No.14 色谱柱压力升高时

HPLC在使用过程中,经常会遇到的问题之一就是压力的升高。据此我们以反相分离为例，介绍压力升高时的解决方法。

压力升高时，首先将色谱柱取下通液，判断系统压力是否过高。系统压过高的情况，多数为配管等发生堵塞引起的。系统压力正常的情况，则应该是色谱柱问题。此时应考虑清洗色谱柱。使用反冲时有可能会得到好的冲洗效果，反冲时需要注意不可接检测器，同时需注意流速与压力的控制。
一般推荐提高有机溶剂浓度比例进行清洗，但最好根据样品的溶解性选择合适溶剂。比如：反相分离时，如是因样品中蛋白吸附引起的压力升高，此时使用含有0.1%TFA的乙腈水溶液进行梯度洗脱会更有效（须注意色谱柱的适用pH范围）。

怀疑样品中有不溶物或分离过程中有样品析出的，建议清洗或更换色谱柱的筛板。 实际上，色谱柱压力一旦升高，想要通过清洗使柱效等恢复是比较困难的。为了降低柱压升高的可能性，建议充分过滤样品，做好除蛋白等大分子的前处理（尤其是制剂类产品中的辅料预处理），必要时使用保护柱等。