标签： 脂质

Beyotime 脂质氧化(MDA)检测试剂盒

产品名称：Beyotime 脂质氧化(MDA)检测试剂盒

产品货号：S0131S

英文名称：Lipid Peroxidation MDA Assay Kit

产品规格：100次

产品介绍：

碧云天的脂质氧化(MDA)检测试剂盒(Lipid Peroxidation MDA Assay Kit)采用一种基于MDA和TBA反应产生红色产物的显色反应，随后通过比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中MDA进行定量检测，广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation)水平检测的试剂盒。

 

产品原理：

丙二醛(Malondialdehyde,MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物。动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA。此时通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA的测定被广泛用作脂质氧化的指标。生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA，例如thromboxane synthase也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。

丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA发生反应，形成红色的MDA-TBA加合物，MDA-TBA加合物在535nm处有最大吸收，据此可以通过比色法进行检测。另外，MDA-TBA加合物也可以在535nm被激发产生最大发射波长553nm，据此也可以进行荧光检测。

 

产品特点：

1.特殊的抗氧化剂有效地抑制样品在检测过程中产生新的MDA，使检测更加准确。同时本检测试剂盒在检测过程中可以把部分MDA天然形成的聚丙二醛分解成MDA，使对脂质氧化的测定更加准确。

2.本试剂盒可以检测低达1μM的MDA，也可检测高达200μM的MDA在本试剂盒的检测范围内，可以直接用本试剂盒检测血浆、血清、尿液样品等。

 

产品组分：

TBA 25mg

TBA配制液 6.76ml

TBA稀释液 15ml

抗氧化剂 300μl

标准品(1mM) 200μl

说明书 1份

保存条件：

-20℃保存，一年有效。TBA和抗氧化剂需避光保存，TBA配制液和TBA稀释液可室温或4℃存放三个月。

 

产品订购信息：

品牌             货号                   名称                                             规格

Beyotime    S0131S       脂质氧化(MDA)检测试剂盒

产品名称：Beyotime 脂质氧化(MDA)检测试剂盒

产品货号：S0131S

关于公司：

Beyotime创办于2001年。近20年来专注于自主研发和生产。2007年成立上海碧云天生物技术有限公司，为特新“小巨人”企业，并进一步入选第二批第一年建议支持的专精特新“小巨人”企业， 也是G60科创走廊一类重点扶持企业和上海市专精特新中小企业。江苏碧云天为江苏省优良企业，南通市双创优企。公司主要研发生产生物、医学研究用试剂、试剂盒、消耗品和仪器设备。

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248
细胞脂质过氧化物检测试剂盒
Liperfluo
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光，充氮气
运输条件：室温

特点：

● 特异性检测铁死亡相关的脂质过氧化

● 比BODIPY C11更适合于胞内定位

● 铁死亡常见指标之一

选择规格：
50μg
50μg*5

 

凑单关联产品TOP5

NO.1.    Lipid Peroxidation Probe -BDP   脂质过氧化探针BDP 

NO.2.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测

NO.3.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽

NO.4.    Mito-FerroGreen    线粒体内亚铁离子检测

NO.5.    ROS Assay Kit    活性氧检测 

 

规格性状

性状：深红色结晶粉末或固体。

纯度（HPLC）：90.0%以上

核磁共振谱：符合一致性

<使用次数>每50µg可用5-50次

产品概述

Liperfluo是Spy-LHP的类似物，可用于检测脂质过氧化物 (LPO)，Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长)，因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团，因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光，但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。

特点：

1）能够成像和检测细胞中的脂质过氧化物

2）长波长激发，可以减少光损伤和自发荧光对细胞的影响

3）高度脂质过氧化物特异性

研究领域

在铁死亡研究中：

作为细胞死亡形式之一，在铁死亡研究中使用到Liperfluo

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      细胞种类

(铁死亡诱导剂）

                                     论文信息
人支气管上皮细胞（RSL3） Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium.
小鼠成纤维细胞(RSL3) Oxidized arachidonic and adrenic PE s navigate cells to ferroptosis.
HeLa细胞(添Erastin或Brefeldin A) Golgi stress   mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells.

原理

Liperfluo是Spy-LHP的类似物，可用于检测脂质过氧化物 (LPO)，Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长)，因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团，因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光，但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。

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荧光特性

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激发波长Ex：488 nm，发射波长Em：500-550 nm

操作步骤

1.在dish等容器中接种细胞并培养。

2.去除培养基后，用无血清培养基清洗一次。

3.加入合适浓度的Liperfluo工作液，在37℃培养30 min。

※请根据细胞种类，诱导药物等实验条件，摸索最佳的Liperfluo工作液浓度。

4.去除上清液后，用无血清培养基清洗2次。

5.用荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。

实验例

用激光共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞

1) 在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种HeLa细胞 (3.0×104个/孔、含血清MEM培养基)，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞1次。

3) 将200 μl用无血清MEM培养基稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

4) 去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。

5) 均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的 t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。

6) 用共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。

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用流式细胞仪检测HeLa细胞

1) 将HeLa细胞 (1.0×105个/孔、含血清MEM培养基) 接种至6孔板(Thermo公司) 中，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞1次。

3) 将2 ml用无血清MEM培养基稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入6孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

4) 去除溶液，用2 ml HBSS清洗2次。

5) 均匀地加入2 ml用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP (tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。

6) 用胰酶消化细胞后，用含有血清的MEM培养基重悬细胞，移至管中并将培养基更换为HBSS。

7) 用流式细胞仪检测 (激发波长：488 nm，发射波长：515-545 nm)。

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用Erastin诱导铁死亡细胞的荧光成像

1) 在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×105个/孔、含血清DMEM培养基)，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

3) 去除培养基，用200 μl HBSS清洗2次。

4) 去除HBSS，加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

5) 去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。

6) 用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。

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常见问题Q&A

Q1.文献实验方法：先加Liperfluo，后加药；说明书实验方法：先加药，后加探针， 哪种方法比较好？
A1: 都可以。

先加Liperfluo再加药

用共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞

（1）在μ-slide 8孔板中（ibidi公司）接种HeLa细胞（3.0×104个/孔、含血清MEM培养基），在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

（2）去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞一次。

（3）将200 μl无血清MEM培养基稀释后的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

（4）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。

（5）均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。

（6）用共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。

先加药再加Liperfluo

（1）在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×105个/孔、含血清DMEM培养基)，

在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

（2）去除培养基，加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液，

在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

（3）去除培养基，用200 μl HBSS清洗2次。

（4）去除HBSS，加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液，

在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

（5）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。

（6）用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。
Q2. Liperfluo如果按照文献进行，先加探针，后加药，荧光淬灭时间为2小时可能无法满足实验，希望延长荧光时间，是否有好的方法？或者是否可以加荧光防淬灭剂？
A2: 关于荧光抗淬灭剂：由于抗淬灭剂的作用原理，有可能无法在实验中使用。

其他的改善方法：

(1)如果褪色的原因是由光源照射造成的褪色。可以尝试减小光源强度进行观测。

(2)清洗操作后长时间放置可能会造成探针向细胞外漏出。可考虑不清洗直接观察。
Q3.Liperfluo由于是活细胞荧光探针，如果铁死亡发生，导致细胞膜破裂后，荧光是否存在？
A3:由于Liperfluo是活细胞探针，对死细胞无法发挥出探针的正常性能。
Q4：培养基中酚红或血清对实验有没有影响？此外，在背景高或荧光弱的情况下有没有改善意见？
A4:可用于酚红或含血清培养基。但是，如果背景高，请用PBS替换。     此外，当背景较高时，Liperfluo可能会被光自然氧化，培养时也请尽量遮光。

(溶解后请务必用铝箔等遮光)。

荧光强度弱的情况下，即使反应时间延长，背景也会变高，所以不推荐。

因此，建议调整设备 (荧光观察)的条件。

1.增强激发光的强度。

2.延长曝光时间。
Q5：悬浮和贴壁细胞都可以使用Liperfluo染色吗？是否可以染色固定细胞
A5:悬浮和贴壁细胞，都可以使用。

有实验经验的：HL-60细胞(悬浮细胞)，CHO细胞·SH-SY5Y细胞(贴壁细胞)等，固定的细胞不能染色。