的药效评价时，生物被膜的形成量至少要达到什么程度？ |
| A：使用Biofilm Formation Assay Kit (货号B601)检测时，操作步骤的最后一步，检测结晶紫(CV)溶液的吸光度时，O.D.在0.5(590 nm)以上为宜。 |
| Q：目前有过检测实例的菌种有哪些？ |
| 目前Biofilm Viability Assay Kit(本产品)以及同系列产品Biofilm Formation Assay Kit (货号B601)有过实际检测案例的菌种有：
・Staphylococcus aureus（金黄葡萄球菌） ・Pseudomonas aeruginosa（绿脓杆菌） ・Escherichia coli（大肠杆菌） ・Streptococcus mutans（虫牙的病原菌之一） ・Porphyromonas gingivalis（牙周病的发病原因之一） 以上菌种的详细培养条件等请参考产品说明书。 |
Biofilm Formation Assay试剂货号：B601
活动进行中
订购满5000元，200元礼品等你拿
凑单关联产品TOP5
NO.1. Microbial Viability Assay Kit-WST 微生物活性检测
NO.2. Biofilm Viability Assay 生物被膜药物杀伤效果检测
NO.3. Biofilm TestPiece Assay Kit 材料表面生物被膜形成能力检测
NO.4. CTC 细菌计数、染色
NO.5. Bacstain- CTC Rapid Staining Kit 细菌活力检测
规格性状
・Crystal Violet Solution 22 ml×1
・ 96-peg-Lid ×1
・ 96-well Plate ×10
在针状孔板盖(96-peg-Lid)的针状突起表面形成生物被膜
产品概述
生物被膜 (Biofilm)是一种主要由细菌体外的多糖组成的膜状复合体，可以在几乎所有的环境下广泛存在。医疗器具的细菌污染、龋齿、牙周炎等感染症等都与生物被膜的形成有关。由于生物被膜一旦形成，会对抗生素等药物产生抗性，进而引起严重的污染问题。因此，具有抑制生物被膜活性的药物和食品成分成为近年来的研究热点。
Biofilm Formation Assay Kit是通过结晶紫(Crystal Violet)法，对生物被膜形成量和药物对生物被膜抑制能力进行检测的试剂盒。检测过程中，生物被膜在孔板盖的针形突起表面生长，所以在清洗和染色操作中生物被膜不易脱落。同时，通过使用多孔板，可以一次性进行多样品检测。
结晶紫(Crystal Violet)染色法
1982年，Pedersen通过对比结晶紫(Crystal Violet)的吸光度与各种微生物生成的生物被膜的干燥重量，发现两者呈线性相关。因此结晶紫染色法作为最经典的生物被膜检测法一直沿用至今。
参考文献： K. Pedersen,”Method for Studying Microbial Biofilms in Flowing-Water Systems”, Appl. Environ. Microbiol., 1982, 43(1), 6.
特长和操作
Biofilm Formation Assay Kit的特长和操作
产品特点
特点① 检测时间大幅缩短
传统的多孔板检测方法是在96孔板的内壁和底部生成生物被膜，在细菌的培养和清洗等过程中，需要一个孔一个孔的进行操作，增加了大量的操作步骤和时间。而本试剂盒检测方法中，生物被膜在针状突起孔板盖的突起表面生成，只需移动孔板盖就可完成，使得操作变得异常简便。
特点② 减小复孔间的孔间差
由于传统法是在96孔板的内壁和底部形成生物被膜，在清洗等操作时非常容易造成生物被膜的脱落，所以复孔间的孔间差过大一直是传统方法的一大弊端。本试剂盒的方法是在孔板盖的突起处的表面形成生物被膜，大幅减少操作中生物被膜脱落的情况。
<使用本方法的参考文献>
T. Tsukatani, F. Sakata, R. Kuroda, “A rapid and simple measurement method for biofilm formation inhibitory activity using 96‑pin microtiter plate lids”, World J. Microbiol. Biotechnol., 2020, doi:10.1007/s11274-020-02964-6.
I. Okamoto etc., “Antibacterial and Antibiofilm Photodynamic Activities of Lysozyme-Au Nanoclusters/Rose Bengal Conjugates”, ACS Omega, 2021, doi: 10.1021/acsomega.1c00838
操作
本试剂盒可以对生物被膜形成量和药物对生物被膜抑制能力进行检测。检测过程中，生物被膜在孔板盖的针形突起表面生长，所以在清洗和染色操作中生物被膜不易脱落。同时，通过使用多孔板，可以一次性进行多样品检测。
产品选择指南
针对两种不同用途的试剂盒选择
使用针状孔板盖(96 Peg-Lid)的试剂盒一共有两款，分别通过结晶紫染色法和WST显色法进行检测，供您根据具体的需求自由选择。
两种试剂盒的选择方法
*不同的菌种，生物被膜的形成条件(培养基、培养时间等)也不相同。建议先使用Biolfilm Formation Assay Kit(本产品)进行摸索。具体的摸索方法请参考FAQ “如何摸索生物被膜最佳实验条件”
*本试剂盒是由同仁化学研究所和日本福冈县工业技术中心—生物食品研究所共同开发。
Biofilm关联产品
本系列的其他产品介绍
用检测片评价抗菌材料对生物被膜的抑制能力
Biofilm TestPiece Assay Kit(货号：B606)
需要对抗菌材料的生物被膜抑制能力进行评价的时候，使用同仁化学研究所独自研发出的TestPiece Holder(检测片固定盖)可以大幅缩短检测时间，并且得到重现性更高的检测数据。
与传统法的比较
菌种：Staphylococcus aureus NBRC13276
复孔数： n=8
检测实例
常见的生物被膜检测指标有两种：MBIC(Minimum Biofilm Inhibitory Concentrations,抑制生物被膜形成的最低浓度)和MBEC(Minimum Biofilm Eradication Concentrations,细菌生物被膜的最小清除浓度)。下面用各试剂盒分别检测对S.aureus(金黄葡萄球菌)的MBIC和MBEC。
常见问题Q&A
| Q: 如何摸索生物被膜的最佳实验条件? |
| A：一般对于生物被膜最佳实验条件的摸索项目有：培养基的种类、细菌的接种浓度、培养基的更换次数、培养时间、培养温度等。 下面针对培养基的种类、细菌的接种浓度、培养基的更换次数、培养时间作为检测实例进行摸索。如果要摸索培养温度的最佳条件，需要准备多个Biofilm Formation Assay Kit(B601)。
摸索实验例1 不同的培养基种类、细菌播种浓度、培养基交换条件下，检测生物被膜的形成量。 (孔板设置例)
日程表
*每隔24 h更换一次新的培养基。 操作步骤： 1)第1天：96-well Plate①的A行和B行的每个孔中播种180 μl用培养基A至D制备的浓度①和②的细菌溶液。C行~H行留空，盖上96-peg Lid，在适宜温度下培养24 h。 例: 细菌浓度①约107 CFU/ml，细菌浓度②约106 CFU/ml。 2) 第二天：将180 μl不含细菌的培养基加至96孔板②的A、B行的孔中。如图例所示，C、D行的各孔中加入180 μl培养基A~D配制的细菌浓度①和②细菌悬液。E行~H行留空。 将步骤1)中的96-peg Lid 盖在96-well Plate②上，在适宜温度下培养24 h。 3) 第三天：将180 μl不含细菌的培养基加至96-well Plate③的A行~D行各孔中，如图例所示，E、F行的各孔中加入180 μl培养基A~D配制的细菌浓度①和②细菌悬液。G、H行留空。 将步骤2)中的96-peg Lid 盖在96-well Plate③上，在适宜温度下培养24 h。 4) 第4天：将180 μl不含细菌的培养基加至96-well Plate④的A行~F行各孔中，如图例所示，G、H行的各孔中加入180 μl培养基A~D配制的细菌浓度①和②细菌悬液。 将步骤3)中的96-peg Lid 盖在96-well Plate④上，在适宜温度下培养24 h。 5）按照操作说明书的“生物被膜形成量 /生物被膜形成抑制能力”操作步骤的2~6，在新的96孔板中进行操作。 摸索实验例2 不同的培养基种类、细菌播种浓度、培养时间条件下，检测生物被膜的形成量。 (孔板设置例)
日程表
1)第1天：96-well Plate①的A行和B行的每个孔中播种180 μl用培养基A至D制备的浓度①和②的细菌溶液。C行~H行留空，盖上96-peg Lid，在适宜温度下培养24 h。 例: 细菌浓度①约107 CFU/ml，细菌浓度②约106 CFU/ml。 2) 第二天：取下96-peg Lid，96-well Plate①的A行和B行不更换培养基，C、D行的各孔中加入180 μl培养基A~D配制的细菌浓度①和②细菌悬液。E行~H行留空。 重新将96-peg Lid 盖在96-well Plate①上，在适宜温度下培养24 h。 3) 第三天：取下96-peg Lid，96-well Plate①的A~D行不更换培养基。E、F行的各孔中加入180 μl培养基A~D配制的细菌浓度①和②细菌悬液。G、H行留空。 重新将96-peg Lid 盖在96-well Plate①上，在适宜温度下培养24 h。 4) 第4天：取下96-peg Lid，96-well Plate①的A~F行不更换培养基。G、H行的各孔中加入180 μl培养基A~D配制的细菌浓度①和②细菌悬液。 重新将96-peg Lid 盖在96-well Plate①上，在适宜温度下培养24 h。 5）按照操作说明书的“生物被膜形成量 /生物被膜形成抑制能力”操作步骤的2~6，在新的96孔板中进行操作。 |
| Q：目前有过检测实例的菌种有哪些？ |
| A：目前Biofilm Formation Assay Kit(本产品)以及同系列产品Biofilm Viability Assay Kit (货号：B603)有过实际检测案例的菌种有：
・Staphylococcus aureus（金黄葡萄球菌） ・Pseudomonas aeruginosa（绿脓杆菌） ・Escherichia coli（大肠杆菌） ・Streptococcus mutans（虫牙的病原菌之一） ・Porphyromonas gingivalis（牙周病的发病原因之一）
以上菌种的详细培养条件等请参考产品说明书。 |
| Q：做细菌被膜抑制药物的药效评价时，生物被膜的形成量至少要达到什么程度？ |
| A：使用Biofilm Formation Assay Kit (本产品)时，操作步骤的最后一步，检测结晶紫(CV)溶液的吸光度时，
O.D.在0.5(590 nm)以上为宜。 |
Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06
特点：
● 高特异性脂滴定位
● 可流式定量检测
● 多种颜色可供选择
凑单关联产品TOP5
NO.1. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测
NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量
NO.3. Iron Assay Kit -Colorimetric- 组织总铁含量及二价铁含量检测
NO.4. Lipid Droplet Assay Kit-Blue 脂滴荧光检测（蓝色）
NO.5. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测
试剂盒内含
概述
同仁化学研究所研发的Lipid Droplet Assays Kit-Blue＆Deep Red试剂盒，与油红O和尼罗红不同，只需简单操作即可选择性的检测LDs。与尼罗红相比试剂盒中的染色剂，具有更好的选择性，从而将荧光背景降低到最小值。此外，试剂盒中的Loading Buffer可维持检测过程中细胞的状态完好。本试剂盒可使用流式细胞仪检测活细胞或固定细胞，也可用于荧光酶标仪进行高通量检测。
原理
脂滴(脂肪滴，Lipid droplets, LDs)由中性脂肪组成，主要包括甘油三酯和胆固醇酯，其外层被一层单层磷脂分子包裹。而且脂滴不仅在脂肪细胞中存在，在真核生物中也普遍存在。最新的研究表明，以前认为脂滴仅是一个简单的脂质储存器，但最近的研究表明其在调节脂质代谢1)，自噬2)和细胞衰老3)等方面都起着重要作用，因此需要进一步详细地研究脂滴形成·成长·融合·分解的机制。Lipi系列探针是高脂肪亲油性小分子探针，可在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。Lipi探针染色后，无须洗涤即可观察到脂滴。
1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.
2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.
3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.
特点
特点1：定量专用试剂盒
试剂盒包含所需的工作液和缓冲液、可以简便实现定量脂滴。
特点2：大幅度缩短操作，活细胞也可以使用
Lipid Droplet Assay Kit中使用的荧光染料可用于活细胞和固定细胞。因此，与使用比色法试剂相比可以大大缩短检测所需的时间。此外，由于染料不会沉积在孔板上，所以可以提高实验的重现性。
实验例
实验例1：孔板检测实验例
将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到A549细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。
<检测条件>
Blue：Ex: 376 – 386 nm、 Em: 435 – 455 nm
Deep Red ：Ex: 623 – 633 nm、 Em: 649 – 669 nm
实验例2：流式细胞术的实验例
将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到HeLa细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。
< 检测条件>
Blue：Ex: 405 nm、 Em: 425 – 475 nm
Deep Red ：Ex: 640 nm、 Em: 650 – 670 nm
脂肪滴产品选择指南
| 产品名称 | 规格 | 货号 | |||
| 成像(成像)
脂滴荧光探针 |
Lipi-Blue | 10 nmol | LD01 | ||
| Lipi-Green | 10 nmol | LD02 | |||
| Lipi-Red | 100 nmol | LD03 | |||
| Lipi-Deep Red | 10 nmol | LD04 | |||
| 定量（荧光酶标仪，FCM） 脂滴荧光检测试剂盒 |
Lipid Droplet Assay Kit – Blue | 1 set | LD05 | ||
| Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red | 1 set | LD06 | |||
Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291
特点：
● 适合组织检测
● 配有标准品，可定量二价、三价铁含量
● 吸光度法
凑单关联产品TOP5
NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.2. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.4. ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- ROS检测
NO.5. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽
试剂盒内含
产品概述
铁是生物体内最重要的金属元素之一，生物体内铁元素的含量虽少，但有着重要的生理作用。近年来，随着铁死亡概念的提出，细胞内铁离子的代谢过程的研究逐渐成为了研究热点。同仁化学研究所开发的 Iron Assay Kit-Colorimetric-试剂盒 是一套操作简便的比色法铁离子检测试剂盒。与其他市面上的检测试剂盒 相比 ，可以在更短的时间内进行快速检测。通过比较组织裂解液中的铁离子探针 3-(2-Pyridyl)-5,6-bis(5-sulfo-2-furyl)-1,2,4-triazine, disodium salt的 吸光度与还原成二价铁离子的三价铁标准品的吸光度，即可确定组织样品中的二价铁含量。同时，还可以通过试剂盒中的还原剂将样品中的三价铁还原成二价铁，以确定总铁含量，进而计算出样品中三价铁的含量。
原理
金属离子选择性
加标回收实验
实验例
组织样品中的Fe2+和 Fe3+的检测
1. 称量 100 mg肝脏组织 。
2. 加入 1 ml冷 PBS，移液器吹打 20次， Vortex振荡 10 s 14,000 RPM离心 4 min，去除上清 。
3. 将样品转移至研钵，加入液氮充分研磨成粉末后，加入 1.3 ml Assay Buffer，回收至微管中。
4. 将含有样品的微管置于超声波水浴中 5 min。（为防止样品温度上升，每 1 min间隔置于冰浴上 20 s）。
5. 16,000 g离心 10 min，除去不溶物。
6. 取 1300 μl上清液，每管分别加入 400 μl上清液，制成二价铁样品、总铁样品、样品空白。
7. Standard管 中加入 Reducer solution。 （参考图 2 H管 30 μl、 G~C管 20 μl、 B管 40 μl、 A管 20 μl）。
二价品样品管中加入 20 μl Assay Buffer。
总铁样品管中加入 20 μl Reducer solution。
样品空白管中加入 20 μl Assay Buffer。
将所有的 Standard管、样品管、样品空白管 37 培养 15 min。
8. 参考表 1和表 2，加入至 96孔板中 37 培养 60 min，检测 593 nm处的吸光度。
9. 将酶标仪数据拷贝至 “Iron Assay Kit – Excel表 ”，自动计算 出二价铁和三价铁浓度。
ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-试剂货号：R252
凑单关联产品TOP5
NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.2. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.3. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测
NO.4. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽
NO.5. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
试剂盒内含
产品概述
ROS Reactive Oxygen Species 主要是在线粒体中合成 ATP时所产生的高活性氧簇。ROS对细胞内的信号传导和吞噬作用等免疫机能起着重要的作用。另一方面， ROS对DNA和蛋白质的氧化作用也是各种疾病和细胞衰老的原因之一。
最近的研究发现，由二价铁所诱发的芬顿反应所引起的一种新的细胞死亡方式（铁死亡，Ferroptosis）的研究领域里 ROS也被广泛关注，检测 ROS的需求和意义也在不断升高 1)。目前在检测 ROS时，使用最多的试剂是DCFH-DA。但是 DCFH-DA往往有灵敏度低、样品荧光与背景的差别不明显等问题 。本试剂盒是一种高灵敏度的ROS检测试剂盒，而且配套使用本试剂盒内附带的 Buffer，可以在相对更低的细胞毒性下对 ROS进行高灵敏度检测。
荧光特性
技术信息
与市面现有试剂的比较
活性氧反应的选择性
高灵敏度DCFH-DA与常规DCFH-DA对活性氧（ROS）的反应性相同。
另外，由于具有与DCFH-DA相同的荧光特性（λex：505nm，λem：525nm），因此能够以相同的激发/荧光波长进行检测。
检测灵敏度的比较
用DCFH-DA和ROS检测试剂盒-高灵敏度DCFH-DA-分别对过氧化氢（1×10 4细胞/ ml）处理的HeLa细胞进行染色，并比较细胞内ROS的荧光结果。结果显示，在任何检测仪器中，同仁化学ROS检测试剂盒-高灵敏度DCFH-DA都以比DCFH-DA拥有更高的灵敏度。
（1）荧光显微镜检测
<检测条件>
Ex.488 nm / Em.500 -560 nm
细胞种类：HeLa细胞
（2）使用荧光酶标仪检测
<检测条件>
Ex.490-520 nm / Em.510-540 nm
细胞种类：HeLa细胞
（3）使用流式细胞仪检测
<检测条件>
FITC激发电压：215 V
细胞种类：HeLa细胞
实验例
一.Erastin处理的A549细胞的内在性ROS的检测
1. 向 ibidi 8-well plate中接种A549细胞 (1××104 cells/ml, DMEM, 10% fetal bovine serum, 1% penicillin-37°C 、 5% CO2培养箱内过夜培养 。
2. 去除培养基，加入用 DMEM培养基 稀释好的 50 μμmol/l的 Erastin溶液， 37°C 、 5% CO2培养箱过夜培养 。
3. 去除上清，HBSS清洗 2次 ，加入 Highly Sensitive DCFH-DA Dye working solution 37°C 、 5% CO2培养箱培养 30 min。
4. 去除Working solution HBSS清洗 2次 ，再次加入 HBSS，用荧光显微镜观察。
二.LPS处理的巨噬细胞内源性ROS的检测
用LPS（脂多糖）处理的RAW264.7细胞中细胞内ROS的变化的荧光成像结果显示，LPS处理可增加细胞内ROS。
<检测条件>
细胞内ROS（高灵敏度DCFH-DA染料）：Ex. 488 nm / Em.500 -560 nm
<实验操作>
1.在ibidi 8孔板中接种RAW264.7细胞（3×104细胞，DMEM，10％胎牛血清，1％青霉素-链霉素）
2.培养箱（37℃，5％）过夜培养
3.除去培养基，用HBSS洗涤细胞两次，然后添加用DMEM培养基稀释的500 ng / ml LPS
4.培养箱（37°C，5％CO2） 孵育20小时
5.除去上清液，用HBSS洗涤细胞两次，然后添加高灵敏度DCFH-DA染料工作液。
6.培养箱（37°C，5％CO2）培养30分钟
7.培养30分钟后除去工作溶，用HBSS洗涤细胞两次后再添加HBSS并用荧光显微镜观察。
三.柳氮磺吡啶(SSZ)引起的细胞内代谢变化
向A549细胞添加已知抑制胱氨酸/谷氨酸转运蛋白（xCT）的柳氮磺吡啶（SSZ）之后，确认了细胞内的ROS、ATP、α-谷氨酸（α-KG）、谷胱甘肽（GSH）的变化和谷氨酸释放量的变化。
结果显示，由于SSZ的添加，细胞内的ATP、谷胱甘肽（GSH）以及谷氨酸的释放量减少，细胞内的α-谷氨酸和ROS增加。
常见问题Q&A
| Q1:请告诉我一个试剂盒可以测多少个样品？ |
| A1:可以测量的样品数量请参考以下内容。 ・96-well plate：1块 ・ibidi8-well plate：6块 ・35mm dish：5块 ・6-well plate：5孔 |
| Q2:有没有可以用作阳性对照的实验例？ |
| A2：使用说明书上记载了经过过氧化氢处理的HeLa细胞的检测实验例。 |
| Q3:Highly Sensitive DCFH-DA working solution可以用Loading Buffer以外的溶液配置吗? |
| A3:为了减轻染色时对细胞的损伤，推荐使用附带的Loading Buffer配置，Hanks’HEPES和HBSS也可以进行制备。如果用培养基进行制备时请使用无血清培养基。 |
| Q4:染色后的清洗可以使用PBS代替HBSS吗？ |
| A4：为了减轻对细胞的损伤推荐HBSS。如果手头没有HBSS的话，建议用培养基清洗。 |
| Q5:用荧光显微镜检测时有什么注意事项吗？ |
| A5：染料与ROS反应并氧化后发出荧光。如果激发光持续照射，则染料会被氧化，背景会上升，因此，在获取荧光成像图像时，请先调整明场环境下的焦点和参数，然后再获取荧光图像。 |
ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号：R253
特点：
● 可长时间持续观测ROS水平
● 染色后可PFA固定和免疫共染色
● 可用于多种仪器的检测
规格性状
产品概述
ROS（Reactive Oxygen Species）主要是在线粒体中合成ATP时所产生的高活性氧簇。适量的ROS对细胞内的信号传导以及免疫机能都有促进作用，而过量的ROS对DNA和蛋白质所造成的氧化作用是导致多种疾病和细胞衰老的原因之一。
常见的细胞内ROS检测方法是利用DCFH-DA进入细胞内被ROS氧化后会发出荧光的特性进行检测。然而，DCFH-DA有灵敏度较低、染色后易从细胞内漏出、观察光所引起的自发荧光1)等问题。
ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-克服了上述问题， 是一种比DCFH-DA灵敏度更高、进入细胞后可以与蛋白质结合抑制向细胞外漏出的荧光探针。更重要的是，它可以抑制由观察光所引起的自发荧光，可以更准确的反映细胞内ROS水平。另外，使用试剂盒内附带的Buffer进行观察，可以在尽量不伤害细胞的状态下检测细胞内的ROS。
1) M. Afzal, et al., “Method to overcome photoreaction, a serious drawback to the use of dichlorofluorescin in evaluation of reactive oxygen species” BBRC, 2003, 304, 619–624.
常见问题
相同实验条件下，检测结果的重现性差、由观察光引起荧光探针自发荧光的假阳性等问题是ROS检测的常见问题。而本试剂盒可以有效地解决上述问题。
选择性对比
Photo-oxidation Resistant DCFH-DA对各种活性氧(ROS)的选择性与DCFH-DA的选择性基本相同。另外，由于荧光特性（λex：505 nm; λem：525 nm）也相同，可以使用DCFH-DA相同的检测波长或Filter。
性能比较表
抑制观察光造成的自发氧化
在未经任何刺激的正常HeLa细胞中，使用Photo-oxidation Resistant DCFH-DA染色细胞后，每5分钟观察一次细胞。结果显示，与一般的DCFH-DA相比，Photo-oxidation Resistant DCFH-DA可以改善观察光所引起的荧光探针的自氧化(假阳性)。
<实验条件>
细胞系：HeLa(未经任何刺激，正常状态)
荧光显微镜(BZ-X800, KEYENCE)
GFP Filter: Ex= 450 – 490 nm, Em = 500 – 550 nm
拍摄时间间隔: 5 min
拍摄曝光时间: 1.5 sec
染色后的细胞固定
一般的荧光探针在细胞固定后容易泄漏到细胞外造成荧光强度降低，而用本试剂盒染色HeLa细胞并加入过氧化氢后，用PFA进行细胞固定，然后通过荧光观察发现固定后的荧光强度几乎没有变化，而且染料基本都滞留在细胞内。
检测灵敏度的比较
利用LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型，比较Photo-oxidation Resistant DCFH-DA与一般的DCFH-DA检测ROS的区别。从实验结果可以看出，同仁化学研究所的探针的灵敏度更高。
① 荧光显微镜检测
<检测条件>
GFP Filter: Ex = 450 – 490 nm, Em = 500 – 550 nm)
② 荧光酶标仪检测
<检测条件>
Ex = 490 – 520 nm, Em = 510 – 540 nm
③ 流式细胞仪检测
<检测条件>
Ex = 488 nm, Em = 515 – 545 nm)
检测例
LPS诱导后，细胞内ROS水平的监测
用ROS Assay Kit –Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-染色RAW264.7细胞后，加入脂多糖(LPS)刺激细胞并开始实时监测细胞内的ROS水平。通过对检测结果的数值化分析可以看出，在LPS诱导10小时后，胞内的ROS水平明显开始升高。
<检测条件>
细胞内ROS Photo-oxidation Resistant DCFH-DA Dye）
GFP Filter (Ex = 450 – 490 nm, Em = 500 – 550 nm)
<实验步骤>
1. 将RAW264.7细胞(2×105 cells/ml, DMEM, 10% fetal bovine serum, 1% penicillin-streptomycin)接种于黑色96-well孔板中。
2. 37℃、5% CO2培养箱过夜培养。
3. 去除培养基，用HBSS清洗细胞2次，添加Photo-oxidation Resistant DCFH-DA Dye Working solution。
4. 37℃、5% CO2培养箱内培养30 min。
5. 去除培养基，用HBSS清洗细胞2次，添加Highly Sensitive DCFH-DA Dye Working solution。
6. 37℃、5% CO2培养箱内培养30 min。
7. 去除培养基，用HBSS清洗细胞2次。添加含有500 ng/ml LPS的DMEM培养基，用荧光显微镜观察。
8. 每隔1小时检测荧光强度并绘制荧光强度/时间的曲线图。
与线粒体标记物Tom 20的共染色
使用本试剂盒染色HeLa细胞后加入过氧化氢，与Tom 20抗体进行免疫共染色，实现了胞内ROS水平与线粒体的形态的同时观察。该实验证明了本试剂盒可以完美解决传统ROS荧光探针无法用于免疫荧光染色的问题。
<检测条件>
激光共聚焦显微镜
(蓝) DAPI: Ex = 405 nm, Em = 450-495 nm
(绿) Photo-oxidation Resistant DCFH-DA: Ex = 488 nm, Em = 500-550 nm
(紫) Alexa Fluor 647: Ex = 633 nm, Em = 640-700 nm
Scale bar：10 µｍ
FAQ
| Q：每个试剂盒可以检测多少个样品？ |
| A：可检测的样品数请参考下列信息：
・ 96-well plate：1块板 |
| Q：是否有可作为“阳性对照”的实验例？ |
| A：产品的使用说明书中的“实验例2”有过氧化氢刺激HeLa的检测实例。请参考说明书实验例2的步骤1-5。 |
| Q：是否可以使用Loading buffer以外的缓冲液来配制Working solution？ |
| A：为了减小观测时对细胞的损伤，建议尽量使用Loading buffer来配制。另外，也可以使用 Hanks’ HEPES或HBSS来配制。如果需要用培养基配制，请使用无血清培养基。 |
| Q：清洗细胞时，是否可以用PBS替代HBSS？ |
| A：为了减小对细胞的损伤，建议尽量使用HBSS。如果手头没有HBSS，建议用培养基清洗细胞。 |
| Q：在使用流式细胞仪检测时，建议在哪一步将贴壁细胞剥落？ |
| A：参照使用说明书，建议在步骤6(药物刺激后并用HBSS清洗细胞之后)，将细胞剥离(胰酶消化)。胰酶消化后重新加入培养基，离心后用HBSS清洗1次，再次离心去上清之后，用HBSS重悬细胞用于检测 |
特点：
● 可以检测细胞、组织等多种样品
● 准确性和灵敏度高
● 可以测定100%SOD抑制率
凑单关联产品TOP5
NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.2. ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- ROS检测
NO.3. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽
NO.4. Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric 细胞凋亡检测
NO.5. DMPO 超氧阴离子和羟自由基检测
产品概述
超氧化物歧化酶 (SOD) 是一种重要的抗氧化酶，它可以催化超氧阴离子 (O2–) 的歧化反应，生成过氧化氢和单质氧。目前有很多种直接或间接地测量SOD活性的方法，在这些方法中，使用硝基蓝四唑 (氮蓝四唑NitroblueTetrazolium ，简称NBT) 的一种间接测量方法因其便捷、简单的使用方法而被广泛应用。但是NBT法存在一些缺点，例如生成的甲臜 (Formazan dye) 的水溶性较低，会和黄嘌呤氧化酶的还原型发生反应等问题。SOD检测试剂盒-WST®提供了更为简便的检测SOD的方法，它是利用同仁学研究所研发的高度水溶性四唑盐WST®-1(2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺酸苯基)-2氢-四唑盐,二钠盐)，能与超氧阴离子(O2–) 反应生成一种水溶性的染料。WST®-1被超氧阴离子还原的比率与黄嘌呤氧化酶的活性线性相关，并且会被SOD所抑制 (见下图，即红色区域SOD反应优先发生，SOD反应完后蓝色区域WST®-1反应才能发生)。因此SOD或者SOD类似物的IC50(50%的抑制浓度)就能用比色法来测定。
特点
1)可以测定100%SOD抑制率。
2)不需要甲醛溶解操作，操作简单。
3)一次可以进行多样本的测定。
4)由于灵敏度高，可以提高样品的稀释倍率，所以可以抑制干扰物质带来的影响。
检测原理
所需设备和材料
2-20 µl和20-200 µl的可调式移液器、多通道移液器，酶标仪（450 nm）、96孔板、37℃培养箱
操作步骤
用96孔板，制作样品到检测可在1小时内完成
抑制曲线
Cu,Zn-SOD的抑制曲线
实验例
高知大学的岛村等人对石茶制作的每一步都测定了其SOD活性。据报道，在制造过程中和微生物相关的需氧发酵和厌氧发酵极大地增加了SOD样活性，并且在发酵过程中抗氧化能力随着茶提取物成分的变化而改变。
“ 石茶生产过程中儿茶素含量和超氧阴离子清除活性的变化”，日本食品科学技术学会学报，55（12），640
L： 新鲜树叶
SL： 蒸煮的树叶
PFL：预发酵（有氧条件下发酵几天）树叶
FL： 发酵（在厌氧条件下发酵数天）树叶
DL： 晒干（数天）树叶
食品抗氧化能力的检测
我们知道，许多由呼吸和各种外在因素产生的活性氧，会降低机体功能，促进各种疾病的发病和老化。
有越来越多对这此类现象的防御机制(抗氧化能力)的文章出现，关于利用食品所具有的抗氧化能力维持健康、预防疾病的研究也备受关注。
常见问题Q&A
| Q1：“1 Unit”的定义是什么？ |
| A1：1 Unit是指样品中的还原性染料（如细胞色素C，WST-1，NBT或XTT）与超氧阴离子之间的比色反应，50%被抑制时的点。例如如果不含任何SOD的样品溶液的O.D.值为1.0的话，那么另一个O.D.值为0.5的样品则被定义为具有1个单位的酶活性。可以使用这个单位来确定样品中的
SOD活性。使用不同染料或方法检测SOD活性，它们之间不具有可比性。 |
| Q2：我能使用SOD标准品来确定样品溶液的SOD活性吗？ |
| A2：可以。制备标准曲线，确定样品溶液的SOD活性。SOD Bovine Erythrocytes
（CAS# 9054-89-1，EC 1.15.1.1）能够从Sigma（Catalog# S2525）购得。 |
| Q3：是否可以用动力学法来测定SOD活性？ |
| A3：可以。因为在20分钟内的生色比率是保持一致的，可以测量直线上升阶段5分钟内的斜率来测定SOD活性。 |
| Q4：如果样品自身带有较深的颜色，这样的样品可以使用吗？ |
| A4：可以。稀释样品可以减小干扰，将样品孔的O.D.值减去Blank 2的O.D.值就可以扣除本底的颜色。但是如果样品溶液的SOD活性过低是不能检测出的。 |
| Q5：如何能够制备更多的Dilution Buffer？ |
| A5：Dilution Buffer为PBS。请按以下浓度配制：137 mM NaCl，2.7 mM KCl，
1.47 mM KH2PO4， 8.1 mM Na2HPO4，pH 7.4。 |
| Q6：使用该试剂盒能否分别检测Mn-SOD和Cu/Zn-SOD？ |
| A6：可以。要单独检测Mn-SOD活性，可以添加KCN阻断Cu/Zn-SOD活性。向样品中加入
1 mM的KCN可以完全阻断Cu/Zn-SOD活性。要测定Cu/Zn-SOD的活，可以用总的SOD活性减去Mn-SOD活性，就可以得到。 |
| Q7：怎样保存样品？ |
| A7：在-80℃可以保存1年。 |
| Q8：能否使用该试剂盒检测超氧化物阴离子的水平？ |
| A8：不必用这个试剂盒，可以使用WST-1来检测超氧化物。但是必须有一个检测样品溶液中超氧化物量的标准。因为超氧化物不稳定，而且会和其它物质反应，要确定系统中生成的超氧化物的总量是比较困难的。试剂盒中的黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系可以被用作检测每个样品中超氧化物相对生成量的标准。 |
NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509
特点：
● 数据可靠，不会与NADP及NADPH反应
● 同一样品可以用Lactate Assay Kit-WST（货号：L256）测定上清液中乳酸含量
● 只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管
● 享有显色底物WST专利
凑单关联产品TOP5
NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.2. Glucose Assay Kit-WST 葡萄糖检测
NO.3. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.4. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测
NO.5. Lipi-Green 脂滴检测（绿色)
试剂盒内含
概述
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)是参与糖酵解、电子转移系统和TCA循环等细胞主要代谢途径氧化还原反应的重要辅助因子。NAD以氧化型NAD+和还原型NADH的形式存在于细胞中。维持适当的NAD+和NADH水平对细胞功能至关重要。此外最近的研究表明NAD+水平的下降与衰老相关，NAD+的量被认为是衰老相关研究的一个标志。
NAD/NADH检测试剂盒可以定量细胞中NAD+/NADH、NADH和NAD+的量，并测量它们的比值。细胞内NADH水平可以通过试剂盒内含的Extraction Buffer裂解细胞并在加热后选择性地定量检测。而细胞内的NAD+水平则可以通过总的NAD+/NADH总量减去NADH量计算得到。
原理
技术情报
NAD+和NADH的分别检测
分别测定NAD+和NADH的操作步骤
*只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管
用试剂盒内的提取缓冲液及去除蛋白质用的微量管，能简便地制备细胞裂解液。通过加热细胞裂解液能单独检测细胞内的NADH量。而细胞内的NAD+量则可以通过总NAD+/NADH量减去NADH量的计算得到。
在本试剂盒中，当n=3时，可以测量12个样品和8个标准品。当使用超过12个样品时，您需要准备单独的微量管。
使用NAD+/NADH作为指标的研究
细胞中NAD+和NADH的量被评估为重要的代谢指标，用于了解受药物管理和基因重组影响的癌细胞和线粒体功能。最近已经明确了长寿相关的受体与NAD+的含量密切相关。越来越多的人将其评估为肥胖，糖尿病和细胞分化等生物学状况的标志物。
检索来源：Google Scholar
检索关键词：
NAD/NADH : “NAD/NADH”
线粒体 ：“NAD/NADH”Mitochondria
癌 ：“NAD/NADH”Cancer
肥胖 ：“NAD/NADH”Obesity
孔板检测中数据的可靠性
可以通过同时测量该试剂盒中包含的标准溶液来进行定量分析。如果样品中NAD+/NADH的总含量高于2 μmol/l，则可以通过稀释样品进行评估。在下面的实验中，使用细胞数相差2倍的HeLa细胞，来确定NAD+和NADH的数量和比率。
使用增殖培养的HeLa细胞（2.5×105，5.0×105个细胞），从标准曲线中得到细胞内NAD+和NADH的量。最终NAD+的量和NADH的量会随着细胞数而改变，但是即使细胞数改变，NAD+和NADH量的比率也不变。
经确认，将2-Deoxy-D-glucose加入到HeLa 细胞后，代谢活性发生了变化。
用乳酸检测试剂盒检测的实验例
向HeLa细胞（1×106细胞）中加入2-Deoxy-D-glucose，终浓度为6 mmol/l，培养24小时后测定乳酸量和NAD+/NADH比。用Lactate Assay Kit-WST（货号：L256）测定上清液中乳酸含量，去除上清后用本试剂盒检测细胞中的NAD+/NADH比。
最终加入2-Deoxy-D-glucose抑制了细胞内糖酵解系统，并导致乳酸量的减少和NAD+/NADH比率的增加。
操作步骤
(1) 按照上图，在每孔中分别加入50 μl的标准液和样品溶液。
※为了获得准确的数据，建议每个样品做3个复孔。
(2) 在每孔中加入50 μl Working Solution。
※由于在加入Working Solution后酶会立刻反应，请用多通道移液器以减少由于加液时间延迟而导致的实验误差。
(3) 在37℃培养60 min。
※培养时请密封培养板，以防止液体蒸发。
(4) 用酶标仪在450 nm处检测吸光度。
(5) 用标准曲线测定样品中总NAD+/NADH和NADH的量。
※如果原样品在检测前已稀释，可用稀释倍率乘以检测的数值。
※NAD+的量可用总NAD+/NADH的量-NADH的量计算得到
NAD+= 总NAD+/NADH-NADH
标准曲线
常见问题Q&A
| Q1：试剂盒可以测量多少个样本？ |
| A1：
*所有样品均测定3次（n=3） 上表中显示了当标准样品从2 μmol/l连续稀释，作出一条共计8个点（n=3）的标准曲线时可以检测的样品数量。如果分为2次检测，由于需要重复做一条标准曲线，因此样品检测的数量会更少。 |
| Q2：是否可以使用450 nm以外的滤光片进行测量？ |
| A2：也可以使用490 nm的滤光片，但是吸光度会低于在450 nm处的吸光度。当用不同滤光片检测时，校准曲线如下：
|
| Q3：可以单独购买过滤管吗？ |
| A3：不可以，我们不单独出售过滤管。如果需要其他耗材，可以使用市场上售卖的过滤管。 |
| Q4：工作液稳定吗？ |
| A4：工作液无法长期保存。请在使用前配制工作液，由于工作液对光敏感请注意避光。该工作液在室温下可避光保存4小时。 |
| Q5：样品颜色没有变化，是什么原因？ |
| A5：样品中的NAD含量可能低于使用此试剂盒可测定的检测限度，在这种情况下，请增加细胞数，或者如果检测样品被稀释，则在检测前降低稀释比例。 |
Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06
特点：
● 高特异性脂滴定位
● 可流式定量检测
● 多种颜色可供选择
凑单关联产品TOP5
NO.1. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测
NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量
NO.3. Iron Assay Kit -Colorimetric- 组织总铁含量及二价铁含量检测
NO.4. Lipid Droplet Assay Kit-Blue 脂滴荧光检测（蓝色）
NO.5. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测
试剂盒内含
概述
同仁化学研究所研发的Lipid Droplet Assays Kit-Blue＆Deep Red试剂盒，与油红O和尼罗红不同，只需简单操作即可选择性的检测LDs。与尼罗红相比试剂盒中的染色剂，具有更好的选择性，从而将荧光背景降低到最小值。此外，试剂盒中的Loading Buffer可维持检测过程中细胞的状态完好。本试剂盒可使用流式细胞仪检测活细胞或固定细胞，也可用于荧光酶标仪进行高通量检测。
原理
脂滴(脂肪滴，Lipid droplets, LDs)由中性脂肪组成，主要包括甘油三酯和胆固醇酯，其外层被一层单层磷脂分子包裹。而且脂滴不仅在脂肪细胞中存在，在真核生物中也普遍存在。最新的研究表明，以前认为脂滴仅是一个简单的脂质储存器，但最近的研究表明其在调节脂质代谢1)，自噬2)和细胞衰老3)等方面都起着重要作用，因此需要进一步详细地研究脂滴形成·成长·融合·分解的机制。Lipi系列探针是高脂肪亲油性小分子探针，可在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。Lipi探针染色后，无须洗涤即可观察到脂滴。
1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.
2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.
3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.
特点
特点1：定量专用试剂盒
试剂盒包含所需的工作液和缓冲液、可以简便实现定量脂滴。
特点2：大幅度缩短操作，活细胞也可以使用
Lipid Droplet Assay Kit中使用的荧光染料可用于活细胞和固定细胞。因此，与使用比色法试剂相比可以大大缩短检测所需的时间。此外，由于染料不会沉积在孔板上，所以可以提高实验的重现性。
实验例
实验例1：孔板检测实验例
将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到A549细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。
<检测条件>
Blue：Ex: 376 – 386 nm、 Em: 435 – 455 nm
Deep Red ：Ex: 623 – 633 nm、 Em: 649 – 669 nm
实验例2：流式细胞术的实验例
将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到HeLa细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。
< 检测条件>
Blue：Ex: 405 nm、 Em: 425 – 475 nm
Deep Red ：Ex: 640 nm、 Em: 650 – 670 nm
脂肪滴产品选择指南
| 产品名称 | 规格 | 货号 | |||
| 成像(成像)
脂滴荧光探针 |
Lipi-Blue | 10 nmol | LD01 | ||
| Lipi-Green | 10 nmol | LD02 | |||
| Lipi-Red | 100 nmol | LD03 | |||
| Lipi-Deep Red | 10 nmol | LD04 | |||
| 定量（荧光酶标仪，FCM） 脂滴荧光检测试剂盒 |
Lipid Droplet Assay Kit – Blue | 1 set | LD05 | ||
| Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red | 1 set | LD06 | |||
Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05
特点：
● 高特异性脂滴定位
● 可流式定量检测
● 多种颜色可供选择
凑单关联产品TOP5
NO.1. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测
NO.2. Lipid Droplet Assay Kit-Blue 脂滴荧光检测（蓝色）
NO.3. Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red 脂滴荧光检测（深红色）
NO.4. Glucose 葡萄糖摄取检测
NO.5. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测
试剂盒内含
概述
同仁化学研究所研发的Lipid Droplet Assays Kit-Blue＆Deep Red试剂盒，与油红O和尼罗红不同，只需简单操作即可选择性的检测LDs。与尼罗红相比试剂盒中的染色剂，具有更好的选择性，从而将荧光背景降低到最小值。此外，试剂盒中的Loading Buffer可维持检测过程中细胞的状态完好。本试剂盒可使用流式细胞仪检测活细胞或固定细胞，也可用于荧光酶标仪进行高通量检测。
原理
脂滴(脂肪滴，Lipid droplets, LDs)由中性脂肪组成，主要包括甘油三酯和胆固醇酯，其外层被一层单层磷脂分子包裹。而且脂滴不仅在脂肪细胞中存在，在真核生物中也普遍存在。最新的研究表明，以前认为脂滴仅是一个简单的脂质储存器，但最近的研究表明其在调节脂质代谢1)，自噬2)和细胞衰老3)等方面都起着重要作用，因此需要进一步详细地研究脂滴形成·成长·融合·分解的机制。Lipi系列探针是高脂肪亲油性小分子探针，可在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。Lipi探针染色后，无须洗涤即可观察到脂滴。
1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.
2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.
3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.
特点
特点1：定量专用试剂盒
试剂盒包含所需的工作液和缓冲液、可以简便实现定量脂滴。
特点2：大幅度缩短操作，活细胞也可以使用
Lipid Droplet Assay Kit中使用的荧光染料可用于活细胞和固定细胞。因此，与使用比色法试剂相比可以大大缩短检测所需的时间。此外，由于染料不会沉积在孔板上，所以可以提高实验的重现性。
实验例
实验例1：孔板检测实验例
将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到A549细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。
<检测条件>
Blue：Ex: 376 – 386 nm、 Em: 435 – 455 nm
Deep Red ：Ex: 623 – 633 nm、 Em: 649 – 669 nm
实验例2：流式细胞术的实验例
将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到HeLa细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。
< 检测条件>
Blue：Ex: 405 nm、 Em: 425 – 475 nm
Deep Red ：Ex: 640 nm、 Em: 650 – 670 nm
脂肪滴产品选择指南
| 产品名称 | 规格 | 货号 | |||
| 成像(成像)
脂滴荧光探针 |
Lipi-Blue | 10 nmol | LD01 | ||
| Lipi-Green | 10 nmol | LD02 | |||
| Lipi-Red | 100 nmol | LD03 | |||
| Lipi-Deep Red | 10 nmol | LD04 | |||
| 定量（荧光酶标仪，FCM） 脂滴荧光检测试剂盒 |
Lipid Droplet Assay Kit – Blue | 1 set | LD05 | ||
| Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red | 1 set | LD06 | |||
α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261
特点：
● 检测结果的重现性好
● 可作为线粒体活性的指标
● 多角度了解细胞代谢变化
规格性状
| 100 tests | ・Fluorescent Dye ・α-KG Standard ・Enzyme Mix ・Coenzyme ・Assay Buffer ・lysis Solution ・Control Buffer ・ALT Solution ・Reaction Buffer |
×1 300 μl×1 ×1 ×1 6.5 ml×1 2 ml×1 25 ml×1 35 μl×1 5 ml×1 |
产品概述
α-酮戊二酸(α-KG)是TCA循环中重要的中间体。它被作为进入TCA循环的葡萄糖代谢物增加的指标以及谷氨酰胺代谢(Glutaminolysis,一种谷氨酰胺底物与α-KG反应的通路)增加的指标。α-KG在神经递质谷氨酸和γ-氨基丁酸（GABA）的产生中起着重要作用，不仅如此它还担负着一定的清除细胞内的活性氧的功能，是非常重要的细胞代谢指标之一。
检测原理
α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric可以定量检测α-酮戊二酸(α-KG)。通过检测反应生成的试卤灵(Resorufin)的荧光(Ex：530 – 560 nm、Em：580 – 600 nm)对细胞内的α-KG进行定量。另外，本试剂盒还可以通过使用96孔板进行多样品检测。
检测操作
整个操作过程，从细胞的前处理到荧光酶标仪检测，只需要按照操作说明书的步骤添加试剂即可检测细胞内α-酮戊二酸(α-KG)的浓度。而且，本试剂盒专门针对同类型检测方法中普遍存在的结果重现性差的问题进行了优化，即使是第一次做α-KG检测实验的科研人员也可以放心使用。
► 结果重现性高的两个秘诀
1) 样品的前处理
同类型的检测试剂盒在样品前处理时需要微量的pH调节、过滤膜过滤等操作，这是导致结果重现性差的原因之一。而同仁化学研究所的α-KG检测试剂盒，只需要按照说明书添加试剂，可以大幅减少前处理过程中产生的操作误差。
2) α-Ketoglutarate的检测
其他检测试剂盒使用与上图相同的原理，但是由于①和②的两步反应同时在96孔板里进行，这是造成误差的另一个重要原因。而同仁化学研究所的试剂盒将这两步反应分开进行，进一步降低了误差。
标准曲线的作成例
本试剂盒附带α-KG的标准品，可以通过制作标准曲线来定量的检测样品中的α-KG浓度。如果样品中的α-KG浓度高于20 μmol/l，请预先稀释样品再检测。
实验例
Doxorubicin(DOX)刺激引起的细胞内代谢变化
阿霉素(Doxorubicin, DOX)可以作用于 细胞周期的G2/M期，停止细胞的增殖并且细胞衰老，利用DOX作用于A549细胞，会导致胞内α-KG浓度增加。另外通过SG 03 Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal检测细胞衰老、C548 Cell Cycle Assay Solution Deep Red / C549 Cell Cycle Assay Solution Blue检测细胞周期、MT09 JC-1 MitoMP Detection Kit检测线粒体膜电位的结果如下：
Sulfasalazine(SSZ)引起的细胞内代谢变化
Sulfasalazine(SSZ)可以抑制细胞的胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)。用SSZ刺激A549细胞后，细胞内的α-KG、ATP、GSH、细胞放出的谷氨酸等变化用下列方法进行了检测。结果发现，SSZ刺激后细胞内的ATP、谷胱甘肽(GSH)、谷氨酸的放出量均减少，而细胞内的α-KG和ROS水平增加。
<使用产品>
・细胞内ATP：CK18 Cell Counting Kit-Luminescence
・细胞内GSH：G263 GSSG/GSH Quantification Kit II
・细胞内ROS：R252 ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-
・胞外谷氨酸：G269 Glutamate Assay Kit-WST
<实验条件>
细胞：A549细胞(1 x 106 cells) 暴露时间： 48 h
NASH诱导小鼠的肝脏组织的代谢变化
NASH(非酒精性脂肪肝)的病变组织中有ATP、α-KG、NAD的量减少的特点。使用4周龄的高脂肪食物投喂(引发NASH)的1型糖尿病模型小鼠(STAM模型)的肝脏组织，检测其中的ATP、α-KG、NAD水平的变化。结果显示，NASH诱导后10周龄的小鼠组中ATP、α-KG、NAD的浓度降低。
※详细的实验步骤请参考FAQ“是否有检测组织的实验例
<使用产品>
・组织内ATP：CK18 Cell Counting Kit-Luminescence
・组织内NAD：N509 NAD/NADH Assay Kit-WST
常见问题Q&A
| Q1：每个试剂盒可以检测所少个样品？ |
| A1：如果标准曲线和样品都采用3个复孔来计算，可以检测12个样品。具体的96孔板的样品孔排列实例请见说明书。 |
| Q2：是否可以用黑色孔板以外的孔板（透明板或白色板）？ |
| A2：用透明板或白色板无法准确的绘制标准曲线，请使用黑色96孔板进行实验 |
| Q3：检测时样品没有显色，可能的原因有哪些？ |
| A3：本试剂盒对α-KG的检测范围是0.2 μmol/l以上，样品中的α-KG浓度如果低于0.2 μmol/l无法检测出来。可以尝试降低样品前处理时的稀释倍率。 |
| Q：配置好的Working Solution能否保存？ |
| A：配置好的Working solution无法保存，请现配现用。另外，Working solution遇光不稳定，配制好后请用铝箔纸包裹避光。※避光、室温的条件下可保存2小时左右。 |
| Q：检测样品是否可以保存？ |
| A：操作说明书上的“—定量细胞内α-KG的样品制备—”的步骤5中得到的前处理样品在-20℃可以保存10天。冷冻保存后的样品会发生沉淀，请离心后取上清作为检测样品。※加入20 μl Lysis solution, 吹打混匀后8,000xg离心10 min，取上清。 |
| Q：是否有组织样品的检测实例？ |
| A：有小鼠肝脏组织的检测实例。 |
具体的实验步骤如下：
碱性提取法提取的肝脏样品中的代谢指标检测
1.取大约100 mg小鼠肝脏组织样品加至500μl预冷的0.5 mol/ KOH水溶液中。
※必须使用经过灌流操作完全脱血的组织样品，否则残留的血液会影响检测结果。
2.用Dounce型组织研磨器研磨肝脏组织。
3.将研磨后的样品回收至微管中，用500μl预冷的0.5 mol/ KOH水溶液清洗研磨器，并将清洗后的液体也
一起转移到回收样品的微管中(共约1 ml)。
4.向回收样品的微管中加入1 ml预冷的超纯水，充分混合后在冰浴上静置5 min(共约2 ml)。
※由于溶液的粘性较高，有时会出现离心后难以分离的情况。此时，用25 g左右的细针头注射器不断
吸取/推出(大约20-30次)，直到可以顺畅的吹打溶液为止。
5.离心机12,000xg，4 ℃离心5 min。
α-KG检测用样品的制备
6.取900μl上一步操作(步骤5)得到的溶液，加入200μl 1mol/l KH2PO4水溶液进行中和，混匀后在冰浴上
静置5 min。
7.离心机12,000xg，4 ℃离心5 min，取1 ml上清液至新的微管中作为检测样品。
<检测时的注意事项>
※组织提取的样品无法保存，请在当天内完成检测。
※枪头中残留的样品溶液时造成误差的原因之一，吸取样品溶液时尽量缓慢，减少枪头中残留的样品溶液。
※在稀释标准品和样品的时候，使用0.5 mol/l KOH水溶液和1mol/l KH2PO4水溶液按照9:5比率混合的溶液。
<检测实例>
诱导非酒精性脂肪肝的小鼠肝脏组中α-KG量的变化
Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256
特点：
● 细胞上清液和细胞样品均适用
● 操作简便
● 灵敏度高最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸
● 试剂稳定性高
● 享有显色底物WST专利
凑单关联产品TOP5
NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.2. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.3. Glucose Assay Kit-WST 葡萄糖检测
NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.5. MitoPeDPP 线粒体内脂质过氧化物检测
试剂盒内含
概述
乳酸是细胞的一种主要代谢途径-糖酵解的代谢产物，也是肌肉疲劳和高乳酸血症的重要生物标志物。它还可以作为监测细胞内代谢途径变化的标志物。此外最近的代谢研究表明，乳酸是组织和癌细胞的三羧酸循环中碳的主要来源。
Lactate Assay Kit-WST®可用于定量检测糖酵解代谢产生的乳酸，并优化了定量过程。本试剂盒通过测定WST®的显色反应来定量细胞上清液中的乳酸含量，可用96孔板检测，灵敏度高，最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸。
WST®：WST是日本同仁化学研究所的注册商标
原理
本试剂盒通过测定WST的显色反应来定量细胞上清或细胞内的乳酸含量。
另外，试剂盒中含有乳酸标准液，可以通过制备标准曲线来定量样品中的乳酸浓度。
特点
特点1：操作简单，只需要加入试剂
只需在加入细胞裂解液的细胞上清液中加入试剂，培养即可。
特点2：试剂稳定性高
乳酸标准曲线
可以从使用试剂盒中的乳酸标准液制作出乳酸标准曲线，然后通过标准曲线求出样品中的乳酸浓度。
当乳酸浓度在1 mmol/l以上时，可以通过稀释样品进行检测。
实验例
2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用
1、在96孔板中接种1×104个/孔的HeLa细胞(MEM培养基中含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素)，在37℃，5% CO2培养箱中过夜培养。
2、去除上清液后，在培养基中加入100 µl配制好的系列浓度的2-脱氧-D-葡萄糖溶液。
3、在37℃，5% CO2培养箱中过夜培养。
4、培养后，吸取20 µl细胞上清液至1.5 ml微量管中，并用超纯水稀释8倍制备样品溶液，然后按照说明书的图3在每孔中加入20 µl样品溶液。
5、按照“配制乳酸标准液”的方法配制乳酸标准液。
6、在96孔板中按照说明书的图3在每孔中加入20 µl各种浓度的乳酸标准液。
7、在每孔中加入80 µl工作液。
8、在37℃培养箱中培养30 min。
9、用酶标仪测定450 nm的吸光度，并用标准曲线计算样品的乳酸浓度。
2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用，随着2-脱氧-D-葡萄糖 (一种糖酵解抑制剂)浓度的增加，乳酸浓度逐渐减少
葡萄糖和乳酸的测定例
用葡萄糖测定试剂盒（货号：G264）和乳酸测定试剂盒检测（货号：L256）:检测将葡萄糖转运蛋白抑制剂Phloretin添加到Jurkat细胞时的代谢活性变化。
■实验条件
细胞：Jurkat细胞（5×105细胞）
药物：Phloretin（终浓度：100 µmol/l）
培养时间：过夜培养
■结果
Phloretin的添加抑制了葡萄糖的摄取，减少了葡萄糖的消耗，增加了培养基中葡萄糖的量，并减少了乳酸的量。
常见问题Q&A
| Q：使用含有血清的培养基，可以测定培养上清液中的乳酸吗？ |
| A：使用含有血清的培养基，可以测定培养上清液中的乳酸。 但是在含有血清的情况下，由于背景上升，需要测定培养基OD值并将其作为背景对照减去。 【参考数据】 含和不含10％FBS的吸光度比较
<结果> |
| Q：如何检测细胞内乳酸含量？ |
| （1）用微量管收集1×105的细胞*1。
（2）以300×g离心2 min后去除上清液。 （3）加入300 μl的PBS，用移液器吹打使其重悬，再以300×g离心2 min后去除上清液。 （5）以8000×g离心5 min，收集上清液。 *1、样品为HeLa细胞时，为了检测出0.02 mmol/l以上的乳酸含量，需要1×105的细胞甚至更多。 *3、内源性乳酸脱氢酶（LDH）会导致背景增高，因此通过脱蛋白处理去除内源性乳酸脱氢酶 （LDH）。 |
| Q：配制后的Working Solution稳定性如何，可以保存多久？ |
| A：Working Solution需要现配现用。 光会影响Working Solution的稳定性，所以配制后请用铝箔纸包裹。 配制后的Working Solution在室温避光条件下可以保存4 h。 （Working Solution遇到光，溶液的颜色会由红色变为橙色，背景会升高。） |
| Q：为什么我的样品孔没有显色？ |
| A：样品中的乳酸浓度可能低于检测限（0.02 mmol/l）。 乳酸浓度低于0.02 mmol/l的样品无法用该试剂盒检测，因此请考虑其他方法，如LC-MS。 如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的乳酸浓度可能低于0.02 mmol/l。 请降低稀释比例，从而将检测样品的乳酸浓度调整到最低检测限以上。 |
| Q：是否可以检测含有还原性物质的样品？ |
| A：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量乳酸浓度。 实验中如遇到以上情况，可以设定药物对照（不含细胞含药物的培养基+试剂）， 并将标准品孔和样品孔的吸光度分别减去药物对照的吸光度。 |
| Q：该试剂盒可以定量D-Lactate吗？ |
| A：该试剂盒是用于L-Lactate的定量，不能定量D-Lactate。 |
| Q：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？ |
| A：也可以使用490 nm的滤光片， 但是吸光度会低于在450 nm处的吸光度。 |
| Q：一个试剂盒可以检测样品的数量。 |
| A：制备标准曲线和样品（n=3）时，可以检测的样品数量如下所示。
标准曲线：8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)
96孔板排列示意图（n=3） |
NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510
特点：
● 数据可靠，不会与NAD+及NADH反应
● 只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管
● 享有显色底物WST专利
凑单关联产品TOP5
NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.2. Glucose Assay Kit-WST 葡萄糖检测
NO.3. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.4. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测
NO.5. Lipi-Green 脂滴检测（绿色）
试剂盒内含
概述
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP) 是磷酸戊糖途径（一种细胞代谢途径）反应中一种重要的辅因子。NADP以氧化态NADP+和还原态NADPH的形式存在于细胞中。NADPH不光对脂肪酸、胆固醇而且对还原型谷胱甘肽的生成至关重要。另外最近的研究表明，NADP+/NADPH通过限制碳水化合物的摄入来延长寿命与NADP+/NADPH有很大关联。
NADP/NADPH Assay Kit-WST能定量检测细胞中总NADP+/NADPH、NADPH和NADP+的量，并计算它们的比值。细胞内NADPH水平可以用试剂盒内的Extraction Buffer裂解细胞后加热进行定量检测。而细胞内的NADP+水平则可以通过总NADP+/NADPH减去NADPH的量计算得到。
原理
技术资料
分别检测NADP+和NADPH
分别测定NADP+和NADPH的操作步骤
*只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管
用试剂盒内的提取缓冲液及去除蛋白质用的微量管，能简便地制备细胞裂解液。 通过加热细胞裂解液能单独检测细胞内NADPH量，而细胞内的NADP+量则可以通过总NADP+/NADPH量减去NADPH量的计算得到。
在本试剂盒中，当n=3时，可以测量12个样品和8个标准样品。使用超过12个样品时，您需要准备单独的超滤管。
使用NADP+/NADPH作为标记的研究
检索来源：Google Scholar
检索关键词：
NADP/NADPH：“NADP/NADPH”
线粒体：”NADP/NADPH”Mitochondria
癌：”NADP/NADPH”Cancer
氧化应激：”NADP/NADPH”Oxidative Stress
孔板检测中数据的可靠性
通过同时检测试剂盒内的标准溶液，可以对浓度在0.01-1 μmol/l的总NADP+/NADPH和NADPH进行定量。如果样品中的总NADP+/NADPH的浓度>1 μmol/l，可以通过稀释样品来调节。实验证实本试剂盒(NADP/NADPH Assay Kit-WST)不会与NAD+及NADH反应。
操作步骤
（1）按下图，在每孔中分别加入50 μl的标准液和样品溶液。
※为了获得准确的数据，建议每个样品做3个复孔。
（2）在每孔中加入50 μl Working Solution。
※由于在加入Working Solution后酶会立刻反应，请用多通道移液器以减少由于加液时间延迟而导致的实验误差。
（3）在37°C培养60 min。
※培养时请密封培养板，以防止液体蒸发。
（4）用酶标仪在450 nm处检测吸光度。
（5）用标准曲线测定样品中总NADP+/NADPH和NADPH的量。
※如果原样品在检测前已稀释，可用稀释倍率乘以检测的数值。
※NADP+的量可用下列计算公式计算：总NADP+/NADPH-NADPH的量计算得到。
NADP+=总NADP+/NADPH-NADPH
实验例
细胞样品检测实验例 (加入抗癌药物Doxorubicin)
向Jucket细胞中 (3×106 cells)加入终浓度为500 nmol/l的Doxorubicin (Dox)，在培养24 h后检测NADP+/NADPH 比值和还原型/氧化型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)。用本试剂盒检测PBS清洗后的细胞的NADP+/NADPH比值，用 GSSG/GSH Quantification Kit II (货号：G263) 检测谷胱甘肽的比值。
在细胞内加入DOX后，产生的ROS(H2O2) 破坏了DNA、DNA修复酶 (PARP*) 被激活， 并且NADP+被其消耗。为了补充不足的NADP+，NADPH氧化酶被激活，结果在数据中则会表现为NADP+的增加。与此同时还原型谷胱甘肽 (GSH) 会被产生的ROS所消耗，因此GSH/GSSG的比值会下降。
常见问题Q&A
| Q1：该试剂盒可以检测多少个样本？ |
| A1：
*所有样品均测定3次（n=3） 上表中显示了当标准样品从2 μmol/l连续稀释，作出一条共计8个点（n=3）的标准曲线时可以检测的样品数量。如果分为2次检测，由于需要重复做一条标准曲线，因此样品检测的数量会更少。 |
| Q2：可以单独购买过滤管吗？ |
| A2：不可以，我们不单独出售过滤管。如果需要其他耗材，可以使用市场上售卖的过滤管。 |
| Q3：工作液稳定吗？ |
| A3：工作液无法长期保存。请在使用前配制工作液，由于工作液对光敏感请注意避光。该工作液在室温下可避光保存4小时。 |
| Q4：样品颜色没有变化，是什么原因？ |
| A4：样品中的NAD含量可能低于使用此试剂盒可测定的检测限度，在这种情况下，请增加细胞数，或者如果检测样品被稀释，则在检测前降低稀释比例。 |
