标签： 克隆

金畔生物试剂,5 min TA/Blunt-Zero Cloning Kit

5 min TA/Blunt-Zero Cloning Kit

基于拓扑异构酶的快速克隆试剂盒

5 min TA/Blunt-Zero Cloning Kit

兼容：能够同时兼容TA克隆和平末端克隆；

快速：加入片段，反应5 min即可。

高效：克隆效率高且阳性率＞95%。

5 min TA/Blunt-Zero Cloning Kit

1.兼容性强

5 min TA/Blunt-Zero Cloning Kit

 

2.简单快速

5 min TA/Blunt-Zero Cloning Kit

 

3.阳性率高：使用插入片段为1kb，转化后随即挑取单克隆进行菌落PCR鉴定，Marker为金畔生物DL5000 DNA Marker（MD102）

5 min TA/Blunt-Zero Cloning Kit

5 min TA/Blunt-Zero Cloning Kit

本产品是第二代TOPO克隆试剂盒，包含第二代Topoisomerase、含有自杀基因ccdB的载体以及平末端因子。使用第二代Topoisomerase，配合合适的buffer，活性更高，进一步提高克隆效率，室温5 min完成高效连接。使用含有自杀基因ccdB的载体，当插入片段与载体成功连接时，破坏ccdB正确表达，宿主细胞能够正常生长，否则宿主细胞不能正常生长，从而实现“Zero”背景。添加平末端化因子，使得本产品能够同时兼容TA克隆与平末端克隆。

5 min TA/Blunt-Zero Cloning Kit

组分

C601-01(25 rxns)

C601-02(50 rxns)

5×TA/Blunt-Zero Cloning Mixa

25 μl

2 × 25 μl

500 bp Control insert(20 ng/μl)

5 μl

10 μl

M13 Primer Mix(10 μM)b

200 μl

400 μl

a.包含Topoisomerase和pCE2 TA/Blunt-Zero Vector(双抗性载体：Amp+，Kan+)

b.包含M13 Forward Primer 和M13 Reverse Primer

5 min TA/Blunt-Zero Cloning Kit

-30～-15°C保存，可于-20～0°C运输。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,Q5® 定点突变试剂盒 #E0554S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆 & 合成生物学

Q5® 定点突变试剂盒

#E0554S 10 次反应

相关产品

NEB PCR 克隆试剂盒
NEB PCR 克隆试剂盒（不含感受态细胞）
KLD 酶混合液

特性

 适用于各种模板，稳定、高效的引入突变，进行指数扩增
 Q5 超保真 DNA 聚合酶保真性极高，缩短筛选时间
 可室温建立反应
 使用常规引物，无需对寡核苷酸进行磷酸化或纯化
 方便使用的预混液剂型 

概述

Q5 定点突变试剂盒可以在 2 小时内快速对双链质粒 DNA 进行定点突变，该试剂盒使用稳定的 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶，结合客户自行设计的引物，在各种质粒中引入替换、缺失和插入突变。为保证效率，将产物转入试剂盒提供的高效级 NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞，质粒长度可达 14.3 kb。 

应用

• 在质粒 DNA 上产生替换、插入、缺失突变 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , 克隆 & 合成生物学

图 1：Q5 定点突变试剂盒流程。该试剂盒可以快速、高效地对双链质粒 DNA 进行替换、缺失或插入突变。第一步是使用 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶进行指数扩增。第二步是包含激酶、连接酶和 DpnI 的特殊混合液处理，快速环化 PCR 产物和去除模板。第三步是高效转入化学感受态细胞。

Q5 定点突变试剂盒包含

– Q5 热启动超保真 Master Mix（2X）
– KLD 酶混合液（10X）和反应缓冲液（2X）
– 对照引物混合液（各 10 μM）和 DNA 模板（5 ng/μl）
– NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞（高效级）
– pUC19 转化对照质粒（5 pg/μl）
– SOC Outgrowth 培养基 

质保声明

Q5 定点突变试剂盒经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,Quick Blunting™ 快速末端平齐化试剂盒#E1201L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆 & 合成生物学

Quick Blunting™ 快速末端平齐化试剂盒

#E1201L 100 次反应

#E1201S 20 次反应

特别提供

快速末端平齐化和快速连接试剂盒
#E0542S 20 次反应 . . . . . .￥1,809
#E0542L 100 次反应 . . . . . .￥7,199

特性

 30 分钟内可完成限制性内切酶消化后 DNA 的末端平齐化
 即用型预混液在室温即可进行反应
 适用于限制性内切酶消化后的 DNA，已剪切或雾化的 DNA 或 PCR 产物 

概述

快速末端平齐化试剂盒将不匹配的 DNA 5´ 或 3´ 突出末端转变为带有 5´ 磷酸的平末端，以便有效地与平末端 DNA 克隆载体连接。用 T4 DNA 聚合酶（NEB #M0203）使 DNA 末端平齐化，该酶同时具有 3´ →5´ 外切酶活性和 5´ →3´ 聚合酶活性。酶混合液中的另一成分是 T4 多聚核苷酸激酶（NEB #M0201），可将平末端 DNA 的 5´ 端磷酸化，以用于与克隆载体的连接反应。本试剂盒经过优化，可在单次反应中将 5 μg 的 DNA 末端平齐化。 

应用

• 对已剪切、雾化、或经限制性内切酶消化的 DNA 进行末端平齐化，便于与质粒、cosmid、fosmid 和 BAC 载体连接
• PCR 产物在进行平末端克隆前进行末端平齐化

快速末端平齐化TM试剂盒组份

– 平齐化酶混合液
– 10X 平齐化反应缓冲液
– 1 mM dNTP 混合液

质保声明

快速末端平齐化试剂盒经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

热失活

70℃ 加热 10 分钟。

注意事项

PCR 产物在进行末端平齐化之前必须纯化，可采用商业纯化试剂盒、酚抽提/乙醇沉淀法或者凝胶电泳的方法纯化 DNA。经限制性内切酶消化的 DNA 无需纯化可直接进行末端平齐化反应。

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , 克隆 & 合成生物学

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,NEB® PCR 克隆试剂盒-含感受态细胞#E1203S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆 & 合成生物学

NEB® PCR 克隆试剂盒（含感受态细胞）

#E1203S 20 次反应

相关产品

NEB PCR 克隆试剂盒

特性

 含 SP6 和 T7 启动子，便于体外转录
 克隆所有类型的 PCR 产物更为简单，包括平末端和 TA 末端
 克隆速度快，连接仅需 5 分钟
 筛选简单，几乎没有克隆背景，不需要蓝白斑筛选
 无需纯化步骤，节约时间
 两侧的限制性内切酶酶切位点方便亚克隆，包含两种单酶切选择
 BsaI 位点的除去以便 Golden Gate 克隆

概述

NEB PCR 试剂盒提供：优化的 2X 克隆预混液（其中配有独特的连接增强剂）和线性载体。该线性载体利用最新技术抑制背景菌落生长，使背景值降为最低。本试剂盒能简单、快速克隆各种 PCR 产物。具有校读功能的聚合酶产生平末端扩增子（如：Q5 或者 Phusion），无校对功能的聚合酶产生单碱基突出末端的扩增子（如 Taq、OneTaq、LongAmp Taq)。2X 克隆预混液中包含有末端修复成份，可在连接反应步骤前进行末端平齐化，因此，无论扩增子是何种末端都能完成有效连接。此外，使用本试剂盒，PCR 产物无需纯化，PCR 引物也无需经过 5´ -磷酸基修饰。

• 提供下游菌落 PCR 或测序引物
• 试剂盒包含 1 kb 扩增子对照和线性载体及一次用量的大肠杆菌感受态细胞
• 比其它商业化产品保质期长（12 个月）

PCR 克隆试剂盒包含

– 克隆预混液
– 线性化 pMiniT™ 载体
– 对照扩增子
– 克隆检测正向引物
– 克隆检测反向引物
– NEB 10-beta E. coli 感受态细胞（克隆级）(仅在 NEB #E1202 提供) 

质保声明

NEB PCR 克隆试剂盒经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com，www.neb-china.com。 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,Gibson Assembly® 组装预混液  #E2611L

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆 & 合成生物学

Gibson Assembly® 组装预混液

#E2611L 50 次反应

#E2611S 10 次反应

特性

 增加组装产物的成功率，尤其是组装较大或数量较多的片段
 灵活的序列设计，无需克隆位点
 无需 PCR 纯化步骤
 1 小时内完成复杂的组装过程
 DNA 可立即进行转化，或作为 PCR 或 RCA 的模版 

概述

该产品是由 J.Craig Venter 研究所的 Daniel Gibson 博士及其同事发明，由基因组合成公司（Synthetic Genomics）授权予 NEB 公司。不论是片段的长短或末端的相容性，它都可以成功组装多个 DNA 片段。该产品可以在一管内，恒温条件下，有效的连接多个带有重叠序列的片段，Gibson 组装预混液在同一反应缓冲液中有三种不同的酶活性：

• 外切酶活性会产生单链 3´ 突出端，促使互补的末端退火
• 聚合酶活性会填补退火片段的缺口
• 连接酶活性能将组装后的 DNA 切刻处进行连接 

Gibson 组装预混液包括

– Gibson 组装预混液
– NEBuilder 阳性对照 

质保声明

Gibson 组装预混液经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。更多信息请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com 的产品专栏。 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , 克隆 & 合成生物学

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,NEBuilder® 高保真 DNA 组装克隆试剂盒 #E5520S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆 & 合成生物学

NEBuilder® 高保真 DNA 组装克隆试剂盒

#E5520S 10 次反应

特性

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , 克隆 & 合成生物学

概述

NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液可以高效、准确的组装 DNA 片段。不管片段的长度和末端匹配性如何，该方法均可以多片段无缝组装。还可以组装单链寡核苷酸或含 15-80 bp 重叠区的不同片段长度的 DNA 片段。主要用于合成生物学和多片段的一步克隆，该产品操作简单、灵活，以预混液形式提供。在同一反应缓冲液中有几种不同的酶活性：
• 外切酶活性会产生单链 3´ 突出端，促使互补的末端重复序列（重叠区）退火
• 聚合酶活性会填补退火片段的缺口
• 连接酶活性能在组装后的 DNA 切刻处进行连接最终形成双链闭合的 DNA 分子，可以用于 PCR、RCA 或其它的分子生物学应用，以及直接转化到大肠杆菌。
NEBuilder 高保真 DNA 组装克隆试剂盒包含高效的 NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液和 NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞，仅 2 小时即可完成组装和转化实验。
NEBuilder 高保真试剂盒有两种：含 NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞（克隆试剂盒，NEB #E5520）；含 NEB 10-beta E. coli 感受态细胞（大片段组装试剂盒，NEB #E2623）。NEB 5-alpha 感受态细胞适用于小于等于 15 kb 质粒的转化。对于大于 15 kb 质粒的转化，NEB 推荐 NEB 10-beta 感受态细胞。
NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , 克隆 & 合成生物学

NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液包含

– NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液
– NEBuilder 阳性对照

NEBuilder 高保真 DNA 组装克隆试剂盒包含

– NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液

– NEBuilder 阳性对照

– NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞（高效级）
– SOC Outgrowth 培养基
– pUC19 对照 DNA

质保声明

NEBuilder 高保真 DNA 组装试剂盒经过严格的质控检测，以确保产品的最高活性和纯度。更多详细信息，请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。 

NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术,KLD 酶混合液#M0554S

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆 & 合成生物学

KLD 酶混合液

#M0554S 25 reactions

相关产品：

NEB PCR 克隆试剂盒
#E1202S 20 次反应 . . . . . .￥3,299
NEB PCR 克隆试剂盒（不含感受态细胞）
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#M0554S 25次反应 . . . . . .￥3,599

特性：

 NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , 克隆 & 合成生物学

概述

 概述：Q5 定点突变试剂盒可以在 2 小时内快速对双链质粒 DNA 进行定点突变，该试剂盒使用稳定的 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶，结合客户自行设计的引物，在各种质粒中引入替换、缺失和插入突变。为保证效率，将产物转入试剂盒提供的高效级 NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞，质粒长度可达 14.3 kb。

应用：

 • 在质粒 DNA 上产生替换、插入、缺失突变

Q5 定点突变试剂盒包含：

 – Q5 热启动超保真预混液（2X）

– KLD 酶混合液（10X）和反应缓冲液（2X）
– 对照引物混合液（各 10 μM）和 DNA 模板
（5 ng/μl）
– NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞（高效级）
– pUC19 转化对照质粒（5 pg/μl）
– SOC Outgrowth 培养基

质保声明：

 Q5 定点突变试剂盒经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

实验流程：

 NEB代理 , DNA修饰酶与克隆技术 , 克隆 & 合成生物学