C31H30N2Na2O13S
716.62
C31H30N2Na2O13S
716.62
C25H20N3NaO6S
513.5
产品概述
XB-I是检测Mg的比色试剂。它微溶于水和乙醇,易溶于碱性溶液。XB-I的水溶液呈红色,在pH 9且Mg存在时转为红紫色。(最大波长:510 nm,摩尔吸光系数:49,000,检测范围0.02-0.4 ppm)。
C32H12BF24Na
886.2
C6H4Na2O8S2・H2O
332.22
C44H34N4O20S6・4H2O
1203.21
C12H8N2・H2O
198.22
C32H32N2O12
636.6
C11H9N3O2
215.21
C21H14N2O7S
438.41
C56H36BF48NaO8˙3H2O
1836.65
C8H8N6O6
284.19
C56H36BF48NaO8˙3H2O
1836.65
C10H10N2
158.2
关联产品
C23H24N4O2・H2O
406.48
C24H16BF4Na・2H2O
450.21
关联产品
C20H10N2Na2O4
388.28
C17H19BrN4Na2O4S・2H2O
537.34
分子式:
C20H12N3NaO7S
分子量:
461.38
C17H12NNaO8S2
445.4
C10AgNS2
256.14
关联产品
C19H15NO8
385.32
C19H12O8S
400.36
C15H11N3O
249.27
C14H22N2O8・H2O
364.35
关联产品
C10H22N4O8
326.3
C10H12N2Na4O8・4H2O
452.23
C25H20N6O7S2
580.59
产品详情
外观:黄色或棕色粉末
纯度:通过检测 (TLC)
反应式
WSTs产品说明
水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的,三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性,然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性,但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基,它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐,它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团,颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高,因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。
电子转移到四唑盐的机制
技术信息
图2.WST甲臜染料的吸收光谱
参考文献
1) M. Ishiyama, et al., Anal. Sci., 12, 515 (1996).
分子式:
C10H14K2N2O8・2H2O
分子量:
404.45
C4H7NO4
133.1
C6H11NO5
177.16
C19H13ClIN5O2
505.7
外观:浅黄色或橙黄色粉末
纯度:>95.0% (Titration)
反应式
C40H32Cl2N8O2
727.64
产品描述
TB微溶于水,但难溶于丙酮、乙酸乙酯和醚。甲醇、乙醇和四氯甲烷等其他有机溶剂可以很好地溶解TB。由于TB可被脱氢酶轻易地还原产生紫红色甲臜染料凝聚物,因此它可以用于组织样品中的脱氢酶检测。
反应式
产品详情
外观:浅黄色或浅橙黄色粉末
摩尔吸光度:>52,500 (254 nm)
C40H30Cl2N10O6
817.64
产品描述
Nitro-TB可被热水或热的甲醇溶解,丙酮和醚等有机溶剂不能溶解Nitro-TB。Nitro-TB可容易地被脱氢酶还原成紫色甲臜染料凝聚物,它可用于在琼脂糖凝胶上检测脱氢酶。
反应式
产品详情
外观:黄色晶体状粉末
纯度:>98.0%
摩尔吸光度:>63,000 (257 nm)
C25H16N7NaO8S2
629.56
产品详情
外观:橙色或橙棕色粉末
纯度:通过检测 (TLC)
摩尔吸光度(pH8):≥24,000 (320 nm左右)
反应式
WSTs产品说明
水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的,三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性,然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性,但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基,它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐,它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团,颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高,因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。
电子转移到四唑盐的机制
技术信息
图2.WST甲臜染料的吸收光谱
参考文献
1) WST-1: M. Ishiyama, et al., Chem. Pharm. Bull, 41, 1118 (1993),
2) M. Ishiyama, et al., In Vitro Toxicol, 8, 187 (1995),
3) S. Shirahata, et al., Biosci. Biotech. Biochem., 59, 345 (1995),
4) K. Teruya, et al., Biosci. Biotech. Biochem., 59, 341 (1995),
5) Y. Kayamori, et al., Clin. Biochem., 30, 595 (1997);
6) W. Zhang, et al., FASEB J., 20, 2496 (2006);
7) S. Yang, et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 319, 595 (2006);
8) D. Inokuma, et al., Stem Cells, 24, 2810 (2006);
9) T. Ishikawa, et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 26, 1998 (2006).
关联产品
C52H44N12Na2O16S6
1331.35
产品详情
外观:黄色或浅棕绿色粉末
纯度:通过检测 (TLC)
反应式
WSTs产品说明
水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的,三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性,然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性,但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基,它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐,它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团,颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高,因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。
电子转移到四唑盐的机制
技术信息
图2.WST甲臜染料的吸收光谱
参考文献
1) M. Ishiyama, et al., Anal. Sci., 12, 515 (1996).
C19H10IN6NaO10S2
696.34
产品详情
外观:浅黄棕色或浅棕色粉末
纯度:通过检测 (TLC)
反应式
WSTs产品说明
水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的,三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性,然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性,但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基,它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐,它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团,颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高,因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。
电子转移到四唑盐的机制
技术信息
图2.WST甲臜染料的吸收光谱
C19H11IN5NaO8S2
651.35
产品详情
外观:浅黄棕色粉末
纯度:通过检测 (TLC)
反应式
WSTs产品说明
水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的,三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性,然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性,但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基,它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐,它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团,颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高,因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。
电子转移到四唑盐的机制
技术信息
图2.WST甲臜染料的吸收光谱
C12H18INO3
351.18
C12H16N4O7
328.28
C16H22Cl2N2・2H2O
349.3
C12H18NNaO4S・2H2O
331.36
产品概述
新型Trinder’s试剂是Dojindo最先开发的一种基于氧化的显色试剂,是一种高水溶性苯胺衍生物,常用作诊断试剂色原。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。Dojindo的色原纯度高,稳定性好,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,色原在与4-氨基安替比林 (4-AA) 或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH) 的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高1.5-2倍,然而4-AA溶液比MBTH溶液更稳定。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。葡萄糖、酒精、酰基-辅酶A和胆固醇可以用于检测与色原及4-AA偶合的那些底物。现有10种色原。 对于特定的底物,试验不同种类的色原对开发最佳的检测系统是必需的。
产品特征描述
新型Trinder’s试剂的特征描述
以上摩尔吸光系数为各种Trinder’s试剂在H2O2/POD催化下,与4-AA在37℃,反应10分钟生成的产物,
在各自的最大检测波长处以及合适的pH范围内检测得到的。
反应原理
氧化反应
C13H20NNaO4S・H2O
327.37
产品概述
新型Trinder’s试剂是Dojindo最先开发的一种基于氧化的显色试剂,是一种高水溶性苯胺衍生物,常用作诊断试剂色原。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。Dojindo的色原纯度高,稳定性好,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,色原在与4-氨基安替比林 (4-AA) 或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH) 的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高1.5-2倍,然而4-AA溶液比MBTH溶液更稳定。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。葡萄糖、酒精、酰基-辅酶A和胆固醇可以用于检测与色原及4-AA偶合的那些底物。现有10种色原。 对于特定的底物,试验不同种类的色原对开发最佳的检测系统是必需的。
产品特征描述
新型Trinder’s试剂的特征描述
以上摩尔吸光系数为各种Trinder’s试剂在H2O2/POD催化下,与4-AA在37℃,反应10分钟生成的产物,
在各自的最大检测波长处以及合适的pH范围内检测得到的。
反应原理
氧化反应
C12H18NNaO4S・H2O
313.35
产品概述
新型Trinder’s试剂是Dojindo最先开发的一种基于氧化的显色试剂,是一种高水溶性苯胺衍生物,常用作诊断试剂色原。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。Dojindo的色原纯度高,稳定性好,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,色原在与4-氨基安替比林 (4-AA) 或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH) 的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高1.5-2倍,然而4-AA溶液比MBTH溶液更稳定。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。葡萄糖、酒精、酰基-辅酶A和胆固醇可以用于检测与色原及4-AA偶合的那些底物。现有10种色原。 对于特定的底物,试验不同种类的色原对开发最佳的检测系统是必需的。
产品特征描述
新型Trinder’s试剂的特征描述
以上摩尔吸光系数为各种Trinder’s试剂在H2O2/POD催化下,与4-AA在37℃,反应10分钟生成的产物,
在各自的最大检测波长处以及合适的pH范围内检测得到的。
反应原理
氧化反应
C12H18NNaO5S・2H2O
347.36
产品概述
新型Trinder’s试剂是Dojindo最先开发的一种基于氧化的显色试剂,是一种高水溶性苯胺衍生物,常用作诊断试剂色原。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。Dojindo的色原纯度高,稳定性好,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,色原在与4-氨基安替比林 (4-AA) 或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH) 的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高1.5-2倍,然而4-AA溶液比MBTH溶液更稳定。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。葡萄糖、酒精、酰基-辅酶A和胆固醇可以用于检测与色原及4-AA偶合的那些底物。现有10种色原。 对于特定的底物,试验不同种类的色原对开发最佳的检测系统是必需的。
产品特征描述
新型Trinder’s试剂的特征描述
以上摩尔吸光系数为各种Trinder’s试剂在H2O2/POD催化下,与4-AA在37℃,反应10分钟生成的产物,
在各自的最大检测波长处以及合适的pH范围内检测得到的。
反应原理
氧化反应
C20H26N2Na2O8S2・4H2O
604.62
氧化反应
产品简介
SAT-3是一种稳定的、高水溶性的o-Tolidine (3,3‘-二甲基联苯胺)类似物。它很容易在过氧化物酶和过氧化氢酶存在下,被氧化为绿色的显色底物(pH 4~6)。
TMBZ需要有有机溶剂和表面活性剂才可以溶解,而SAT-3仅用缓冲液即可溶剂。并且,SAT-3溶液只需要常温避光即可保存。本试剂的最大波长在675 nm处。
操作步骤
1. 将1 ml的100 mM SAT-3 solution加至含有30 mM过氧化氢酶溶液的8 ml的50 mM citrate缓冲液(pH 4)中,制成assay solution。
2. 向96孔板的每孔中加入100-200 μl assay solution,37℃培养5-30 min。
3. 检测670 nm处吸光度或者每孔加入50 μl的4 M硫酸,检测490 nm处吸光度。
参考文献
1) M. Mizoguchi, M. Ishiyama, M. Shiga and K. Sasamoto, “Sensitive Chromogenic Substrate for Detecting Peroxidase Activity”, Anal. Commun, 1998, 35, 179.
操作和储存条件
规格
性状:白色至浅棕色粉末
纯度(HPLC):≥95.0%
水中溶解度:通过检测(透明,无色至微蓝色)
pH(25℃):6.0~8.0 (25℃)
含水量:9.0~14.0%
IR谱图:一致
操作和储存条件
0-5℃,避光
C16H14ClN5
311.77
C52H59ClN4O19
1079.49
特点:
● 激发光557nm,发射光581nm
● 红色荧光与罗丹明相似
● 定位准确,信号强度高
产品性状
规格
性状 : 本产品为暗紫色固体,使用时将固体溶解于无水DMSO中
纯度(HPLC): 98%以上
荧光光谱图 : 符合实验要求
NMR光谱图 : 符合实验要求
处理条件
保存方法 : 避光冷冻
产品概述
在所有的钙离子指示剂中,Rhod 2荧光信号的波长最长。它具有和罗丹明类似的激发和发射波长,分别为557 nm和581 nm。这样的激发波长使得我们很容易就能找到氩和氪光源的激光。尽管有人认为Rhod 2的荧光信号仅仅将钙复合物的荧光增加了数倍,但是Dojindo的Rhod 2由于具有很高的纯度,能有效地将钙荧光信号增加80-100倍左右,使得它的信号强度在所有的钙离子探针里面是最强的。所以,我们强烈建议使用Rhod 2作为探针用激光显微镜来检测细胞内的钙离子情况。有报道称,特别是在神经组织切片培养方面Rhod 2具有定位点的轮廓线更加清晰的特点。Rhod 2和钙离子的解离常数为(Kd=1.0 mM),在所有的钙离子荧光探针中是最高的,为监测钙离子浓度提供了一个广阔的范围。Rhod 2-AM是一种Rhod 2的乙酰甲酯衍生物,能非常容易的通过AM法负载到细胞内。
原理
与其他探针一样,Rhod 2-AM是将四个羧基全部作为脂溶性乙基甲酯体的细胞膜透明性物质。可以很容易地被细胞吸收。通过细胞内的脂肪酶水解成为Rhod 2,可以检测细胞内Ca2+。
激发发射波长
E x :557 nm
Em: 581 nm
溶解比例
溶解比例:1mg/ml(DMSO),50mg/ml(三氯甲烷)
注意事项
1、试剂容易吸潮,从冰箱取出后,请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂极其微量,
开封前,请轻弹管壁几次,以保证粉末落入管底。
2、第一次使用时, 建议母液即配即用。试剂溶解后尽可能在短时间内使用,以保证实验效果。
3、溶解液 DMSO 需要保证新鲜无水,否则将会导致 AM 体水解,荧光染料无法进入细胞影响实验效果。
4、母液遇水极易分解,如果不能一次用完,建议分装保存,例如分装成 5 μl/管,用封口膜封口,
并用铝箔纸包裹,放在一个密闭性能好的塑料袋中,并放入一包干燥剂,在≤-20℃密封避光保存。
5、建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等,找到最佳实验条件
参考文献
1) R. Y. Tsien, “New Calcium Indicators and Buffers with High Selectivity against Magnesium and Protons: Design, Synthesis, and Properties of Prototype Structures”, Biochemistry, 1980, 19 (11), 2396.
2) R. Y. Tsien, T. Pozzan and T. J. Rink, “Calcium Homeostasis in Intact Lymphocytes: Cytoplasmic Free Calcium Monitored with a New, Intracellularly Trapped Fluorescent Indicator”, J. Cell Biol., 1982, 94, 325.
3) M. B. Feinstein, J. J. Egan, R. I. Sha’afi and J. White, “The Cytoplasmic Concentration of Free Calcium Inplatelets Is Controlled by Stimulators of Cyclic AMP Production (PGD2, PGE1, FORSKOLIN)”, Biochem. Biophys. Res. Commun., 1983, 113, 598.
4) N. Miyoshi, K. Hara, S. Kimura, K. Nakanishi and M. Fukuda, “A New Method of Determining Intracellular Free Ca2+ Concentration Using Quin 2-fluorescence”, Photochem. Photobiol., 1991, 53 (3), 415.
Q&A
Q1: 细胞内检测钙离子的试剂种类都有什么,选择什么样的比较好呢? |
A1: 根据检测仪器和检测波长有很多的选择,产品后面标有AM的试剂是可以通过细胞膜的 有很多种相似的试剂,其特点如下: 【Fura 2】 •双波长激发 激发(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、发射:λem=500 nm •解离常数:224 nmol/L •因为是荧光强度的比值、可以有效的减小误差 =>細胞内Ca浓度计算。 •该试剂被使用的最多 •必须要更换过滤片、会耽误一些时间。 【Fluo 3】 •单波长激发 激发:λex=508 nm、发射:λem=527 nm •解离常数:400 nmol/L •因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小 (不会受到NADH、NADPH的影响) •可以使用Ar激光激发装置。 •不适合切片中钙离子的检测 •【Fluo 4】 •单波长激发 •激发:λex=495 nm、发射:λem=518 nm •解离常数:360 nmol/L •与Fluo3相比对荧光强度更高。 •因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小 •(不会受到NADH、NADPH的影响) •可以使用Ar激光激发装置。 •与Fluo3相比对細胞的毒性低 •【Indo 1】 •单波长激发 •激发:λex= 330 nm、发射(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm) •解离常数:250 nmol/L •由于不需要更换滤光片,可以很快地检测细胞内钙离子浓度变化以及像心肌细胞运动中钙离子的变化 •(需要两台检测仪器) •【Rhod 2】 •单波长激发 •激发:λex=553 nm、发射:λem=576 nm •解离常数:1.0 μmol/L •因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小 •(不会受到NADH、NADPH的影响) •可以使用Ar激光激发装置。 •【Quin 2】 •单波长激发 •激发:λex=339 nm、发射:λem=492 nm •解离常数:110 nmol/L •最早开发的产品 |
C26H23K4N3O10
693.87
特点:
● 激发波长339nm,发射波长492nm
● 能够轻易的穿过细胞膜
产品性状
规格
性状 : 本产品为淡黄色粉末,可溶于水
纯度(HPLC): 95%以上
摩尔吸光系数 : 34,000 以上(240 nm附近)
水溶性: 符合要求
处理条件
保存方法 : 避光,常温
产品概述
Quin 2能够和钙(logKCaY=7.1)形成稳定的荧光螯合物,但和镁却不行(logMgY=2.7)。这种螯合物在525 nm的发射波长处有着很高的量子产量(0.14),Quin 2的激发波长为339 nm,发射波长为492 nm。Quin 2-AM是Quin 2的乙酰甲酯衍生物,能够轻易地穿过细胞膜。进入细胞后,酯结构立刻被水解,形成Quin 2。
原理
Quin 2能够和钙(logKCaY=7.1)形成稳定的荧光螯合物,但和镁却不行(logMgY=2.7)。这种螯合物在525 nm的发射波长处有着很高的量子产量(0.14),Quin 2的激发波长为339 nm,发射波长为492 nm。Quin 2-AM是Quin 2的乙酰甲酯衍生物,能够轻易地穿过细胞膜。进入细胞后,酯结构立刻被水解,形成Quin 2。
激发发射波长
E x :339 nm
Em: 492 nm
溶解比例
溶解比例:84 mg/100 mL(水)
注意事项
1、试剂容易吸潮,从冰箱取出后,请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂极其微量,开封前,请轻弹管壁几次,以保证粉末落入管底。
2、第一次使用时, 建议母液即配即用。试剂溶解后尽可能在短时间内使用,以保证实验效果。
3、溶解液 DMSO 需要保证新鲜无水,否则将会导致 AM 体水解,使荧光染料无法进入细胞,影响实验效果。
4、母液遇水极易分解,如果不能一次用完建议分装保存,例如分装成 5 μl/管,用封口膜封口,并用铝箔纸包裹,放在一个密闭性能好的塑料袋中,并放入一包干燥剂,在≤-20℃密封避光保存。
5、建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等,找到最佳实验条件
文献
1) R. Y. Tsien, “New Calcium Indicators and Buffers with High Selectivity against Magnesium and Protons: Design, Synthesis, and Properties of Prototype Structures”, Biochemistry, 1980, 19 (11), 2396.
2) R. Y. Tsien, T. Pozzan and T. J. Rink, “Calcium Homeostasis in Intact Lymphocytes: Cytoplasmic Free Calcium Monitored with a New, Intracellularly Trapped Fluorescent Indicator”, J. Cell Biol., 1982, 94, 325.
3) M. B. Feinstein, J. J. Egan, R. I. Sha’afi and J. White, “The Cytoplasmic Concentration of Free Calcium Inplatelets Is Controlled by Stimulators of Cyclic AMP Production (PGD2, PGE1, FORSKOLIN)”, Biochem. Biophys. Res. Commun., 1983, 113, 598.
4) N. Miyoshi, K. Hara, S. Kimura, K. Nakanishi and M. Fukuda, “A New Method of Determining Intracellular Free Ca2+ Concentration Using Quin 2-fluorescence”, Photochem. Photobiol., 1991, 53 (3), 415.
Q&A
Q1: 细胞内检测钙离子的试剂种类都有什么,选择什么样的比较好呢? |
A1: 根据检测仪器和检测波长有很多的选择,产品后面标有AM的试剂是可以通过细胞膜的
有很多种相似的试剂,其特点如下: 【Fura 2】 •双波长激发 激发(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、发射:λem=500 nm •解离常数:224 nmol/L •因为是荧光强度的比值、可以有效的减小误差 =>細胞内Ca浓度计算。 •该试剂被使用的最多 •必须要更换过滤片、会耽误一些时间。 【Fluo 3】 •单波长激发 激发:λex=508 nm、发射:λem=527 nm •解离常数:400 nmol/L •因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小 (不会受到NADH、NADPH的影响) •可以使用Ar激光激发装置。 •不适合切片中钙离子的检测 •【Fluo 4】 •单波长激发 •激发:λex=495 nm、发射:λem=518 nm •解离常数:360 nmol/L •与Fluo3相比对荧光强度更高。 •因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小 •(不会受到NADH、NADPH的影响) •可以使用Ar激光激发装置。 •与Fluo3相比对細胞的毒性低 •【Indo 1】 •单波长激发 •激发:λex= 330 nm、发射(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm) •解离常数:250 nmol/L •由于不需要更换滤光片,可以很快地检测细胞内钙离子浓度变化以及像心肌细胞运动中钙离子的变化 •(需要两台检测仪器) •【Rhod 2】 •单波长激发 •激发:λex=553 nm、发射:λem=576 nm •解离常数:1.0 μmol/L •因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小 •(不会受到NADH、NADPH的影响) •可以使用Ar激光激发装置。 •【Quin 2】 •单波长激发 •激发:λex=339 nm、发射:λem=492 nm •解离常数:110 nmol/L •最早开发的产品 |