货号：UP04
氨基酸摄取能力检测试剂盒
Amino Acid Uptake Assay Kit
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
使用荧光显微镜、荧光酶标仪或流式细胞仪即可快速检测
添加探针后无需清洗操作，可直接检测
选择规格：20tests,100tests
试剂盒内容
UP04 Amino Acid Uptake Assay Kit
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20tests |
BPA Solution |
35u×1 |
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BPA Dilution Buffer |
35 ul×1 |
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Probe Solution |
15 ul×1 |
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100 tests |
BPA Solution |
175ul×1 |
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BPA Dilution Buffer |
175 ul×1 |
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Probe Solution |
75 ul×1 |
产品概述
氨基酸是合成蛋白质和核酸的重要来源，对于增殖活性异常活跃的癌细胞来说尤其重要。不仅如此，癌细胞由于其自身糖酵解途径的亢进，造成乙酰辅酶A(Acetoacetyl-CoA)供应的减少，更加剧了对TCA循环来源之一的氨基酸的需求。基于此方面的研究发现，癌细胞中氨基酸转运体LAT1(L-type amino acid transporter 1)的表达明显增高，说明氨基酸的大量摄取是癌细胞的普遍特征之一。这一发现也有望成为癌症药物研发的新靶点。
在癌症免疫治疗领域，治疗效果不仅与癌细胞的代谢变化有关，免疫细胞的代谢调控也至关重要。例如，随着免疫细胞的衰老，代谢平衡的改变会导致免疫细胞对癌细胞的杀伤能力减弱。因此，通过调控免疫细胞的代谢来改善免疫治疗效果的研究也十分盛行。
氨基酸类似物(BPA)通过氨基酸转运体吸收到细胞后，探针穿透细胞膜并与氨基酸类似物结合，发出荧光(λex=360 nm，λem=460 nm)。本试剂盒可使用荧光显微镜、荧光酶标仪和流式细胞仪检测，通过可视化和数值化的检测评价细胞摄取氨基酸的能力，以及氨基酸转运体抑制剂的筛选。
本试剂盒是在日本大阪府立大学切畑光统(Kirihata Mitsunori)教授提供情报和指导下开发的产品。
运用领域
抑制氨基酸的吸收是癌症药物开发和筛选的靶点之一。此外，通过比较正常细胞和癌细胞的氨基酸吸收能力，还可以了解癌细胞的恶性程度及其细胞特征。
操作步骤
实验例
使用本试剂盒检测BCH(氨基酸转运体抑制剂)对HeLa细胞摄取氨基酸能力的阻碍作用。
＜检测条件＞
细胞：HeLa cells
培养基：MEM （5.5 mmol/l Glucose）
培养条件：1 mmol/l BCH/HBSS (Hanks’ Balanced Salt Solution), 37℃, 30 min
检测仪器：荧光酶标仪 (Ex=340-380 nm, Em: 435-485 nm)
检测仪器：荧光酶标仪 (Ex=360 nm, Em: 460 nm)
<检测条件>
检测仪器：流式细胞仪 (Ex=405 nm, Em: 425-475 nm)
与传统方法比较
与传统的同位素示踪法和代谢组学检测法相比，操作时间大幅减少。
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| 产品名 | 包装 | 价格 | 货号 |
| Glucose Uptake Assay Kit-Blue | 1 set | 3,980 | UP01 |
| Glucose Uptake Assay Kit-Green | 1 set | 3,980 | UP02 |
| Glucose Uptake Assay Kit-Red | 1 set | 3,980 | UP03 |
常见问题Q&A
Q：BPA是通过哪种转运蛋白进入细胞内的？
A：有文献报道BPA是通过LAT1, LAT2, ATB0,+转运进入细胞的(Wongthai P et al., “Boronophenylalanine, a boron delivery agent for boron neutron capture therapy, is transported by ATB0,+, LAT1 and LAT2”, Cancer Sci., 2015, Mar;106(3):279-86)。此外，同仁化学也通过实验验证了BCH等LAT1的抑制剂、leucine等LAT1的底物对BPA摄取的抑制作用。
Q：已经有检测实例的细胞系有哪些？
A：贴壁细胞有HeLa, A549, HepG2, MCF-7, C2C12, MEF, U251；悬浮细胞有MOLT4。
Q：BPA被细胞摄入后，是否会被分解或代谢掉？
A：BPA的构造非常稳定，实验操作范围的过程中不会被分解。
Q：BPA被细胞摄入后，能否进行固定化操作？
A：由于探针会从细胞内向细胞外泄漏，所以无法进行染色后的固定化操作。
Q：BPA被细胞摄入后，是否会在特定部位积累？
A：被细胞摄取的BPA均匀的分布在细胞内。
Q：BPA uptake solution，Working solution能否长时间保存？
A： BPA uptake solution，Working solution无法长期保存，请现配现用。
Q：如果荧光信号没有变化，我该怎么办？
A：主要可能的原因有以下两点：
①细胞本身对BPA solution的摄入能力较低。此时建议尝试提高BPA solution的浓度。(5~50倍稀释)
②Working solution发生变质，请重新配置Working solution，保证现配现用。
Q：如果荧光背景较高， 我该怎么办？
A： 检测环境中可能含有未被细胞摄入的BPA。此时建议用HBSS清洗后再检测。
Q：BPA是否可以定量检测？
A：无法进行定量检测，本染料是评价细胞摄取氨基酸能力高低或增减的试剂。
Q：检测荧光时使用什么样的微孔板比较合适？
A： 有检测实例的微孔板如下：
