N 端脑钠肽前体测定试剂盒（酶联免疫荧光法） 说明书 IVD 【产品名称】 通用名称: N 端脑钠肽前体测定试剂盒（酶联免疫荧光法） 英文名称: VIDAS NT-proBNP2 (PBN2) 【包装规格】 60 测试/盒 【预期用途】 本产品用于测定人血清或血浆（肝素锂和肝素钠）中脑钠肽的 N 末端片段水平。 N 端脑钠肽前体测定试剂盒（酶联免疫荧光法）是一种在 VIDAS 系列仪器上应用的自动定量检测， 采用 ELFA（酶联免疫荧光法）技术用于测定人血清或血浆（肝素锂和肝素钠）中脑钠肽的 N 末端片段 水平。VIDAS NT-proBNP2（PBN2）检测被用作疑似心力衰竭的辅助诊断方法。 摘要和说明 心力衰竭（HF）是一种复杂的临床综合症，发生这种症状时，心脏的泵血功能不足以满足机体新陈 代谢的需要。最常见的症状是呼吸短促、疲劳、心动过速和水肿（1）。钠肽—ANP（心房钠肽）、BNP （脑钠肽）和 CNP（C 型钠肽），是心脏（ANP 和 BNP）或血管内皮细胞（CNP）对血流动力学压力 做出反应所释放的神经激素,以调节血容量内稳态：血管舒张（拮抗肾素-血管紧张素系统）、 尿钠排泄 （肾脏分泌钠增多）以及利尿（2）。由于血容量扩张或血压超负荷引起的心肌内壁压力增加，会激活心 肌细胞中 BNP 基因,产生前体分子 proBNP。该前体分子经进一步裂解后释放出具有生物活性的 C-末端片 段 BNP 以及非活性的 N-末端片段 NT-proBNP（2）。BNP 和 NT-proBNP 在血液中的浓度具有很高的相 关性，但由于半衰期不同（NT-proBNP 为 120 分钟，BNP 为 60 分钟），NT-proBNP 的水平比 BNP 要 高（2）。肾脏能够等量清除这两种分子，而 BNP 还会被钠肽受体或神经内肽酶（蛋白水解）清除 （3）。NT-proBNP 的水平升高与心室功能不全以及心力衰竭严重程度有关（4），NT-proBNP 还可用于 检测轻度心力衰竭（5）以及射血分数保留的心力衰竭（6）。 B-型钠肽被专业指南推荐用于对急性呼吸困难和疑似急性心力衰竭患者尤其是临床无法确诊的患者 进行诊断评估（1, 7）。研究表明，在急诊科疑似心力衰竭患者诊断策略中纳入 NT-proBNP 检测，能够 有效缩短住院时间并降低花费（8,9）。ICON 研究已经确定了 NT-proBNP 在诊断急性心力衰竭方面的单 个排除临界值和多个基于年龄的纳入临界值（10）。进行 NT-proBNP 鉴别诊断也具有重要的临床意义， 因为 NT-proBNP 的水平在其他影响心室功能的情况下也会升高，例如：肺栓塞、高血压、心瓣膜病、心 肌病、心律失常、重症疾病（例如：脓毒血症）、贫血和中风（11）。 初诊时，NT-proBNP 检测在引导无症状性慢性心力衰竭患者转诊专业科室方面尤为重要，因为该项 检测可排除疑似左心室收缩功能不全（12）。NT-proBNP 在各种临床情况中均有各自的预后值，包括伴 随或不伴随急性心力衰竭的急性呼吸困难（13）、慢性心力衰竭（14）、稳定和不稳定型缺血性心脏病 （15）。NT-proBNP 对肌钙蛋白水平正常的急性冠状动脉综合征的预后价值越来越高（16）。NTproBNP 在急性非稳定性心力衰竭的住院患者监测（17）和慢性心力衰竭的治疗指导方面（18）可作为 一种有效指标。 VIDAS NT-proBNP2 检测包含两个单克隆抗体，这两个抗体可以识别位于 proBNP（1-108）N 末端 部分（1-76）的表位。 【检验原理】 一步夹心免疫法结合终点法荧光检测（ELFA）。 固相管（SPR® ）作为固相和加样器。试剂为即用型，预先分注到密封的试剂条中。 所有测定步骤均由仪器自动完成。样品转移到含碱性磷酸酶标记的抗-NT-proBNP 抗体（结合物）的 小孔中。样品/结合物混合物在 SPR 中多次循环进出，使抗原与固定在 SPR 内壁和结合物上的免疫球蛋 白相结合从而形成夹心。 通过洗涤步骤，去除未结合部分。 N 端脑钠肽前体测定试剂盒（酶联免疫荧光法） 版本号 9301622 D – 2015/01 2 然后进行两次检测。在每一次检测中，底物（4-甲基伞形酮磷酸酯）在 SPR 中进出循环。结合物中 的酶催化底物水解成可在 450 nm 下测定其荧光的荧光产物（4-甲基伞形酮）。荧光强度与样品中的免疫 球蛋白浓度成正比。 检测结束后，仪器根据两个检测步骤对应的两条定标曲线，通过荧光阈值确定每个样品所用的定标曲 线，自动计算结果。然后，打印结果。 【主要组成成分】 试剂盒组成 PBN2 试剂条，60 条 STR 即用型。 PBN2 固相管，60 个 2 x 30 SPR® 即用型。小鼠单克隆抗- NT-proBNP 抗体包被的固相管(SPR)。 PBN2 质控品： C1 质控品 1 x 2 mL（液体） C2 质控品 1 x 2 mL（液体） C1 C2 即用型。 PBS 缓冲液 pH 7.2 + 蛋白质和化学稳定剂 + 含有合成 NTproBNP 肽的防腐剂。 C1 质控品浓度大约为 3000~4600 pg/mL，C2 质 控品浓度大约为 480~720 pg/mL，质控品浓度具有批特异性，具体浓度 值详见 MLE 数据。 MLE 数据将显示以 pg/mL 为单位的置信区间（ “质控品 C1 剂量值范围” 或“质控品 C2 剂量值范围”）。 PBN2 标准品： S1 标准品 2 x 2 mL（液体） S2 标准品 2 x 2 mL（液体） S1 S2 即用型。 PBS 缓冲液 pH 7.2 + 蛋白质和化学稳定剂 + 含有合成 NTproBNP 肽的防腐剂。 S1 标准品浓度大约为 6100~9200 pg/mL，S2 标 准品浓度大约为 250~450 pg/mL，标准品浓度具有批特异性，具体浓度 值详见 MLE 数据。 MLE 数据将显示以 pg/mL 为单位的标准品浓度[“标准品（S1）剂量值”或 “标准品（S2）剂量值”]，同时显示以“相对荧光值”表示的置信区间[“标准 品（S1）RFV 范围”或“标准品（S2）RFV 范围”]。 样品稀释液 1 x 2 mL R1 即用型。 PBS 缓冲液 pH 7.2 + 蛋白质和化学稳定剂 + 防腐剂。 校准测试所需的出厂主数据规格书： • 试剂盒提供了 MLE 数据（主批次输入） 或者 • 包装盒标签上印有 MLE 条形码 SPR SPR®内壁，在生产过程中已经采用小鼠单克隆抗-NT-proBNP 抗体对进行包被。每个 SPR 均采用 “PBN2″编码进行识别。使用时，从袋子中取出所需数目的 SPR 管后，请立即封袋保存。 试剂条 试剂条有 10 个小孔，采用已标记箔材封口。标签包含一个条形码，主要包括试验代码、试剂盒批号 和有效期。加样时，需将第 1 孔的箔材穿孔，以便加入样品。每个试剂条的最后一个小孔是检测孔，用 于荧光检测。试剂条中部的小孔中包含了试验所需的各种试剂。 孔 试剂 1 样品孔。 2 – 3 – 4 空白孔。 5 结合物：碱性磷酸酶标记的绵羊单克隆抗-NT-proBNP 抗体+ 防腐剂（400 µL）。 6 -7 – 8 TRIS NaCl Tween（pH 7.3）+ 防腐剂（600 µL）。 9 空白孔。 10 含底物的读取孔：4-甲基伞形酮磷酸盐（0.6 mmol/L）+ 二乙醇胺（DEA*）（0.62 N 端脑钠肽前体测定试剂盒（酶联免疫荧光法） 版本号 9301622 D – 2015/01 3 mmol/L 或 6.6%. pH 9.2）+ 1 g/L 叠氮钠（300µL）。 *警示词：危险 危害： H318：造成严重眼部刺激。 预防措施： P280：配戴防护手套/护目镜/面罩。 P305+P351+P338：如入眼：用清水小心冲洗数分钟。如果配戴隐形眼镜并方便摘除，摘除隐形眼 镜后继续冲洗。 详情参见“材料安全性数据表”。 试验所需的但试剂盒未提供的材料 – 用于分装 200µL 液体的带一次性吸头的加样枪。 – 无滑石粉的一次性手套。 – 对于其他具体材料和一次性耗材，请参见仪器用户手册。 – VIDAS 系列仪器。 【储存条件及有效期】 储存条件 • 在 2～8℃，有效期 12 个月。 • 禁止冷冻。 • 将所有未使用的试剂存放在 2-8℃下。 • 打开试剂盒后，检查确认 SPR 袋子正确密封且无损坏。如果不合格，禁止使用 SPRs。 • 使用后在内部放置干燥剂并将袋子仔细密封以保持 SPRs 的稳定性，并将整个试剂盒放回至 2-8℃条件 下。 • 若按照上述规定条件贮藏，所有组分在有效期内保持稳定。 生产日期：详见外包盒标签。 失效日期：详见外包盒标签。 【适用仪器】 VIDAS，mini VIDAS，VIDAS 3