伯乐Bio-Rad1703592CHEF Bacterial Genomic DNA Plug Kit，CHEF细菌基因组DNA插块试剂盒，现货
伯乐bio-rad1703592chef bacterial genomic dna plug kit，chef细菌基因组dna插块试剂盒，产品简介：
产品品牌：伯乐bio-rad
产品名称：chef细菌基因组dna插块试剂盒
英文名称：chef bacterial genomic dna plug kit
产品货号：1703592
产品规格：套
伯乐bio-rad1703592chef bacterial genomic dna plug kit，chef细菌基因组dna插块试剂盒，产品说明：
bacteria preparation kit for pfge, includes proteinase k, cleancut agarose, lysozyme, required buffers, screened cap, 2 plug molds, for 100 plugs
用于pfge的细菌制备试剂盒，包括蛋白酶k、洁净琼脂糖、溶菌酶、所需缓冲液、筛选盖、2个塞模，用于100个塞
chef基因组dna桶块试剂盒
chef基因组dna插块试剂意为pfge制备完整的染色体大小的dna提供了方便。bio-fad 提供3种试剂意，分别用于制备细菌(溶菌酶敏感) 、哺乳动物的基因组dna及酵母染色体(yacs)。 每个试剂盒包括制备100个插块所需要的酶、反应缓冲液和限制性酶切cleanout"琼脂糖，也包括一次性插块模和筛帽以简化插块处理。每个试剂盒都经过严格测试，保证所制备的基因组dna能被限制性酶切并可在chef电泳系统中分离。
伯乐bio-rad1703592chef bacterial genomic dna plug kit，chef细菌基因组dna插块试剂盒，产品分类订购信息：
components:
伯乐bio-rad 9702259 cell suspension buffer细胞悬浮缓冲液
伯乐bio-rad 9702260 10x wash buffer10倍洗涤缓冲液
伯乐bio-rad 9702261 proteinase k buffer蛋白酶k缓冲液
伯乐bio-rad 9702262 proteinase k stock蛋白酶k原液
伯乐bio-rad 1703594 agarose, cleancut™ 2% solution琼脂糖，纯切™ 2%溶液
伯乐bio-rad 9702264 chef genomic dna plug kit lysozyme chef基因组dna插入试剂盒溶菌酶
伯乐bio-rad 9702265 chef genomic dna plug kit lysozyme buffer基因组dna插入试剂盒溶菌酶缓冲液
伯乐bio-rad1703592chef bacterial genomic dna plug kit，chef细菌基因组dna插块试剂盒，产品订购信息：
伯乐bio-rad 1703591 chef mammalian genomic dna plug kit哺乳动物基因组dna插块试剂盒
伯乐bio-rad 1703592 chef bacterial genomic dna plug kit chef细菌基因组dna插块试剂盒
伯乐bio-rad 1703593 chef yeast genomic dna plug kit酵母基因组dna染色体试剂盒
伯乐bio-rad 1703594 cleancut agarose, 2%，1
伯乐Bio-Rad1703592CHEF Bacterial Genomic DNA Plug Kit，CHEF细菌基因组DNA插块试剂盒，现货
伯乐bio-rad1703592chef bacterial genomic dna plug kit，chef细菌基因组dna插块试剂盒，产品简介：
产品品牌：伯乐bio-rad
产品名称：chef细菌基因组dna插块试剂盒
英文名称：chef bacterial genomic dna plug kit
产品货号：1703592
产品规格：套
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bacteria preparation kit for pfge, includes proteinase k, cleancut agarose, lysozyme, required buffers, screened cap, 2 plug molds, for 100 plugs
用于pfge的细菌制备试剂盒，包括蛋白酶k、洁净琼脂糖、溶菌酶、所需缓冲液、筛选盖、2个塞模，用于100个塞
chef基因组dna桶块试剂盒
chef基因组dna插块试剂意为pfge制备完整的染色体大小的dna提供了方便。bio-fad 提供3种试剂意，分别用于制备细菌(溶菌酶敏感) 、哺乳动物的基因组dna及酵母染色体(yacs)。 每个试剂盒包括制备100个插块所需要的酶、反应缓冲液和限制性酶切cleanout"琼脂糖，也包括一次性插块模和筛帽以简化插块处理。每个试剂盒都经过严格测试，保证所制备的基因组dna能被限制性酶切并可在chef电泳系统中分离。
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伯乐bio-rad 9702259 cell suspension buffer细胞悬浮缓冲液
伯乐bio-rad 9702260 10x wash buffer10倍洗涤缓冲液
伯乐bio-rad 9702261 proteinase k buffer蛋白酶k缓冲液
伯乐bio-rad 9702262 proteinase k stock蛋白酶k原液
伯乐bio-rad 1703594 agarose, cleancut™ 2% solution琼脂糖，纯切™ 2%溶液
伯乐bio-rad 9702264 chef genomic dna plug kit lysozyme chef基因组dna插入试剂盒溶菌酶
伯乐bio-rad 9702265 chef genomic dna plug kit lysozyme buffer基因组dna插入试剂盒溶菌酶缓冲液
伯乐bio-rad1703592chef bacterial genomic dna plug kit，chef细菌基因组dna插块试剂盒，产品订购信息：
伯乐bio-rad 1703591 chef mammalian genomic dna plug kit哺乳动物基因组dna插块试剂盒
伯乐bio-rad 1703592 chef bacterial genomic dna plug kit chef细菌基因组dna插块试剂盒
伯乐bio-rad 1703593 chef yeast genomic dna plug kit酵母基因组dna染色体试剂盒
伯乐bio-rad 1703594 cleancut agarose, 2%，1
ReliaPrep™ FFPE gDNA Miniprep System(石蜡包埋样品基因组DNA提取试剂盒)
目录价：
货号
品牌
产品线
货号：PAK-1
包含了精确测定生物指示剂含菌量所需要的所有材料。
生物指示剂需要进行含菌量的验证，Mesa labs提供的含菌量测定试剂盒，方便可以进行测试。
试剂盒中包含：
详细的含菌量测定说明书
含有240mL培养基的250ml的Wheaton玻璃瓶
4个各装有4颗6mm玻璃珠的19.5×150mm灭菌平底试管
12个16×125mm灭菌稀释空试管
8支1mL移液管、8支2mL移液管、2支5mL移液管、2支10mL移液管
货号：PAK-1 全套产品
PAK/M 单独出售的培养基，240ml
SORFA 硕华 蛋白电泳类产品
免疫印迹 Western Blot
免疫印迹实验（蛋白质印迹法）即Western Blot。其基本原理是先通过凝胶电泳分离细胞或组织的总蛋白质，然后把蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，最后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
Sorfa 硕华 PAGE预混胶试剂盒
传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂盒配制凝胶操作繁琐，如果同时配制多块胶，还需计算每个组分所需用量，且因不同组分需要量不同，每次需调节移液枪，耗时耗力。为节省科研用户的宝贵时间，SORFA特推出PAGE预混胶试剂盒，适用于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
试剂盒包含：
分离胶A (200ml) 、分离胶B (200ml) 、 浓缩胶A (75ml) 和 浓缩胶B (75ml)
试剂盒配套提供APS和TEMED
产品特色：
*制胶简单快捷
1.分离胶和浓缩胶配制简化：只需A液+B液（等比例混合）、10%APS、TEMED
2.无需计算所需工作体积，不再需要多次调枪
3.简化传统制胶流程，缩短制胶时间，最少只需要2min
*无须冷藏，室温储存即可，有效期长达2年
*缩短实验流程，一天可多次跑胶
可耐受最高260V分离电压，将凝胶电泳时间从1-2小时缩短至30min
*有6%、8%、10%、12%、15%五个不同浓度可供选择
订购信息：
| 货号 | 产品描述 | 规格 | 单位 |
| SS0106 | 6% PAGE预混胶试剂盒 | 100 Tests | 盒 |
| SS0108 | 8% PAGE预混胶试剂盒 | 100 Tests | 盒 |
| SS0110 | 10% PAGE预混胶试剂盒 | 100 Tests | 盒 |
| SS0112 | 12% PAGE预混胶试剂盒 | 100 Tests | 盒 |
| SS0115 | 15% PAGE预混胶试剂盒 | 100 Tests | 盒 |
SORFA之所以坚持APS和TEMED独立使用，而不进一步“预混”和“改良”，目的是追求产品质量的绝对稳定，保证实验结果稳定可靠。并且SORFA PAGE预混胶试剂盒可以在常温下进行储存，生产日后效期长达2年。
Sorfa 硕华 快速转膜液
快速转膜液（20X）是SORFA研发的一款20倍浓缩的高效转膜液，转膜过程无需使用甲醇，且仅需20-30分钟，就能快速、高效地将蛋白转移到印迹膜（PVDF或硝纤膜）上。SORFA快速转膜液（20X），快速、安全、高效！
订购信息：
| 货号 | 产品描述 | 规格 | 单位 |
| SS0405 | 500ml快速转膜液（20X） | 500ml | 盒 |
| SS0405A | 500ml快速转膜液（10X） | 500ml | 盒 |
Sorfa 硕华 通用抗体稀释液
通用型抗体稀释液是一种即用型的，适合于稀释所有免疫抗体测定（Immunofluorescence, IHC,ELISA, WB）实验中的抗体。该试剂可用于一抗或二抗的稀释和配制，稀释后的抗体，在4℃保存可使用长达六个月。稀释液中加入了多种抗体结合反应增强剂及稳定剂，能够增加抗体的溶解度和稳定性，增强
免疫反应，降低非特异的背景颜色，提高实验的特异性和灵敏度，可反复使用，节约宝贵的抗体。试剂中不含有动物源的蛋白，适合于所有类型抗体稀释，包括HRP，AP标记的抗体。
订购信息：
| 货号 | 产品描述 | 规格 | 单位 |
| SS0201 | 100ml通用型抗体稀释液 | 100ml | 盒 |
| SS0205 | 500ml通用型抗体稀释液 | 500ml | 盒 |
| SS0305 | 500ml高效Western封闭液 | 500ml | 盒 |
其他蛋白电泳类产品：
| 货号 | 产品名称 | 包装规格 | 单位 |
| SS1001 | 三色预染蛋白Marker(10-245 kDa) | 250ul/支 | 包 |
| SS1002 | 250ul/支*2 | 包 | |
| SS1005 | 250ul/支*5 | 包 | |
| SS1101 | 三色预染蛋白Marker(10-180 kDa） | 250ul/支 | 包 |
| SS1102 | 250ul/支*2 | 包 | |
| SS1105 | 250ul/支*5 | 包 | |
| SS0901 | BCA蛋白定量试剂盒 | 500Tests | 盒 |
| SS0501 | 强RIPA细胞裂解液 | 100ml | 瓶 |
| SS0601 | 中度RIPA细胞裂解液 | 100ml | 瓶 |
| SS1701 | 超敏ECL发光液（fg级） | A液B液各50ml | 包 |
| SS1801 | 高敏ECL发光液（pg级） | A液B液各25ml | 包 |
| SS0801 | 蛋白酶抑制剂混合液 (100×，不含EDTA） | 1ml | 包 |
| SS0810 | 10*1ml | 包 | |
| SS1601 | 蛋白印迹膜再生液 | 100ml | 瓶 |
| SS1605 | 500ml | 瓶 | |
| SS1501 | 一步法蛋白染胶液（适用于变性胶） | 100ml | 瓶 |
| SS1505 | 500ml | 瓶 | |
| SS1310 | 5× 蛋白上样缓冲液（还原性） | 1 ml/支*10 | 包 |
| SS1405 | 10×SDS Tris-Gly电泳缓冲液 | 500ml | 盒 |
DNA电泳类产品：
| 货号 | 产品名称 | 包装规格 | 单位 |
| SS2201 | 琼脂糖 | 100g | 瓶 |
细胞生物学试剂：
| 货号 | 产品名称 | 包装规格 | 单位 |
| SS2401 | 无血清快速细胞冻存液 | 100ml | 瓶 |
| SS2301 | CCK-8细胞增殖与活性检测试剂盒 | 5ml | 瓶 |
| SS1901 | Lipo2000 转染试剂 | 0.75ml | 包 |
| SS1902 | 1.5ml | 包 | |
| SS2001 | Lipo3000 转染试剂 | 0.25ml | 包 |
| SS2003 | 0.75ml | 包 | |
| SS2101 | LipoRNAiMAX 转染试剂 | 0.25ml | 包 |
| SS2102 | 0.5ml | 包 |
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凑单关联产品TOP5
NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.2. Calcein-AM/PI Double Staining Kit 活死细胞双染检测
NO.3. Cell Viability Assay Kit 细胞增殖/毒性检测
NO.4. NAD/NADH Assay Kit-WST NAD/NADH检测
NO.5. Biofilm Formation Assay 生物被膜形成量/抑制能力检测
产品概述
使用水溶性四唑盐WST-8作为显色物质的微生物比色法检测试剂盒。微生物通过能量代谢活动在细胞内生成NAD(P)H，WST-8在电子载体的作用下被NAD(P)H还原成水溶性的甲臜产物(橙色)。甲臜产物的生成量与微生物的能量代谢活性成正比例关系。因此，可以通过橙色的显色程度确认微生物的存活率和活性。
本产品由同仁化学研究所与日本福冈县工业技术中心生物食品研究所共同开发。
检测时间大幅缩短
传统的微生物活力检测一般采用克隆形成实验(Colony Formation Assay)或通过增殖造成的混浊等目视评价方法。这些方法需要的时间很长而且操作繁杂需要一定的熟练度才可以成功检测。而使用本试剂盒检测大肠杆菌时，相对于传统寒天培地法长达22小时的检测时间，本试剂盒仅需要8小时即可检测。(1 CFU/ml)
操作上更加简单快捷，培养后只需要加入试剂即可。检测时，在96孔板内准备好微生物悬浊液后加入试剂，在培养箱内通过微生物代谢活性开始显色。
大肠杆菌的增殖检测例
<检测步骤>
1.将大肠杆菌(NBRC3972)在TSBYE培养基中进行预培养。 2.用Mueller-Hinton(以下略称为MHB)配制成108 CFU/ml的大肠杆菌悬浊液，再用MHB制成10倍稀释系列悬浊液。 3.使用多通道移液器将不同菌体密度的大肠杆菌加入至96孔板中(每孔190 μl)。 4.使用多通道移液器向各孔中加入10 μl显色试剂。 5.为了防止蒸发和污染，用透明密封贴(PCR用等)贴在孔板上，置于酶标仪(VersaMax, 日本Molecular Devices)中。 6.用动力学测定模式(Kinetics)每隔15 min检测一次460 nm处吸光度直至24 h。(37℃)
<检测结果和定量性的确认>
下图是随时间变化的大肠杆菌检测的结果。96孔板的最左列是高密度(约108 CFU/ml)，
越往右密度越低，大约每隔1 h各列依次开始显色。
下图是图表化的大肠杆菌检测的结果。以“达到可以目视的吸光度值0.5所需要的时间(h)”为y轴，以各菌体密度(CFU/ml)为x轴作图。如下面的直线关系式，确认检测大肠杆菌的定量性。
y= -0.43Ln(x)+8.01
当x =1时，即1CFU/ml时，y =8.01。因此得知，1个微生物的检测大约需要8 h。也就是说，经过大约8 h培养后，吸光度如果没变化的话可以判定大肠杆菌阴性。
灵敏度更高
用容易分辨的“颜色”代替难以分辨的“浑浊度变化”
麦氏(McFarland)比浊法是通过菌液中的浑浊度来判断活菌数浓度的方法。而本试剂盒是通过颜色的变化检测活菌数的浓度。因肉眼的极限，使用比浊法无法判断的低浓度细菌活性，可以用灵敏度更高的本试剂盒进行检测。
下面是使用微生物定量法检测水溶性维他命之一的维他命B6的检测例。与传统的比浊法相比，可以在更短时间内更灵敏的进行定量。
维他命B6的微生物定量例
<检测步骤>
1.向96孔板的各孔中加入90 μl维他命定量用培养基。 2.向96孔板的各孔中加入90 μl标准溶液或样品溶液。 3.将10 μl配置好的各种需要维他命的菌种液和10 μl检测试剂加入孔中，30℃或37℃下培养一段时间。 4.将孔板置于酶标仪，使用终点(End Point)模式检测460 nm处吸光度。加入传统法的检测试剂，检测610 nm处的吸光度(浑浊度)。
使用微生物：Saccharomyces cerevisiae ATCC9080
使用培养基：维他命B6定量用基础培养基
培养温度：30℃
标准物质：吡哆醇盐酸盐
<检测结果和定量性的确认>
下图是本方法(WST法)和传统法的直线性的比较结果。本方法在培养24 h时，0.02~1 ng/ml的浓度范围内呈直线性。而传统法在培养24 h时，灵敏度仍达不到检测标准，需要将培养时间延长至48 h才能与本方法进行比较。
药物耐受性的实验例
<检测步骤>
1.将金黄葡萄菌(SA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分别播种至96孔板中。然后添加各浓度的抗生素。 2.在37℃下培养6 h，添加试剂后再培养2 h进行显色反应。
<检测结果和定量性的确认>
SA：Staphylococcus aureus
MRSA：Methicilin-resistant Staphylococcus aureus
传统方法对比
与传统抗菌性能实验(Spot-on-lawn法)的对比
抗菌性能检测的应用例
同时使用传统的Spot-on-lawn法(以下简称Spot法)和WST法进行抗菌性能对比实验。Spot法需要用目视的方法确认阻止圆的有无，而且检测所需的时间也更长。WST法的检测结果与传统法的结果相关性一致，而且可以在更短的时间内完成检测。下面是Spot法和WST法的抗菌性能检测实例。
用4种检定菌和待测样本共5种乳酸菌的培养上清液作为检测样本，筛选出具有产生抗菌能力的乳酸菌。
其中乳链菌肽(Nisin)生产菌之一的Lactobacillus lactis NBRC12007作为阳性对照，Lactobacillus lactis NBRC100933作为阴性对照。
为了分离出上清液中的抗菌物质，将乳酸菌培养上清液(pH 6.5-6.8)过滤并灭菌，然后用MHB培养基制备稀释系列，37℃培养6 h。
添加检测试剂之后， 37℃培养2 h。结果显示传统法与WST法相关性一致。
检测针对4种检定菌的24个供体的时候，Spot法需要12枚dish(每个dish8个检测点)，检测时间需要20 h以上。而使用WST法检测时只需要1块96孔板，8 h左右即可完成检测。
显色原理
微生物通过能量代谢活动在细胞内生成NAD(P)H，WST-8在电子载体的作用下被NAD(P)H还原成水溶性的甲臜产物(橙色)。甲臜产物的生成量与微生物的能量代谢活性成正比例关系。因此，可以通过橙色的显色程度确认微生物的存活率和活性。
有检测实例的微生物
| 真菌(霉菌类)：Mould | 真菌(酵母类)：Yeast |
| Alternaria alternata NBR+B40:B56C31805
Aspergillus flavus NBRC4295 Aspergillus fumigatus NBRC33022 Aspergillus niger NBRC105649 Aspergillus terreus NBRC6346 Aspergillus ustus NBRC4128 Aureobasidium pullulans NBRC6353 Chaetomium globosum NBRC6347z Cladosporium cladosporioides NBRC6348 Exophiala dermatitidis NBRC6421 Paecilomyces variotii NBRC33284 Penicillium citrinum NBRC6352 Penicillium pinzophilum NBRC33285 Phoma citricarpa NBRC5287 Pseudallescheria boydii NBRC32229 Rhizopus oryzae NBRC31005 Sporothrix schenckii NBRC32961 Trichoderma virens NBRC6355 Trichophyton rubrum NBRC 5807 |
Candida albicans ATCC90028
Candida albicans JCM 1542 Candida albicans SC5314 Candida krusei NBRC1395 Candida parapsilosis NBRC1396 Candida utilis Cryptococcus albidus NBRC0378 Cryptococcus neoformans ATCC66031 Saccharomyces cerevisiae NBRC2347 Trichosporon asahii NBRC103889 Trichosporon asahii M9459 Trichosporon asahii M9925 Zygosaccharomyces rouxi |
| 革兰氏阳性菌：Gram-positive | 格兰仕阴性菌：Gram-negative |
| Bacillus cereus
Bacillus subtillis Corynebacterium glutamicum Enterococcus faecalis Enterococcus faecalis FSCC 146002 Lactobacillus casei Listeria monocytogenes Micrococcus luteus Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus NBRC13276 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus epidermidis Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 Staphylococcus epidermidis FSCC 223011 Streptococcus mutans NCTC 10449 Streptococcus mutans UA 159 |
Acetobacter sp.
Acinetobacter baumannii ATCC 19606 Campylobacter concisus ATCC 33237 Enterobacter cloacae FSCC145003 Escherichia coli 1.1369 Escherichia coli ATCC 25922 Escherichia coli BW25113 Escherichia coli K-12 Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum JCM 12990 Klebsiella pneumoniae FSCC167002 Proteus mirablils Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa NBRC13275 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Salmonella enteritidis Salmonella typhimurium Serratia marcescens Stenotrophomonas maltophilia ATCC 51331 Vivrio parahaemolyticus Yersinia enterocollica |
凑单关联产品TOP5
NO.1. Microbial Viability Assay Kit-WST 微生物活性检测
NO.2. Biofilm Formation Assay 生物被膜形成量/抑制能力检测
NO.3. Biofilm TestPiece Assay Kit 材料表面生物被膜形成能力检测
NO.4. CTC 细菌计数、染色
NO.5. Bacstain- CTC Rapid Staining Kit 细菌活力检测
规格性状
・WST Solution 1 ml×1
・Electron Mediator Reagent 0.12 ml×1
・ 96-peg-Lid ×1
・96-well Plate ×10
在针状孔板盖(96-peg-Lid)的针状突起表面形成生物被膜
产品概述
生物被膜 (Biofilm)是一种主要由细菌体外的多糖组成的膜状复合体，可以在几乎所有的环境下广泛存在。医疗器具的细菌污染、龋齿、牙周炎等感染症等都与生物被膜的形成有关。由于生物被膜一旦形成，会对抗生素等药物产生抗性，进而引起严重的污染问题。因此，具有抑制生物被膜活性的药物和食品成分成为近年来的研究热点。
Biofilm Viability Assay Kit可以检测微生物的代谢活性。检测过程中，生物被膜在孔板盖的针形突起表面生长，所以在清洗和染色操作中生物被膜不易脱落。同时，通过使用多孔板，可以一次性进行多样品检测。
Biofilm Viability Assay Kit的特长和操作
检测原理
Biofilm Viability Assay Kit是通过检测生物被膜内的活细菌的代谢活性来评价药物对生物被膜内的微生物杀伤效果的试剂盒。NADH(NADPH)是一种参与微生物能量代谢的辅酶，它可以通过电子载体，将WST还原成有颜色的甲臜染料(Formazan)。通过检测这个还原能力，可以表征微生物的代谢活性。
操作
本试剂盒可以对生物被膜形成量和药物对生物被膜抑制能力进行检测。检测过程中，生物被膜在孔板盖的针形突起表面生长，所以在清洗和染色操作中生物被膜不易脱落。同时，通过使用多孔板，可以一次性进行多样品检测。
试剂盒选择
针对两种不同用途的试剂盒选择
使用针状孔板盖(96 Peg-Lid)的试剂盒一共有两款，分别通过结晶紫染色法和WST显色法进行检测，供您根据具体的需求自由选择。
两种试剂盒的选择方法
*不同的菌种，生物被膜的形成条件(培养基、培养时间等)也不相同。建议先使用Biolfilm Formation Assay Kit(关联产品)进行摸索。具体的摸索方法请参考FAQ “如何摸索生物被膜最佳实验条件”
*本试剂盒是由同仁化学研究所和日本福冈县工业技术中心—生物食品研究所共同开发。
检测实例
常见的生物被膜检测指标有两种：MBIC(Minimum Biofilm Inhibitory Concentrations,抑制生物被膜形成的最低浓度)和MBEC(Minimum Biofilm Eradication Concentrations,细菌生物被膜的最小清除浓度)。下面用各试剂盒分别检测对S.aureus(金黄葡萄球菌)的MBIC和MBEC。
Biofilm关联产品
用检测片评价抗菌材料对生物被膜的抑制能力
Biofilm TestPiece Assay Kit(货号：B606)
需要对抗菌材料的生物被膜抑制能力进行评价的时候，使用同仁化学研究所独自研发出的TestPiece Holder(检测片固定盖)可以大幅缩短检测时间，并且得到重现性更高的检测数据。
与传统法的比较
菌种：Staphylococcus aureus NBRC13276
复孔数： n=8
常见问题Q&A
| Q：加入显色试剂以后，培养多长时间比较合适？ |
| A：不同微生物种类，代谢活性不同，显色所需要的时间也不同。第一次检测时，建议每培养一定时间就检测一下吸光度，最长一般不超过24 h，以确定最佳培养时间。S. aureus和S. mutans两个菌种可以参考操作说明书的图2和图3。 |
| Q：是否可以使用450 nm以外的滤光片进行检测？ |
| A：440~480 nm范围内的滤光片均可使用。 |
| Q：做细菌被膜抑制药物的药效评价时，生物被膜的形成量至少要达到什么程度？ |
| A：使用Biofilm Formation Assay Kit (货号B601)检测时，操作步骤的最后一步，检测结晶紫(CV)溶液的吸光度时，O.D.在0.5(590 nm)以上为宜。 |
| Q：目前有过检测实例的菌种有哪些？ |
| 目前Biofilm Viability Assay Kit(本产品)以及同系列产品Biofilm Formation Assay Kit (货号B601)有过实际检测案例的菌种有：
・Staphylococcus aureus（金黄葡萄球菌） ・Pseudomonas aeruginosa（绿脓杆菌） ・Escherichia coli（大肠杆菌） ・Streptococcus mutans（虫牙的病原菌之一） ・Porphyromonas gingivalis（牙周病的发病原因之一） 以上菌种的详细培养条件等请参考产品说明书。 |
概述
血管紧张素转换酶(ACE)可以通过血压调节机制之一的肾素-血管紧张素系统，将血管紧张素Ⅰ(AngiotensinⅠ)转化成具有升压作用的血管Ⅱ(AngiotensinⅡ)。同时，它还可以分解降压肽之一的缓激肽(Bradyinin)，是一种与血压上升有很大关系的酶。近年来，市面上有许多以预防高血压为目的的功能性食品(特定保健用途食品)，而其中具有ACE抑制活性的食品备受关注。传统的ACE抑制活性检测法是通过测定马尿酸在228nm处的吸光度来计算的，马尿酸是从合成底Hippuryl-His-Leu中生成，经过乙酸乙酯溶剂提取、浓缩干燥、再溶解得到的。该方法需要使用乙酸乙酯等有害的有机溶剂，且操作复杂，容易产生测量误差，因此急需一种操作更简单、结果更准确的检测方法。同仁化学研究所开发的ACE Kit-WST是一种新型酶法检测试剂盒。通过检测3-Hydroxybutyryl-Gly-Gly-Gly(3HB-GGG)中得到的3-Hydroxybutyric acid(3HB)，可以更安全、快速、简单的检测ACE抑制活性。本方法还可以使用96孔板进行多样品检测，进一步提高了检测的快捷性和重现性。
检测原理
特点
检测过程约2小时
检测时，只需要将样品溶液和试剂加入96孔板，培养(60 min; 10 min)，检测吸光度即可。
与传统法的比较
本试剂盒对应96孔板酶标仪检测，可以一次检测多个样品。而且无需使用有毒性的有机溶剂，可以更安全、快速、简便的得到高重现性的检测结果。
实验例
东当归处理过程中ACE抑制活性的变化3)
日本奈良县农业综合技术中心的浅尾研究员使用本试剂盒对日本大和地区的东当归在收获过程中，ACE抑制活性(IC50值)的变化进行了研究。研究结果对收获过程中的处理操作在ACE抑制活性方面的药理学影响有重要参考价值。
样品的前处理
各样品经过冻结干燥、粉碎成粉后加入20倍的蒸馏水，在40℃下振荡(100 rpm)30 min，最后通过离心分离(3000 ×g, 10 min)获得的上清液作为样品溶液。
抑制曲线例
检测波长：450 nm
横坐标为样品浓度
参考文献
1) L. H. Lam, T. Shimamura, K. Sakaguchi, K. Noguchi, M. Ishiyama, Y. Fujimura and H. Ukeda, “Assay of angiotensin I-converting enzyme-inhibiting activity based on the detection of 3-Hydroxybutyric acid”, Anal. Biochem., 2007, 364, 104.
2) L. H. Lam, T. Shimamura, S. Manabe, M. Ishiyama and H. Ukeda, “Assay of Angiotensin I-converting Enzyme-inhibiting Activity Based on the Detection of 3-Hydroxybutyrate with Water-soluble Tetrazolium Salt”, Anal. Sci., 2008, 24, 1057.
3) 浅尾浩史 他, “ヤマトトウキの調製過程におけるアンジオテンシンI変換酵素(ACE)阻害活性と品質特性の変化”, 近畿中国四国農研究, 2010, 17, 9.
4) C. C. Lau, N. Abdullah and A. S. Shuoib, “Novel angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides derived from an edible mushroom, Pleurotus cystidiosus O.K. Miller identified by LC-MS/MS”, BMC Complement. Altern. Med., 2013,13, 313.
5) K. Yamaki, “Screening Research Methods for α-glucosidase Inhibitors and Angiotensin-converting Enzyme Inhibitors in Fermented Soybean Products and Fermented Milk Products”, JARQ, 2014, 48, 41.
6) R. Nakabayashi, Z. Yang, T. Nishizawa, T. Mori and K. Saito, “Top-down Targeted Metabolomics Reveals a Sulfur-Containing Metabolite with Inhibitory Activity against Angiotensin-Converting Enzyme in Asparagus officinalis”, J. Nat. Prod., 2015, 78(5), 1179.
7) M. Alauddin, H. Shirakawa, K. Hiwatashi, A. Shimakage, S. Takahashi, M. Shinbo and M. Komaia, “Processed soymilk effectively ameliorates blood pressure elevation in spontaneously hypertensive rats”, J. Funct. Foods., 2015, 14, 126.
8) N. Ontiverosa, V. López-Terosb, M. Vergara-Jiménezc, A. R. Islas-Rubiod, F. I. Cárdenas-Torresc, E. Cuevas-Rodrígueze, C. Reyes-Morenoe, D. M. Granda-Restrepof, S. Lopera-Cardonaf, G. Isaí Ramírez-Torresb and F. Cabrera-Chávezc, Amaranth-hydrolyzate enriched cookies reduce the systolic blood pressure in spontaneously hypertensive rats’, J. Funct. Foods., 2019,doi:10.1016/j.jff.2019.103613.
常见问题Q&A
| Q1：可以检测ACE活性吗？ |
| A1：不可以检测ACE活性。 本试剂盒是检测ACE抑制剂活性的试剂盒。 |
| Q2：本试剂盒的优点是什么？ |
| A2：优点是 安全、快速、简便。 「无需使用有机溶剂」、 「一次检测多个样品」、 「实验结果重现性高」 *传统方法需要使用乙酸乙酯进行溶解、浓缩干燥再检测。操作非常繁杂，容易引入误差。 |
| Q3：可以检测多少个样品？ |
| A3：根据实验目的不同，分别准备了「确认抑制活性的有无」和「检测IC50」两种操作步骤。 Protocol 1：n=3时，可检测14个样品(50 tests)，28个样品(100 tests) Protocol 2：n=3时，可检测2个样品(50 tests)，4个样品(100 tests) 详情请参考产品说明书。 |
| Q4：样品在前处理的时候有什么需要注意的吗？ |
| A4：「样品前处理实例(蔬菜/水果等)」 样品为食品时，首先将样品研磨匀浆，然后离心分离，取上清液为样品溶液。如果样品有混浊，请通过过滤和稀释等手段，尽量保证样品呈澄清状。如果样品本身有颜色，适当稀释至不影响检测的范围内。（详见说明书）柠檬酸等酸性较强的样品(pH4~5)，会使Substrate buffer中的3HB-GGG发生沉淀，影响检测。可加入少量碳酸氢钠粉末，中和后离心分离，取上清进行实验。 |
| Q5：样品中有非水溶性物质，是否可以检测？ |
| A5：如果待测样品是非水溶性的，先使用DMSO或乙醇溶解制成Stock solution，然后再用 Buffer进行稀释，并控制DMSO或乙醇的含量在1%以下。 |
| Q6：对检测有影响的物质有哪些？ |
| A6：样品中如果有还原性物质或者氨基酰化酶等对3HBDH有抑制作用的物质，会影响检测。 |
| Q7：如果将Enzyme B和Enzyme A的溶解顺序颠倒的话会有什么问题吗？ |
| A7：会导致灵敏度降低。 请务必按照先用纯水溶解Enzyme B，再用Enzyme B溶液溶解Enzyme A的顺序。 |
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NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.2. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测
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NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.5. ROS Assay Kit 活性氧检测
试剂盒内含
500 次 3000 次
・Calcein-AM Reagent 200 μg x 1 1 mg x 1
・PI Stock Solution (1.5 mmol/l) 200 μl x 1 1 ml x 1
・DMSO 200 μl x 1 1 ml x 1
产品概述
Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒内含两种染料：Calcein-AM和Propidium Iodide (PI)。这个试剂盒可在荧光显微镜下同时观察在同一个细胞培养皿中的活细胞和死细胞。Calcein-AM可透过细胞膜，通过活细胞内的酯酶作用脱去AM基团，产生的Calcein (钙黄绿素) 发出强绿色荧光，因此活细胞在荧光显微镜下可被检测到绿色荧光。另一方面PI可以通过受损的细胞膜进入到死细胞内并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光，因此死细胞会被检测到红色荧光。除了用荧光显微镜外，也有报道可以用流式细胞仪和荧光酶标仪来进行定量检测。
荧光特性
Calcein-AM : λex=490 nm , λem=515 nm
PI : λex=530 nm , λem=580 nm
染色例
细胞染色实例
（a） （b） （c）
a) Calcein-AM染FTC细胞（活细胞单染）
b) PI染HCT116细胞（死细胞单染）
c) Calcein-AM、PI染MHD-1 细胞（活死细胞双染）
最佳浓度摸索
由于不同细胞种类、细胞浓度的染色条件不同，我们建议自行摸索一下Calcein-AM和PI的最适浓度。
Calcein-AM和PI的最佳浓度是根据不同的细胞种类而定，通过以下的操作，我们可以找到不同细胞染色试剂的最佳浓度：
1. 通过在0.1%皂苷或0.1-0.5%毛地黄皂苷中培养10 min或通过在70%乙醇中培养30 min制备死细胞。
2. 用0.1-10 μM PI溶液染死细胞，以便找到仅针对细胞核染色而不对细胞质染色的PI浓度。
3. 用0.1-10 μM Calcein-AM溶液染死细胞，以便找到不对细胞质染色的Calcein-AM浓度，再以此浓度的Calcein-AM对活细胞染色以检验活细胞是否被染色。
操作步骤
以HeLa细胞为例
制备1 mmol/l的Calcein-AM储存液
【500 次】
将200 μl DMSO加入到含200 μg Calcein-AM粉末的管中，用移液器吹打溶解。
【3000 次】
将1 ml DMSO加入到含1 mg Calcein-AM粉末的管中，用移液器吹打溶解。
※Calcein-AM储存液需要避光，在-20℃密封保存。
制备染色工作液
将Calcein-AM储存液和PI储存液恢复至室温后使用。
在5 ml的PBS（-）中加入10 μl Calcein-AM储存液和15 μl PI储存液，混匀制成工作液。此时Calcein-AM的浓度为2 μmol/l，而PI的浓度为4.5 μmol/l。
染色步骤
1、 用Trypsin-EDTA消化细胞。
2、 通过离心收集细胞（1,000 rpm，3 min）。
3、 去除上清液，加入PBS（-）制备细胞悬液（105 – 106 cells/ml为宜）。
4、 重复步骤2和步骤3数次以消除培养基中的酯酶活性。
5、 取100 μl 染色工作液与200 μl 细胞悬液混合，在37℃培养15 min。
6、 在490±10 nm激发波长下同时观察黄绿色荧光的活细胞和红色荧光的死细胞。另外用545 nm激发波长单独观察死细胞。
注意事项
1、 由于本试剂盒中的Calcein-AM Reagent 粉末和PI Stock Solution量很少，有可能会粘在盖子或管壁上，开封前请先涡旋以使其振落下来。
2、 由于Calcein-AM储存液对潮气敏感，请在使用后密闭Calcein-AM储存液的盖子。如果不能一次用完，建议分装保存，例如分装成10 μl/管，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。
3、 配制好的染色工作液请在当天使用。
4、 PI有疑似致癌性，使用前应注意以下几点：
1） 使用时请带好手套，口罩，防护眼镜等，不要接触到或呼吸到。
2） 当PI不慎接触到皮肤时，请立刻用大量的水冲洗。
3） 处理方法
清洗容器的清洗液和废液请按照实验室的有毒有害物质的处理方法进行处理，或按照以下方法处理：
・用UV照射的方法进行分解
・用次氯酸钠氧化分解后，进行中和处理
试剂盒内含
产品概述
细胞中的线粒体作为有氧呼吸产生ATP的主要场所，是体内重要的细胞器之一，常被用于早期细胞毒性、氧化应激、细胞凋亡等研究中1)。线粒体活性的降低与机能失调，已被证实与癌症、衰老、神经退行性疾病 (如阿尔兹海默症、帕金森病等) 等密切相关2)3)。
JC-1是一种被广泛使用的小分子线粒体膜电位探针，依赖于线粒体膜电位在线粒体中聚集，染料伴随聚集过程，荧光从绿色 (530 nm) 变为红色 (590 nm)。当线粒体发生去极化，红/绿荧光强度比值降低。以往的研究者反映，JC-1不易溶于水并有大量沉淀产生。但与其他公司的产品不同，同仁化学研究所研制的JC-1试剂解决了这一问题，避免了沉淀的产生。同时使用试剂盒中配制的成像缓冲液 (Imaging Buffer)，可大幅降低荧光背景并在检测过程中保护细胞不受损伤。
当JC-1工作液的浓度为2 μmol/l, 每次用量为100 μl时，可以检测500次。
产品特点
1.为什么要检测线粒体膜电位
线粒体不仅是细胞内产生能量的场所，它还与癌症、衰老、阿尔兹海默症、帕金森等神经变异性疾病密切相关。因此，针对线粒体状态的研究非常重要，其中线粒体膜电位的变化经常被作为重要的指标之一检测。
当线粒体正常、膜电位差保持不变时，JC-1会聚集并发出红色荧光，而当膜电位降低时，JC-1会作为单体存在并发出绿色荧光。红色和绿色荧光强度的变化可以作为检测线粒体状态的指标。
2.初次使用也很容易上手
3.去极化的检测实例
使用去极化剂carbonylcyanide-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone（FCCP）对HeLa细胞进行处理，用本试
剂盒进行检测。可以发现与未加药物的细胞相比，加药组细胞的红色荧光明显减少。
实验条件
JC-1浓度： 2 μmol/l in MEM, 染色时间30 min
FCCP浓度：100 μmol/l， FCCP处理时间1 h
检测条件
Green : Ex 488 nm/ Em 500-550 nm;
Red : Ex 561 nm/ Em 560-610 nm;
标尺: 20 μm
操作步骤
实验例
1.诱导凋亡的实验例
1.1 荧光显微镜
通过荧光颜色的改变判断由凋亡导致的线粒体膜电位的变化。
检测条件
Green: Ex 488 nm / Em 500-550 nm
Red : Ex 561 nm / Em 560-610 nm
标尺: 80 μm
1.2 流式细胞仪
定量分析单个细胞的膜电位变化
检测条件
Green: Ex 488 nm / Em 515-545 nm
Red : Ex 488 nm / Em 564-604 nm
1.3 酶标仪
确认孔板中吸光度来判断线粒体膜电位的变化
检测条件
Green: Ex 485 nm / Em 525-545 nm
Red : Ex 535 nm / Em 585-605 nm
2.诱导自噬的实验例
使用表达Parkin的HeLa细胞，分别使用线粒体自噬试剂盒（Mitophagy Detection Kit：MD01）和线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1 MitoMP Detection Kit： MT09）来观察添加和不添加CCCP（羰基氰化物间氯苯）的线粒体状态的变化。
结果证明在未经CCCP处理的细胞中几乎未检测到线粒体自噬的发生，并且线粒体膜电位正常维持。 而在添加了CCCP的细胞中，证实了线粒体膜电位的降低（JC-1的红色荧光的降低）和线粒体的自噬（Mtphagy染料的荧光的增强）。
<检测条件>
线粒体自噬检测
Ex：561 nm，Em：570-700 nm
线粒体膜电位检测
绿色Ex：488 nm，Em：500-550 nm
红色Ex：561 nm，Em：560-610 nm
实验条件
1.将Parkin质粒导入HeLa细胞
使用HilyMax（货号：H357）将Parkin质粒引入HeLa细胞中（Parkin质粒/HilyMax试剂：0.1 μg/0.2 μl）
然后过夜培养，收集细胞进行以下检测。
2.自噬检测
向表达Parkin的HeLa细胞中添加0.1 μmol/l Mtphagy工作溶液，并在37°C下孵育30分钟。然后将细胞用HBSS洗涤，加入10 μg/ml CCCP/MEM溶液，并在37℃下孵育2小时。荧光显微镜下观察处理后的细胞。
3.线粒体膜电位检测
将10 μg/ml的CCCP/MEM溶液添加至表达Parkin的HeLa细胞中，并在37℃下孵育1.5小时。加入4 μmol/l的JC-1工作溶液使终浓度至2 μmol/l，并将细胞溶液在37℃下孵育30分钟。孵育后将细胞用HBSS洗涤，加入成像缓冲液，在荧光显微镜下观察细胞。
3.线粒体膜电位与细胞周期关联性
将已知能在细胞周期的G2/M期起作用以终止细胞增殖并诱导细胞衰老的阿霉素（DOX）加入A549细胞后，
使用细胞周期检测试剂盒蓝色（产品代码：C549）/深红色（产品代码：C548）后检测。
结果证实了A549细胞的细胞周期确实发生了变化，同时用细胞衰老检测试剂盒–SPiDER-βGal（产品代码：SG03）证实了细胞产生衰老，实验证实了线粒体膜电位会发生变化。
特点：
•可以检测基因组DNA样品的碱基位点数量
•采用方便的比色法检测
•检测范围：40个碱基位点/ 1×105 碱基对DNA
订购满5000元，200元礼品等你拿
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试剂盒内含
产品概述
DNA的氧化损伤是由于DNA与活性氧 (ROS) 尤其是羟自由基之间的相互作用造成的。由超氧阴离子和过氧化氢通过Fenton反应产生的羟自由基在DNA中产生多重修饰。羟自由基对脱氧核糖基团的氧化攻击将导致DNA释放自由碱基，产生链断裂、各种糖修饰以及单个无碱基位点 (AP位点) 。事实上AP位点是由ROS产生的损伤的主要类型。醛反应性探针 (ARP；N’-氨氧基甲基羰基肼-D-生物素) 特异性地与AP位点的开环上的醛基反应。通过这个反应可以检测到导致醛基形成的DNA修饰。用过量ARP试剂反应后，DNA上的所有AP位点均用生物素做了标签。可以用亲和素-生物素法，用连接到亲和素上的过氧化物酶或碱性磷酸酶做比色法检测来对这些带有生物素标签的AP位点进行计数。DNA损伤定量试剂盒包含用于检测每1×105个碱基对中1-40个AP位点的所有必需溶液。
＊本试剂盒仅适用于基因组DNA中无碱基位点 (Abasic Sites)的检测。
原理
DNA损伤在除了复制过程中的DNA聚合酶错误外，保留有机体遗传信息的DNA在体内还受到环境辐射，紫外线，化学物质（如烷基化剂）和代谢物（如活性氧）的破坏，接收。如果这些错误和伤害得不到适当的修复，它们将导致突变，从而导致癌症和衰老。
DNA损伤部位有修复结构，其中之一就是去除碱修复。此时，将出现一个称为AP位点的基础位点（apurinic/apyrimidinic位点）。换句话说，AP位点的检测是可以测量DNA损伤位点的有效方法。
ARP（N’-氨基氧基甲基羰基肼基-D-生物素）是已知可以与该AP位点进行生物素特异结合的试剂。-Nucleostain-DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting-是一种可以通过使用ARP将DNA生物素化并固定在96孔微板上，可以简单地定量样品DNA中的AP 位点的试剂盒。
该试剂盒包含具有与AP位点的标准DNA，并且可以使用HRP标记的链霉亲和素通过生物素检测方法对AP位点进行定量。
使用方法请看实验例。
*冷藏保存中或恢复到室温时，有时会在管状管中看到水滴状的液粒。
这是由干燥防止剂液粒化而成的，产品的性能没有问题。
＊本套装中含有加入了溶液的试剂组件。
溶液可能会粘附在试管或瓶盖的内壁上，因此在打开前应先摇匀
技术信息
除试剂盒以外必要的物品
・10μl，200μl，1 ml微量移液器（可变型）
・200μl多通道移液器（可变型）
・培养箱（37℃）
・酶标仪
・0.5 ml，1.5 ml离心管
・离心机
・DNA纯化试剂盒
・纸巾
本公司出售各种DNA纯化试剂盒。
Get pureDNA Kit-Cell, Tissue(Code：GK03)
关于DNA提纯的问题，请咨询同仁化学。
操作方法
常见问题Q&A
| Q1: 是否可以创建40个以上AP位点/ 100,000个标准溶液？ |
| A1:该试剂盒的标准DNA是0-40个AP位点/ 100,000ARP-DNA。但我们已经准备了多达50个AP站点/ 100,000个的ARP-DNA（暂时没有做到更多）。从理论上讲，可以制备更多的ARP-DNA，但这么做的话我们无法保证和保持校准线的线性程度。
如果要检测更高浓度的碱基损伤，但样品DNA没有相同浓度的损伤，您可以用0AP 位点-DNA（测定范围内稀释）后再进行测定，之后再换算实际AP数比较好。 |
| Q2: AP位点是DNA的一个基本损伤位点，被用作氧化应激的指标，除了AP位点之外，还有其他氧化应激指标吗？ |
| A2：我们创建了一个文档，概述了氧化应激的各种标记物。
从实验者的角度，描述了每种氧化应激标记的特性和检测样品的处理方法，因此请参考以下文档（日文）。 https://www.dojindo.co.jp/technical/beginner/stressmarker.pdf |
| Q3:建议在DNA的纯度为吸光度为1.8以上进行检测。是否能够测量至1.5？ |
| A3:因为吸光度在1.5内没有做过类似实验，所以暂时无法确认。
我们用吸光度为1.6～1.7的DNA进行检测，但不能看到很大的变化。 所以推荐1.8或更高。 纯度低的话可能意味着蛋白质污染。低纯度蛋白质具有阻断作用，可能使DNA粘附在板上。 请使用尽可能高的纯度，因为它可能会阻止这种情况 |
| Q4:是否可以存储提取的DNA而无需将其转换为ARP？ |
| A4:存储是不可取的，因为这会增加AP位点的数量。 （冷藏和冷冻）
如果要在不进行ARP化的情况下进行存储，请使用乙醇沉淀，制粒并冷冻保存。AP站点确实是容易发生剪切的部位。 但是，如果以catallist free的状态保存的话，即使在3’侧有断开也不会影响ARP的检测。 相反，如果提取的DNA储存在非冷冻状态的环境中， 由自然产生的去除碱形成的AP位点是一个更重要的问题。 所以在这种情况下，如果你的样品在正确存储标准DNA是可以进行修饰的。 ARP修饰后AP位点稳定，建议提取后迅速进行APR处理。 |
| Q5:这个试剂盒可以检测什么？ |
| A5：您可以定量DNA中的AP位点。AP位点是[apurinic / appyrimidinic site]的缩写，作用于受损的DNA。一般在去除碱修复过程中会出现。DNA的损伤除了复制时DNA polymerase的错误之外，还受到紫外线，化学物质（如烷基化剂）和代谢物（如活性氧）的影响。
通过测定AP位点可以检测DNA损伤。 |
| Q6:这个试剂盒能测定的样品数量是多少？ |
| A6：20samples为20个样品。
每个Filtration Tube都有20个samples。 因为一个样品一般使用一个Filtration Tube，所以这个Tube的数量即是可测定的样品数。 20samples的测定用的板也是1块板。 |
| Q7:96孔板和过滤管中有溶液剩余，请告诉我废弃的方法 |
| A7:多余的溶液请在确认以下成分信息后，按照政策规定的废弃规则废弃。
<配套试剂成分> ・ARP-DNA standard solution（稀释水后废弃，不含有害成分） ・ARP solution（稀释后作废，不含有害成分） ・DNA binding solution（稀释水后废弃，不含有害成分） ・Washing buffer（稀释水后废弃，不含有害成分） ・HRP-Striptavidin（稀释水后废弃，不含有害成分） ・TE buffer（可溶于水，EDA・2NA 0.1%以下） ・Substrate solution（稀释水后废弃，不含有害成分） |
特点：
● 细胞、组织样品均可检测
● 操作更加简单
● 试剂盒稳定性高
凑单关联产品TOP5
NO.1. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
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NO.4. ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- ROS检测
NO.5. Calcein-AM/PI Double Staining Kit 活死细胞双染检测
概述
谷胱甘肽 (γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸) 是体内的一种三肽化合物，它参与抗氧化和药物代谢的过程，还是谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽S-转移酶、巯基转移酶等的底物。谷胱甘肽通常以还原型状态(GSH) 存在，但是GSH在氧化应激的作用下会转化为氧化型状态 (GSSG)。因此GSH/GSSG的比值被认为是氧化应激研究的一个重要指标。
优势
1）可以进行氧化型谷胱甘肽（GSSG）、还原型谷胱甘肽（GSH）的分类定量。
2）操作简单，且可以同时检测多个样品。
操作步骤
详见说明书
注意事项
试剂开封后各溶液的保存方法及保存时间
Substrate Working Solution：溶解后在-20℃可保存2个月
GSH Standard Solution：溶解后在-20℃可保存2个月
GSSG Standard Solution：溶解后在-20℃可保存2个月
Enzyme Working Solution：稀释后在4℃可保存2个月
Coenzyme Working Solution：用超纯水溶解后在-20℃可保存2个月
Masking Solution：用乙醇溶解后在4℃可保存2个月
其他材料
酶标仪（405或415 nm）、20 µl和200 µl移液器，多通道移液器、 96孔板、 5-磺基水杨酸 (SSA) 溶液 （点击购买）、 乙醇
常见问题Q&A
| Q1:如何计算GSH浓度？ |
| A1:根据标准曲线得到总谷胱甘肽（GSH+GSSG）的浓度，使用以下公式计算GSH浓度。 GSH浓度=总谷胱甘肽浓度-GSSG浓度×2 GSSG（氧化型谷胱甘肽）相当于两分子的GSH（还原型谷胱甘肽）。 因此，通过将GSSG浓度加倍从而得到GSH浓度。 |
| Q2:是否可以通过添加Masking Reagent来掩盖源自GSSG的GSH？ |
| A2:加入酶/辅酶之后，由GSSG产生的GSH先与DTNB反应，而还原为GSSG。GSSG生成的GSH不会被屏蔽。 |
| Q3:本试剂盒与谷胱甘肽定量试剂盒（货号：T419）有什么区别？ |
| A3:本试剂盒可以分别检测GSSG和GSH，而总谷胱甘肽定量试剂盒（T419）则无法实现。作为氧化应激指标的GSH和GSSG的比例更加受引研究人员关注。 |
| Q4:显色效果弱怎么办？ |
| A4:考虑以下原因：
原因1）本试剂盒的测量范围是0.5 μmol/l及以上，测量样品中所含的谷胱甘肽的量可能小于该值。 对策）本试剂盒无法测量不符合测量范围的样品，请考虑其他方法检测。例如HPLC方法。 也可以通过降低预处理的稀释率或增加样品量来增加检测样品的浓度。 注意：为了加强显色效果而延长显色时间，则无法获得标准曲线。 原因2）可能含有抑制荧光的物质。例如：与SH基团反应的化合物（马来酰亚胺）会干扰测量结果。 对策）由于无法通过预处理等去除这些化合物，因此请在不含有此类物质的情况下再检测。 原因3）反应中的pH值低，有可能抑制显色。 对策）1、测量时，请确保SSA浓度为1％或更低。当SSA浓度为1％或更高时，会抑制显色效果。 2、如果含有其他酸性物质，则在测量前用三乙醇胺等将其中和至pH 7，或将它们稀释至约1％或更低的酸浓度下进行反应。 |
| Q5:该试剂盒可以检测多少样品？ |
| A5:本试剂盒可以进行100次检测（使用1块96孔板） 当n=3时，可以检测9个样品。（样品未染色） 如果仅测量谷胱甘肽的总量，可以检测25个样品。 样品的布局例：通道1～6是GSSG浓度测定，通道7～12是总谷胱甘肽浓度测定。
|
| Q6:样品中有大量谷胱甘肽，如何稀释样品？ |
| A6:用0.5％5-磺基水杨酸（SSA）水溶液稀释。 测量时样品中的SSA浓度应为0.5至1％。 如果SSA浓度高，则反应过程中的pH值会呈酸性，这可能会影响吸光度。 |
| Q7:通过测量GSSG与GSH的比例可以得到什么？ |
| A7:谷胱甘肽通常在体内以还原形式（GSH）存在， 因为它通过刺激（例如氧化应激）转化为氧化形式（GSSG） GSH与GSSG之比是氧化应激的指标。 |
特点：
● 细胞、组织样品均可检测
● 操作更加简单
● 采用荧光法灵敏度更高
产品概述
丙二醛(MDA)是脂质过氧化物分解后形成的一种化合物。因此，MDA 是检测细胞和组织中脂质过氧化物的最常见的指标之一，在氧化应激、铁死亡等领域的研究中被广泛使用。MDA Assay Kit 可以检测样品中的 MDA 浓度，通过硫代巴比妥酸（TBA）与水解产生的 MDA 反应形成的 TBA 复合体的吸光度或荧光强度来检测样品中的丙二醛（MDA）。试剂盒中配有抗氧化剂(Antioxidant)，可以防止样品在反应过程中发生不必要的氧化，从而确保获得准确的实验结果。
试剂盒内含
测定原理
本试剂盒采用经典的TBA法，通过检测MDA/硫代巴比妥酸(TBA)复合体的荧光或吸光度来检测细胞或组织中的MDA浓度。此外，试剂盒中还附带MDA标准溶液，以便通过标准曲线检测样品中的MDA。
产品特点
简化操作步骤
一般的MDA检测试剂盒(TBA法)，作为底物的硫代巴比妥酸(TBA)需要天平称量和高温加热溶解的步骤。而同仁化学研究所的MDA试剂盒中的TBA无需称量和加热溶解的操作，从而减少由于称量等造成的误差，使得实验结果的孔间差更小。同时，还可大幅缩短操作所需的时间。
细胞、组织样品均可检测
细胞样品通过荧光法检测。组织样品可以根据样品中MDA的含量在荧光法和吸光度法之间自由选择。具体可参考下表。
实验例
由于Erastin可以抑制xCT（胱氨酸/谷氨酸转运体），是最常见的铁死亡诱导剂之一。使用同仁化学研究所的MDA试剂盒检测Erastin处理的HepG2(人肝癌细胞)中MDA的变化。通过标准曲线(用BCA法蛋白定量校准后)，计算样品中MDA的浓度。可以发现，Erastin处理的细胞中，MDA含量明显上升。
特点：
● 即用型试剂盒、数据重现性好
● 配制试剂所需的时间大幅缩短
● 检测结果不易受pH, 溶剂等因素影响
规格性状
产品概述
近年来的研究发现，人体内的抗氧化能力的降低与各种疾病的产生息息相关，因此人们对于具有抗氧化能力的功能食品的需求越来越高。 根据日本高知大学岛村等人的文献报道 1)，使用稳定的自由基 DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)作为底物的抗氧化能力检测法是数据重现性最好的一种方法。本试剂盒依据岛村老师的检测方法，将DPPH法的过程进行了改良和标准化，解决了以往实验中孔间差较大、试剂配制过程繁冗等问题。
本试剂盒在日本高知大学农林海洋学部的岛村智子老师的指导下开发而成 。
1) T. Shimamura et al., Anal. Sci., 2014, 30, 717-721
操作时间大幅缩短
DPPH和Trolox在溶液状态下都不稳定，需要现配现用。特别是作为底物的DPPH，一般还需要检测吸光度来确定含量，因此操作的步骤和时间都十分冗长。本试剂盒已经将所需的试剂准备好并分成小份单独包装，检测前只需要溶解定容即可开始实验，大幅缩短了操作步骤和时间。(DPPH的溶解需要超声波振荡发生器)
检测原理
检测步骤
将试剂盒样品加至96孔板，培养30分钟后即可上机检测。
将试剂盒样品加至96孔板，培养30分钟后即可上机检测。
检测结果不受各因素影响
用DPPH法检测抗氧化能力的时候，溶液中的pH以及溶剂的浓度等因素会对检测结果产生影响。本试剂盒通过优化操作步骤、调整溶液添加顺序等方法最大程度抑制pH和溶剂浓度对检测结果的影响。
pH对检测结果的影响 样品溶剂对检测结果的影响
试剂盒内含的Assay Buffer可以保证检测反应在一定 样品量只占检测溶液体积的1/10(20 μl)，因此样品的
的pH下进行。 溶剂无论是水还是无水乙醇，都不影响最终检测结果。
IC50值的复孔差
如果只用样品的抗氧化能力IC50值来评价，比较容易出现检测结果的波动。用标准物质(Trolox)和样品同时检测，通过Trolox等价活性值(TEAC)来评价的话，可以得到重现性高的检测结果。
TEAC（ μg TE/μg）= Trolox IC50 （μg/ml）/ Sample IC50（ μg/ml）
检测例
不同检测机构之间的检测结果的差异
下面3个不同的检测机构，使用本试剂盒检测已知的抗氧化物：没食子酸、儿茶酸、桑色素。用比色皿通过分光光度计检测Trolox等价活性值(TEAC)，结果显示3个检测机构之间的检测结果基本上没有差异。
参考文献：T. Shimamura et al., NipponShokuhin Kagaku Kogaku Kaishi, 2007, 54, 482 – 487
分光光度计和酶标仪检测结果的一致性
按照上面的实验的同样的方法，改用酶标仪和96孔板进行检测并计算Trolox等价活性值(Trolox)，检测结果也高度一致。
特点：
● 标记的物质可以在大约2个小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 标记的物质可以用所附的保存溶液保存。
试剂盒内含
产品概述
ICG（吲哚菁绿）是一种花青颜料，也用于肝功能和肝储备测试的色素负载测试中，并且在近红外区域具有荧光。激发波长在774nm附近，荧光波长在805nm附近，并且具有即使在体内使用也不容易被血红蛋白干扰的荧光特性。因此，期望将其应用于使用近红外荧光的体内荧光成像。 ICG标记试剂盒-NH2是用于标记具有氨基基团的蛋白质（尤其是抗体）的试剂盒。套件随附的NH2-Reactive以及已发布的荧光素标记套件–NH2（代码：LK01），HiLyte FluorTM 555标记套件–NH2（代码：LK14），HiLite FluorTM 647标记套件–NH2（代码：LK15）由于ICG在分子中具有活性酯，因此仅通过与具有氨基的分子混合即可形成稳定的共价键。当将ICG标记在蛋白质上时，可以使用随附的过滤管轻松去除抑制标记反应和未反应的NH2反应性ICG的低分子量化合物（例如Tris）。对于ICG标记的IgG，荧光波长为774/805nm。
该试剂盒包含标记所需的试剂和用于储存准备好的ICG标记产品的溶液。
原理
操作步骤
使用注意事项:
如果样品中含有分子量>10,000的物质 (多肽、其它蛋白等)，有阻碍标记反应的可能性。在标记前需要先纯化，如果样品是抗体，可用 IgG Purification Kit (AP01，AP02)纯化，如果样品中有小的不溶物质，离心后取上清液来标记。
操作步骤：
a) 蛋白溶液量要≤100ul，如果抗体浓度<0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总蛋白量达到50-200ug。
b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，继续离心5min或提高转速。
c) NH2-Reactive ICG在管子的底部，加10ul DMSO到管子的底部，用移液器反复吹打溶解。由于NH2-Reactive ICG会被DMSO中的水分水解，在制备好NH2-Reactive ICG溶液后马上进行第4步操作。
d) 如果蛋白总量达到200ug，请加入全部NH2-Reactive ICG溶液。
e) 我们推荐用WS Buffer保存标记产物，但也可以根据下一步实验要求选择合适的缓冲液。
产品优势
1）标记的物质可以在大约2个小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）标记的物质可以用所附的保存溶液保存。
ICG标记实验例
图. 小鼠尾静脉注射ICG抗体的荧光成像图小鼠皮下肿瘤模型在注射了ICG抗体 (50ug) 48h后，有明显的迹象表明抗体在肿瘤中有选择性地聚集。
仪器：活体成像仪 (Clairvivo OPT，岛津制作所)
小鼠：BALB/c(nu/nu) 纯合子裸小鼠 (母，11周)
肿瘤细胞：HeLa细胞 (在右腋皮下移植后4周)
检测条件：Ex=785nm，Em=845/55nm
抗体：整合素α2抗体 曝光时间：10s
荧光特性
常见问题Q&A
| Q1: 标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法。 |
| A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使用50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。
当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。 —————————————— PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33 PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33 —————————————— 离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。 |
特点：
● R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 也可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。
● 带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。
试剂盒内含
产品概述
藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。R-藻红蛋白(R-PE)是一种藻胆蛋白，它在578nm附近有橙色荧光，激发波长为488nm。R-Phycoerythrin Labeling Kit-SH能够简便快速地制备被R-PE标记的IgG，SH-reactive R-PE（该试剂盒的成分之一）具有一个马来酰亚胺基，不需任何活化就能够轻易地与靶分子中的巯基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube能够快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了标记所需的全部溶液，包括制备带有SH的还原型IgG所需的还原剂以及储存标记产物的Storage buffer。
*R-PE: R-Phycoerythrin(R-藻红蛋白)
原理
荧光特性
操作步骤
使用注意事项:
1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。
2. 在标记过程中，IgG或者R-Phycoerythrin-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。
3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。
4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
标记IgG操作步骤
（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）用移液器使溶液混合，然后8,000-10,000g离心10分钟。b）
（3）将150μl WS buffer加入到Reducing agent中并用移液器吹打数次使其溶解。
（4）从步骤3所得的溶液中，取100μl转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吹打数次后，37℃培养30分钟。
（6）将100μl RA solution加入到管中，8,000-10,000g离心10分钟。弃滤液，加入200μl RA solution，再离心一次。b）
（7）将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive R-PE并吹打其溶解。
（8）将所得的SH-reactive R-PE溶液转移到被还原的IgG所集中的过滤管的膜上。
（9）用移液器吹打数次后，37℃培养1小时。
（10）加入150μl WS buffer并吹打10-15次来回收标记产物。c）将该溶液转移至0.5ml试管中，在0-5℃下保存。d）
a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记后产物的浓度为1.4-1.8mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2个R-PE分子。没有被结合的R-PE可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常R-PE标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。
产品优势
1）R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）也可以通过使用附着的还原剂*标记不具有游离SH基团的蛋白质。
6）带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。
*还原剂经过优化，可减少IgG的制备。 当使用具有除IgG以外的S-S键的样品时，由于S-S键的断裂，标记分子的活性可能会丢失。请在确认不会发生因还原引起的失活后使用。
常见问题Q&A
| Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。 |
| Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？ |
| A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了 |
| Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法 |
| A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。
当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。 —————————————— PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33 PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33 —————————————— 离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。 |
|
Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？ |
| A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm
B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm |
| Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物 |
| A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。 |
|
Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？ |
|
A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。 |
|
Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
|
A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。 |
| Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子 |
| A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。 |
|
Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？ |
| A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。 |
|
Q10:标记产物能保存多久？ |
| A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。 |
特点：
● R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。
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试剂盒内含
产品概述
藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。R-藻红蛋白(R-PE)是一种藻胆蛋白，它在578nm附近有红色荧光，激发波长为488nm。R-Phycoerythrin Labeling Kit-NH2能够简便快速地制备被R-PE标记的IgG，NH2-reactive R-PE（该试剂盒的成分之一）具有一个活性的酯基团，不需任何活化能够轻易地与靶分子中的氨基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube用来快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了包括标记产物的储存液等用于R-PE标记的所需的全部试剂。
*R-PE: R-Phycoerythrin(R-藻红蛋白)
原理
荧光特性
操作步骤
使用注意事项:
1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。
2. 在标记过程中，IgG或者R-Phycoerythrin-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。
3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。
4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
标记IgG操作概述
（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。b）
（3）完成离心后，将10μl Reaction buffer加入到NH2-reactive R-PE中并用移液枪吹打使其溶解。
（4）将含有NH2-reactive R-PE的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。
（6）将190μl WS buffer加入到过滤管中并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。c） 将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记后产物的浓度为1.4-1.8mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2个R-PE分子。没有被结合的R-PE可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常R-PE标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。
产品优势
1）R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。
常见问题Q&A
| Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。 |
| Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？ |
| A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了 |
| Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法 |
| A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。
当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。 —————————————— PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33 PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33 —————————————— 离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。 |
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Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？ |
| A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm
B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm |
| Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物 |
| A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。 |
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Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？ |
|
A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。 |
|
Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
|
A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。 |
| Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子 |
| A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。 |
|
Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？ |
| A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。 |
|
Q10:标记产物能保存多久？ |
| A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。 |
特点：
● APC标记的产品可以在大约2.5小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50-200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。
● 可以使用随附的保存溶液保存APC标签。
试剂盒内含
产品概述
藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。别藻蓝蛋白(APC)是一种藻胆蛋白，它在660nm附近有红色荧光，激发波长为488nm。Allophycocyanin Labeling Kit-SH能够简便快速地制备被APC标记的IgG，SH-reactive APC（该试剂盒的成分之一）具有一个马来酰亚胺基，不需任何活化就能够轻易地与靶分子中的巯基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube能够快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了标记所需的全部溶液，包括制备带有SH的还原型IgG所需的还原剂以及储存标记产物的Storage buffer。
*APC: Allophycocyanin (别藻蓝蛋白)
原理
荧光特性
操作步骤
使用注意事项:
1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。
2. 在标记过程中，IgG或者Phycobiliprotein-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。
3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。
4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
标记IgG操作步骤：
（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）用移液器使溶液混合，然后8,000-10,000g离心10分钟。b）
（3）将150μl WS buffer加入到Reducing agent中并用移液器吹打数次使其溶解。
（4）从步骤3所得的溶液中，取100μl转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吹打数次后，37℃培养30分钟。
（6）将100μl RA solution加入到管中，8,000-10,000g离心10分钟。弃滤液，加入200μl RA solution，再离心一次。b）
（7）将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive APC并吹打其溶解。
（8）将所得的SH-reactive APC溶液转移到被还原的IgG所集中的过滤管的膜上。
（9）用移液器吹打数次后，37℃培养1小时。
（10）加入150μl WS buffer并吹打10-15次来回收标记产物。c）将该溶液转移至0.5ml试管中，在0-5℃下保存。d）
a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记后产物的浓度为1.4-1.8mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2个APC分子。没有被结合的APC可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常APC标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。
产品优势
1）APC标记的产品可以在大约2.5小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50-200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）还可以通过使用附着的还原剂*标记不具有游离SH基团的蛋白质。
6）可以使用随附的保存溶液保存APC标签。
*还原剂针对减少IgG的制备而优化。当使用带有除IgG以外的S-S键的样品时，由于S-S键的断裂，可能会失去待标记分子的活性。请在确认不会发生因还原引起的失活后使用。
常见问题Q&A
| Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。 |
| Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？ |
| A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了 |
| Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法 |
| A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。
当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。 —————————————— PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33 PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33 —————————————— 离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。 |
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Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？ |
| A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm
B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm |
| Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物 |
| A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。 |
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Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？ |
|
A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。 |
|
Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
|
A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。 |
| Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子 |
| A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。 |
|
Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？ |
| A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。 |
|
Q10:标记产物能保存多久？ |
| A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。 |
特点：
● APC标记的产品可以在约2.5小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 可以使用附带的保存溶液保存APC标签。
试剂盒内含
产品概述
藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。别藻蓝蛋白（APC）是一种藻胆蛋白，它在660 nm附近有红色荧光。Allophycocyanin Labeling Kit-NH2能够简便快速地制备被APC标记的IgG，NH2-reactive APC（该试剂盒的成分之一）具有一个活性的酯基团，不需任何活化就能够轻易地与靶分子中的氨基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube用来交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了标记产物的Storage buffer等用于APC标记的所需的全部试剂。
*APC: Allophycocyanin (别藻蓝蛋白)
原理
荧光特性
操作步骤
使用注意事项:
1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。
2. 在标记过程中，IgG或者Phycobiliprotein-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。
3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。
4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
标记IgG操作步骤
（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000 g离心10分钟后，加入100μl WS buffer再离心一次。b）
（3）离心完成后，将10μl Reaction buffer加入到NH2-reactive APC中并用移液器吹打使其溶解。
（4）将含有NH2-reactive APC的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。
（6）将190μl WS buffer加入到过滤管中并用枪吹打10到15次来回收标记产物。c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记后产物的浓度为1.4-1.8mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2个APC分子。没有被结合的APC可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常，APC标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。
产品优势
1）APC标记的产品可以在约2.5小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）可以使用附带的保存溶液保存APC标签。
常见问题Q&A
| Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。 |
| Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？ |
| A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了 |
| Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法 |
| A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。
当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。 —————————————— PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33 PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33 —————————————— 离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。 |
| Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？ |
| A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm
B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm |
| Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物 |
| A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。 |
| Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？ |
| A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。 |
| Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。 |
| Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子 |
| A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。 |
| Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？ |
| A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。 |
| Q10:标记产物能保存多久？ |
| A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。 |
特点：
● 可以在大约3个小时内制备ALP标记的产品。
● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 只需与NH2反应性ALP混合即可形成ALP标签。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 带有ALP标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。
试剂盒内含
产品概述
该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的碱性磷酸酶标IgG以及竞争性EIA所需的碱性磷酸酶标抗原。该试剂盒中的NH2-reactive ALP能够与含有NH2的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的全部试剂，包括储存用缓冲液。NH2-reactive ALP不需任何活化就可以和靶分子结合。因此，当碱性磷酸酶标IgG用于EIA时，NH2-reactive ALP的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。
*ALP：Alkaline Phosphatase (碱性磷酸酶)
备注：经过同仁化学研究所的长期稳定性考验，代码为LK12的产品在0-5℃未开封的条件下由原来可以保存半年延长至一年。
原理
操作步骤
使用注意事项:
1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。
2.所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。
3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。
4.如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化 (不包含于此试剂盒中)。
5.如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。
6.如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶NH2-reactive ALP放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。
标记IgG操作步骤：
（1）将100μl Washing buffer以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。b）
（3）将10μl Reaction buffer加入到NH2-reactive ALP中并用移液器吹打使其溶解。
（4）将含有NH2-reactive ALP的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。
（6）加入190μl Storage buffer 并吹打10到15次来回收标记产物。c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记后共轭物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1到3个碱性磷酸酶分子。没有被结合的碱性磷酸酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常，碱性磷酸酶标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以在-20℃下存放。但还要注意样品自身是否稳定。
标记小分子操作步骤：
（1）用Reaction buffer制备50μl，1mM的氨基化合物溶液，a）并将该溶液加入到NH2 -Reactive ALP管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。
（2）将100μl Washing Buffer加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。
（3）在8,000-10,000g离心10分钟，b）弃滤液，向管中加入200μl Washing Buffer。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g离心10分钟。b）
（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。c）将此溶液转移至微型管中，并储存于0-5℃下 d）。
a）如果氨基化合物在水溶液中无法溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl与45μl Reaction buffer混合。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5 min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。
c）标记后产物的浓度大约为400-500μg/ml（10-12.5μM）。1-2个靶分子能够和1个碱性磷酸酶分子结合。
d）建议用Storage Buffer来回收标记产物，也可以选择其它合适的缓冲液。
产品优势
1）可以在大约3个小时内制备ALP标记的产品。
2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）只需与NH2反应性ALP混合即可形成ALP标签。
5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
6）带有ALP标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。
常见问题Q&A
| Q1: 能够使用这个试剂盒标记Fab或者Fab’吗？ |
| A:可以标记。并且回收率通常都超过80%。 |
| Q2:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000或者<5,000且具有活性氨基结构。如果分子量>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品用LK12来标记。如果分子量<5,000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话：800-988-0083 |
| Q3: 能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:可以，只要它的分子量<5,000且具有活性氨基。可以参照标记小分子的操作说明。 |
| Q4:LK12所能标记的最小的IgG的量是多少？ |
| A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。尽管这个试剂盒也能标记10 μg的IgG，但是本底会较高。 |
| Q5: 每个IgG能够标记多少碱性磷酸酶分子？ |
| A:每个IgG平均能标记上1-2个碱性磷酸酶分子。 |
| Q6:标记反应结束后，未反应的NH2-reactive ALP是否还具有活性？ |
| A:没有了。NHS在反应过程中会完全被水解。 |
| Q7:标记反应过程中，NH2-reactive ALP是否会形成一些低聚物？ |
| A:不会。由于NH2-reactive ALP中的所有活性氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。 |
| Q8:是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？ |
| A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该试验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。 |
| Q9:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？ |
| A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。 |
特点：
● POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。
● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● POD标记的产品只需与NH2-反应性过氧化物酶混合即可形成。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● POD标签可以用随附的保存溶液保存。
试剂盒内含
产品概述
该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的辣根过氧化物酶标IgG以及竞争性EIA所需的辣根过氧化物酶标抗原。该试剂盒中的NH2-reactive peroxidase具有琥珀酰亚胺基 (NHS)，它能够与含有NH2的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的所有试剂，包括储存用缓冲液。标记过程相当简单：只需将IgG和NH2-reactive peroxidase混合并且在37℃下培养2小时。NH2-reactive peroxidase不需任何活化就可以和靶分子形成共价键。NHS与辣根过氧化物酶之间的距离大约为1.2nm，为辣根过氧化物酶分子半径的一半。因此，当辣根过氧化物酶标IgG用于EIA时，NH2-reactive peroxidase的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。由于NH2-reactive peroxidase自身的氨基已经被阻断，因此自身不会发生反应。
原理
操作步骤
使用注意事项:
1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。
2.所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。
3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。
4.如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化（不包含于此试剂盒中）。如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。
5.如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶NH2-reactive peroxidase放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。
标记IgG操作步骤：
（1）将100μl Washing buffer以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。b）
（3）将10μl Reaction buffer加入到NH2-reactive peroxidase中并用移液器吹打使其溶解。
（4）将含有NH2-reactive peroxidase的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吸取溶液吹吸净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。
（6）将100μl Washing buffer加入到过滤管中。如果滤液的体积超过300μl，在进行步骤7前需要先丢弃滤液。
（7）8,000-10,000g离心10分钟。b）
（8）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。如果在聚积过程中，滤液体积达到或超过了400μl，则需在进行下一步离心前将滤液除去。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记产物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-3个辣根过氧化物酶分子。没有被结合的辣根过氧化物酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常，辣根过氧化物酶标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。
标记小分子操作步骤：
（1）用Reaction buffer制备50μl，1mM的氨基化合物，a）并将该溶液加入到NH2-reactive peroxidase管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。
（2）将100μl Washing buffer加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。
（3）在8,000-10,000g 离心10分钟，b）弃滤液，向管中加入200μl Washing buffer。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g 离心10分钟。b）
（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收抗体。c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）如果氨基化合物在水溶液中无法溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl 与45μl Reaction buffer混合。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记产物的浓度大约为400-500μg/ml (10-12.5μM)。1-2个靶分子能够和1个辣根过氧化物酶分子结合。
d）标记后的小分子在0-5℃下能够存放至少6个月。
产品优势
1）POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。
2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）POD标记的产品只需与NH2-反应性过氧化物酶混合即可形成。
5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
6）POD标签可以用随附的保存溶液保存。
常见问题Q&A
| Q1: 标记反应结束后，未反应的NH2-reactive peroxdase是否还具有活性？ |
| A:没有了。它在反应过程中会完全被水解。 |
| Q2: 标记反应过程中，NH2-reactive peroxdase是否会形成一些低聚物？ |
| A:不会。由于NH2-reactive peroxdase中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。 |
| Q3: 是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？ |
| A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该实验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。 |
| Q4:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？ |
| A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。 |
| Q5: 能够使用这个试剂盒标记Fab或者Fab’吗？ |
| A:可以标记。并且回收率通常都超过80%。 |
| Q6:能够用这个试剂盒标记其它蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000或者<5,000且具有活性伯胺或仲胺结构。如果分子量>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品用LK11-10来标记。 如果分子量<5,000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话：800-988-0083 |
| Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:可以。只要它的分子量小于5,000且具有活性伯胺或仲胺。可以参照标记小分子的操作说明。 |
| Q8:LK11所能标记的最小的IgG的量是多少？ |
| A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。尽管这个试剂盒也能标记10 μg的IgG，但是本底会较高。 |
| Q9:每个IgG能够标记多少辣根过氧化物酶分子？ |
| A:每个IgG平均能标记上1-3个辣根过氧化物酶分子。 |
特点：
● POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。
● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● POD标记的产品只需与SH反应过氧化物酶混合即可形成。
● 还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● POD标签可与随附的存储溶液一起存储。
试剂盒内含
产品概述
该试剂盒主要用于制备酶免疫分析（EIA）所需的辣根过氧化物酶标IgG以及竞争性EIA所需的辣根过氧化物酶标抗原。该试剂盒中的SH-reactive peroxidase能够与含有巯基的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的全部试剂，包括还原剂和储存用缓冲液。SH-reactive peroxidase可以和靶分子形成共价键，还原剂能够在IgG分子上建立自由巯基。当辣根过氧化物酶标IgG用于EIA时，SH-reactive peroxidase的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。
原理
操作步骤
使用注意事项:
1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。
2.所需标记的较小的巯基化合物的分子量要<5,000。
3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。
4.如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化（不包含于此试剂盒中）。
5.如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。
6.如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶SH -reactive peroxidase放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。
标记IgG操作步骤：
（1）将100μl Solution A以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）用移液器使溶液混合，8,000-10,000g离心10分钟。b）
（3）将150μl Solution A加入到Reducing agent中并用移液器吹打使其溶解。
（4）将100μl步骤3所得溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吹打数次，然后在37℃下培养30分钟。
（6）将100μl Solution B加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟。除去滤液，加入200μl Solution B，再离心一次。b）
（7）将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive peroxidase中并用移液器吹打使其溶解。
（8）将SH-reactive peroxidase溶液移到被还原的IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（9）用移液器吹打数次，然后在37℃下培养1小时。
（10）将100μl Solution A加入到试管中，8,000-10,000g离心10分钟。b）
（11）加入200μl Storage buffer并吹打10-15次来回收标记产物。c）将此溶液转移至一支0.5ml的试管，并储存于0-5℃。
a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。如果在聚积过程中，滤液体积超过了400μl，则需在进行下一步离心前将滤液除去。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记产物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个还原后的IgG分子上会被标记 上1到2个辣根过氧化物酶分子。没有被结合的辣根过氧化物酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常辣根过氧化物酶标记后的还原型IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。另外，还要注意样品自身是否稳定。
标记小分子操作步骤：
（1）用Reaction buffer制备50μl，1 mM的巯基化合物溶液，a）并将该溶液加入到SH-reactive peroxidase管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。
（2）将100μl Solution A加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。
（3）在8,000-10,000g离心10分钟，b）弃滤液，向管中加入200μl Solution A。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g离心10分钟。b）
（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10-15次来回收抗体。c）将此溶液转移至一支0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）如果巯基化合物无法在水溶液中溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl 与45μl Reaction buffer混合。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记产物的浓度大约为400-500μg/ml（10-12.5μM）。1到2个靶分子能够和1个辣根过氧化物酶分子结合。
d）标记后的小分子在0-5℃下能够存放至少6个月。
产品优势
1）POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。
2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）POD标记的产品只需与SH反应过氧化物酶混合即可形成。
5）还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。
6）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
7）POD标签可与随附的存储溶液一起存储。
常见问题Q&A
| Q1: 能够使用这个试剂盒标记F(ab’)2吗？ |
| A:可以标记。请参照标记IgG的操作说明，回收率通常都超过80%。 |
| Q2: 能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？ |
| A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000或者<5,000且具有活性巯基结构。如果分子量.>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品用 LK09-10来标记。如果分子量<5,000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话 ：800-988-0083 |
| Q3: 能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:可以，只要它的分子量小于5,000且具有活性巯基。可以参照标记小分子的操作说明。 |
| Q4:LK09所能标记的最小的IgG的量是多少？ |
| A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。但是，在步骤8，使用SH-reactive peroxidase溶液时，用量缩小为原来的1/5，也能够标记10 μg的IgG。 |
| Q5: 每个IgG能够标记多少辣根过氧化物酶分子？ |
| A:每个IgG平均能标记上1-2个辣根过氧化物酶分子。 |
| Q6:标记蛋白质之前是否必须先使用过滤管？ |
| A:如果蛋白溶液中不含有带有活性巯基的小分子并且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右，则没有必要使用过滤管。只需要将样品溶液和Solution B混合，再把混合液加入到SH-reactive peroxidase管中即可。 |
| Q7:是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？ |
| A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该试验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。 |
| Q8:我的样品中含有小的不溶物，我该怎么办？ |
| A:低速离心后用上清液来标记。 |
| Q9:标记反应结束后，未标记的SH-reactive peroxidase是否仍然含有活性马来酰亚胺？ |
| A:不含有。几乎100%的SH-reactive peroxidase都被用于了IgG或者小分子的标记。 |
| Q10:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？ |
| A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。 |
特点：
● POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。
● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● POD标记的产品只需与NH2-反应性过氧化物酶混合即可形成。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● POD标签可以用随附的保存溶液保存。
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试剂盒内含
产品概述
该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的辣根过氧化物酶标IgG以及竞争性EIA所需的辣根过氧化物酶标抗原。该试剂盒中的NH2-reactive peroxidase具有琥珀酰亚胺基 (NHS)，它能够与含有NH2的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的所有试剂，包括储存用缓冲液。标记过程相当简单：只需将IgG和NH2-reactive peroxidase混合并且在37℃下培养2小时。NH2-reactive peroxidase不需任何活化就可以和靶分子形成共价键。NHS与辣根过氧化物酶之间的距离大约为1.2nm，为辣根过氧化物酶分子半径的一半。因此，当辣根过氧化物酶标IgG用于EIA时，NH2-reactive peroxidase的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。由于NH2-reactive peroxidase自身的氨基已经被阻断，因此自身不会发生反应。
原理
操作步骤
使用注意事项:
1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。
2.所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。
3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。
4.如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化（不包含于此试剂盒中）。如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。
5.如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶NH2-reactive peroxidase放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。
标记IgG操作步骤：
（1）将100μl Washing buffer以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。b）
（3）将10μl Reaction buffer加入到NH2-reactive peroxidase中并用移液器吹打使其溶解。
（4）将含有NH2-reactive peroxidase的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吸取溶液吹吸净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。
（6）将100μl Washing buffer加入到过滤管中。如果滤液的体积超过300μl，在进行步骤7前需要先丢弃滤液。
（7）8,000-10,000g离心10分钟。b）
（8）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。c） 将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。如果在聚积过程中，滤液体积达到或超过了400μl，则需在进行下一步离心前将滤液除去。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记产物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-3个辣根过氧化物酶分子。没有被结合的辣根过氧化物酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常，辣根过氧化物酶标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。
标记小分子操作步骤：
（1）用Reaction buffer制备50μl，1mM的氨基化合物，a）并将该溶液加入到NH2-reactive peroxidase管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。
（2）将100μl Washing buffer加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。
（3）在8,000-10,000g离心10分钟，b）弃滤液，向管中加入200μl Washing buffer。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g离心10分钟。b）
（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收抗体。c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）如果氨基化合物在水溶液中无法溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl与45μl Reaction buffer混合。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记产物的浓度大约为400-500μg/ml (10-12.5μM)。1-2个靶分子能够和1个辣根过氧化物酶分子结合。
d）标记后的小分子在0-5℃下能够存放至少6个月。
产品优势
1）POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。
2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）POD标记的产品只需与NH2-反应性过氧化物酶混合即可形成。
5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
6）POD标签可以用随附的保存溶液保存。
常见问题Q&A
| Q1: 标记反应结束后，未反应的NH2-reactive peroxdase是否还具有活性？ |
| A:没有了。它在反应过程中会完全被水解。 |
| Q2: 标记反应过程中，NH2-reactive peroxdase是否会形成一些低聚物？ |
| A:不会。由于NH2-reactive peroxdase中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。 |
| Q3: 是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？ |
| A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该实验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。 |
| Q4:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？ |
| A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。 |
| Q5: 能够使用这个试剂盒标记Fab或者Fab’吗？ |
| A:可以标记。并且回收率通常都超过80%。 |
| Q6:能够用这个试剂盒标记其它蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000或者<5,000且具有活性伯胺或仲胺结构。如果分子量>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品用LK11-10来标记。 如果分子量<5,000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话：800-988-0083 |
| Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:可以。只要它的分子量小于5,000且具有活性伯胺或仲胺。可以参照标记小分子的操作说明。 |
| Q8:LK11所能标记的最小的IgG的量是多少？ |
| A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。尽管这个试剂盒也能标记10 μg的IgG，但是本底会较高。 |
| Q9:每个IgG能够标记多少辣根过氧化物酶分子？ |
| A:每个IgG平均能标记上1-3个辣根过氧化物酶分子。 |
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