标签： 连接酶

NEB代理,DNA修饰酶与克隆技术,DNA 连接酶,T4 DNA 连接酶#M0202L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

T4 DNA 连接酶

#M0202L 100,000 units

#M0202M 100,000 units (高浓度 5X)

#M0202S 20,000 units

#M0202T 20,000 units (高浓度 5X)

#M0202V 10,000 units

特性

· 高效连接粘性末端和平末端
· T/A 克隆
·dsDNA 切刻修复
·构建高丰度克隆文库
·RNA 和 DNA 的连接 

概述

该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻。

来源

纯化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8。

反应条件

1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液
[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM MgCl2，10 mM DTT，1 mM ATP] 推荐 DNA 5´ 末端浓度为 0.1-1.0 μM，16℃ 温育。

热失活

65℃ 加热 10 分钟。

质保声明

T4 DNA 连接酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。

单位定义（粘性末端活性单位）

1 单位指在 20 μl 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液中，16℃ 反应条件下，30 分钟能使 50% 的经 HindIII 消化的λDNA 片段 [5´ 端浓度为 0.12 μM（300μg/ml）] 连接所需的酶量。

浓度

400,000 units/ml 和 2,000,000 units/ml。

注意事项

与 E. coli DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同，T4 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。若需稀释 T4 DNA 连接酶，推荐使用 50% 甘油贮存缓冲液（稀释缓冲液 A，NEB #B8001）稀释，-20℃ 保存。如稀释后马上使用，也可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。
只要在反应体系中补加 1 mM ATP，连接反应就可以在 NEB 提供的四种限制性内切酶缓冲液或在 T4 DNA 多聚核苷酸激酶反应缓冲液中进行。

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

该产品的特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375，请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

 

 

 

 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 连接酶

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 连接酶

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NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,E. coli DNA 连接酶#M0205L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

E. coli DNA 连接酶

#M0205L 1,000 units

#M0205S 200 units

特性

 dsDNA 切刻修复
 Okayama 和 Berg cDNA 克隆 

概述

催化双链 DNA 粘性末端的 5´ -磷酸和 3´ –羟基形成磷酸二酯键。不能有效连接平末端底物。E. coli DNA 连接酶以 NAD 为辅因子。在 4-37℃范围内，E. coli DNA 连接酶均有活性。

来源

纯化自重组 E. coli 菌株，该菌株携带 E. coli DNA 连接酶的编码基因。 

反应条件

1X E. coli DNA 连接酶缓冲液
[30 mM Tris-HCl（pH 8.0 @ 25℃），4 mM MgCl2，1 mM DTT，26 μM NAD+，50 μg/ml BSA]，最适反应温度为16℃。 

热失活

65℃ 加热 20 分钟。 

质保声明

E. coli DNA 连接酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位指在 20 μl 反应体系中，在 16℃ 反应条件下，30 分钟能使 50% 的经 HindIII 消化的 λDNA 片段 [5´ 端浓度为 0.12 μM（300 μg/ml）] 连接所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com 

浓度

10,000 units/ml。 

注意事项

本酶以 NAD+（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）作为辅因子。
该酶对平末端片段的连接效率极低，平末端的连接请用平末端/TA 连接酶预混液（NEB #M0367）或快速连接试剂盒（NEB #M2200）。 

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NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,Taq DNA 连接酶#M0208L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

Taq DNA 连接酶

#M0208L 10,000 units

#M0208S 2,000 units

#M0208V 1,000 units

特性

 耐热性好
 dsDNA 切刻修复
 用于 Gibson 组装方法 
 可用连接酶链式反应和连接酶检测反应对等位基因进行特异性检测

概述

相邻 DNA 链的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对，并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。因此，可以用它来检测单碱基替换。Taq DNA 连接酶以 NAD 为辅因子。在 37-75℃ 范围内，Taq DNA 连接酶均有活性。

来源

纯化自重组 E. coli 菌株，含有自 Thermus aquaticus HB8 中克隆的连接酶基因。 

反应条件

1X Taq DNA 连接酶反应缓冲液

[20 mM Tris-HCl（pH 7.6 @ 25℃），25 mM KAc，10 mM Mg(Ac)2，10 mM DTT，1 mM NAD 和 0.1% Triton X-100]，45℃ 温育。

该酶需 NAD+ 作辅因子，在 10X Taq DNA 连接酶缓冲液中已添加 NAD+；为了延长 NAD+ 的半衰期，缓冲液应于 -70℃ 贮存。

质保声明

Taq DNA 连接酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义（粘性末端活性单位）

1 单位指 50 μl 反应体系中，45℃ 条件下，15 分钟内能使 50% 的 1 μg 经 BstEII 消化的 λDNA 片段（12 bp 粘性末端）发生连接所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

浓度

40,000 units/ml。 

注意事项

Taq DNA 连接酶可以有效连接 12 bp 的互补片段，但却无法连接 4 bp 的互补片段（典型限制酶消化产物）。

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NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,9°N™ DNA 连接酶 

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

9°N™ DNA 连接酶

#M0238S 2,500 units

特性

 可在高温条件下，连接 DNA 链上的切刻位点
 耐热性好
 可用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测

概述

9°N™ DNA 连接酶耐热性好，能够催化磷酸二酯键的形成，使与同一互补靶 DNA 链杂交的两条相邻寡核苷酸链的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端通过磷酸二酯键相连。该连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对，并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。9°N™DNA 连接酶以 ATP 为辅因子。该酶在 45-70℃ 范围内均有活性。 

来源

纯化自重组 E. coli 菌株，其携带有从极度耐热的海底超嗜热古菌（Thermococcus sp.）9°N 菌株中克隆的连接酶基因。 

反应条件

1X 9°N DNA 连接酶反应缓冲液
[10 mM Tris-HCl，600 μM ATP，2.5 mM MgCl2，2.5 mM DTT，0.1% Triton X-100（pH 7.5 @ 25℃）]，45℃ 温育。 

质保声明

9°N DNA 连接酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或www.neb-china.com。

单位定义（粘性末端活性单位）

1 单位指 50 μl 反应体系中，45℃ 条件下，15 分钟内能使 50% 的 1 μg 经 BstEII 消化的 λDNA 片段（12 bp 粘性末端）发生连接所需要的酶量。粘性末端活性单位相当于切刻封闭单位。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

浓度

40,000 units/ml。 

注意事项

该酶可以有效连接 12 bp 的互补片段，但却无法连接 4 bp 的互补片段（典型限制酶消化产物）。 

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NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,T3 DNA 连接酶 #M0317L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

T3 DNA 连接酶

#M0317L 750,000 units

#M0317S 100,000 units

特性

 连接粘性末端或平末端
 高盐耐受力
 dsDNA 切刻修复 

概述

T3 DNA 连接酶来源于 T3 噬菌体，是 ATP 依赖型双链 DNA 连接酶，可以有效催化粘性末端、平齐末端和切刻的连接。加入 PEG 6000 可提高平齐末端连接效率。T3 DNA 连接酶在反应中对 NaCl 的耐受性是 T4 DNA 连接酶的 2 倍，因此，当体外分子生物学实验中需要考虑实验离子浓度下 DNA 连接酶活性时，就多了一个选择。 

来源

重组 E. coli 质粒，含有 T3 DNA 连接酶编码基因。 

反应条件

1X T3 DNA 连接酶反应缓冲液
[66 mM Tris-HCl，1 mM ATP，10 mM MgCl2，1 mM DTT，7.5% PEG 6000（pH 7.6 @ 25℃）]，25℃ 温育。

质保声明

T3 DNA 连接酶经过严格的质量控制检测，以确保最高的纯度和反应效率。详情请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位是指在 20 μl 总反应体系中，1X T3 DNA 连接酶反应缓冲液条件下，25℃ 温育 1 分钟，能使 50% 的 100 ng 经 HindIII 消化的 λDNA 连接所需的酶量。 

浓度

3,000,000 units/ml。 

注意事项

ATP 是必需的辅因子。
当某些实验不能用 PEG 6000 时，可使用 T4 DNA 连接酶缓冲液，但活性会降低 10 倍。切记反应时体系内一定要有终浓度为 1 mM 的 ATP。需要维持高 NaCl 浓度的实验，建议使用不含 PEG 6000 的缓冲液。
65℃ 加热 10 分钟可使 T3 DNA 连接酶失活。如果反应缓冲液中含有 PEG，该酶不能加热失活，否则会抑制后续转化实验。 

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有关该产品特性和应用的相关文献，请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,T7 DNA 连接酶#M0318L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

T7 DNA 连接酶

#M0318L 750,000 units

#M0318S 100,000 units

特性

 仅用于连接粘性末端
 dsDNA 切刻修复 

概述

T7 DNA 连接酶来源于 T7 噬菌体，它是一种 ATP 依赖型双链 DNA 连接酶，该酶可催化双链 DNA 相邻 5´ 磷酸末端和 3´ 羟基基团之间形成磷酸二酯键。T7 DNA 连接酶可以有效地催化粘性末端和切刻的连接。与 T4 和 T3 DNA 连接酶不同，T7 DNA 连接酶不能有效地催化平末端连接。因此，在实验过程中，当平末端和粘性末端同时存在时，仅需粘性末端发生连接，T7 DNA 连接酶是理想的选择。 

来源

重组 E. coli 质粒，含有 T7 DNA 连接酶编码基因。 

反应条件

 1 X T7 DNA 连接酶反应缓冲液

[66 mM Tris-HCl，1 mM ATP，10 mM MgCl2，1 mM DTT，7.5% PEG 6000 (pH 7.6 @ 25℃)]，25℃ 温育。

质保声明

T7 DNA 连接酶经过严格的质量控制检测，以确保最高的纯度和反应效率。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位是指在 20 μl 总反应体系中，1 X T7 DNA 连接酶反应缓冲液条件下，25℃ 温育 30 分钟，能使 50% 的 100 ng 经 HindIII 消化的 λDNA 片段连接所需的酶量。 

浓度

3,000,000 units/ml。 

注意事项

ATP 是必需的辅助因子。
当某些实验不能用 PEG 6000 时，可使用 T4 DNA 连接酶缓冲液，但活性会降低 10 倍。切记反应时体系内一定要有终浓度为 1 mM 的 ATP。
65℃ 加热 10 分钟可使 T7 DNA 连接酶失活。如果反应缓冲液中含有 PEG，该酶不能加热失活，否则会抑制后续转化实验。 

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NEB代理,DNA修饰酶与克隆技术,DNA 连接酶,平末端/TA 连接酶预混液#M0367L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

平末端/TA 连接酶预混液

#M0367L 250 次反应

#M0367S 50 次反应

特性

 连接平末端
 T/A 克隆
 dsDNA 切刻修复
 构建高丰度克隆文库
 连接粘性末端 

概述

平末端/TA 连接酶预混液是一种即用型 2X 预混液，内含 T4 DNA 连接酶、专属连接增强剂和经过优化的缓冲液。该预混液是专门为提高平末端和单碱基突出末端的连接和转化效率而设计，并简化了建立反应所需步骤，优化了酶和缓冲液的最佳比例，以确保稳定、高效的连接，室温下即可快速连接所有末端类型的 DNA。因为该预混液在 -20℃ 储存时为液体状态，所以使用时无需解冻。此外，即使当 DNA 量少且浓度低时仍可进行亚克隆连接，为用户节约宝贵的 DNA 样品，且无需稀释直接转化到多种化学感受态大肠杆菌中。 

来源

纯化自重组 E. coli 菌株，含有编码 T4 DNA 连接酶的基因。 

反应条件

在 10 μl 的反应体系中加入 1X 平末端/TA 连接酶预混液和 DNA 底物，25℃ 温育。10 μl 反应体系中包含 1,800 个 T4 DNA 连接酶粘性末端单位。 

质保声明

该产品经过严格的质量控制检测，以确保最高的纯度和反应效率。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

注意事项

该预混液在 -20℃ 储存时为液体状态。-70℃ 保存时，反复冻融 20 次后，检测反应效率无明显变化。 

NEB代理,DNA修饰酶与克隆技术,DNA 连接酶,ElectroLigase® 电转连接酶 #M0369S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

ElectroLigase® 电转连接酶

#M0369S 50 次反应

特性

 电转化的最佳连接酶
 载体构建
 接头连接
 片段组装
 文库构建
 TA 克隆 

概述

电转连接酶由 T4 DNA 连接酶和经过优化的即用型 2X 缓冲液组成，其缓冲液内含专属连接增强剂，不含 PEG。该组合专门用于促进各种 DNA 末端（平末端、粘性末端、TA 末端）的高效连接。无需脱盐和纯化，电转连接酶可直接用于电转化的细胞。因为其缓冲液在 -20℃ 储存时为液体状态，所以使用时无需解冻，从而简化了反应起始步骤。通过优化酶和缓冲液的比例，室温下即可快速连接所有末端类型的 DNA。即使当 DNA 量少且浓度低时仍可进行亚克隆连接，从而节省了用户宝贵的 DNA 样品。此外，无需稀释和纯化，反应液可直接转化多种电转感受态大肠杆菌。 

来源

纯化自重组 E. coli 菌株，含有编码 T4 DNA 连接酶的基因。 

反应条件

11 μl 反应体系，加入 1X 电转连接酶反应缓冲液、DNA 底物和 1 μl 电转连接酶，25℃ 温育 30 分钟。 

质保声明

电转连接酶经过严格的质量控制检测，以确保最高的纯度和反应效率。详情请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

注意事项

该产品在 -20℃ 储存时为液体状态。 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,瞬时粘性末端连接酶预混液#M0370L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

瞬时粘性末端连接酶预混液

#M0370L 250 次反应

#M0370 S50 次反应

特性

 瞬时连接粘性末端
 dsDNA 切刻修复
 构建高丰度克隆文库 

概述

瞬时粘性末端连接酶预混液是一种即用型 2X 预混液，内含 T4 DNA 连接酶、专属连接增强剂和经过优化的缓冲液。该预混液是专门为瞬时连接粘性末端（2-4 bp）和提高转化效率而设计，它还简化了建立反应所需的步骤，优
化了酶和缓冲液的比例。因为该预混液在 -20℃ 储存时为液体状态，所以使用时无需解冻，特别是无需温育时间就能高效连接粘性末端底物，反应时仅需加入预混液及互补末端 DNA，混匀后转化，从而节省了克隆连接反应的时间。此外，亚克隆连接可以以低浓度在很小的体系里完成，节省用户宝贵的 DNA 样品，并且无需稀释可直接转化到多种化学感受态大肠杆菌中。 

来源

纯化自重组 E. coli 菌株，含有编码 T4 DNA 连接酶的基因。

反应条件

在 10 μl 反应体系中加入 1X 瞬时粘性末端连接酶预混液和 DNA 底物。10 μl 反应体系中包含 1,800 个 T4 DNA 连接酶粘性末端单位。 

质保声明

该试剂经过严格的质量控制检测，以确保酶的高纯度和高效率。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

注意事项

该预混液在 -20℃ 储存时为液体状态。-70℃ 保存时，反复冻融 20 次后，检测反应效率无明显变化。 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 连接酶,SplintR® 连接酶 #M0375L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

SplintR® 连接酶

#M0375L 6,250 units

#M0375S 1,250 units

特性

 连接被互补 RNA 固定的相邻的单链 DNA
 鉴定 miRNAs 和 mRNAs，包括 SNPs 

概述

SplintR 连接酶也称为 PBCV-1 DNA 连接酶或 Chorella 病毒 DNA 连接酶，它能够高效催化相邻的 DNA 核苷酸的连接，这个连接过程需要一条互补的 RNA 在两条 DNA 单链间起“夹板”或“桥梁”的固定作用。这种以前没有报道过的活性可能推动一些创新性 miRNAs 和 mRNAs，包括 SNPs 的分析方法。在二代测序和分子诊断等众多领域中，SplintR 是富集目的基因的理想选择。它具有稳定的生物活性，对 RNA 介导固定的 DNA 底物亲和性强（米氏常数 Km = 1 nM），能够在复杂的混合物中检测到亚纳摩尔级的特定 RNA。因此，在 RNA 检测技术中，SplintR 连接酶不失为最佳选择用酶。 

来源

来自重组的 E. coli 菌株，其携带编码 PBCV-1 DNA 连接酶的基因。 

反应条件

1X SplintR 连接酶反应缓冲液，25℃ 温育，最佳连接温度是 16℃。 
热失活：65℃ 温育 20分钟。

质保声明

SplintR 连接酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义（粘性末端活性单位）

1 单位指 20 μl 反应体系中，1X SplintR 连接酶反应缓冲液，25℃ 条件下，15 分钟内能使 2 pmol（完成 50%）三重 FAM 标记的 DNA:RNA 杂交底物连接所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

浓度

25,000 units/ml。 

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NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 连接酶,Salt-T4™ 耐盐 DNA 连接酶#M0467L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

Salt-T4™ 耐盐 DNA 连接酶

#M0467L 100,000 units

#M0467S 20,000 units

特性

  • Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶是 T4 DNA 连接酶经基因工程改造过的酶，与 T4 DNA 连接酶相比提高了耐盐性
  • 不仅能够连接平末端和粘性末端，还能修复双链 DNA 和 DNA/RNA 杂交链的单链切刻
  • 随酶提供 T4 DNA 连接酶缓冲液和 StickTogether™ DNA 连接酶缓冲液

概述

 Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶作为 T4 DNA 连接酶的耐盐变体，该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的5´ -磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键，比野生型T4 DNA连接酶更耐受高盐条件。该酶在盐浓度高达300mM的情况下仍能连接粘性末端而不丧失任何活性。该酶对其他反应组分（载体或插入片段）携带的盐不敏感，并允许连接反应在盐含量较高的替代反应缓冲液（如 NEBuffer 3.1）中进行。

 

图1：与T4 DNA连接酶相比，Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶在粘性末端底物上表现出更高的耐盐性

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , DNA 连接酶

 

在 25℃ 条件下，用 400 单位的 T4 DNA 连接酶（NEB # M0202）或 Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶（NEB #   M0467）与 0.12 µM 荧光标记的 HindIII（粘性末端）酶切片段在盐量增加（0-1000 mM NaCl）的 1 x T4
DNA 连接酶缓冲液中温育 10 分钟。连接产物用毛细管电泳检测。

 

 

当盐浓度超过 200 mM 时，T4 DNA连接酶的活性迅速丧失，而在盐浓度高达 500 mM时，Salt-T4 耐盐
DNA 连接酶在粘性末端底物上仍保留了 > 60% 的活性。
 
来源
纯化自表达 Salt- T4 耐盐 DNA连接酶基因的 E. coli。
反应条件
1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液（50 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，10 mM DTT，1 mM ATP，（pH 7.5 @ 25℃）） ，25℃ 温育。
热失活
65℃ 加热 10 分钟。
质保声明
Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。
单位定义（粘性末端活性单位）
1 单位指在 20 µl 反应体系中，含 100 mM NaCl 的 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液条件下，25℃ 温育 30 分钟，能使 50% 的 6 µg 经 HindIII 消化的 λDNA 连接所需的酶量。
浓度
400,000 units/ml。
注意事项
1、与 E. coli DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同，Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。
2、若需稀释 T4 DNA 连接酶，推荐使用 50% 甘油贮存缓冲液（稀释缓冲液 A，NEB #B8001S）稀释，
-20℃ 保存。如稀释后马上使用，也可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。
3、室温连接
为了方便，可在室温（20-25℃）进行连接。连接粘性末端（1 x T4 DNA 连接酶缓冲液）：在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶，反应 10 分钟。连接平末端或单碱基突出末端
（1 x StickTogether™ DNA 连接酶缓冲液）：在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶，反应 10 分钟。不要用加热来终止反应，因为 StickTogether™DNA连接酶缓冲液里的 PEG 受热会抑制转化。
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NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,固定化 T4 DNA 连接酶#M0569S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

固定化 T4 DNA 连接酶

#M0569S 1.1 mg

产品特点

· 固定化 T4 DNA 连接酶（IM T4 DNA Ligase）由 T4 DNA 连接酶和磁珠组成，两者由共价键连接。

· 使用磁力可轻松去除反应中的酶
· 避免热失活步骤对下游应用的干扰
· 固定化酶可重复使用
· 开启新的工作流程和应用

产品说明

 T4 DNA 连接酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5´-磷酸基末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻（1）。

固定化 T4 DNA 连接酶（IM T4 DNA Ligase）是包被有 T4 DNA 连接酶的磁珠悬浮液，以 10 mg/ml 的溶液（50% 甘油）提供，每微升溶液的有效浓度为 60 粘性末端单位（CEU）。反应完成后，体系中的酶可使用磁力去除，然后可重复使用。

  固定化 T4 DNA 连接酶在不同温度下的相对活性

Temperature

% Activity

16ºC

100%

25ºC

100%

37ºC

50%

 

 

固定化 T4 DNA 连接酶在不同 NEB 缓冲液中的活性

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图 1：固定化 T4 DNA 连接酶成功连接 Lambda DNA-HindIII 消化产物

 

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根据产品说明书推荐步骤，分别使用无连接酶、可溶性 T4 DNA 连接酶（NEB #M0202）、固定化 T4 DNA 连接酶（NEB #M0569）对 Lambda DNA- HindIII 消化产物（NEB #N3012）进行连接。结果显示，可溶性酶和固定化酶的连接效果一致。

 

图 2：固定化 T4 DNA 连接酶可重复使用

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将固定化 T4 DNA 连接酶（NEB #M0569）置于快连缓冲液中，对 Nanopore 接头进行连续夹板连接，数据显示：经过 20 次连续连接反应后，酶活仍不受影响。

 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,Taq 高保真 DNA 连接酶#M0647

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

Taq 高保真 DNA 连接酶

#M0647 S50 次反应

特性

 高保真，耐热性好
 dsDNA 切刻修复
 可用连接酶链式反应（LCR）和连接酶检测反应（LDR）对等位基因进行特异性检测
 锁式探针连接
 为方便计算连接温度，请登陆 Ligasecalc.neb.com 使用 Thermostable Ligase Reaction Temperature Calculator在线工具。

概述

Taq 高保真 DNA 连接酶含热稳定 DNA 连接酶和专属试剂，具有无以伦比的保真性，能高保真且高效地连接 DNA 切刻。在优化的缓冲液体系中，该酶将与靶 DNA 互补的相邻 5´-磷酸基和 3´-羟基的切刻位点以磷酸二酯键进行连接，极大程度降低了错配率。改良的配方使得该产品可以更好的识别连接反应供体和受体，从而可以精确检测 SNPs 和其他等位基因变异。Taq 高保真 DNA 连接酶在 37–75℃ 温度范围内都有活性。

来源

 纯化自重组的 E. coli 菌株，携带有克隆自嗜热菌的连接酶基因。

反应条件

1X Taq 高保真 DNA 连接酶反应缓冲液
[20 mM Tris-HCl，150 mM KCl，10 mM MgCl2，10mM DTT，1 mM NAD 和 0.1% Triton X-100（pH 8.5 @25℃）]，25℃ 温育。

质保声明

Taq 高保真 DNA 连接酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

关于该酶性质和产品应用的参考文
献，请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。