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Lysosomal Acidic pH Detection Kit货号：L266

溶酶体pH检测试剂盒

Lysosomal Acidic pH Detection Kit

商品信息

储存条件：-80度保存

运输条件：常温

特点：

● 溶酶体特异性高

● 灵敏的检测溶酶体pH

● 试剂盒中包含溶酶体酸性化抑制剂

选择规格：

1set

产品概述

溶酶体是常见的细胞器之一，由生物膜包裹多种分解酶组成的酸性胞内囊泡。溶酶体可以将细胞内的废物进行分解以维持细胞内各种状态的平衡。溶酶体的功能紊乱会造成或加剧包括神经退行性疾病在内的多种疾患，因此研究溶酶体对相关疾病机理的阐释及相应治疗药物的开发非常重要。

荧光探针活体染色是在研究溶酶体功能时最常用的手段，然而市面上的溶酶体荧光探针一般都存在特异性差和荧光强度随pH变化的问题。同仁化学研究所开发的试剂盒对溶酶体的特异性高并且可以灵敏的检测溶酶体的pH变化，得到更准确的检测结果。此外，由于停留性能好，该荧光探针还可用于需要长时间观察的实验。

检测溶酶体机能

本试剂盒包含两种不同的溶酶体荧光探针：荧光强度随pH变化的pHLys Red和荧光强度不随pH变化的LysoPrime Green。通过组合使用这两种染料可以同时对溶酶体的量和pH变化进行检测，全面的了解溶酶体状态。另外，试剂盒中还包含溶酶体酸性化抑制剂Bafilomycin A1，即使是第一次做相关实验的科研人员也可以轻松上手。

本试剂盒可检测的溶酶体机能指标

荧光强度随pH变化的荧光探针pHLys Red

荧光强度不随pH变化的荧光探针LysoPrime Green

试剂盒内含溶酶体酸性化抑制剂

用溶酶体酸性化抑制剂Bafilomycin A1(Baf. A1)诱导HeLa细胞后，用本试剂盒同时检测溶酶体的量和pH变化。结果显示，与对照组相比，加药组中溶酶体的pH降低，而溶酶体的量基本没有变化。

<检测条件>

LysoPrime Green (绿):

Ex = 488 nm, Em = 490 – 550 nm

pHLys Red (红):

Ex = 561 nm, Em = 560 – 620 nm

FAQ

Q：运输温度和长期保存温度(-80℃)存在差异，是否会有问题？

A：本品虽然是常温运输，运输期间的保存温度经过测试不会对产品性能产生影响。您在收到试剂后请在-80℃下保存。

另外，本试剂需要-80℃保存的试剂是LysoPrime Green，有关不同温度下(25℃、4 ℃、

-20 ℃、 -80℃)长期保存对染色效果的影响，请参照同仁化学研究所的产品网页(货号： L261)的FAQ部分。经过测试，在室温(25℃)保存一个月不会对产品性能产生影响。

Q：实验中需要加入对溶酶体pH有影响的药物。有哪些需要注意的地方？

A：请先进行LysoPrime Green染色，再进行药物刺激。而pHLys Red的染色也请在LysoPrime Green染色后再进行。

如果使用试剂盒附带的Bafilomycin A1进行刺激的话，可以将pHLys Red working solution与Bafilomycin A1一起同时加入，或者也可以先进行pHLys Red染色，再加入Bafilomycin A1。

Q：是否可以用含血清的培养基进行染色？

A：由于LysoPrime Green会受到血清的影响，所以请使用不含血清的培养基或者HBSS配制working solution。 pHLys Red可以用含血清的培养基或者HBSS、PBS溶液来配制working solution。

Q:是否可以用一般的的荧光显微镜观察？

A：可以用一般的荧光显微镜观察，但是有个别细胞系可能无法观察。此时建议使用激光共聚焦显微镜。

pHLys Red – Lysosomal Acidic pH Detection货号：L265

溶酶体pH检测试剂Red

pHLys Red – Lysosomal Acidic pH Detection

商品信息

储存条件：冷暗处保存

运输条件：常温

特点：

● 溶酶体特异性高

● 高灵敏度检测溶酶体pH

● 染色后过夜仍可观察到荧光

选择规格：

1tube

3tubes

产品概述

荧光探针活体染色是在研究溶酶体功能时最常用的手段，然而市面上的溶酶体荧光探针一般都存在特异性差和荧光强度随pH变化的问题。同仁化学研究所开发的pHLys Red对溶酶体的特异性高并且可以灵敏的检测溶酶体的pH变化，得到更准确的检测结果。此外，由于停留性能好，该荧光探针还可用于需要长时间观察的实验。

高灵敏度检测溶酶体pH

现有的溶酶体pH检测试剂在准确的溶酶体定位和灵敏度方面存在一定的问题。用低浓度溶酶体酸度抑制剂Bafilomycin A1（Baf. A1）处理的HeLa细胞用pHLys Red或现有的染料染色，并进行荧光成像。结果显示，与现有的染料相比，pHLys Red对溶酶体pH值的变化更敏感。

<检测条件>

pHLys Red:Ex = 561 nm, Em = 560 – 620 nm

Sensor Y/B:Ex = 561 nm, Em = 560 – 620 nm

Sensor G:Ex = 488 nm, Em = 490 – 550 nm

另外，在试管内检测各pH值下，pHLys Red的荧光强度变化。结果显示，pHLys Red在pH4.0-5.5的范围内，荧光强度变化最显著。

溶酶体特异性高

分别使用传统溶酶体荧光探针与pHLys Red在溶酶体特异性标记物LAMP1-GFP表达的HeLa细胞中进行对比。结果可以看出，传统溶酶体荧光探针在溶酶体以外的地方也有荧光，造成背景荧光高的问题。而pHLys Red可以有效抑制背景荧光(Merged荧光图像)，展现出更高的溶酶体特异性。

<检测条件>

Green: Ex= 488 nm, Em= 500-570 nm

Red : Ex= 561 nm, Em= 560-620 nm

溶酶体内的停留性高

pHLys Red与市面上的其他产品在相同实验条件下进行对比，其他产品在染色24小时后，荧光强度有明显的下降，而pHLys Red由于在溶酶体内的停留性能高，仍然可以维持高荧光强度。

<检测条件>

Green: Ex= 488 nm, Em= 490-550 nm

Red: Ex= 561 nm, Em= 560-620 nm

实验例

细胞衰老所引起的溶酶体量和pH的变化

用Doxorubicin(DOX)刺激A549细胞诱导细胞衰老后，检测细胞内衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)和溶酶体量与pH的变化。用细胞衰老检测试剂盒—Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal(货号：SG03)检测细胞衰老，分别用pHLys Red和LysoPrime Deep Red(货号：L264)检测溶酶体的量和pH的变化。荧光显微镜的观察结果发现伴随着细胞衰老的发生，三个检测指标均有上升。另外，通过酶标仪的数值化的检测，也得到了相同的检测结果。

<检测条件>

SA-βGal(绿) : Ex = 488 nm, Em = 490 – 550 nm

溶酶体pH (红) : Ex = 561 nm, Em = 560 – 620 nm

溶酶体的量(紫) : Ex = 633 nm, Em = 640 – 700 nm

<检测条件>

SA-βGal: Ex = 525 – 535 nm, Em = 550 – 570 nm

溶酶体pH: Ex = 555 – 565 nm, Em = 590 – 610 nm

溶酶体的量: Ex = 645 – 655 nm, Em = 690 – 710 nm

FAQ

Q：是否可以培养基以外的溶液配制working solution

A：可以。还可以使用HBSS或PBS配制working solution。

Q：实验中需要加入对溶酶体pH有影响的药物。加入药物的时机需要在pHLys Red染色之前还是之后？

A：请在pHLys Red染色之后再进行药物刺激。由于pHLys Red可以在正常状态的溶酶体处聚集，如果先进行药物刺激导致溶酶体的pH升高到中性附近的话，pHLys Red将无法在溶酶体处聚集。因此请先染色再进行药物刺激。

如果使用Bafilomycin A1进行刺激的话，可以将pHLys Red working solution与Bafilomycin A1一起同时加入，或者也可以先进行pHLys Red染色，再加入Bafilomycin A1。

Q：我想同时检测溶酶体的量和pH，是否可以与LysoPrime系列共染色？

A：可以。但是请先染色LysoPrime再染色pHLys Red。

Q：可以检测的仪器和对应的滤光片有哪些？

A：

・激光共聚焦显微镜

Ex = 561 nm, Em= 560-620 nm

・普通荧光显微镜

TxRed Filter

Ex = 540 – 580 nm, Em: 590 – 670 nm

・荧光酶标仪

Ex = 555 – 565 nm, Em = 590 – 610 nm

Q: 在摸索最佳染色条件时，pHLys Red的浓度为多少比较合适？

A：推荐1000倍稀释pHLys Red。如果需要摸索最佳实验条件，请参考下列范围。<如果发现荧光较弱>

请在250-500倍稀释范围内进行摸索。

LysoPrime Deep Red – High Specificity and pH Resistance货号：L264

溶酶体染色试剂Deep Red

LysoPrime Deep Red – High Specificity and pH Resistance

商品信息

储存条件：-20℃避光保存

运输条件：常温

特点：

● 溶酶体特异性高

● 不易受溶酶体pH值变化的影响

● 染色后过夜仍可观察到荧光

选择规格：

1tube

3tubes

产品概述

荧光探针活体染色是在研究溶酶体功能时最常用的手段，然而市面上的溶酶体荧光探针一般都存在特异性差和荧光强度随pH变化的问题。同仁化学研究所开发的LysoPrime Deep Red荧光探针对溶酶体具有高度特异性，并且不易受pH值变化的影响，因此可以更准确的对溶酶体进行研究。另外，由于其细胞内的滞留能力强，还适用于需要长期荧光观察的实验。

溶酶体特异性高

分别使用传统溶酶体荧光探针与LysoPrime Deep Red在溶酶体特异性标记物LAMP1-GFP表达的HeLa细胞中进行对比。结果可以看出，传统溶酶体荧光探针在溶酶体以外的地方也有荧光，造成背景荧光高的问题。而LysoPrime Deep Red可以有效抑制背景荧光(Merged荧光图像)，展现出更高的溶酶体特异性。

<检测条件>

Green: Ex= 488 nm, Em= 500-570 nm

Deep Red : Ex= 633 nm, Em= 640-700 nm

不易受溶酶体pH变化影响

LysoPrime Deep Red与市面上的其他产品都是在溶酶体集聚的荧光染料。然而随着溶酶体酸性抑制剂Bafilomycin A1的作用，溶酶体pH由酸性向中性变化的过程中，其他产品逐渐离开溶酶体，荧光信号也显著下降。而LysoPrime Deep Red却可以继续保持在溶酶体内，荧光强度几乎不变，与其他产品的荧光减弱形成鲜明的对比。

＜检测条件＞

Deep Red: Ex= 633 nm, Em= 640-700 nm

Red: Ex= 561 nm, Em= 560-620 nm

溶酶体内的停留性高

LysoPrime Deep Red与市面上的其他产品在相同实验条件下进行对比，其他产品在染色24小时后，荧光强度有明显的下降，而LysoPrime Deep Red由于在溶酶体内的停留性能高，仍然可以维持高荧光强度。

<检测条件>

Deep Red: Ex= 633 nm, Em= 640-700 nm

Green: Ex= 488 nm, Em= 490-550 nm

Red: Ex= 561 nm, Em= 560-620 nm

实验例

细胞衰老所引起的溶酶体量和pH的变化

用Doxorubicin(DOX)刺激A549细胞诱导细胞衰老后，检测细胞内衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)和溶酶体量与pH的变化。用细胞衰老检测试剂盒—Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal(货号：SG03)检测细胞衰老，分别用LysoPrime Deep Red和pHLys Red(货号：L265)检测溶酶体的量和pH的变化。荧光显微镜的观察结果发现伴随着细胞衰老的发生，三个检测指标均有上升。另外，通过酶标仪的数值化的检测，也得到了相同的检测结果。

<检测条件>

SA-βGal(绿):

Ex = 488 nm, Em = 490 – 550 nm

溶酶体pH (红):

Ex = 561 nm, Em = 560 – 620 nm

溶酶体的量(紫):

Ex = 633 nm, Em = 640 – 700 nm

<检测条件>

SA-βGal: Ex = 525 – 535 nm, Em = 550 – 570 nm

溶酶体pH: Ex = 555 – 565 nm, Em = 590 – 610 nm

溶酶体的量: Ex = 645 – 655 nm, Em = 690 – 710 nm

FAQ

Q：是否可以用含有血清的培养基进行染色？

A：由于血清会对LysoPrime Deep Red产生影响，因此不能用含有血清的培养基染色。另外，除了无血清培养基以外，还可以用HBSS溶液配制working solution。

Q：实验中需要加入对溶酶体pH有影响的药物。加入药物的时机需要在LysoPrime Deep Red染色之前还是之后？

A：请在LysoPrime Deep Red染色之后再进行药物刺激。LysoPrime Deep Red在溶酶体处积蓄后，即使溶酶体的pH发生变化，仍可停留在溶酶体处。但是，如果先进行药物刺激，溶酶体的pH接近中性的话， LysoPrime Deep Red将无法在溶媒体处聚集。因此，请先进行LysoPrime Deep Red的染色，再进行药物刺激

Q：我想同时检测溶酶体的量和pH，是否可以与pHLys Red共染色？

A：可以。但是请先染色LysoPrime Deep Red再染色pHLys Red

Q：可以检测的仪器和对应的滤光片有哪些？

A：・激光共聚焦显微镜

Ex = 633 nm, Em= 640-700 nm

・普通荧光显微镜

Cy5 Filter

Ex = 590 – 650 nm, Em= 660 – 740 nm

・荧光酶标仪

Ex = 645 – 655 nm, Em= 690 – 710 nm

Q: 在摸索最佳染色条件时，LysoPrime Deep Red的浓度为多少比较合适？

A：推荐1000倍稀释LysoPrime Deep Red。如果需要摸索最佳实验条件，请参考下列范围。<如果发现荧光背景高>

请在2000-5000倍稀释范围内进行摸索。