标签： Annexin V

金畔生物试剂,Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit 

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

  • 染色特异性强

  • PE染料为红色荧光，可与绿色荧光实现共染

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

图1. Annexin V-PE/7-AAD染色检测凋亡效果图

图 A. 未经喜树碱诱导的Jurkat 细胞，用Annexin V-PE 和7-AAD双染后流式二维图（左）与直方图（右）；

图 B. 用终浓度为4 μM 的喜树碱诱导Jurkat 细胞凋亡4 h，用Annexin V-PE 和7-AAD双染后流式二维图（左）以及直方图（右）。

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

图2. Annexin V-PE/7-AAD染色检测不同程度凋亡

用喜树碱（Camptothecin，CPT）诱导Jurkat细胞（人T淋巴瘤细胞）凋亡，诱导浓度分别为0、4、8、12、16μM，分别诱导4小时后，参照产品说明书实验方案进行染色，用流式细胞仪检测结果如图2。

(A)0μM. (B)4μM.(C)8μM.(D)12μM.(E)16μM.(F)竞争封闭实验，采用16μM CPT诱导Jurkat细胞4小时后，参照说明书收集并洗涤细胞，于染色前加入无染料标记的Annexin V蛋白孵育10分钟，再进行Annexin V-PE/7-AAD染色。无染料标记的Annexin V结合了细胞上的PS，再进行染色时，Annexin V-PE无法结合PS，这说明了染色的特异性。

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

在正常细胞中，磷酯酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的PS由内侧外翻至外侧，从而将PS暴露于细胞外部环境。Annexin V是一种35 – 36 kDa的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与PS具有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞的细胞膜结合。因此Annexin V被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

将Annexin V以藻红蛋白(Phycoerythrin, PE)进行标记，标记后的Annexin V保留了与PS的高亲和力，可作为探针，利用流式细胞仪进行细胞凋亡的检测。由于在凋亡早期即发生PS外翻，故Annexin V-PE染色在凋亡早期就能识别出凋亡的发生。7-氨基放线菌素(7-AAD)是一种核酸染料，7-AAD不能透过正常细胞或早期凋亡细胞完整的细胞膜，但可穿透膜损伤细胞如晚期凋亡细胞或者坏死细胞的细胞膜并与其内的DNA结合，可用来区分早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞或坏死细胞。因此将Annexin V-PE与7-AAD进行共染，就可以区分不同凋亡时期的细胞。

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

本试剂盒所有组分均在2 – 8℃保存，Annexin V-PE和7-AAD Staining Solution需避光保存，勿冷冻。

金畔生物试剂,Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

早期凋亡检测

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

绿色荧光标记

试剂盒中含有PI，可与Annexin V -FITC配合区分凋亡/ 坏死细胞

适用于流式细胞仪和荧光显微镜

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

图 A. 未经喜树碱诱导的Jurkat 细胞，用Annexin V-FITC 和碘化丙啶(PI) 双染后流式二维图（左）与直方图（右）；

图 B. 用终浓度为4 μM 的喜树碱诱导Jurkat 细胞凋亡4 h，用Annexin V-FITC 和碘化丙啶(PI) 双染后流式二维图（左）以及直方图（右）。

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(PS) 只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS) 由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35-36 kDa 的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，因此Annexin V 被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

将Annexin V 进行绿色荧光(FITC) 标记，以标记了的Annexin V 作为探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶(Propidium Iodide， PI) 是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将  Annexin V 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

4-8℃保存，长期不用可将Annexin V-FITC保存在-20℃

AD11/Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit-细胞凋亡检测试剂盒

AD11/Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit-细胞凋亡检测试剂盒,Annexin V染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。在细胞凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜特异性结合，因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一

货号：AD11
Annexin V, 633/PI凋亡检测试剂盒
Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温

特点：

灵敏度&稳定性高
性价比之选。
无需荧光补偿调节

选择规格：50assays,50assays*2

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NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
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NO.5. DAPGreen – Autophagy Detection 细胞自噬检测

试剂盒内含

50次
Annexin v，633结合物 ×1
Pl Solution x1
10×Annexin V Binding Buffer x 1
*注:规格中的每“次”是以细胞浓度1×106cells/ml计

产品概述

细胞凋亡是指为维持有机体内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。正常情况下任何细胞在形成过程中发生的异常都会通过凋亡消除。例如体内的癌细胞增长为肿瘤的过程会受细胞凋亡的引导而被抑制。然而在抑癌基因p53出现问题时，凋亡就不会诱导发生，从而导致癌细胞的不断增长。细胞凋亡可以通过细胞形态的变化或生物化学的变化来检测。目前常用的指标有caspase活性变化、DNA碎片、磷脂酰丝氨酸的外翻等。

原理

Annexin V染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。在细胞凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜特异性结合，因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。用红色荧光633标记的Annexin V通过流式细胞仪或荧光显微镜可以检测到细胞凋亡的发生。碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 是一种核酸染料，PI只能透过凋亡晚期和死细胞的细胞膜，因此Annexin V和PI结合使用，可以区分凋亡早晚期的细胞及死细胞。

荧光参数

流式细胞仪检测

1. 加样到流式细胞仪检测，

633：激发波长Ex: 633 nm；

发射波长Em: 650-670 nm。

PI：激发波长Ex: 488 nm；

发射波长Em: 564-606 nm。

2. 633的红色荧光通过633通道(FL4)检测;

PI的红色荧光通过PI通道 (FL2或FL3)检测 (建议使用FL3)。

设定对照

1. 未染色细胞。

2. Annexin V, 633染色细胞 (没有PI)。

3. PI染色细胞 (没有Annexin V, 633)。

荧光显微镜检测

将细胞悬液滴到玻片上，置于显微镜上使用合适的滤光片检测。

* 由于EDTA会对细胞膜的特定部位有损伤，建议使用不含EDTA的胰酶消化贴壁细胞

注意事项

1. Annexin V, 633和PI均对光敏感。所有染色过程和培养过程均需避光。

2. 若细胞收集过程中使用胰酶，需设法去除残留的胰酶，这些胰酶会消化并降解Annexin V, 633，最终导致染色失败。

3. 用 APC和PE通道检测基本不用调节荧光补偿，但是如果细胞中还有其它荧光，例如细胞中有GFP，GFP荧光会影响PI通道的信息采集，需要调节荧光补偿。

参考文献

1. Deregulated lncRNA expression profile in the mouse lung adenocarcinomas with KRAS-G12D mutation and P53 knockout,Journal of Cellular and Molecular Medicine, 2019, 00:1-11

2. Curcumin Inhibits Growth of Human NCI-H292 Lung Squamous Cell Carcinoma Cells by Increasing FOXA2 Expression,Front. Pharmacol., 2018, doi: 10.3389/fphar.2018.00060

3. UCP2 ameliorates mitochondrial dysfunction, inflammation, and oxidative stress in lipopolysaccharide-induced acute kidney injury,International Immunopharmacology, 2019, 71, 336-349

4. γ-Glutamyl cyclotransferase contributes to endometrial carcinoma malignant progression and upregulation of PD-L1 expressionduring activation of epithelial-mesenchymal transition,International Immunopharmacology, 2019, 106039, doi:10.1016/j.intimp.2019.106039

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AD10/Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit-细胞凋亡检测试剂盒,Annexin V染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。在细胞凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜特异性结合，因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

货号：AD10
Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒
Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温

特点：

灵敏度&稳定性高
性价比高
荧光显微镜和流式检测双重方法检测

选择规格：50assays,50assays*2

关联产品TOP5

NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
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试剂盒内含

50次
Annexin V，FITC结合物 ×1
Pl Solution ×1
10×Annexin V Binding Buffer ×1
*注:规格中的每“次”是以细胞浓度1×10cells/ml计

产品概述

细胞凋亡是指为维持有机体内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。正常情况下任何细胞在形成过程中发生的异常都会通过凋亡消除。例如体内的癌细胞增长为肿瘤的过程会受细胞凋亡的引导而被抑制。然而在抑癌基因p53出现问题时，凋亡就不会诱导发生，从而导致癌细胞的不断增长。细胞凋亡可以通过细胞形态的变化或生物化学的变化来检测。目前常用的指标有caspase活性变化、DNA碎片、磷脂酰丝氨酸的外翻等。

原理

Annexin V染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。在细胞凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜特异性结合，因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。用绿色荧光FITC标记的Annexin V通过流式细胞仪或荧光显微镜可以检测到细胞凋亡的发生。碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 是一种核酸染料，PI只能透过凋亡晚期和死细胞的细胞膜，因此Annexin V和PI结合使用，可以区分凋亡早晚期的细胞及死细胞。

荧光参数

-流式细胞仪检测

1. 加样到流式细胞仪检测，激发波长Ex = 488 nm；发射波长Em = 530 nm。

2. Annexin V-FITC的绿色荧光通过FITC通道 (FL1) 检测；PI的红色荧光通过PI 通道 (FL2或FL3) 检测 (建议使用FL3)。

-荧光显微镜检测

将细胞悬液滴到玻片上，置于显微镜上使用合适的滤光片检测。* 由于EDTA会对细胞膜的特定部位有损伤，建议使用不含EDTA的胰酶消化贴壁细胞。

相关资料

所需的设备和材料

– 样品和诱导剂

– PBS、超纯水

– 合适量程的移液器

– 细胞培养用6，12，24，96孔板

– 流式细胞仪或荧光显微镜。

* 最大激发/发射波长 Annexin V, FITC: 494 nm/518 nm；PI: 535 nm/617 nm

溶液制备

1×Annexin V Binding solution：将10×Annexin V Binding Buffer用超纯水稀释10倍。

稳定性

试剂盒在0-5℃下可以保存6个月，请避光保存Annexin V, FITC结合物。

＊实验实例及操作步骤请参考中文说明书

常见问题Q&A

Q1:贴壁细胞凋亡实验是否能够不消化？

A1：不选择消化的原因是什么？
=>主要是担心胰酶对细胞膜损伤而影响结果判断。

贴壁细胞在检测凋亡之前，如果没有出现团聚的情况，那么是可以尝试不消化直接镜检。理由是基于Annexin V- FITC与细胞反应的一个机理，凋亡早期的膜磷脂酰丝氨酸由膜内外翻，与Annexin V特异性结合，那么FITC标记的Annexin V呈现一个绿色荧光，所以我们保证足够的细胞膜暴露在工作液中，那即使没有经过胰酶消化，最终也是能够用荧光显微镜观察凋亡的情况。

不消化有几点好的地方：

1.避免一个对细胞膜的损伤，那结果能够很好的反应促凋亡的结果

2.操作简便，避免消化以及清洗过程中出现的操作失误

不消化有几点担心的地方：

1.无法制成细胞悬液，染色可能出现不充分

2.可能无法观察凋亡晚期PI和FITC双染的细胞

Q2:目前用Tunel的检测试剂盒做凋亡实验。和Tunel比较，用Annexin V-FITC的优点是什么？

A2: TUNEL这种方法灵敏度很高，但是特异性比较低，只能标记出凋亡中期和凋亡晚期的细胞，而且细胞坏死也会发生DNA断裂，不能算是真正的凋亡细胞，造成假阳性的现象。
建议老师两种方法都进行，以Tunel方法为主，Annexin V的方法为辅，这样两种方法都进行，互相也可以验证结果是否准确，互作参考。

参考文献

1. A Novel Allosteric Inhibitor of Phosphoglycerate Mutase 1 Suppresses Growth and Metastasis of Non-Small-Cell Lung Cancer,

Cell Metabolism, 2019, 30, 1-13

2. Tumor Microenvironment Activable Self-Assembled DNA Hybrids for pH and Redox Dual-Responsive Chemotherapy/PDT

Treatment of Hepatocellular Carcinoma, Advanced Science, 2017, 4(4), 1600460

3. Biogenic (R)-(+)-Lipoic Acid Only Constructed Cross-LinkedVesicles with Synergistic Anticancer Potency，

Advanced Functional Materials, 2018, 1806567

4. Anti-mitotic chemotherapeutics promote apoptosis through TL1A-activated death receptor 3 in cancer cells,

Cell Research, 2018, 28, 544-555

5. Bacteria-Driven Hypoxia Targeting for Combined Biotherapy and Photothermal Therapy, ACS Nano, 2018, 12(6), 5995-6005

6. Nanoenzyme-Augmented Cancer Sonodynamic Therapy by Catalytic Tumor Oxygenation, ACS Nano, 2018, 12, 3780-3795

7. Tumor-Specific Multiple Stimuli-Activated Dendrimeric Nanoassemblies with Metabolic Blockade Surmount Chemotherapy

Resistance, ACS Nano, 2017, 11(1), 416-429

8. Near Infrared-Guided Smart Nanocarriers for MicroRNA-Controlled Release of Doxorubicin/siRNA with Intracellular ATP as Fuel,

ACS Nano, 2016, 10(3), 3637-47

9. Noninvasive small-animal imaging of galectin-1 upregulation for predicting tumor resistance to radiotherapy,

Biomaterials, 2018, 158, 1-9

10. Cytotoxicity of guanine-based degradation products contributes to the antiproliferative activity of guanine-rich oligonucleotides,Chemical Science, 2015, 6, 3834-3836

11. A Novel Strategy through Combining iRGD Peptide with Tumor-icroenvironment-Responsive and Multistage Nanoparticles

for Deep Tumor Penetration, ACS Appl.Mater.Interfaces, 2015, 7(49), 27458-27466

12. JOSD1 inhibits mitochondrial apoptotic signalling to drive acquired chemoresistance in gynaecological cancer by stabilizing MCL1,Cell Death & Differentiation, 2020, 27, 55-70

13. The influence of printing parameters on cell survival rate and printability in microextrusion-based 3D cell printing technology,Biofabrication, 2015, 7(4), 045002

14. Downregulation of MCL-1 and upregulation of PUMA using mTOR inhibitors enhance antitumor efficacy of BH3 mimetics in triple-negative breast cancer, Cell Death & Disease, 2018, 9, 137

15. Mutations in the P10 region of procaspase-8 lead to chemotherapy resistance in acute myeloid leukemia by impairing procaspase-8 dimerization, Cell Death & Disease, 2018, 9(5), 516

16. Preclinical evaluation of antitumor of the proteasome inhibitor MLN2238 (ixazomib) in hepatocellular carcinoma cells,Cell Death & Disease, 2018, 9, 28

17. Long Noncoding RNA HCAL Facilitates the Growth and Metastasis of Hepatocellular Carcinoma by Acting as a ceRNA of LAPTM4B,Molecular Therapy: Nucleic Acids, 2017, 9, 440-451

18. TMEM74 promotes tumor cell survival by inducing autophagy via interactions with ATG16L1 and ATG9A,Cell Death & Disease, 2017, 8, e3031-3045

19. Nogo-C regulates cardiomyocyte apoptosis during mouse myocardial infarction, Cell Death & Disease, 2016, 7, e2432

20. TonEBP modulates the protective effect of taurine in ischemia-induced cytotoxicity in cardiomyocytes,Cell Death & Disease, 2015, 6, e2025