标签： 外泌体

ExoQuick exosome precipitation solution EXOQ20A-1,EXOQ5A-1

要从清除的血清、血浆或腹水中分离外泌体，只需: 将适当体积的ExoQuick添加到100µl的样品中，在4°C下孵育至少1小时，低速旋转30分钟(1500 g)分离外泌体。分离的外泌体保留在沉淀中，并在适当的溶液中重悬。

应用：它可用于广泛的下游应用，包括生物标志物研究、外泌体miRNA分析、外泌体蛋白质组学、外泌体脂质组学/代谢组学、功能研究如细胞间信号传导，和基础生物学研究如在肿瘤发生中的作用。

货号

品名

规格

EXOQ20A-1

ExoQuick exosome precipitation solution

20ml

EXOQ5A-1

ExoQuick exosome precipitation solution

5ml

ExoQuick Plasma prep and Exosome precipitation kit (5 ml ExoQuick plus 500 µL Th

当从血浆中分离外泌体时，纤维蛋白原和纤维蛋白会阻碍有效的恢复。通过用凝血酶预处理血浆，纤维蛋白原可以转化为纤维蛋白，并通过简单的离心步骤很容易地预先清除。所得的血清样溶液用ExoQuick处理，原始配方，用于定量外泌体分离，与高通量方法兼容。

简单的工作流程涉及最少的动手时间和低输入样本量要求，ExoQuick是需要从小动物模型或临床研究样品中纯化多个外泌体样品和/或样品的研究人员的绝佳选择。

应用：它可用于广泛的下游应用，包括生物标志物研究、外泌体miRNA分析、外泌体蛋白质组学、外泌体脂质组学/代谢组学、功能研究如细胞间信号传导，和基础生物学研究如在肿瘤发生中的作用。

货号

品名

规格

EXOQ5TM-1

ExoQuick Plasma prep and Exosome precipitation kit (5 ml ExoQuick plus 500 µL Thrombin > 500U/mL)

75 reactions

ExoQuick TC for Tissue Culture Media EXOTC50A-1,EXOTC10A-1

从组织培养基中分离外泌体，只需:
添加适量的ExoQuick-TC
在4°C下孵育过夜
低速旋转30分钟(1500g)分离外泌体。

分离的外泌体保留在沉淀中，并在适当的溶液中重悬。

应用：它可用于广泛的下游应用，包括生物标志物研究、外泌体miRNA分析、外泌体蛋白质组学、外泌体脂质组学/代谢组学、功能研究和基础生物学。


货号

品名

规格

EXOTC50A-1

ExoQuick TC for Tissue Culture Media

50mL

EXOTC10A-1

ExoQuick TC for Tissue Culture Media

10mL

Exo-Fect Exosome Transfection Kit EXFT10A-1 EXFT20A-1

Exo-Fect是一种新型的核酸转移剂，可以将核酸直接转染到分离的外泌体中。然后这些转染的外泌体可以将核酸输送到靶细胞中。

使用Exo – Fect，你可以把分离的外泌体变成货物运载工具，将RNA（包括siRNAs, miRNAs, and mRNAs）、DNA(包括质粒)甚至代谢物和其他小分子引入受体细胞。只需将分离的外泌体与exo – fect和你想要的产物分子结合起来，在不到一个小时的时间内，你装载的外泌体将准备好添加到受体细胞中。

所有的Exo – Fect试剂盒都带有德克萨斯州红色标记的阳性对照，非靶向siRNA来确认外泌体转染。与我们的 EV-Entry Reagent配对，最大限度地提高受体细胞对产物分子的吸收。

货号

品名

规格

EXFT10A-1

Exo-Fect Exosome Transfection Kit

10 reactions

EXFT20A-1

Exo-Fect Exosome Transfection Kit

20 reactions

RA808A-1 SeraMir Exosome RNA Purification Column kit

当您想从已经分离的外泌体中提取RNA时，请选择SeraMir外泌体RNA柱纯化试剂盒。

操作流程：只需将无酚外泌体裂解缓冲液添加到分离的外泌体中，然后通过SeraMir RNA纯化柱运行。在短短三分钟内，您的高纯度的exoRNAs将准备好进行下一步实验，无论是用于qPCR，微量分析，NGS还是其他应用。

货号

品名

规格

RA808A-1

SeraMir Exosome RNA Purification Column kit (20 exoRNA columns)

20 preps

HansaBioMed,进口品牌

HansaBioMed

HansaBioMed LLC（http://www.exotest.eu）是一家完全致力于外泌体（exosomes）研究工具开发的欧洲公司。公司以“为生命科学领域外泌体研究开发和商业化相关专利技术、试剂盒以及相关设备”为使命。

HansaBioMed的研发生产基地位于爱沙尼亚首都塔林（Tallinn）科技园和意大利锡纳 (Siena)。 HansaBioMed公司可为全球生命科学市场提供最广泛的外泌体研究工具，是历史最悠久也是唯一一家只专注于提供高品质外泌体分离与分析相关产品的公司。目前公司主要提供的产品包括外泌体标准品（Exosome Standards）、外泌体结合抗体（Exosome binding Antibodies）以及特异性外泌体亚群富集试剂盒等。

 

同时，HansaBiomed公司与来自学术界和产业界的国际知名研究团体合作，进一步发展其技术平台以及独有的生物标志物产品线。学术合作单位包括罗马的Istituto Superiore di Sanità研究所、美国哈佛大学和耶鲁大学以及里加的拉脱维亚大学等。


公司网址：http://hansabiomed.eu/



上海金畔生物科技有限公司代理各种进口试剂耗材，欢迎来电咨询18301939375，量多优惠。网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗，仅可用于科研等非医疗目的。

ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red试剂盒货号：EX06

ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red试剂盒货号：EX06
外泌体蛋白质染色-深红色
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red
商品信息
储存条件：0-5度保存，防潮
运输条件：室温

特点：

● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集

● 回收率高

● 多种颜色可供选择

选择规格：
5samples

试剂盒内含

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概述

近年来研究发现，外泌体作为细胞外囊泡（Extracellular vesicle; EV）的一种，与癌症的恶化与转移密切相关， 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信，细胞摄入外泌体时的示踪技术非 常重要，然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点（1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子，造成背景增高）。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料，并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色，可满足多重染色在内的各种实验需求。

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特点

特点1：外泌体的标记和纯化一步到位 

 

ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。

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纯化方法(未反应染料的去除)的比较

ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管，与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比，能够以更高的回收率纯化外泌体。

回收率
过滤管（本试剂盒） 50%
凝胶过滤法 10%
   ※本公司的实施例：通过NTA技术（纳米颗粒跟踪分析）比较提取前后的外泌体粒子数

关于使用过滤管进行纯化的有效性，常见问题是：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？详见Q&A。

特点2：多种颜色选择 

 

ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。

■实验条件

超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。

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■观察条件

Green:

Ex： 488 nm / Em： 490-540 nm

Red:

Ex： 561 nm / Em： 570-640 nm

Deep Red:

Ex： 640 nm / Em： 640-760 nm

实验例

实验例：确认外泌体的局部存在

将用ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red(产品名称：EX06，Protein Dye-Deep Red)或ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red(产品名称：EX02，Mem Dye-Red)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，通过与溶酶体染色试剂(绿色)共染确认了外泌体在细胞内的定位。结果证实，用蛋白质或膜染色的外泌体均位于溶酶体中。

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观察条件

Protein Dye-Deep Red（紫）：Ex：640 nm / Em：640-760 nm

Mem Dye-Red（红色）：Ex：561 nm / Em：570-640 nm

溶酶体染色试剂（绿）：Ex：488 nm / Em：490-540 nm

 

实验条件

将用超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为5 µg)用每个外泌体染色试剂盒染色，添加到HeLa细胞(0.75×104cells)中，孵育3.5小时后对溶酶体进行染色，观察洗涤后的荧光图像。

 

产品名称 容量 货号
外泌体膜荧光染色试剂盒
（绿色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green 5 samples EX01
（红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red 5 samples EX02
（深红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red 5 samples EX03
外泌体蛋白荧光染色试剂盒
（绿色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green 5 samples EX04
（红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red 5 samples EX05
（深红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red 5 samples EX06
*纯化的外泌体(超离心法)，蛋白质：1-10 µg/sample，粒子数：10-100×10^8个/sample

常见问题Q&A

Q1：纯化外泌体建议用什么方法？
A1：一般我们推荐使用超速离心法纯化外泌体。但是，免疫沉淀法和磁珠法纯化的外泌体也有过成功染色的实例。
目前，聚合物沉淀法纯化的外泌体由于有聚合物的残留会影响外泌体的染色，所以无法使用本试剂盒。
Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？
A2：我们公司在做染色后外泌体进入细胞的实验时，使用过MEM（Minimum Essential Medium）和DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）。目前我们公司一直采用的含血清培养基进行外泌体实验，暂时无法推荐无血清培养基。
Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？
A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。
Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？
A5:虽然在过滤膜上可以观察到颜色的残留，但是我们公司通过下面的实验验证了过滤膜上的回收产物里不含未反应的染料。
<实验条件>
超速离心法纯化的①含有外泌体（蛋白质含量10 µg）的缓冲液和②单纯缓冲液，分别按照试剂盒说明书记载的步骤进行染色操作。染色后的产物加入到HeLa细胞中（1.25×104 cells），4小时后进行荧光观察。
结果显示，单纯缓冲液染色后的回收产物加入到细胞后，没有观察到荧光，进而可证明回收产物中没有残留的染料。

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① Exosome + Buffer

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② Only Buffer

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Fluorescent images at 4 h incubation

Detection conditions

Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm

Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm

Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm

ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red试剂盒货号：EX05

ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red试剂盒货号：EX05
外泌体蛋白质染色-红色
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red
商品信息
储存条件：0-5度保存，防潮
运输条件：室温

特点：

● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集

● 回收率高

● 多种颜色可供选择

选择规格：
5samples
试剂盒内含
概述
特点
实验例
常见问题Q&A

试剂盒内含

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概述

近年来研究发现，外泌体作为细胞外囊泡（Extracellular vesicle; EV）的一种，与癌症的恶化与转移密切相关， 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信，细胞摄入外泌体时的示踪技术非 常重要，然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点（1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子，造成背景增高）。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料，并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色，可满足多重染色在内的各种实验需求。

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特点

特点1：外泌体的标记和纯化一步到位 

 

ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。

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纯化方法(未反应染料的去除)的比较

ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管，与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比，能够以更高的回收率纯化外泌体。

回收率
过滤管（本试剂盒） 50%
凝胶过滤法 10%
   ※本公司的实施例：通过NTA技术（纳米颗粒跟踪分析）比较提取前后的外泌体粒子数

关于使用过滤管进行纯化的有效性，常见问题是：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？详见Q&A。

特点2：多种颜色选择 

 

ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。

■实验条件

超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。

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■观察条件

Green:

Ex： 488 nm / Em： 490-540 nm

Red:

Ex： 561 nm / Em： 570-640 nm

Deep Red:

Ex： 640 nm / Em： 640-760 nm

实验例

实验例：确认外泌体的局部存在

将用ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red(产品名称：EX06，Protein Dye-Deep Red)或ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red(产品名称：EX02，Mem Dye-Red)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，通过与溶酶体染色试剂(绿色)共染确认了外泌体在细胞内的定位。结果证实，用蛋白质或膜染色的外泌体均位于溶酶体中。

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观察条件 

Protein Dye-Deep Red（紫）：Ex：640 nm / Em：640-760 nm

Mem Dye-Red（红色）：Ex：561 nm / Em：570-640 nm

溶酶体染色试剂（绿）：Ex：488 nm / Em：490-540 nm

 

实验条件

将用超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为5 µg)用每个外泌体染色试剂盒染色，添加到HeLa细胞(0.75×104cells)中，孵育3.5小时后对溶酶体进行染色，观察洗涤后的荧光图像。

 

产品名称 容量 货号
外泌体膜荧光染色试剂盒
（绿色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green 5 samples EX01
（红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red 5 samples EX02
（深红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red 5 samples EX03
外泌体蛋白荧光染色试剂盒
（绿色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green 5 samples EX04
（红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red 5 samples EX05
（深红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red 5 samples EX06
*纯化的外泌体(超离心法)，蛋白质：1-10 µg/sample，粒子数：10-100×10^8个/sample

常见问题Q&A

Q1：纯化外泌体建议用什么方法？
A1：一般我们推荐使用超速离心法纯化外泌体。但是，免疫沉淀法和磁珠法纯化的外泌体也有过成功染色的实例。
目前，聚合物沉淀法纯化的外泌体由于有聚合物的残留会影响外泌体的染色，所以无法使用本试剂盒。
Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？
A2：我们公司在做染色后外泌体进入细胞的实验时，使用过MEM（Minimum Essential Medium）和DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）。目前我们公司一直采用的含血清培养基进行外泌体实验，暂时无法推荐无血清培养基。
Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？
A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。
Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？
A5:虽然在过滤膜上可以观察到颜色的残留，但是我们公司通过下面的实验验证了过滤膜上的回收产物里不含未反应的染料。
<实验条件>
超速离心法纯化的①含有外泌体（蛋白质含量10 µg）的缓冲液和②单纯缓冲液，分别按照试剂盒说明书记载的步骤进行染色操作。染色后的产物加入到HeLa细胞中（1.25×104 cells），4小时后进行荧光观察。
结果显示，单纯缓冲液染色后的回收产物加入到细胞后，没有观察到荧光，进而可证明回收产物中没有残留的染料。

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① Exosome + Buffer

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② Only Buffer

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Fluorescent images at 4 h incubation

Detection conditions

Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm

Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm

Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm

外泌体(Exosomes)提取试剂盒—ExoIsolator Exosome Isolation Kit货号：EX10

外泌体(Exosomes)提取试剂盒—ExoIsolator Exosome Isolation Kit货号：EX10
外泌体(Exosomes)提取试剂盒
ExoIsolator Exosome Isolation Kit
商品信息
储存条件：常温
运输条件：常温

特点：

● 无需任何操作技巧

● 与超速离心法相当的回收率

● Filter Holder可重复利用

选择规格：
3 tests

规格性状

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产品概述

ExoIsolator Exosome Isolation Kit可以从细胞培养上清液中快速分离出外泌体， 其回收率与超速离心法相当。试剂盒中内含的 Isolation Filter可以将细胞培养上清液中的外泌体捕获分离，因此无需复杂的操作即可在短时间快速获取外泌体。

简单的操作：无需任何操作技巧

ExoIsolator Exosome Isolation Kit的操作过程极为简单。组装好Filter Holder和Isolation Filter进行减压过滤，再用PBS回收过滤膜表面上的外泌体即可。这种方法可以尽可能的减少外泌体的损失，而且不易产生人为操作因素上的差别。

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回收效率高：与超速离心法相当

目前最常用的外泌体分离方法是超速离心法，使用超速离心法和ExoIsolator Exosome Isolation Kit同时回收HEK293S细胞培养液中的外泌体，通过外泌体粒度分布(图1)、粒子数(图2a)和外泌体marker的表达量(图2b)检测两种方法得到的外泌体并进行比较。结果可以看出，两种方法得到的外泌体的粒度分布和粒子数基本相同，而外泌体marker的表达量的结果显示，在相同蛋白量的情况下，ExoIsolator 的外泌体标志物更高，说明ExoIsolator 比超速离心法得到的外泌体纯度更高。(专利申请中)

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图1. 提取得到的外泌体的粒度分布

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图2. 粒子数(a)与外泌体标志物的表达量(b)

试剂盒的组成

本试剂盒包含Filter Holder和Isolation Filter，其中Filter Holder可以通过高压蒸汽锅灭菌后重复使用。

微信截图_20220118170325.png

 

另外，作为消耗品的Isolation Filter 10枚装 单独销售。

具体请参考产品页面：货号EX11 产品名：ExoIsolator Isolation Filter。

FAQ

Q：如果没有顺利的提取外泌体，可能的原因有哪些？
A： 可能有以下三方面原因。       1. 过滤时减压的强度过高会使外泌体回收量显著降低。真空泵的推荐压强为-25 kPa，或比-25 kPa更弱。

2. Isolation Filter分为正反两面，安装时的如果方向错误会导致外泌体回收量显著降低。请务必将Isolation Filter的正面(光泽面)向上，具体请参考说明书或操作视频。

3. 为了完全回收Isolation Filter表面上的外泌体，请用PBS反复多次的流过过滤膜的全部表面，具体请参考说明书或操作视频。
Q：分离得到的外泌体是否可以长期保存？
A：4℃可以保存1个月~半年。长期保存时请-80 ℃保存并尽量避免反复冻融，建议分成小包装分开保存。

参考资料(日语)：吉冈祐亮、落谷孝広(2020)、エクソソーム実験ガイド  ISBN: 978-4-7581-2246-7。
Q：用含有血清的培养基培养的细胞培养上清液是否可以提取外泌体？
A：不推荐使用含有血清的培养基。由于血清(FBS等)中也含有外泌体，分离得到的外泌体中也会含有血清中的外泌体，对结果产生干扰。
Q：ExoIsolator的回收率是多少？
A：不同检测样品的外泌体回收率也不同。      下面是从市面上销售的纯牛奶中提取的外泌体回收率供参考。

 

蛋白质回收率(%)粒子回收率(%)：34.6%(SD±3.9)38.3(SD±8.3)
Q：从细胞培养上清液中可以得到多少外泌体？
A：细胞的种类和培养条件都会对外泌体的量有影响。下面是25 ml HEK293S细胞(振动培养)的培养上清中分离出来的外泌体的量。

回收的蛋白质的质量(μg)回收的粒子数(particles)：11.2(SD±2.09)6.0E+09(SD±1.0E+9)

*蛋白质检测采用的BCA法， 粒子数通过NTA分析检测。
Q： 可以回收的外泌体的尺寸是多少？
A： 可以回收大约100-200nm的尺寸。

（参考）

从HEK293S细胞培养上清回收的外泌体的粒度分布
Q： 一个filter可以处理的样本量是多少？
A： 对于培养基上清液，我们建议使用25ml。

随着样品体积的增加，减压过滤时间也会增加。

例如，如果使用25ml HEK293S细胞培养上清液（11.2μg蛋白质），则减压过滤大约需要5-10分钟。

抽滤的时间不仅取决于样品的体积，还取决于样品中所含的外泌体和蛋白质的量。
Q：如果不知道抽吸装置的吸气压力。我该怎么处理？
A： 您可以通过单独准备一个显示吸入压力的压力表来检查吸入压力。
Q： 减压过滤的时间过长。过滤器堵塞。可能的原因是什么？
A： 请检查以下三种可能的原因。

1、如果样品体积太大或样品中的蛋白质浓度太高，抽滤时间可能需要更久。

处理HEK293S细胞上清液时的样品体积和过滤时间参照：

25毫升（11.2μg蛋白质）：5-10分钟

50毫升（22.4μg蛋白质）：30-60分钟

2、如果减压压力太低太低，过滤时间会更长。

处理25ml HEK293S细胞上清液时的抽滤压力和过滤时间参照：

抽滤压力-25千帕：5-10分钟。

抽滤压力-10千帕：10-20分钟

3、如果包含大量其他物质，而不是外泌体，则可能发生堵塞。

建议事先用0.22μm的 filter 处理样品。

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