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金畔生物试剂,Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

染色特异性强
PE染料为红色荧光，可与绿色荧光实现共染

图1. Annexin V-PE/7-AAD染色检测凋亡效果图

图 A. 未经喜树碱诱导的Jurkat 细胞，用Annexin V-PE 和7-AAD双染后流式二维图（左）与直方图（右）；

图 B. 用终浓度为4 μM 的喜树碱诱导Jurkat 细胞凋亡4 h，用Annexin V-PE 和7-AAD双染后流式二维图（左）以及直方图（右）。

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

图2. Annexin V-PE/7-AAD染色检测不同程度凋亡

用喜树碱（Camptothecin，CPT）诱导Jurkat细胞（人T淋巴瘤细胞）凋亡，诱导浓度分别为0、4、8、12、16μM，分别诱导4小时后，参照产品说明书实验方案进行染色，用流式细胞仪检测结果如图2。

(A)0μM. (B)4μM.(C)8μM.(D)12μM.(E)16μM.(F)竞争封闭实验，采用16μM CPT诱导Jurkat细胞4小时后，参照说明书收集并洗涤细胞，于染色前加入无染料标记的Annexin V蛋白孵育10分钟，再进行Annexin V-PE/7-AAD染色。无染料标记的Annexin V结合了细胞上的PS，再进行染色时，Annexin V-PE无法结合PS，这说明了染色的特异性。

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

在正常细胞中，磷酯酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的PS由内侧外翻至外侧，从而将PS暴露于细胞外部环境。Annexin V是一种35 – 36 kDa的Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白，与PS具有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞的细胞膜结合。因此Annexin V被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

将Annexin V以藻红蛋白(Phycoerythrin, PE)进行标记，标记后的Annexin V保留了与PS的高亲和力，可作为探针，利用流式细胞仪进行细胞凋亡的检测。由于在凋亡早期即发生PS外翻，故Annexin V-PE染色在凋亡早期就能识别出凋亡的发生。7-氨基放线菌素(7-AAD)是一种核酸染料，7-AAD不能透过正常细胞或早期凋亡细胞完整的细胞膜，但可穿透膜损伤细胞如晚期凋亡细胞或者坏死细胞的细胞膜并与其内的DNA结合，可用来区分早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞或坏死细胞。因此将Annexin V-PE与7-AAD进行共染，就可以区分不同凋亡时期的细胞。

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

本试剂盒所有组分均在2 – 8℃保存，Annexin V-PE和7-AAD Staining Solution需避光保存，勿冷冻。

金畔生物试剂,Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

早期凋亡检测

绿色荧光标记

试剂盒中含有PI，可与Annexin V -FITC配合区分凋亡/ 坏死细胞

适用于流式细胞仪和荧光显微镜

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

图 A. 未经喜树碱诱导的Jurkat 细胞，用Annexin V-FITC 和碘化丙啶(PI) 双染后流式二维图（左）与直方图（右）；

图 B. 用终浓度为4 μM 的喜树碱诱导Jurkat 细胞凋亡4 h，用Annexin V-FITC 和碘化丙啶(PI) 双染后流式二维图（左）以及直方图（右）。

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(PS) 只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS) 由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35-36 kDa 的Ca²⁺ 依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，因此Annexin V 被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

将Annexin V 进行绿色荧光(FITC) 标记，以标记了的Annexin V 作为探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶(Propidium Iodide， PI) 是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将 Annexin V 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

4-8℃保存，长期不用可将Annexin V-FITC保存在-20℃

AD11/Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit-细胞凋亡检测试剂盒

AD11/Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit-细胞凋亡检测试剂盒,Annexin V染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。在细胞凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜特异性结合，因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一

货号：AD11
Annexin V, 633/PI凋亡检测试剂盒
Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温

特点：

灵敏度&稳定性高
性价比之选。
无需荧光补偿调节

选择规格：50assays,50assays*2

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试剂盒内含

50次
Annexin v，633结合物 ×1
Pl Solution x1
10×Annexin V Binding Buffer x 1
*注:规格中的每“次”是以细胞浓度1×106cells/ml计

产品概述

细胞凋亡是指为维持有机体内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。正常情况下任何细胞在形成过程中发生的异常都会通过凋亡消除。例如体内的癌细胞增长为肿瘤的过程会受细胞凋亡的引导而被抑制。然而在抑癌基因p53出现问题时，凋亡就不会诱导发生，从而导致癌细胞的不断增长。细胞凋亡可以通过细胞形态的变化或生物化学的变化来检测。目前常用的指标有caspase活性变化、DNA碎片、磷脂酰丝氨酸的外翻等。

原理

Annexin V染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。在细胞凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜特异性结合，因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。用红色荧光633标记的Annexin V通过流式细胞仪或荧光显微镜可以检测到细胞凋亡的发生。碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 是一种核酸染料，PI只能透过凋亡晚期和死细胞的细胞膜，因此Annexin V和PI结合使用，可以区分凋亡早晚期的细胞及死细胞。

荧光参数

流式细胞仪检测

1. 加样到流式细胞仪检测，

633：激发波长Ex: 633 nm；

发射波长Em: 650-670 nm。

PI：激发波长Ex: 488 nm；

发射波长Em: 564-606 nm。

2. 633的红色荧光通过633通道(FL4)检测;

PI的红色荧光通过PI通道 (FL2或FL3)检测 (建议使用FL3)。

设定对照

1. 未染色细胞。

2. Annexin V, 633染色细胞 (没有PI)。

3. PI染色细胞 (没有Annexin V, 633)。

荧光显微镜检测

将细胞悬液滴到玻片上，置于显微镜上使用合适的滤光片检测。

* 由于EDTA会对细胞膜的特定部位有损伤，建议使用不含EDTA的胰酶消化贴壁细胞

注意事项

1. Annexin V, 633和PI均对光敏感。所有染色过程和培养过程均需避光。

2. 若细胞收集过程中使用胰酶，需设法去除残留的胰酶，这些胰酶会消化并降解Annexin V, 633，最终导致染色失败。

3. 用 APC和PE通道检测基本不用调节荧光补偿，但是如果细胞中还有其它荧光，例如细胞中有GFP，GFP荧光会影响PI通道的信息采集，需要调节荧光补偿。

参考文献

1. Deregulated lncRNA expression profile in the mouse lung adenocarcinomas with KRAS-G12D mutation and P53 knockout,Journal of Cellular and Molecular Medicine, 2019, 00:1-11

2. Curcumin Inhibits Growth of Human NCI-H292 Lung Squamous Cell Carcinoma Cells by Increasing FOXA2 Expression,Front. Pharmacol., 2018, doi: 10.3389/fphar.2018.00060

3. UCP2 ameliorates mitochondrial dysfunction, inflammation, and oxidative stress in lipopolysaccharide-induced acute kidney injury,International Immunopharmacology, 2019, 71, 336-349

4. γ-Glutamyl cyclotransferase contributes to endometrial carcinoma malignant progression and upregulation of PD-L1 expressionduring activation of epithelial-mesenchymal transition,International Immunopharmacology, 2019, 106039, doi:10.1016/j.intimp.2019.106039

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货号：AD10
Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒
Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温