D-二聚体排除试验试剂盒（酶联免疫荧光法）说明书 【产品名称】 通用名称：D-二聚体排除试验试剂盒（酶联免疫荧光法） 英文名称：VIDAS D-Dimer Exclusion II (DEX2) 【包装规格】 60 测试/盒 【预期用途】 本产品用于体外定量检测人血浆（含枸橼酸盐）中的纤维蛋白降解产物（FbDP）。 D-二聚体排除试验试剂盒（酶联免疫荧光法）是一种在 VIDAS 系列分析仪上使用的自动定量试验，使 用 ELFA 技术（酶联免疫荧光分析）。 VIDAS D-二聚体排除试验 II 与临床可能性评分诊断模型相结合，用于排除可疑患有 DVT（深静脉血栓） 或 PE（肺栓塞）的门诊病人是否患有这两种疾病。纤维蛋白降解产物（FbDP）是一些高度异质性的可溶性 片段， 在两个同步进行的生理反应发生时出现在循环系统中（1）。 凝固，可溶性纤维蛋白原在凝血酶及因子 XIIIa 作用下凝固成不溶性的稳定的纤维蛋白。 纤维蛋白溶解，纤溶酶使纤维蛋白凝块溶解。 D -二聚体片段是这个过程的最终产物（2）。 虽然 FbDP 的大小各不相同，但他们都具有一个或多个 D -二聚体抗原决定簇（1，2）。因此，将 FbDP 统称为“D -二聚体”。由于单克隆抗体能够特异性识别纤维蛋白抗原表位，因此 D -二聚体试验可以直接检 测血浆中的 D -二聚体，而与纤维蛋白原及其降解产物来无交叉反应（1）。 D -二聚体反映稳定的纤维蛋白的存在，使得此标志物成为静脉血栓栓塞（VTE）的诊断的有用工具（3）。 基于 ELISA 技术的 D -二聚体定量检测在反应阻断血栓的存在方面灵敏度很高，因此，在排除静脉血栓栓塞 性疾病方面十分有价值（4，5）。 结合临床可能性评分诊断评估，当 D -二聚体浓度低于预定的临界值（由严格的临床研究决定）时， 它可以在可疑门诊病人中安全地排除深静脉血栓症（DVT）和肺栓塞（PE）的诊断（5-7）。D -二聚体 ELISA 检测在可疑 DVT 或 PE 患者诊断工作中的临床实用性在于可以显著减少影像学检测的次数，同时会使诊断 总成本相应减少（8，9）。D -二聚体并非特异性的存在于 DVT / PE 中，在凝血和纤溶激活时的其他各种条 件（如手术，外伤，感染，炎症，妊娠，）下也可观察到其水平升高（3）。因此，由于住院患者伴有可升 高 D -二聚体水平的合并症比例很大，在使用 D -二聚体排除 DVT 或 PE 时，其应用性较低（5,10）。某些情 况导致 D -二聚体结果可能会低于预期而出现假阴性。因此，当可疑 DVT / PE 患者的临床可能性评估预发 生概率较高、DVT/PE 的症状持续时间较长（超过一个星期）或已在进行抗凝治疗时，使用 D -二聚体排除 DVT/PE 并不安全（10，11）。 D -二聚体测定也可用来辅助诊断弥漫性血管内凝血（DIC）（12）。 【检验原理】 采用酶联免疫夹心两步法和最后的荧光检测（ELFA）相结合的分析原理。 固相管（SPR），既作为固相将抗 FbDP 单克隆抗体吸附在其表面，也作为移液装置。分析试剂是即用 型，并分装于密封的单次使用的试剂条中。 所有分析步骤都由仪器自动进行。反应介质在固相管中循环进出数次。 首先固相管吸取样品、稀释，然后在固相管中循环进出几次。抗原与包被于固相管上的抗 FbDP 免疫 球蛋白相结合。未结合的成分在清洗步骤中去除。 在第二步中，包含一个碱性磷酸酶标记的抗 FbDP 单克隆抗体的共轭物与包被在固相管上的抗原相结 合，形成 “三明治”结构。未结合的成分在清洗步骤中去除。然后进行检测。底物（磷酸 4-甲基伞形烷） 在固相管中循环进出几次。共轭物酶催化底物水解为荧光产物（4-甲基伞形酮），其荧光强度可在 450 nm 处测量。荧光强度与样品中的抗原浓度成正比。 IVD D-二聚体排除试验试剂盒（酶联免疫荧光法） 版本号 14219 E-CN-2015/01 2 实验结束时，仪器会根据存储于其中的校准曲线自动计算结果，然后打印一份报告。 【主要组成成份】 试剂盒组成（60 个测试）-试剂重组： 60个D-二聚体排除试验试剂条 STR 即用型。 60（2×30）个D-二聚体排除试验 固相管 SPR 即用型。 固相管内表面用抗FbDP单克隆免疫球蛋白（小鼠）包被。 D-二聚体排除试验对照品： C1 对照品 2x2mL(冻干) C2 对照品 2x2mL(冻干) C1 C2 用2mL蒸馏水重悬。静待5分钟，然后混合。 重悬后，在2～8℃保存28天，或在-25±6℃保存至试剂盒的有 效期（重悬后立即冻结）。 反复冻融不可超过5次。 从用甘氨酸－小牛白蛋白缓冲液稀释的人类血浆*中提取的 FbDP+防腐剂。 MLE数据标出了置信区间，单位mg/L（FEU）（“质控品C1浓度 范围”或“质控品C2浓度范围”）。 D-二聚体排除试验校准品： S1 校准品： 2x2mL(冻干) S1 用2mL蒸馏水重悬。静待5分钟，然后混合。 重悬后，在2～8℃保存28天，或在-25±6℃保存至试剂盒的有 效期（重悬后立即冻结）。 反复冻融不可超过5次。 从用甘氨酸－小牛白蛋白缓冲液稀释的人类血浆*中提取的 FbDP+防腐剂。 MLE数据标出了校准品浓度，单位mg/L（FEU）（“校准品S1浓 度范围”），同时标出了以“相对荧光值”表示的置信区间（校 准品S1 RFV范围）。 D-二聚体排除试验稀释液 1×5 mL(液体) R1 即用型。 Tris缓冲液（0.05mol/L、pH=7.4）、小牛血清、防腐剂。 校准测试所需的出厂主数据规格书： 试剂盒提供了 MLE 数据（主批次输入） 或者 包装盒标签上印有MLE条形码 *本品已经经过检测显示 HBs 抗原阴性，HIV1、HIV2 和 HCV 抗体阴性。不过，由于尚无一种试验方法能够*保证没有这些 物质，所以本产品必须按照具有潜在的感染性进行处理。因此，处理当中应该采取常用的安全措施。 固相管（SPR） 生产过程中将固相管内表面用抗 FbDP 单克隆免疫球蛋白（小鼠）包被。每个固相管用 DEX2 代码标识。 在开袋仅取出所需要的固相管后，小心将储存袋密封好。 试剂条 试剂条包括 10 个孔，并覆盖带有标签的金属箔片。标签包括一个条形码，主要表示检测代码，试剂 盒的批号和有效日期。第一个孔的金属箔片被打孔，以便加入标本。每个试剂条的最后一个孔都是一个荧 光读数孔，可以在其中进行荧光测定。可以进行荧光阅读。在试剂条的中间部分孔包含需要检测的各种试 剂。 DEX2 试剂条的描述 孔 试剂 1 样本孔。 D-二聚体排除试验试剂盒（酶联免疫荧光法） 版本号 14219 E-CN-2015/01 3 2、3、4 空白孔。 5 共轭物：TRIS缓冲液（0.05 mol/L，pH=6.5）中碱性磷酸酶标记的抗FbDP单克隆免疫球蛋白 （小鼠）、马血清、防腐剂（400μL）。 6、7、9 清洗缓冲液：TRIS缓冲液（0.05 mol/L，pH=7.3）、化学稳定剂、防腐剂（600μL）。 8 稀释液：TRIS缓冲液（0.05mol/L的，pH=7.4）、小牛血清、蛋白和化学稳定剂、防腐剂（600μL）。 10 含底物的荧光读数孔：磷酸4-甲基伞形烷（0.6mmol/L）、二乙醇胺（DEA）（0.62 mol/L或6.6％） PH=9.2 ±1g/L的叠氮钠（300μL）。 * *警示词：危险 危害： H318：造成严重眼部刺激。 预防措施： P280：配戴防护手套/护目镜/面罩。 P305+P351+P338：如入眼：用清水小心冲洗数分钟。如果配戴隐形眼镜并方便摘除，摘除隐形眼镜后 继续冲洗。 详情参见“材料安全性数据表”。 必需但试剂盒中未提供的材料及耗材： 使用一次性吸头的移液器，用来分配 2 至 200ml 的液体。 无粉末的一次性乳胶手套。 对于其他具体的材料和用品，请参照仪器操作手册。 VIDAS 系列仪器。 【储存条件及有效期】 2～8℃储存，有效期 12 个月。 禁止冷冻试剂。 所有未用试剂存于 2～8℃。 打开试剂盒后，检查固相管铝箔袋密封是否完好且无损坏。否则请勿使用固相管。 为保持固相管稳定性，取出所需 SPR 后请将有干燥剂的袋重新仔细密封并将整个试剂盒放回 2～8℃ 按推荐的环境储藏试剂盒,可确保所有成份在标注的效期内稳定。 生产日期：详见外包盒标签。 失效日期：详见外包盒标签。 【适用仪器】 VIDAS，miniVIDAS，VIDAS 3