SORFA专注生产制造生命科学耗材十几年，目前拥有上千种产品。
产品远销北美、欧洲、东亚、中东等80多个国家和地区。
SORFA工厂厂区占地26000多平方米，同时拥有十万级净化车间三千多平方米；
且通过了ISO 13485:2012质量体系认证，部分产品通过CE认证和FDA认证。
Sorfa产品分为移液系列、离心系列、细胞培养系列、微生物系列、过滤系列、冻存系列、防护系列等几大类。
Sorfa的微生物系列包括了均质袋、接种针、接种环、涂布棒、采样袋、培养皿等产品。
Sorfa 细胞刮刀
产品特点：
采用医用级高分子PP材料 ，GMP10万级洁净车间生产
刀片质地柔软，易于操作，减少细胞损伤
刀柄不同长短满足对不同培养容器的细胞收集
刀片两种大小供选择，满足不同需求
无热原，无内毒素，无细胞毒性
辐照灭菌，SAL 10-6
订购信息：
| 货号 | 产品描述 | 包装规格 | 装箱数量 |
| 260100 | 250mm细胞刮刀，刀片长18mm，独立灭菌包装 | 1根/包，50包/盒 | 50根/盒 |
| 260200 | 250mm细胞刮刀，刀片长30mm，独立灭菌包装 | 1根/包，50包/盒 | 50根/盒 |
| 260300 | 400mm细胞刮刀，刀片长18mm，独立灭菌包装 | 1根/包，50包/盒 | 50根/盒 |
| 260400 | 400mm细胞刮刀，刀片长30mm，独立灭菌包装 | 1根/包，50包/盒 | 50根/盒 |
C34H40N2O18
764.68
特点：
● 螯合率高于EGTA
● 可螯合细胞内的钙离子
性质
BAPTA-AM是BAPTA羧基的乙酰氧基甲基酯化产物，可以很容易地吸收到细胞中。 该酯被细胞内酯酶分解，显示出主体在细胞中作为BAPTA的功能。 生成的BAPTA保留在细胞内部。
参考文献
1) R. Y. Tsien, “New Calcium Indicators and Buffers with High Selectivity against Magnesium and Protons: Design, Synthesis, and Properties of Prototype Structures”, Biochemistry, 1980, 19 (11), 2396.
2) R. Y. Tsien, “A Non-disruptive Technique for Loading Calcium Buffers and Indicators into Cells”, Nature, 1981, 290, 527.
3) J. I. Korenbrot, D. L. Ochs, J. A. Williams, D. L. Miller and J. E. Brown, “The Use of Tetracarboxylate Fluorescent Indicators in the Measurement and Control of Intracellular Free Calcium Ions”, Soc. Gen. Physiol. Ser., 1986, 40, 347.
4) S. M. Harrison and D. M. Bers, “The Effect of Temperature and Ionic Strength on the Apparent Ca-affinity of EGTA and the Analogous Ca-chelators BAPTA and Dibromo-BAPTA”, Biochim. Biophys. Acta, 1987, 925, 133.
5) E. W. Gelfand and R. K. Cheung, “Dissociation of Unidirectional Influx of External Ca2+ and Release from Internal Stores in Activated Human T Lymphocytes”, Eur. J. Immunol., 1990, 20, 1237.
6) J. P. Kao, J. M. Alderton, R. Y. Tsien and R. A. Steinhardt, “Active Involvement of Ca2+ in Mitotic Progression of Swiss 3T3 Fibroblasts”, J. Cell Biol., 1990, 111, 183.
7) M. L. Schubert and J. Hightower, “Functionally Distinct Muscarinic Receptors on Gastric Somatostatin Cells”, Am. J. Physiol., 1990, 258, G982.
8) Y. Tojyo and Y. Matsumoto, “Inhibitory Effects of Loading with the Calcium-chelator 1, 2-Bis(o-aminophenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid (BAPTA) on Amylase Release and Cellular ATP Level in Rat Parotid Cells”, Biochem. Pharmacol., 1990, 39(11), 1775.
规格性状
规格性状：
该产品为无色液体。
纯度（HPLC）：98.0％以上
处理条件
1.危险物第4类，第3石油类，危险等级Ⅲ 2.无火 3.储存方法：冷冻，避光
性质
5-羧基荧光素是一种通过将染料掺入细胞来研究细胞内pH变化的方法，但是当用于pKa = 7.0的细胞(如淋巴细胞)中时，染料会从细胞中洗脱出来，很难快速测定。 BCECF引入了两个羧乙基基团以减少从细胞中的洗脱。 适用于研究细胞内pH变化(λex= 490 nm，λem= 526 nm)。
注意事项
・如果将本产品以粉末形式取出并使用，由于其性质，静电等因素，它可能会粘附在容器内部，从而难以完全取出。
・对于粘附在容器上且无法取出的粉末，请在使用前将要使用的溶剂倒入容器中并溶解。
溶解例
2 mg / ml(甲醇)
规格性状
规格性状：
该产品为橙色至红棕色粉末，可溶于甲醇。
纯度（HPLC）：85.0％以上
溶于甲醇：测试合格
荧光光谱：测试合格
红外光谱：测试合格
NMR光谱：测试一致
处理条件：
1.储存方法：避光
| 染料名 | 检测法 | 荧光色 | λex (nm) | λem (nm) | 染色参考 |
| BCECF-AM | 荧光 | 绿 | 490 | 526 | 进入细胞内AM体分解 |
| Calcein-AM | 荧光 | 绿 | 490 | 515 | 进入细胞内AM体分解 |
| CFSE | 荧光 | 绿 | 496 | 516 | 结合细胞内的蛋白质 |
| FDA | 荧光 | 绿 | 488 | 530 | 細胞内加水分解 |
| PI | 荧光 | 红 | 530 | 620 | 只能染色死細胞（蓝色） |
| AO | 荧光 | 绿 | 502 | 526 | 细胞核染色 |
| DAPI | 荧光 | 兰 | 360 | 460 | 结合死细胞的核酸 |
| Hoechst 33258 | 荧光 | 兰 | 350 | 461 | 结合活细胞/死细胞核酸 |
| Hoechst 33342 | 荧光 | 兰 | 352 | 461 | 结合死细胞的核酸 |
| MitoRed | 荧光 | 红 | 560 | 580 | |
| Rh123 | 荧光 | 绿 | 507 | 529 | |
| MitoBright LT Green | 荧光 | 绿 | 493 | 508 | 线粒体染色 |
| MitoBright LT Red | 荧光 | 红 | 548 | 564 | 线粒体染色 |
| MitoBright LT Deep Red | 荧光 | 深红 | 644 | 666 | 线粒体染色 |
| 染料名 | 检测法 | 荧光色 | λex (nm) | λem (nm) | 染色参考 |
| BCECF-AM | 荧光 | 绿 | 490 | 526 | 进入细胞内AM体分解 |
| Calcein-AM | 荧光 | 绿 | 490 | 515 | 进入细胞内AM体分解 |
| CFSE | 荧光 | 绿 | 496 | 516 | 结合细胞内的蛋白质 |
| FDA | 荧光 | 绿 | 488 | 530 | 細胞内加水分解 |
| PI | 荧光 | 红 | 530 | 620 | 只能染色死細胞（蓝色） |
| AO | 荧光 | 绿 | 502 | 526 | 细胞核染色 |
| DAPI | 荧光 | 兰 | 360 | 460 | 结合死细胞的核酸 |
| Hoechst 33258 | 荧光 | 兰 | 350 | 461 | 结合活细胞/死细胞核酸 |
| Hoechst 33342 | 荧光 | 兰 | 352 | 461 | 结合死细胞的核酸 |
| MitoRed | 荧光 | 红 | 560 | 580 | |
| Rh123 | 荧光 | 绿 | 507 | 529 | |
| MitoBright LT Green | 荧光 | 绿 | 493 | 508 | 线粒体染色 |
| MitoBright LT Red | 荧光 | 红 | 548 | 564 | 线粒体染色 |
| MitoBright LT Deep Red | 荧光 | 深红 | 644 | 666 | 线粒体染色 |
细胞染色
| 染料名 | 检测法 | 荧光色 | λex (nm) | λem (nm) | 染色参考 |
| BCECF-AM | 荧光 | 绿 | 490 | 526 | 进入细胞内AM体分解 |
| Calcein-AM | 荧光 | 绿 | 490 | 515 | 进入细胞内AM体分解 |
| CFSE | 荧光 | 绿 | 496 | 516 | 结合细胞内的蛋白质 |
| FDA | 荧光 | 绿 | 488 | 530 | 細胞内加水分解 |
| PI | 荧光 | 红 | 530 | 620 | 只能染色死細胞（蓝色） |
| AO | 荧光 | 绿 | 502 | 526 | 细胞核染色 |
| DAPI | 荧光 | 兰 | 360 | 460 | 结合死细胞的核酸 |
| Hoechst 33258 | 荧光 | 兰 | 350 | 461 | 结合活细胞/死细胞核酸 |
| Hoechst 33342 | 荧光 | 兰 | 352 | 461 | 结合死细胞的核酸 |
| MitoRed | 荧光 | 红 | 560 | 580 | |
| Rh123 | 荧光 | 绿 | 507 | 529 | |
| MitoBright LT Green | 荧光 | 绿 | 493 | 508 | 线粒体染色 |
| MitoBright LT Red | 荧光 | 红 | 548 | 564 | 线粒体染色 |
| MitoBright LT Deep Red | 荧光 | 深红 | 644 | 666 | 线粒体染色
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细胞染色
凑单关联产品TOP5
NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.2. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测
NO.3. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.5. ROS Assay Kit 活性氧检测
试剂盒内含
500 次 3000 次
・Calcein-AM Reagent 200 μg x 1 1 mg x 1
・PI Stock Solution (1.5 mmol/l) 200 μl x 1 1 ml x 1
・DMSO 200 μl x 1 1 ml x 1
产品概述
Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒内含两种染料：Calcein-AM和Propidium Iodide (PI)。这个试剂盒可在荧光显微镜下同时观察在同一个细胞培养皿中的活细胞和死细胞。Calcein-AM可透过细胞膜，通过活细胞内的酯酶作用脱去AM基团，产生的Calcein (钙黄绿素) 发出强绿色荧光，因此活细胞在荧光显微镜下可被检测到绿色荧光。另一方面PI可以通过受损的细胞膜进入到死细胞内并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光，因此死细胞会被检测到红色荧光。除了用荧光显微镜外，也有报道可以用流式细胞仪和荧光酶标仪来进行定量检测。
荧光特性
Calcein-AM : λex=490 nm , λem=515 nm
PI : λex=530 nm , λem=580 nm
染色例
细胞染色实例
（a） （b） （c）
a) Calcein-AM染FTC细胞（活细胞单染）
b) PI染HCT116细胞（死细胞单染）
c) Calcein-AM、PI染MHD-1 细胞（活死细胞双染）
最佳浓度摸索
由于不同细胞种类、细胞浓度的染色条件不同，我们建议自行摸索一下Calcein-AM和PI的最适浓度。
Calcein-AM和PI的最佳浓度是根据不同的细胞种类而定，通过以下的操作，我们可以找到不同细胞染色试剂的最佳浓度：
1. 通过在0.1%皂苷或0.1-0.5%毛地黄皂苷中培养10 min或通过在70%乙醇中培养30 min制备死细胞。
2. 用0.1-10 μM PI溶液染死细胞，以便找到仅针对细胞核染色而不对细胞质染色的PI浓度。
3. 用0.1-10 μM Calcein-AM溶液染死细胞，以便找到不对细胞质染色的Calcein-AM浓度，再以此浓度的Calcein-AM对活细胞染色以检验活细胞是否被染色。
操作步骤
以HeLa细胞为例
制备1 mmol/l的Calcein-AM储存液
【500 次】
将200 μl DMSO加入到含200 μg Calcein-AM粉末的管中，用移液器吹打溶解。
【3000 次】
将1 ml DMSO加入到含1 mg Calcein-AM粉末的管中，用移液器吹打溶解。
※Calcein-AM储存液需要避光，在-20℃密封保存。
制备染色工作液
将Calcein-AM储存液和PI储存液恢复至室温后使用。
在5 ml的PBS（-）中加入10 μl Calcein-AM储存液和15 μl PI储存液，混匀制成工作液。此时Calcein-AM的浓度为2 μmol/l，而PI的浓度为4.5 μmol/l。
染色步骤
1、 用Trypsin-EDTA消化细胞。
2、 通过离心收集细胞（1,000 rpm，3 min）。
3、 去除上清液，加入PBS（-）制备细胞悬液（105 – 106 cells/ml为宜）。
4、 重复步骤2和步骤3数次以消除培养基中的酯酶活性。
5、 取100 μl 染色工作液与200 μl 细胞悬液混合，在37℃培养15 min。
6、 在490±10 nm激发波长下同时观察黄绿色荧光的活细胞和红色荧光的死细胞。另外用545 nm激发波长单独观察死细胞。
注意事项
1、 由于本试剂盒中的Calcein-AM Reagent 粉末和PI Stock Solution量很少，有可能会粘在盖子或管壁上，开封前请先涡旋以使其振落下来。
2、 由于Calcein-AM储存液对潮气敏感，请在使用后密闭Calcein-AM储存液的盖子。如果不能一次用完，建议分装保存，例如分装成10 μl/管，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。
3、 配制好的染色工作液请在当天使用。
4、 PI有疑似致癌性，使用前应注意以下几点：
1） 使用时请带好手套，口罩，防护眼镜等，不要接触到或呼吸到。
2） 当PI不慎接触到皮肤时，请立刻用大量的水冲洗。
3） 处理方法
清洗容器的清洗液和废液请按照实验室的有毒有害物质的处理方法进行处理，或按照以下方法处理：
・用UV照射的方法进行分解
・用次氯酸钠氧化分解后，进行中和处理
特点：
● 检测灵敏度高
● 操作简便，用时短
● 可以用荧光酶标仪做高通量筛选
● 荧光染料泄露少，数据重现性高
产品概述
细胞通过摄入各种各样的营养物质并在胞内的代谢作用下产生能量。营养物代谢的过程随着细胞外环境、细胞状态、细胞种类的不同亦不尽相同。近年来的研究发现，营养代谢不仅与能量的产生密切相关，还与基因表达等各种各样的细胞调节机制有关。葡萄糖是最重要的一种营养物质，细胞摄取葡萄糖的过程对于研究和理解细胞机能非常重要。细胞摄取葡萄糖的评价方法主要是放射性同位素示踪法。但是由于放射性同位素示踪法操作繁杂，泛用性并不高。另外，还有一种使用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)的酶循环法，该方法虽然可以进行孔板检测，但是无法用于荧光显微镜和流式细胞仪观察。因此，最近常用的方法是通过葡萄糖类似物2-NBDG的荧光检测法1)。然而，2-NBDG也有荧光强度弱、灵敏度低的问题，而且被细胞摄取的2-NGDG还有从细胞中向外泄漏的情况出现。同仁化学研究新开发的荧光葡萄糖类似物Glucose Uptake Probe-Blue是一种比2-NBDG灵敏度更高的葡萄糖摄取能力检测试剂。而且使用本试剂盒中包含的Washing and Imaging (WI) Solution可以抑制探针从细胞内泄漏，得到重现性更高的实验数据。
产品优势
与传统方向相比的优势！ 4大特征
Glucose Uptake Probe-Blue是蓝色荧光染料，可以轻松得与其他颜色的荧光染料共染色。另外，由于采用高亮度的荧光染料，相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。
① 与其他荧光染料的共染色
可以根据实验需求，选择其他荧光染料与Glucose Uptake Probe进行共染色，一次检测多个指标。下图是用Glucose Uptake Probe Blue与脂肪滴(红色：Lipi-Red 货号LD03)共染色脂肪细胞分化而来的3T3-L1细胞的荧光图像。
<观测条件>
细胞： 3T3-L1
检测条件：
Glucose Uptake Probe-Blue：Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm
Lipi-Red：Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm
② 可用荧光显微镜或流式细胞仪检测
下面是分别使用不含葡萄糖的培养基以及高葡萄糖浓度的培养基培养A549细胞并用Glucose Uptake Probe-Blue进行染色的实验结果。可以观察到高浓度葡萄糖对Glucose Uptake Probe-Blue摄入的抑制作用。结果分别用荧光显微镜和流失细胞仪进行检测。
细胞：A549
检测条件
Glucose Uptake Assay Kit-Blue：Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm
③ 快速检测
使用高亮度的Glucose Uptake Probe-Blue，即使使用2-NBDG完全相同的实验步骤，也可以大幅缩短实验时间。
操作的前处理、染色(进入细胞内的过程)的步骤只需要清洗3次，非常简便。
④ 减少荧光染料的泄漏
使用试剂盒附带的WI Solution清洗细胞，可以抑制染料进入细胞后的泄漏，得到重现性更高的数据。详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02的页面。
与传统法的比较
*以上结果源自A549细胞实验的结果，其他细胞系的向胞外泄露的时间可能不同。
相关产品区别
与Glucose Assay Kit的不同点
Glucose Uptake Probe-Green和Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)的不同点。
1.Glucose Assay Kit-WST可以定量检测细胞上清液中葡萄糖的消费量。
Glucose Uptake Assay Kit无法定量检测葡萄糖。
2.Glucose Uptake Assay Kit-Green可短时间内检测葡萄糖摄取能力的差值。
Glucose Assay Kit-WST无法在短时间内检测葡萄糖量的变化。
详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02的页面。
实验例
实验例1：Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用
HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后，使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察。
荧光显微镜观察
(Scale Bar: 50 μm)
<观测条件>
细胞：HepG2细胞
使用培养基：MEM (5.5 mmol/l Glucose)
培养条件：5 µmol/l Cytochalasin B / MEM （5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS）, 37℃, 24 h
染色条件：Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM （0 mol/l Glucose）, 37℃, 15 min
检测仪器：荧光显微镜；
Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm
Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm
Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm
实验例2：Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进
胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。
荧光显微镜观察
(Scale Bar: 50 μm)
<观测条件>
细胞：mouse adipocyte
使用培养基：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)
刺激条件：0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min
染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min
检测仪器：荧光显微镜；
Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm
Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm
Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm
实验例：饥饿培养诱导细胞自噬以及葡萄糖摄取能力的变化
用自噬体染色试剂DAPRed和自噬溶酶体染色试剂DALGreen染色HeLa细胞后，再用不含氨基酸的培养基饥饿培养3小时诱导细胞自噬。通过荧光显微镜观察发现DAPRed和DALGreen的荧光强度增强，证明细胞自噬的发生，另外通过Glucose Uptake Probe-Blue观察到细胞摄取葡萄糖的能力上升。
<检测条件>
Blue: Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm
Green: Ex = 450-490 nm, Em = 500-550 nm
Red: Ex = 533-557 nm, Em = 570-640 nm
Scale bar: 50 μm
常见问题Q&A
| Q1:Glucose Uptake Probe-Blue具体是通过哪种葡萄糖转运蛋白进入细胞的？ |
| A：对于具体的每一种葡萄糖转运蛋白的特异性目前还没有详细的数据。 |
| Q2：Glucose Uptake Probe-Blue被细胞摄入后，会被分解或代谢掉吗？ |
| A：染料的荧光部分非常稳定，实验范围内的操作不会造成分解。另外，类葡萄糖的部位，从结构上考虑可能会被Hexokinase(己糖激酶)磷酸化，除此以外应该不会参加任何代谢反应。 |
| Q3: Glucose Uptake Probe-Blue被活细胞摄入后，可以进行细胞固定的操作吗？ |
| A：由于荧光探针会从细胞内漏出，染色后无法进行细胞固定。 |
| Q4：Probe working solution可以长期保存吗？ |
| A：Probe working solution无法长期保存，请现配现用。Probe stock solution冷冻可以保存一个月。 |
| Q5: 无法观察到荧光信号变化的时候，应该怎么办？ |
| A：预实验的时候可以先从稀释浓度（x250~x1,000）、染色时间(5 min~1 h)范围内进行摸索。 |
| Q6：荧光背景高的时候，应该怎么办？ |
| A：可能是由于有未被细胞摄入的残留荧光染料。请用WI Solution再多进行一次清洗操作。 |
| Q7: 用WI solution清洗之后，荧光染料可以在细胞内停留多长时间？ |
| A：一般在室温下可以保持在细胞内1 h左右，不同的细胞种类，时间可能会有一定差别。 |
| Q8：可以对葡萄糖进行定量检测吗？ |
| A：本产品不能用于葡萄糖的定量检测。如果需要定量检测培养基中的葡萄糖的消耗量或者细胞内的葡萄糖量，可以使用同仁化学研究所的Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)。 |
| Q9: 可以对被细胞摄入的染料进行定量吗？ |
| A：不可以对细胞摄入的染料进行定量。本试剂盒是葡萄糖摄取能力强弱或增减的检测试剂盒。 |
| Q10: 如果无法通过葡萄糖的竞争性抑制细胞探针的摄取，该如何解决？ |
A：竞争性抑制是否发生取决于每个细胞中的葡萄糖转运蛋白的表达水平和类型。（例如：HepG2细胞）
在这种情况下，使用2-脱氧葡萄糖(2-DG)进行预处理可能会在葡萄糖竞争抑制方面产生差异。请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green(产品代码:UP02)的使用示例。 2-DG预处理对探针摄取的抑制和葡萄糖竞争性抑制(HepG2细胞) 1.将细胞接种在培养皿或微孔板中，并在5% CO₂培养箱(37°C)中培养过夜。 2.除去培养基[DMEM (10% FBS，高葡萄糖)]后，加入50 mmol/l 2-DG/培养基，并在5% CO₂培养箱(37℃)中培养细胞2小时。 3.清洗细胞两次。 4.加入预热的DMEM(无葡萄糖，无血清)并将细胞在5%CO₂中孵育 在培养箱(37°C)中培养15 min。 5.除去上清液后，加入预热的探针溶液并在5% CO₂中孵育 在培养箱(37°C)中培养15 min。 6.除去上清液后，用冷却的WI溶液(1x)洗涤细胞两次。 7.除去上清液后，加入冷却后的WI溶液(1x)，并在室温下培养 5分钟。 8.除去上清液后，加入冷却的WI溶液(1x)。 9.荧光显微镜下观察细胞。
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| Q11: 目前有过检测实例的细胞有哪些? |
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| Q12: 以下为不同细胞添加抑制剂后，葡萄糖摄取能力检测实验。 |
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规格性状
| Glucose Uptake Probe-Blue ×1
WI Solution (50X) 5 ml ×1 供参考的可测次数 每个试剂盒大约可检测12枚35 mm dish或1枚96孔板 |
特点：
● 检测灵敏度高
● 操作简便，用时短
● 可以用荧光酶标仪做高通量筛选
● 荧光染料泄露少，数据重现性高
产品概述
细胞通过摄入各种各样的营养物质并在胞内的代谢作用下产生能量。营养物代谢的过程随着细胞外环境、细胞状态、细胞种类的不同亦不尽相同。近年来的研究发现，营养代谢不仅与能量的产生密切相关，还与基因表达等各种各样的细胞调节机制有关。葡萄糖是最重要的一种营养物质，细胞摄取葡萄糖的过程对于研究和理解细胞机能非常重要。细胞摄取葡萄糖的评价方法主要是放射性同位素示踪法。但是由于放射性同位素示踪法操作繁杂，泛用性并不高。另外，还有一种使用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)的酶循环法，该方法虽然可以进行孔板检测，但是无法用于荧光显微镜和流式细胞仪观察。因此，最近常用的方法是通过葡萄糖类似物2-NBDG的荧光检测法1)。然而，2-NBDG也有荧光强度弱、灵敏度低的问题，而且被细胞摄取的2-NGDG还有从细胞中向外泄漏的情况出现。同仁化学研究新开发的荧光葡萄糖类似物Glucose Uptake Probe-Red是一种比2-NBDG灵敏度更高的葡萄糖摄取能力检测试剂。而且使用本试剂盒中包含的Washing and Imaging (WI) Solution可以抑制探针从细胞内泄漏，得到重现性更高的实验数据。
产品优势
与传统方向相比的优势！ 4大特征
Glucose Uptake Probe-Red是红色荧光染料，可以与红色野外其他颜色的荧光染料共染色。另外，由于采用高亮度的荧光染料，相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。
① 与其他荧光染料的共染色
可以根据实验需求，选择其他荧光染料与Glucose Uptake Probe进行共染色，一次检测多个指标。下图是用Glucose Uptake Probe Red与脂肪滴(绿色：Lipi-Green货号LD02)共染色脂肪细胞分化而来的3T3-L1细胞的荧光图像。
<观测条件>
细胞： 3T3-L1
检测条件：
Glucose Uptake Probe-Red：Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm
Lipi-Green：Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm
② 可用荧光显微镜或流式细胞仪检测
Glucose Uptake Probe-Red除了荧光显微镜和流式细胞仪以外还可以用荧光酶标仪进行检测。下面是A549细胞的葡萄糖摄取能力的检测结果，可以明显观察到高浓度葡萄糖对Glucose Uptake Probe-Red摄入的抑制作用。
细胞：A549
检测条件
Glucose Uptake Assay Kit-Red：Ex = 545 nm, Em = 605 nm
③ 快速检测
使用高亮度的Glucose Uptake Probe-Blue，即使使用2-NBDG完全相同的实验步骤，也可以大幅缩短实验时间。
操作的前处理、染色(进入细胞内的过程)的步骤只需要清洗3次，非常简便。
④ 减少荧光染料的泄漏
使用试剂盒附带的WI Solution清洗细胞，可以抑制染料进入细胞后的泄漏，得到重现性更高的数据。详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02的页面。
与传统法的比较
*以上结果源自A549细胞实验的结果，其他细胞系的向胞外泄露的时间可能不同。
相关产品区别
与Glucose Assay Kit的不同点
Glucose Uptake Probe-Green和Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)的不同点。
1.Glucose Assay Kit-WST可以定量检测细胞上清液中葡萄糖的消费量。
Glucose Uptake Assay Kit无法定量检测葡萄糖。
2.Glucose Uptake Assay Kit-Green可短时间内检测葡萄糖摄取能力的差值。
Glucose Assay Kit-WST无法在短时间内检测葡萄糖量的变化。
详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02 的页面。
实验例
实验例1：Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用
HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后，使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察。
荧光显微镜观察
(Scale Bar: 50 μm)
<观测条件>
细胞：HepG2细胞
使用培养基：MEM (5.5 mmol/l Glucose)
培养条件：5 µmol/l Cytochalasin B / MEM （5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS）, 37℃, 24 h
染色条件：Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM（0 mol/l Glucose）, 37℃, 15 min
检测仪器：荧光显微镜；
Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm
Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm
Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm
实验例2：Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进
胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。
荧光显微镜观察
(Scale Bar: 50 μm)
<观测条件>
细胞：mouse adipocyte
使用培养基：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)
刺激条件：0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min
染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min
检测仪器：荧光显微镜；
Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm
Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm
Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm
常见问题Q&A
| Q1: Glucose Uptake Probe-Red具体是通过哪种葡萄糖转运蛋白进入细胞的？ |
| A：对于具体的每一种葡萄糖转运蛋白的特异性目前还没有详细的数据。 |
| Q2: Glucose Uptake Probe-Red被细胞摄入后，会被分解或代谢掉吗？ |
| A：染料的荧光部分非常稳定，实验范围内的操作不会造成分解。另外，类葡萄糖的部位，从结构上考虑可能会被Hexokinase(己糖激酶)磷酸化，除此以外应该不会参加任何代谢反应。 |
| Q3: Glucose Uptake Probe-Red被活细胞摄入后，可以进行细胞固定的操作吗？ |
| A：由于荧光探针会从细胞内漏出，染色后无法进行细胞固定。 |
| Q4: 用荧光酶标仪检测时候，对孔板有什么特别要求吗？ |
| A：需要使用荧光检测用的细胞培养板。 |
| Q5:Probe working solution可以长期保存吗？ |
| A：Probe working solution无法长期保存，请现配现用。Probe stock solution冷冻可以保存一个月。 |
| Q6: 无法观察到荧光信号变化的时候，应该怎么办？ |
| A：预实验的时候可以先从稀释浓度（x250~x1,000）、染色时间(5 min~1 h)范围内进行摸索。 |
| Q7: 荧光背景高的时候，应该怎么办？ |
| A：可能是由于有未被细胞摄入的残留荧光染料。请用WI Solution再多进行一次清洗操作。 |
| Q8: 用WI solution清洗之后，荧光染料可以在细胞内停留多长时间？ |
| A：一般在室温下可以保持在细胞内1 h左右，不同的细胞种类，时间可能会有一定差别。 |
| Q9: 可以对葡萄糖进行定量检测吗？ |
| A：本产品不能用于葡萄糖的定量检测。如果需要定量检测培养基中的葡萄糖的消耗量或者细胞内的葡萄糖量，可以使用同仁化学研究所的Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)。 |
| Q10: 可以对被细胞摄入的染料进行定量吗？ |
| A：不可以对细胞摄入的染料进行定量。本试剂盒是葡萄糖摄取能力强弱或增减的检测试剂盒。 |
| Q11: 如果无法通过葡萄糖的竞争性抑制细胞探针的摄取，该如何解决？ |
| A：竞争性抑制是否发生取决于每个细胞中的葡萄糖转运蛋白的表达水平和类型。（例如：HepG2细胞）
在这种情况下，使用2-脱氧葡萄糖(2-DG)进行预处理可能会在葡萄糖竞争抑制方面产生差异。 请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green(产品代码:UP02)的使用示例。 2-DG预处理对探针摄取的抑制和葡萄糖竞争性抑制(HepG2细胞) 1.将细胞接种在培养皿或微孔板中，并在5% CO₂培养箱(37°C)中培养过夜。 2.除去培养基[DMEM (10% FBS，高葡萄糖)]后，加入50 mmol/l 2-DG/培养基，并 在5% CO₂培养箱(37℃)中培养细胞2小时。 3.清洗细胞两次。 4.加入预热的DMEM(无葡萄糖，无血清)并将细胞在5%CO₂中孵育 在培养箱(37°C)中培养15 min。 5.除去上清液后，加入预热的探针溶液并在5% CO₂中孵育 在培养箱(37°C)中培养15 min。 6.除去上清液后，用冷却的WI溶液(1x)洗涤细胞两次。 7.除去上清液后，加入冷却后的WI溶液(1x)，并在室温下培养 5分钟。 8.除去上清液后，加入冷却的WI溶液(1x)。 9.荧光显微镜下观察细胞。
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| Q12: 目前有过检测实例的细胞有哪些? |
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| Q13: 以下为不同细胞添加抑制剂后，葡萄糖摄取能力检测实验。 |
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规格性状
| Glucose Uptake Probe-Red ×1
WI Solution (50X) 5 ml ×1 供参考的可测次数 每个试剂盒大约可检测12枚35 mm dish或1枚96孔板 |
TUNEL FITC Apoptosis Detection Kit
绿色荧光检测凋亡
经过优化FITC-12-dUTP 与未标记dNTP 的比例，提高了荧光检测的信噪比和灵敏度
高活性的重组TdT 酶保证荧光掺入效率
适用于细胞爬片、石蜡切片和冰冻切片
图1. 果蝇三龄幼虫视盘(eye disc)
凋亡诱导基因Hid 在特异性启动子驱动下在果蝇视盘的远端诱导出大量凋亡细胞。A. TUNEL 染色，标记凋亡细胞。B. ELAV 染色，标记所有的感光细胞。C. Merge
图2. 人睾丸组织切片经DNase I 处理
A. TUNEL染色，标记凋亡细胞。B. PI染色，标记所有细胞核。C. Merge。
细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体的DNA 被内源核酸内切酶有规律的降解成长度约为180 bp-200 bp 的整倍数的片段。本试剂盒采用TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 法，应用末端脱氧核糖核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase，TdT) 在凋亡细胞断裂的DNA的3’- 羟基(3’-OH) 末端催化掺入荧光素-12-脱氧三磷酸尿苷(FITC-12-dUTP)。FITC-12-dUTP 标记的DNA 可以用荧光显微镜直接观察或者用流式细胞仪定量。试剂盒对标记反应进行了优化，采用一定比例的FITC-12-dUTP 和未标记dNTP 进行3’-OH 末端的核苷酸掺入，使得同一个断裂的DNA 片段末端可以形成更长的“标记尾巴”。该“标记尾巴”减少了相邻掺入dNTP 上标记基团的空间位阻，增加每个断裂片段上的荧光基团数目，降低荧光基团相邻后可能造成的聚集和淬灭，从而提高检测灵敏度，减少非特异性反应。
经过优化FITC-12-dUTP 与未标记dNTP 的比例，提高了荧光检测的信噪比和灵敏度，高活性的重组TdT 酶保证荧光掺入效率，适用于细胞爬片、石蜡切片和冰冻切片。
-30 ~ -15℃保存；
FITC-12-dUTP Labeling Mix，-30 ~ -15℃避光保存。
CCK-8 Cell Counting Kit
准确、快速的细胞增殖和细胞毒性检测试剂
操作简便：即开即用，无需配制其他试剂
灵敏度高：灵敏度、线性相关性高，重复性好
细胞毒性低
以HEK293悬浮细胞为样本铺96孔板，单组三个复孔设9个细胞数梯度，每组细胞数分别为：0、400、800、1600、3200、6400、12800、25600、51200/孔，进行CCK-8、WST-1、MTT法比较，实验结果表明CCK-8法灵敏度高，线性范围宽。
以HEK293悬浮细胞为样本铺96孔板，单组三个复孔设9个细胞数梯度，每组细胞数分别为：0、400、800、1600、3200、6400、12800、25600、51200/孔，以细胞数量对吸光值绘制标准曲线，与其他公司同类产品相比，CCK-8 Solution相关性为R2 > 0.99。
CCK-8 Cell Counting Kit， 简称CCK-8 试剂盒， 是依赖于WST-8 (2-(2- 甲氧基-4- 硝苯基)-3-(4- 硝苯基)-5-(2,4- 二磺基苯)-2H- 四唑单钠盐) 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性检测的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。WST-8 在电子耦合载体1-Methoxy PMS 的作用下可被线粒体内的一些脱氢酶还原成高度水溶性的橙黄色甲臜产物(Formazan)，生成的甲臜的颜色深浅与细胞增殖成正比，与细胞毒性成反比。
使用酶标仪在450 nm 波长处测得吸光值，该测定值可间接反映活细胞的数量。本试剂盒的CCK-8 Solution 为即用型试剂， 可直接加入到细胞样品中，孵育一定时间后即可检测，不需要预配各种成分。
4℃避光保存
