Taq DNA聚合酶的分类欢迎咨询

Taq DNA聚合酶有几种,除了普通扩增用的Taq DNA聚合酶外,还有以下几种特意性Taq DNA聚合酶
a,保真性的一个通用标准是错配率,错配率越低保真性越好。普通 Taq 酶的错配率在 10 -5 碱基 / 循环数,而高保真 Taq 酶错配率可降到 10 -6 数量级,大大降低了出错的可能性;它适合对 PCR 保真性要求较高的实验,如基因筛选、测序、突变检测等等。高保真 Taq 酶的保真原理是:高保真 Taq 酶具有 3‘ 到 5’ 核酸外切酶的活性。目前市面上主要有两类产品:一类是混合型的高保真酶,将带有 Proofreading 活性的酶与普通 Taq 酶(用于提高扩增效率)混合起来;另一类是单一型的高保真酶。
b,热启动Taq酶(高特异Taq酶):在 PCR *个循环变性之前,有一个升温的过程,引物和模板会有一些非特异性配对,如果这时 Taq 酶发挥活性,就很容易产生非特异性扩增,由于循环初期模板量非常少,产生的非特异性条带经过后面的指数扩增,就会严重干扰目的片段的扩增,甚至导致特异性条带不能扩出;而热启动 Taq 酶是必需经过高温才能激活的酶,因此在初始循环的变性之前它没有活性,不会产生非特异性扩增,这就大大提高了 PCR 扩增的特异性。
c,高耐热Taq酶: 对于有些模板变性温度较高,需要时间较长,可能要求高耐热性 Taq 酶,如 NEB 公司的 Vent 和 Deep Vent DNA 聚合酶系列,两者都是从海底火山口分离出来后克隆的,是普通 Taq 酶耐热性的三倍以上,前者在 95°C 半衰期近 7 小时, 100°C 近 2 小时;而后者分别为 23 小时和 8 小时。
d,超长片段扩增Taq酶:对于作基因组图谱、测序及分子遗传学研究的科研人员,可能会用到超长片段的扩增, Clontech 公司的 Advantage Genomic 系列混有 Tth DNA 聚合酶, Proofreading 酶和热启动抗体,对复杂模板可扩增 10kb 片段,简单模板可达 40kb 。

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NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,NEBuilder® 高保真 DNA 大片段组装试剂盒#E2623S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆 & 合成生物学

NEBuilder® 高保真 DNA 大片段组装试剂盒

#E2623S 20 次反应

特性

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概述

NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液可以高效、准确的组装 DNA 片段。不管片段的长度和

末端匹配性如何,该方法均可以多片段无缝组装。还可以组装单链寡核苷酸或含 15-80 bp 重叠
区的不同片段长度的 DNA 片段。主要用于合成生物学和多片段的一步克隆,该产品操作简单、
灵活,以预混液形式提供。在同一反应缓冲液中有几种不同的酶活性:
• 外切酶活性会产生单链 3´ 突出端,促使互补的末端重复序列(重叠区)退火
• 聚合酶活性会填补退火片段的缺口
• 连接酶活性能在组装后的 DNA 切刻处进行连接最终形成双链闭合的 DNA 分子,可以用于 PCR、
RCA 或其它的分子生物学应用,以及直接转化到大肠杆菌。
NEBuilder 高保真 DNA 组装克隆试剂盒包含高效的 NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液和 NEB 5-alpha
E. coli 感受态细胞,仅 2 小时即可完成组装和转化实验。
NEBuilder 高保真试剂盒有两种:含 NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞(克隆试剂盒,NEB #E5520);
含 NEB 10-beta E. coli 感受态细胞(大片段组装试剂盒,NEB #E2623)。NEB 5-alpha 感受态细胞适
用于小于等于 15 kb 质粒的转化。对于大于 15 kb质粒的转化,NEB 推荐 NEB 10-beta 感受态细胞。
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NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液包含

– NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液

– NEBuilder 阳性对照

NEBuilder 高保真 DNA 组装克隆试剂盒包含

– NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液

– NEBuilder 阳性对照
– NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞(高效级)
– SOC Outgrowth 培养基
– pUC19 对照 DNA

质保声明

 NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液经过严格的质控检测,以保证产品的最高效率和纯

度。更多详细信息,请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。
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NEB代理 , DNA聚合酶与扩增技术,Phusion® 热启动 Flex DNA 聚合酶,#M0535L

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 高保真PCR

Phusion® 热启动 Flex DNA 聚合酶

#M0535L 500 units

#M0535S 100 units

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Phusion® 超保真 PCR 试剂盒

Phusion 聚合酶信息

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概述

由于 DNA 序列需要在扩增后进行校正,所以拥有高保真度的 DNA 聚合酶对于 PCR 应用至关重要。由 NEB 生产、质量控制的 Thermo Scientific® Phusion 超保真 DNA 聚合酶兼备高保真度和稳定扩增的性能,适用于所有 PCR 应用。其独特的结构包括一个类似 Pyrococcus 的酶和一个掺入率增强结构域,二者融合在一起。这种组合提升了聚合反应的保真性和速度。可供选择的试剂包括单酶、预混液和试剂盒。Phusion 热启动 Flex DNA 聚合酶有单酶和预混液剂型可供选择。Phusion DNA 聚合酶可用于长片段的扩增,是克隆实验的理想
选择。

其它剂型

Phusion 和 Phusion 热启动 Flex DNA 聚合酶均有预混液剂型可供选择,Phusion 预混液有含 HF 或 GC 缓冲液两种形式。
Phusion PCR 试剂盒包含 Phusion 聚合酶、Phusion HF 和 GC 缓冲液、dNTPs、MgCl2、DMSO 和 DNA
Marker。

浓度

2,000 units/ml。

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Phusion 超保真 DNA 聚合酶扩增片段的产量更高,延伸时间更短。使用不同的聚合酶扩增一段 1.2 kb 长
度的 C. elegans 基因组片段。所有扩增反应按照厂家推荐条件重复进行(30 个循环、30 秒或 2 分钟的延伸时间)并用微流控芯片技术(microfluidic LabChip® analysis)检测。

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Phusion 热启动 Flex DNA 聚合酶具有超强扩增能力。除了 1.3 kb C. elegans 扩增片段,其它扩增片
段模板均为 human Jurkat。扩增长度如上胶图所示。所有扩增反应按照厂家推荐条件(30 个热循
环)重复进行并用微流控芯片技术(microfluidic LabChip® analysis)检测。

* Phusion DNA Polymerase was developed by Finnzymes Oy, now a part of Thermo Fisher Scientific.
This product is manufactured by New England Biolabs, Inc. under agreement with, and under the performance specifications of Thermo Fisher Scientific. Phusion® is a registered trademark and property of Thermo Fisher Scientific.

许可/专利/免责:参见 390-391 页。

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NEB代理 , 限制性内切酶 ,AgeI-HF星选酶#R3552L

产品资料 – 限制性内切酶 – 高保真限制性内切酶

AgeI-HF(星选酶)

#R3552L 1,500 units

#R3552S 300 units

识别位点

NEB代理 , 限制性内切酶 , 高保真限制性内切酶

在不同反应缓冲液的活性

NEBuffer 1.1: 100%
NEBuffer 2.1: 50%
NEBuffer 3.1: 10%
CutSmart Buffer: 100%

在不同反应缓冲液的活性

NEBuffer 1.1: 100%
NEBuffer 2.1: 50%
NEBuffer 3.1: 10%
CutSmart Buffer: 100%

特性

CutSmart、重组酶、基因工程改造酶、省时酶、高保真酶。

反应条件

CutSmart 缓冲液,37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。

浓度

20,000 units/ml。

甲基化敏感性

对哺乳动物基因组 DNA CpG 甲基化敏感。