超氧阴离子和羟自由基检测(EPR)—DMPO货号:D048

超氧阴离子和羟自由基检测(EPR)—DMPO货号:D048
5,5-二甲基-1-吡咯啉-N-氧化物
DMPO
商品信息
储存条件:-20度保存,防潮,避光
运输条件:室温
分子式:

C6H11NO

分子量:

113.16

特点:

• 纯度高

• 杂质峰少

选择规格:
1ml

凑单关联产品TOP5

NO.1.    TEMP    单线态氧检测

NO.2.    BMPO    超氧阴离子和羟自由基检测

NO.3.    ROS Assay Kit    活性氧检测

NO.4.    SOD Assay Kit    超氧化物歧化酶(SOD)检测

NO.5.    Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric-    细胞凋亡检测

 

规格性状

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质量约为1.1g

产品概述

由于具有潜在的致癌风险和促进衰老的作用,生物体内的自由基已成为研究的热点。 DMPO是研究自由基最常用的自旋捕获剂。 它适用于捕获氧自由基,尤其是超氧化物,并生成具有特征的EPR信号的加合物。 但是,大多数市售的DMPO包含会引起高背景的杂质。 因此,这些DMPO需要进一步纯化才能在EPR上进行实验。 Dojindo的DMPO实行严格的质量管控,没有杂质引起的背景问题,因此不需要任何预纯化处理。

产品特点

•超高纯度

•更高的信噪比

•无需预纯化

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同仁化学研究所 (Dojindo) 的DMPO没有杂质 (*) 检出

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以羟自由基的Fenton反应(黑色)和空白(蓝色)为例,同仁化学研究所(Dojindo)的峰更清晰,S/N比例更高

应用

自旋捕获剂,EPR(ESR)检测,超氧阴离子,羟基自由基

原理

自旋捕捉ESR技术是一种检测活性氧的最可靠的办法,它能提供具有特征的ESR信号。DMPO采用一种特殊的敏感方法,可以捕捉超氧阴离子和羟自由基等,分别产生独特的ESR光谱。因此它是探测生物系统内ROS的强有力工具。

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操作步骤

SOD清除超氧阴离子活性检测

1. 将15 μl的DMPO溶液和 50 μl的5 mM的次黄嘌呤加入到35 μl的0.1 M的磷酸盐缓冲液 (pH 7.8) 中。

2. 加入50 μl的待测SOD标准品或待测样品,涡旋振荡 1-2 s。

3. 加入50 μl的0.4 U/ml的黄嘌呤氧化酶之后立即涡旋振荡。

4. 放置一段时间 (例如 1 min) 将溶液转入ESR样品管中检测。

5. 通过峰值计算相对强度(DMPO-O2-/Mn2+)。

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C-,N-,S-基自由基的检测

1. 制备100 mM含有25 μM Diethylenetriaminepentaacetic Acid (DTPA)的磷酸盐缓冲液 (pH 7.4),作为过渡金属螯合剂。

2. 制备以下过氧化物酶底物:A) 100 mM 甲酸钠(HCOONa);B) 100 mM氰化钾(KCN);C) 100 mM叠氮钠(NaN3);D) 含有100 mM亚硫酸钠 (Na2SO3)的100 mM磷酸盐缓冲液 (pH 7.4)。

3. 制备4.0 mg/ml(~100 μM)的辣根过氧化物酶 (HRP)溶液和1 mM H2O2溶液。

4. 制备浓度为1 M的DMPO溶液。

5. 在离心管中加入130 μl的缓冲液,加入20 μl已配好的1 M的DMPO溶液,再加入20 μl底物储存液,10 μl的1 mM H2O2溶液,最后加入20 μl HRP触发反应。

6. 涡旋振荡离心管,加入到进样系统中,检测图谱。

7. 加样后调节光谱并得到图谱。各物质的终浓度为:100 mM DMPO,10 mM的底物,50 μM H2O2,10 μM HRP。

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数据和操作流程由Bruker公司友情提供

超氧阴离子和羟自由基检测(EPR)—DMPO货号:D048

超氧阴离子和羟自由基检测(EPR)—DMPO货号:D048
5,5-二甲基-1-吡咯啉-N-氧化物
DMPO
商品信息
储存条件:-20度保存,防潮,避光
运输条件:室温
分子式:

C6H11NO

分子量:

113.16

特点:

● 纯度高

● 杂质峰少

选择规格:
1ml

凑单关联产品TOP5

NO.1.    TEMP    单线态氧检测

NO.2.    BMPO    超氧阴离子和羟自由基检测

NO.3.    ROS Assay Kit    活性氧检测

NO.4.    SOD Assay Kit    超氧化物歧化酶(SOD)检测

NO.5.    Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric-    细胞凋亡检测

 

规格性状

image.png

质量约为1.1g

产品概述

由于具有潜在的致癌风险和促进衰老的作用,生物体内的自由基已成为研究的热点。 DMPO是研究自由基最常用的自旋捕获剂。 它适用于捕获氧自由基,尤其是超氧化物,并生成具有特征的EPR信号的加合物。 但是,大多数市售的DMPO包含会引起高背景的杂质。 因此,这些DMPO需要进一步纯化才能在EPR上进行实验。 Dojindo的DMPO实行严格的质量管控,没有杂质引起的背景问题,因此不需要任何预纯化处理。

产品特点

•超高纯度

•更高的信噪比

•无需预纯化

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同仁化学研究所 (Dojindo) 的DMPO没有杂质 (*) 检出

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以羟自由基的Fenton反应(黑色)和空白(蓝色)为例,同仁化学研究所(Dojindo)的峰更清晰,S/N比例更高

应用

自旋捕获剂,EPR(ESR)检测,超氧阴离子,羟基自由基

原理

自旋捕捉ESR技术是一种检测活性氧的最可靠的办法,它能提供具有特征的ESR信号。DMPO采用一种特殊的敏感方法,可以捕捉超氧阴离子和羟自由基等,分别产生独特的ESR光谱。因此它是探测生物系统内ROS的强有力工具。

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操作步骤

SOD清除超氧阴离子活性检测

1. 将15 μl的DMPO溶液和 50 μl的5 mM的次黄嘌呤加入到35 μl的0.1 M的磷酸盐缓冲液 (pH 7.8) 中。

2. 加入50 μl的待测SOD标准品或待测样品,涡旋振荡 1-2 s。

3. 加入50 μl的0.4 U/ml的黄嘌呤氧化酶之后立即涡旋振荡。

4. 放置一段时间 (例如 1 min) 将溶液转入ESR样品管中检测。

5. 通过峰值计算相对强度(DMPO-O2-/Mn2+)。

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C-,N-,S-基自由基的检测

1. 制备100 mM含有25 μM Diethylenetriaminepentaacetic Acid (DTPA)的磷酸盐缓冲液 (pH 7.4),作为过渡金属螯合剂。

2. 制备以下过氧化物酶底物:A) 100 mM 甲酸钠(HCOONa);B) 100 mM氰化钾(KCN);C) 100 mM叠氮钠(NaN3);D) 含有100 mM亚硫酸钠 (Na2SO3)的100 mM磷酸盐缓冲液 (pH 7.4)。

3. 制备4.0 mg/ml(~100 μM)的辣根过氧化物酶 (HRP)溶液和1 mM H2O2溶液。

4. 制备浓度为1 M的DMPO溶液。

5. 在离心管中加入130 μl的缓冲液,加入20 μl已配好的1 M的DMPO溶液,再加入20 μl底物储存液,10 μl的1 mM H2O2溶液,最后加入20 μl HRP触发反应。

6. 涡旋振荡离心管,加入到进样系统中,检测图谱。

7. 加样后调节光谱并得到图谱。各物质的终浓度为:100 mM DMPO,10 mM的底物,50 μM H2O2,10 μM HRP。

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数据和操作流程由Bruker公司友情提供

超氧阴离子和羟自由基检测(EPR)—BMPO货号:B568

超氧阴离子和羟自由基检测(EPR)—BMPO货号:B568
5-tert-Butoxycarbonyl-5-methyl-1-pyrroline-N-oxide
BMPO
商品信息
储存条件:-20度保存,防潮
运输条件:室温
分子式:

C10H17NO3&am

分子量:

199.25

特点:

● 纯度高

● 杂质峰少

● 灵敏度高

选择规格:
50mg

凑单关联产品TOP5

NO.1.    DMPO    超氧阴离子和羟自由基检测

NO.2.    TEMP    单线态氧检测

NO.3.    Calcein-AM/PI Double Staining Kit    活死细胞双染

NO.4.    ROS Assay Kit    活性氧检测

NO.5.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

 

产品概述

自旋捕捉技术是当今检测和鉴别不稳定自由基的最可靠的手段之一。顺磁共振波谱 (EPR) 捕捉剂能够成功的检测体内或体外生成的超氧自由基和羟自由基等。

BMPO是同仁化学研究所 (DOJINDO) 自主开发生产的新型高效、高稳定型自由基捕捉剂。它在捕捉自由基能力上优于PBN、DMPO等一般捕获剂,与自由基的结合能力更强,半衰期 (t½=23 min) 更长,ESR谱图能够明显的区别不同的自由基结构如:GS•和•OH。BMPO检测结果可靠性高、重复性强。由于具有高水溶性的特点,更利于水相体系自由基的研究,尤其是生物体系的自由基研究。

应用

自旋捕获剂,EPR(ESR)检测,超氧阴离子,羟基自由基

产品特点

•半衰期长,可检测自由基加合物

•高水溶性

•更高的信噪比

化学结构式

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操作步骤

常规检测步骤 (*本数据仅供参考,具体参数可能因仪器厂家的不同而适当调整)

检测芬顿 (Fenton) 反应所产生的羟自由基:

1. 将1.5 mg的BMPO溶解于5 ml的超纯水。

2. 取15 μl的BMPO溶液,75 μl的1 mM的H2O2和75 μl的100 μM的FeSO4加入到50 μl的超纯水中。

3. 放置一段时间 (例如1 min) 将溶液转入EPR样品管中检测。

4. 通过峰值计算相对强度。

检测黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶体系 (XO) 所产生的超氧自由基:

1. 溶液A:将1 mg的BMPO溶解于1 ml的浓度为50 mM的PBS溶液 (pH 7.4)。

2. 溶液B:用50 mM的PBS溶液 (pH 7.4) 配制含有1 mMDTPA和0.4 mM黄嘌呤的混合溶液。

3. 溶液C:用50 mM的PBS溶液 (pH 7.4) 配制含有0.1 U/ml的黄嘌呤氧化酶溶液。

4. 取15 μl溶液A,135 μl溶液B和10 μl溶液C混合。

5. 放置一段时间 (例如 8 min) 将溶液转入EPR样品管中检测。

6. 通过峰值计算相对强度。

实验例

(*本数据仅供参考,具体参数可能因仪器厂家的不同而适当调整)

*本数据均由Bruker公司EPR仪器检测得出,由于BMPO的分子结构在平面上下差异较大,使得图中BMPO/•OH的两种异构体的超精细结构常数较大能够被ESR分辨出来。本实验中BMPO/•OH的两种立体异构体与BMPO/•OOH的构成相似,两种BMPO结合物的适宜条件为:

构象异构体 (conformer)Ⅰ:

aN =13.47 G,aH

aHβ=15.31 G,aH

aHγ1 = 0.62 G

构象异构体 (conformer)Ⅱ:

a=13.56 G,aH

aHβ=12.3 G,aH

aHγ1 = 0.66 G

超氧化物检测操作流程

1. 用100 mM的PBS溶液 (pH 7.4) 制备浓度为25 μM的DTPA,作为过渡金属螯合剂。

2. 用100 mM PBS (pH 7.4)配制1 mM次黄嘌呤溶液。

3. 配制1 U/ml的黄嘌呤氧化酶溶液。

4. 将10 mg的BMPO溶于200 μl的PBS溶液中。(终浓度约为 250 mM)。

5. 向EP管中加入70 μl缓冲液。

6. 继续添加20 μl浓度为250 mM的BMPO和100 μl步骤2中准备的1 mM的次黄嘌呤溶液。

7. 加入10 μl黄嘌呤氧化酶触发反应,将EP管漩涡震荡后转移到扁平池。

8. 上样并调整参数,获得图谱。

溶液终浓度为:25 mM BMPO, 0.5 mM次黄嘌呤和0.05 U/ml的黄嘌呤氧化酶。

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羟自由基操作流程

1. 分别准备1 mM的FeSO4,10 mM的H2O2和250 mM的BMPO水溶液。

2. 向EP管中加入140 μl的超纯水。

3. 继续加入20 μl浓度为250 mM的BMPO和20 μl浓度为1 mM的FeSO4

4. 加入20 μl浓度为10 mM的H2O2,触发反应。

5. 混合并迅速转移至扁平池中。

6. 上样并调整参数,获得图谱。

溶液终浓度为:25 mM BMPO,0.1 mM FeSO4和1 mM H2O2

*建议实验人员做背景图片,以在EPR图谱中排除自选杂质的干扰。

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相关参考数据

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超氧化物信号强弱随时间的变化曲线和半衰期时间

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*BMPO检测超氧阴离子O2•-的半衰期 (pH=7.4) 更长。因此更适合长时间观察样品的实验。(如检测生物酶反应)