标签： 过氧化物

TMBZ是一种用于过氧化物酶检测的生色试剂。它已被开发作为具有致癌性的联苯胺的一种替代品。由于其苯环上的邻位甲基，TMBZ不会代谢成高致癌的ο-羟基联苯胺或ο,ο’-二羟基联苯胺。因此TMBZ化合物的致癌性远小于联苯胺。尽管TMBZ溶液无色，但在过氧化氢和过氧化物酶存在的情况下，它会变为蓝绿色 (最大波长：655 nm) 。此蓝绿色的复合物的结构被认为是两个氧化的TMBZ分子的自由基形式。TMBZ HCl是TMBZ的盐酸化物形式，它可溶于水 (每10 ml水溶解100 mg TMBZ HCl) 。

检测步骤
1. 用1 ml DMSO溶解6 mg TMBZ以制备100×TMBZ溶液。
2. 将5μl 30%的过氧化氢溶液与1 ml PBS混合以制备200×H₂O₂溶液。
3. 向1 ml PBS中加入10μl 100×TMBZ溶液和5μl 200×H₂O₂溶液以制备染色溶液。^*
4. 向96孔板的每孔中加入100-200μl染色溶液。室温或37℃下孵育该板5 min-1 h。
5. 用PBS洗涤样品若干次以终止染色反应。
* 为得到最佳结果，可能有必要对TMBZ和过氧化氢的最终浓度作修改。染色溶液并不稳定。请在使用前制备新鲜溶液。