Sulfo-SMCC试剂货号：S330
N-[(4-Maleimidomethyl)cyclohexylcarbonyloxy]sulfosuccinimide, sodium salt
92921-24-9
商品信息
储存条件：-20度保存，防潮
运输条件：室温
分子式：
C16H17N2NaO9S
分子量：
436.37
选择规格：
50mg
分类： Dojindo同仁化学
SPDP试剂货号：S291
SPDP试剂货号：S291
N-Succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate
68181-17-9
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
分子式：
C12H12N2O4S2
分子量：
312.37
选择规格：
100mg
GMBS试剂货号：G005
GMBS试剂货号：G005
N-(4-Maleimidobutyryloxy)succinimide
CAS号：80307-12-6
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
分子式：
C12H12N2O6
分子量：
280.23
选择规格：
50mg
100mg
EMCS试剂货号：E018
EMCS试剂货号：E018
N,(6-马来酰亚胺己酰基氧)琥珀酰亚胺
CAS号：55750-63-5
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
分子式：
C14H16N2O6
分子量：
308.29
选择规格：
50 mg
DSP试剂货号：D629
DSP试剂货号：D629
3,3′-二硫代二丙酸 二(N-羟基丁二酰亚胺酯)
DSP
商品信息
储存条件：0-5度保存，防潮
运输条件：室温
分子式：
C14H16N2O8S2
分子量：
404.42
选择规格：
1g
Sulfo-AC5-SPDP试剂货号：S359
Sulfo-AC5-SPDP试剂货号：S359
N-{6-[3-(2-Pyridyldithio)propionamido]hexanoyloxy}sulfosuccinimide, sodium salt
169751-10-4
商品信息
储存条件：-20度保存，防潮
运输条件：室温
分子式：
C18H22N3NaO8S3
分子量：
527.57
选择规格：
50mg
BS3试剂货号：B574
BS3试剂货号：B574
Bis(sulfosuccinimidyl)suberate, disodium salt
CAS号：82436-77-9(free acid)
商品信息
储存条件：0-5度保存，防潮
运输条件：室温
分子式：
C16H18N2Na2O14S2
分子量：
572.43
选择规格：
50mg
DTSSP试剂货号：D630
DTSSP试剂货号：D630
3,3′-二硫代双(磺酸琥珀酰亚氨基丙酸酯)，二钠盐
DTSSP
商品信息
储存条件：0-5度保存，防潮
运输条件：室温
分子式：
C14H14N2Na2O14S4
分子量：
608.51
选择规格：
50mg
ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31
ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31
ICG 标记试剂盒-氨基
ICG Labeling Kit – NH2
商品信息
储存条件：0-5度保存,防潮
运输条件：室温
特点：
● 标记的物质可以在大约2个小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 标记的物质可以用所附的保存溶液保存。
选择规格：
3samples
试剂盒内含
产品概述
ICG（吲哚菁绿）是一种花青颜料，也用于肝功能和肝储备测试的色素负载测试中，并且在近红外区域具有荧光。激发波长在774nm附近，荧光波长在805nm附近，并且具有即使在体内使用也不容易被血红蛋白干扰的荧光特性。因此，期望将其应用于使用近红外荧光的体内荧光成像。 ICG标记试剂盒-NH2是用于标记具有氨基基团的蛋白质（尤其是抗体）的试剂盒。套件随附的NH2-Reactive以及已发布的荧光素标记套件–NH2（代码：LK01），HiLyte FluorTM 555标记套件–NH2（代码：LK14），HiLite FluorTM 647标记套件–NH2（代码：LK15）由于ICG在分子中具有活性酯，因此仅通过与具有氨基的分子混合即可形成稳定的共价键。当将ICG标记在蛋白质上时，可以使用随附的过滤管轻松去除抑制标记反应和未反应的NH2反应性ICG的低分子量化合物（例如Tris）。对于ICG标记的IgG，荧光波长为774/805nm。
该试剂盒包含标记所需的试剂和用于储存准备好的ICG标记产品的溶液。
原理
操作步骤
使用注意事项:
如果样品中含有分子量>10,000的物质 (多肽、其它蛋白等)，有阻碍标记反应的可能性。在标记前需要先纯化，如果样品是抗体，可用 IgG Purification Kit (AP01，AP02)纯化，如果样品中有小的不溶物质，离心后取上清液来标记。
操作步骤：
a) 蛋白溶液量要≤100ul，如果抗体浓度<0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总蛋白量达到50-200ug。
b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，继续离心5min或提高转速。
c) NH2-Reactive ICG在管子的底部，加10ul DMSO到管子的底部，用移液器反复吹打溶解。由于NH2-Reactive ICG会被DMSO中的水分水解，在制备好NH2-Reactive ICG溶液后马上进行第4步操作。
d) 如果蛋白总量达到200ug，请加入全部NH2-Reactive ICG溶液。
e) 我们推荐用WS Buffer保存标记产物，但也可以根据下一步实验要求选择合适的缓冲液。
产品优势
1）标记的物质可以在大约2个小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）标记的物质可以用所附的保存溶液保存。
ICG标记实验例
图. 小鼠尾静脉注射ICG抗体的荧光成像图小鼠皮下肿瘤模型在注射了ICG抗体 (50ug) 48h后，有明显的迹象表明抗体在肿瘤中有选择性地聚集。
仪器：活体成像仪 (Clairvivo OPT，岛津制作所)
小鼠：BALB/c(nu/nu) 纯合子裸小鼠 (母，11周)
肿瘤细胞：HeLa细胞 (在右腋皮下移植后4周)
检测条件：Ex=785nm，Em=845/55nm
抗体：整合素α2抗体 曝光时间：10s
荧光特性
常见问题Q&A
| Q1: 标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法。 |
| A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使用50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。
当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。 —————————————— PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33 PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33 —————————————— 离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。 |
Ab-10 Rapid R-Phycoerythrin Labeling Kit试剂盒货号：LK34
Ab-10 Rapid R-Phycoerythrin Labeling Kit试剂盒货号：LK34
R-藻红蛋白抗体快速标记试剂盒（微量）
Ab-10 Rapid R-Phycoerythrin Labeling Kit
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
选择规格：
3samples
R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26
R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26
藻红蛋白标记试剂盒-巯基
R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 也可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。
● 带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。
选择规格：
3samples
试剂盒内含
产品概述
藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。R-藻红蛋白(R-PE)是一种藻胆蛋白，它在578nm附近有橙色荧光，激发波长为488nm。R-Phycoerythrin Labeling Kit-SH能够简便快速地制备被R-PE标记的IgG，SH-reactive R-PE（该试剂盒的成分之一）具有一个马来酰亚胺基，不需任何活化就能够轻易地与靶分子中的巯基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube能够快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了标记所需的全部溶液，包括制备带有SH的还原型IgG所需的还原剂以及储存标记产物的Storage buffer。
*R-PE: R-Phycoerythrin(R-藻红蛋白)
原理
荧光特性
操作步骤
使用注意事项:
1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。
2. 在标记过程中，IgG或者R-Phycoerythrin-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。
3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。
4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
标记IgG操作步骤
（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）用移液器使溶液混合，然后8,000-10,000g离心10分钟。b）
（3）将150μl WS buffer加入到Reducing agent中并用移液器吹打数次使其溶解。
（4）从步骤3所得的溶液中，取100μl转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吹打数次后，37℃培养30分钟。
（6）将100μl RA solution加入到管中，8,000-10,000g离心10分钟。弃滤液，加入200μl RA solution，再离心一次。b）
（7）将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive R-PE并吹打其溶解。
（8）将所得的SH-reactive R-PE溶液转移到被还原的IgG所集中的过滤管的膜上。
（9）用移液器吹打数次后，37℃培养1小时。
（10）加入150μl WS buffer并吹打10-15次来回收标记产物。c）将该溶液转移至0.5ml试管中，在0-5℃下保存。d）
a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记后产物的浓度为1.4-1.8mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2个R-PE分子。没有被结合的R-PE可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常R-PE标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。
产品优势
1）R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）也可以通过使用附着的还原剂*标记不具有游离SH基团的蛋白质。
6）带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。
*还原剂经过优化，可减少IgG的制备。 当使用具有除IgG以外的S-S键的样品时，由于S-S键的断裂，标记分子的活性可能会丢失。请在确认不会发生因还原引起的失活后使用。
常见问题Q&A
| Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。 |
| Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？ |
| A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了 |
| Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法 |
| A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。
当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。 —————————————— PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33 PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33 —————————————— 离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。 |
|
Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？ |
| A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm
B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm |
| Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物 |
| A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。 |
|
Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？ |
|
A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。 |
|
Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
|
A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。 |
| Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子 |
| A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。 |
|
Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？ |
| A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。 |
|
Q10:标记产物能保存多久？ |
| A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。 |
R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK23
R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK23
藻红蛋白标记试剂盒-氨基
R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。
选择规格：
3samples
凑单关联产品TOP5
NO.1. Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 乳酸脱氢酶(LDH)检测
NO.2. Calcein-AM 活细胞荧光染色
NO.3. Cellstain- CFSE 活细胞长效荧光染色，活体跟踪
NO.4. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.5. Lipi-Blue 脂滴检测（蓝色）
试剂盒内含
产品概述
藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。R-藻红蛋白(R-PE)是一种藻胆蛋白，它在578nm附近有红色荧光，激发波长为488nm。R-Phycoerythrin Labeling Kit-NH2能够简便快速地制备被R-PE标记的IgG，NH2-reactive R-PE（该试剂盒的成分之一）具有一个活性的酯基团，不需任何活化能够轻易地与靶分子中的氨基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube用来快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了包括标记产物的储存液等用于R-PE标记的所需的全部试剂。
*R-PE: R-Phycoerythrin(R-藻红蛋白)
原理
荧光特性
操作步骤
使用注意事项:
1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。
2. 在标记过程中，IgG或者R-Phycoerythrin-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。
3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。
4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
标记IgG操作概述
（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。b）
（3）完成离心后，将10μl Reaction buffer加入到NH2-reactive R-PE中并用移液枪吹打使其溶解。
（4）将含有NH2-reactive R-PE的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。
（6）将190μl WS buffer加入到过滤管中并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。c） 将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记后产物的浓度为1.4-1.8mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2个R-PE分子。没有被结合的R-PE可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常R-PE标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。
产品优势
1）R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。
常见问题Q&A
| Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。 |
| Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？ |
| A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了 |
| Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法 |
| A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。
当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。 —————————————— PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33 PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33 —————————————— 离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。 |
|
Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？ |
| A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm
B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm |
| Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物 |
| A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。 |
|
Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？ |
|
A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。 |
|
Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
|
A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。 |
| Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子 |
| A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。 |
|
Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？ |
| A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。 |
|
Q10:标记产物能保存多久？ |
| A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。 |
Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24
Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24
藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基
Allophycocyanin Labeling Kit – SH
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● APC标记的产品可以在大约2.5小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50-200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。
● 可以使用随附的保存溶液保存APC标签。
选择规格：
3samples
试剂盒内含
产品概述
藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。别藻蓝蛋白(APC)是一种藻胆蛋白，它在660nm附近有红色荧光，激发波长为488nm。Allophycocyanin Labeling Kit-SH能够简便快速地制备被APC标记的IgG，SH-reactive APC（该试剂盒的成分之一）具有一个马来酰亚胺基，不需任何活化就能够轻易地与靶分子中的巯基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube能够快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了标记所需的全部溶液，包括制备带有SH的还原型IgG所需的还原剂以及储存标记产物的Storage buffer。
*APC: Allophycocyanin (别藻蓝蛋白)
原理
荧光特性
操作步骤
使用注意事项:
1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。
2. 在标记过程中，IgG或者Phycobiliprotein-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。
3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。
4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
标记IgG操作步骤：
（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）用移液器使溶液混合，然后8,000-10,000g离心10分钟。b）
（3）将150μl WS buffer加入到Reducing agent中并用移液器吹打数次使其溶解。
（4）从步骤3所得的溶液中，取100μl转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吹打数次后，37℃培养30分钟。
（6）将100μl RA solution加入到管中，8,000-10,000g离心10分钟。弃滤液，加入200μl RA solution，再离心一次。b）
（7）将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive APC并吹打其溶解。
（8）将所得的SH-reactive APC溶液转移到被还原的IgG所集中的过滤管的膜上。
（9）用移液器吹打数次后，37℃培养1小时。
（10）加入150μl WS buffer并吹打10-15次来回收标记产物。c）将该溶液转移至0.5ml试管中，在0-5℃下保存。d）
a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记后产物的浓度为1.4-1.8mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2个APC分子。没有被结合的APC可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常APC标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。
产品优势
1）APC标记的产品可以在大约2.5小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50-200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）还可以通过使用附着的还原剂*标记不具有游离SH基团的蛋白质。
6）可以使用随附的保存溶液保存APC标签。
*还原剂针对减少IgG的制备而优化。当使用带有除IgG以外的S-S键的样品时，由于S-S键的断裂，可能会失去待标记分子的活性。请在确认不会发生因还原引起的失活后使用。
常见问题Q&A
| Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。 |
| Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？ |
| A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了 |
| Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法 |
| A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。
当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。 —————————————— PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33 PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33 —————————————— 离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。 |
|
Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？ |
| A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm
B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm |
| Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物 |
| A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。 |
|
Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？ |
|
A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。 |
|
Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
|
A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。 |
| Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子 |
| A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。 |
|
Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？ |
| A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。 |
|
Q10:标记产物能保存多久？ |
| A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。 |
Allophycocyanin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK21
Allophycocyanin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK21
藻蓝蛋白标记试剂盒-氨基
Allophycocyanin Labeling Kit – NH2
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● APC标记的产品可以在约2.5小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 可以使用附带的保存溶液保存APC标签。
选择规格：
3samples
试剂盒内含
产品概述
藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。别藻蓝蛋白（APC）是一种藻胆蛋白，它在660 nm附近有红色荧光。Allophycocyanin Labeling Kit-NH2能够简便快速地制备被APC标记的IgG，NH2-reactive APC（该试剂盒的成分之一）具有一个活性的酯基团，不需任何活化就能够轻易地与靶分子中的氨基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube用来交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了标记产物的Storage buffer等用于APC标记的所需的全部试剂。
*APC: Allophycocyanin (别藻蓝蛋白)
原理
荧光特性
操作步骤
使用注意事项:
1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。
2. 在标记过程中，IgG或者Phycobiliprotein-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。
3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。
4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
标记IgG操作步骤
（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000 g离心10分钟后，加入100μl WS buffer再离心一次。b）
（3）离心完成后，将10μl Reaction buffer加入到NH2-reactive APC中并用移液器吹打使其溶解。
（4）将含有NH2-reactive APC的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。
（6）将190μl WS buffer加入到过滤管中并用枪吹打10到15次来回收标记产物。c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记后产物的浓度为1.4-1.8mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2个APC分子。没有被结合的APC可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常，APC标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。
产品优势
1）APC标记的产品可以在约2.5小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）可以使用附带的保存溶液保存APC标签。
常见问题Q&A
| Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。 |
| Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？ |
| A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了 |
| Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法 |
| A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。
当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。 —————————————— PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33 PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33 —————————————— 离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。 |
| Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？ |
| A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm
B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm |
| Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物 |
| A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。 |
| Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？ |
| A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。 |
| Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。 |
| Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子 |
| A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。 |
| Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？ |
| A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。 |
| Q10:标记产物能保存多久？ |
| A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。 |
DTPA anhydride试剂货号：D033
DTPA anhydride试剂货号：D033
Diethylenetriamine-N,N,N’,N”,N”-pentaacetic acid, dianhydride
23911-26-4
商品信息
储存条件：室温，防潮
运输条件：室温
分子式：
C14H19N3O8
分子量：
357.32
选择规格：
1g
5g
Maleimido-C3-NTA试剂货号：M035
Maleimido-C3-NTA试剂货号：M035
N-[5-(3′-马来酰亚胺丙烷基氨基)-1-戊基羧基]亚氨基二乙酸, 二钠盐, 一水合物
Maleimido-C3-NTA
商品信息
储存条件：0-5度保存，防潮
运输条件：室温
分子式：
C18H23N3Na2O9・H2O
分子量：
489.38
选择规格：
10mg
BABE试剂货号：B437
BABE试剂货号：B437
1-(p-Bromoacetamidobenzyl)ethylenediamine-N,N,N’,N’-tetraacetic acid
84256-91-7
商品信息
储存条件：-20度保存
运输条件：室温
分子式：
C19H24BrN3O9
分子量：
518.31
选择规格：
10 mg
Isothiocyanobenzyl-NTA试剂货号：I279
Isothiocyanobenzyl-NTA试剂货号：I279
N-[5-(4-Isothiocyanatobenzyl)amido-1-carboxypentyl]iminodiacetic acid
Isothiocyanobenzyl-NTA
商品信息
储存条件：-20度保存，充氮气
运输条件：室温
分子式：
C19H23N3O7S
分子量：
437.47
选择规格：
10mg
Isothiocyanobenzyl-EDTA试剂货号：M030
Isothiocyanobenzyl-EDTA试剂货号：M030
Isothiocyanobenzyl-EDTA（ITCBE）
CAS号：105394-74-9
商品信息
储存条件：-20度保存，防潮
运输条件：室温
分子式：
C18H21N3O8S
分子量：
439.44
选择规格：
10mg
技术情报
注意事项
・如果将本产品以粉末形式取出并使用，由于其性质，静电等因素，它可能会粘附在容器内部，从而难以完全取出。
・对于粘附在容器上且无法取出的粉末，请在使用前将要使用的溶剂倒入容器中并溶解。
溶解例
2 mg / ml（乙腈：10 mmol / l磷酸= 1：1）
Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK13
Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK13
碱性磷酸酶标记试剂盒-巯基
Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● 可以在大约3个小时内制备ALP标记的产品。
● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 只需与SH反应性ALP混合即可形成ALP标签。
● 还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 带有ALP标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。
选择规格：
3samples
试剂盒内含
产品概述
该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的碱性磷酸酶标IgG以及竞争性EIA所需的碱性磷酸酶标抗原。该试剂盒中的SH-reactive ALP能够与含有SH的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的全部试剂，包括还原剂和储存用缓冲液。SH-reactive ALP可以和靶分子形成共价键，还原剂能够在IgG分子上建立自由巯基。当碱性磷酸酶标IgG用于EIA时，SH-reactive ALP的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。
* ALP：Alkaline Phosphatase (碱性磷酸酶)
原理
操作步骤
使用注意事项:
1. 所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。
2. 所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。
3. 标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。
4. 如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化 (不包含于此试剂盒中)。
5. 如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。
6. 如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶SH-reactive ALP放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。
标记IgG操作步骤：
（1）将100μl Solution A以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）用移液器使溶液混合，8,000-10,000g离心10分钟。b）
（3）将150μl Solution A加入到Reducing agent中并用移液器吹打使其溶解。
（4）将100μl步骤3所得溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吹打数次，然后在37℃下培养30分钟。
（6）将100μl Solution B加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟。除去滤液，加入200μl Solution B，再离心一次。b）
（7）将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive ALP中并用移液器吹打使其溶解。
（8）将SH-reactive ALP溶液移到被还原的IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（9）用移液器吹打数次，然后在37℃下培养1小时。
（10）加入150μl Storage buffee并吹打10-15次来回收标记产物。c）将此溶液转移至一支0.5ml的试管，将其储存在0-5℃。d）
a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记产物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个还原后的IgG分子上被标记上2到4个碱性磷酸酶分子。没有被结合的碱性磷酸酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常碱性磷酸酶标记后的还原型IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以在-20℃下存放。但还要注意样品自身是否稳定。
标记小分子操作步骤：
（1）用Reaction buffer制备50μl，1mM的巯基化合物溶液，a）并将该溶液加入到SH-reactive ALP管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。
（2）将100μl Solution A加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。
（3）在8,000-10,000g离心10分钟，b）弃滤液，向管中加入200μl Solution A。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g离心10分钟。b）
（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）如果巯基化合物在水溶液中无法溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl与45μl Reaction buffer混合。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记后产物的浓度大约为400-500μg/ml（10-12.5μM）。1-2个靶分子能够和1个碱性磷酸酶分子结合。
d）建议用Storage Buffer来回收标记产物，也可以选择其它合适的缓冲液。
产品优势
1）可以在大约3个小时内制备ALP标记的产品。
2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）只需与SH反应性ALP混合即可形成ALP标签。
5）还可以通过使用附着的还原剂*标记不具有游离SH基团的蛋白质。
6）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
7）带有ALP标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。
常见问题Q&A
| Q1: 能够使用这个试剂盒标记F(ab’)2吗？ |
| A:可以标记。请参照标记IgG的操作说明，回收率通常都超过80%。 |
| Q2:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？ |
| A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000或者<5,000且具有活性巯基结构。如果分子量>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品来标记。如果分子量<5000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话：800-988-0083 |
| Q3: 能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:可以，只要它的分子量<5,000且具有活性巯基。可以参照标记小分子的操作说明。 |
| Q4: LK13所能标记的最小的IgG的量是多少？ |
| A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。但是，在步骤8，使用SH-reactive ALP溶液时，用量缩小为原来的1/5，还是能够标记10 μg的IgG。 |
| Q5: 每个IgG能够标记多少碱性磷酸酶分子？ |
| A:每个IgG平均能标记上1-2个碱性磷酸酶分子。 |
| Q6: 标记蛋白质之前是否必须先使用过滤管？ |
| A:如果蛋白溶液中不含有带有活性巯基的小分子并且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右，则没有必要使用过滤管。只需要将样品溶液和Solution B混合，再把混合液加入到SH-reactive ALP管中即可。 |
| Q7:是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？ |
| A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该试验的缓冲液。 |
| Q8:我的样品中含有小的不溶物，我该怎么办？ |
| A:低速离心后用上清液来标记。 |
| Q9:标记反应结束后，未标记的SH-reactive ALP是否仍然含有活性马来酰亚胺？ |
| A:不含有。几乎100%的SH-reactive ALP都被用于了IgG或者小分子的标记。 |
| Q10:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？ |
| A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。 |
Alkaline Phosphatase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK12
Alkaline Phosphatase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK12
碱性磷酸酶标记试剂盒-氨基
Alkaline Phosphatase Labeling Kit – NH2
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● 可以在大约3个小时内制备ALP标记的产品。
● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 只需与NH2反应性ALP混合即可形成ALP标签。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 带有ALP标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。
选择规格：
3samples
试剂盒内含
产品概述
该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的碱性磷酸酶标IgG以及竞争性EIA所需的碱性磷酸酶标抗原。该试剂盒中的NH2-reactive ALP能够与含有NH2的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的全部试剂，包括储存用缓冲液。NH2-reactive ALP不需任何活化就可以和靶分子结合。因此，当碱性磷酸酶标IgG用于EIA时，NH2-reactive ALP的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。
*ALP：Alkaline Phosphatase (碱性磷酸酶)
备注：经过同仁化学研究所的长期稳定性考验，代码为LK12的产品在0-5℃未开封的条件下由原来可以保存半年延长至一年。
原理
操作步骤
使用注意事项:
1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。
2.所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。
3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。
4.如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化 (不包含于此试剂盒中)。
5.如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。
6.如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶NH2-reactive ALP放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。
标记IgG操作步骤：
（1）将100μl Washing buffer以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。b）
（3）将10μl Reaction buffer加入到NH2-reactive ALP中并用移液器吹打使其溶解。
（4）将含有NH2-reactive ALP的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。
（6）加入190μl Storage buffer 并吹打10到15次来回收标记产物。c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记后共轭物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1到3个碱性磷酸酶分子。没有被结合的碱性磷酸酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常，碱性磷酸酶标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以在-20℃下存放。但还要注意样品自身是否稳定。
标记小分子操作步骤：
（1）用Reaction buffer制备50μl，1mM的氨基化合物溶液，a）并将该溶液加入到NH2 -Reactive ALP管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。
（2）将100μl Washing Buffer加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。
（3）在8,000-10,000g离心10分钟，b）弃滤液，向管中加入200μl Washing Buffer。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g离心10分钟。b）
（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。c）将此溶液转移至微型管中，并储存于0-5℃下 d）。
a）如果氨基化合物在水溶液中无法溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl与45μl Reaction buffer混合。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5 min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。
c）标记后产物的浓度大约为400-500μg/ml（10-12.5μM）。1-2个靶分子能够和1个碱性磷酸酶分子结合。
d）建议用Storage Buffer来回收标记产物，也可以选择其它合适的缓冲液。
产品优势
1）可以在大约3个小时内制备ALP标记的产品。
2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）只需与NH2反应性ALP混合即可形成ALP标签。
5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
6）带有ALP标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。
常见问题Q&A
| Q1: 能够使用这个试剂盒标记Fab或者Fab’吗？ |
| A:可以标记。并且回收率通常都超过80%。 |
| Q2:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000或者<5,000且具有活性氨基结构。如果分子量>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品用LK12来标记。如果分子量<5,000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话：800-988-0083 |
| Q3: 能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:可以，只要它的分子量<5,000且具有活性氨基。可以参照标记小分子的操作说明。 |
| Q4:LK12所能标记的最小的IgG的量是多少？ |
| A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。尽管这个试剂盒也能标记10 μg的IgG，但是本底会较高。 |
| Q5: 每个IgG能够标记多少碱性磷酸酶分子？ |
| A:每个IgG平均能标记上1-2个碱性磷酸酶分子。 |
| Q6:标记反应结束后，未反应的NH2-reactive ALP是否还具有活性？ |
| A:没有了。NHS在反应过程中会完全被水解。 |
| Q7:标记反应过程中，NH2-reactive ALP是否会形成一些低聚物？ |
| A:不会。由于NH2-reactive ALP中的所有活性氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。 |
| Q8:是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？ |
| A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该试验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。 |
| Q9:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？ |
| A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。 |
Ab-10 Rapid Peroxidase Labeling Kit试剂盒货号：LK33
Ab-10 Rapid Peroxidase Labeling Kit试剂盒货号：LK33
辣根过氧化物酶快速标记试剂盒（微量）
Ab-10 Rapid Peroxidase Labeling Kit
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
选择规格：
3samples
Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51
Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51
辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基
Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。
● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● POD标记的产品只需与NH2-反应性过氧化物酶混合即可形成。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● POD标签可以用随附的保存溶液保存。
选择规格：
1sample
试剂盒内含
产品概述
该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的辣根过氧化物酶标IgG以及竞争性EIA所需的辣根过氧化物酶标抗原。该试剂盒中的NH2-reactive peroxidase具有琥珀酰亚胺基 (NHS)，它能够与含有NH2的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的所有试剂，包括储存用缓冲液。标记过程相当简单：只需将IgG和NH2-reactive peroxidase混合并且在37℃下培养2小时。NH2-reactive peroxidase不需任何活化就可以和靶分子形成共价键。NHS与辣根过氧化物酶之间的距离大约为1.2nm，为辣根过氧化物酶分子半径的一半。因此，当辣根过氧化物酶标IgG用于EIA时，NH2-reactive peroxidase的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。由于NH2-reactive peroxidase自身的氨基已经被阻断，因此自身不会发生反应。
原理
操作步骤
使用注意事项:
1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。
2.所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。
3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。
4.如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化（不包含于此试剂盒中）。如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。
5.如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶NH2-reactive peroxidase放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。
标记IgG操作步骤：
（1）将100μl Washing buffer以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。b）
（3）将10μl Reaction buffer加入到NH2-reactive peroxidase中并用移液器吹打使其溶解。
（4）将含有NH2-reactive peroxidase的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吸取溶液吹吸净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。
（6）将100μl Washing buffer加入到过滤管中。如果滤液的体积超过300μl，在进行步骤7前需要先丢弃滤液。
（7）8,000-10,000g离心10分钟。b）
（8）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。如果在聚积过程中，滤液体积达到或超过了400μl，则需在进行下一步离心前将滤液除去。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记产物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-3个辣根过氧化物酶分子。没有被结合的辣根过氧化物酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常，辣根过氧化物酶标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。
标记小分子操作步骤：
（1）用Reaction buffer制备50μl，1mM的氨基化合物，a）并将该溶液加入到NH2-reactive peroxidase管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。
（2）将100μl Washing buffer加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。
（3）在8,000-10,000g 离心10分钟，b）弃滤液，向管中加入200μl Washing buffer。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g 离心10分钟。b）
（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收抗体。c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）如果氨基化合物在水溶液中无法溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl 与45μl Reaction buffer混合。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记产物的浓度大约为400-500μg/ml (10-12.5μM)。1-2个靶分子能够和1个辣根过氧化物酶分子结合。
d）标记后的小分子在0-5℃下能够存放至少6个月。
产品优势
1）POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。
2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）POD标记的产品只需与NH2-反应性过氧化物酶混合即可形成。
5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
6）POD标签可以用随附的保存溶液保存。
常见问题Q&A
| Q1: 标记反应结束后，未反应的NH2-reactive peroxdase是否还具有活性？ |
| A:没有了。它在反应过程中会完全被水解。 |
| Q2: 标记反应过程中，NH2-reactive peroxdase是否会形成一些低聚物？ |
| A:不会。由于NH2-reactive peroxdase中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。 |
| Q3: 是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？ |
| A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该实验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。 |
| Q4:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？ |
| A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。 |
| Q5: 能够使用这个试剂盒标记Fab或者Fab’吗？ |
| A:可以标记。并且回收率通常都超过80%。 |
| Q6:能够用这个试剂盒标记其它蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000或者<5,000且具有活性伯胺或仲胺结构。如果分子量>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品用LK11-10来标记。 如果分子量<5,000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话：800-988-0083 |
| Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:可以。只要它的分子量小于5,000且具有活性伯胺或仲胺。可以参照标记小分子的操作说明。 |
| Q8:LK11所能标记的最小的IgG的量是多少？ |
| A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。尽管这个试剂盒也能标记10 μg的IgG，但是本底会较高。 |
| Q9:每个IgG能够标记多少辣根过氧化物酶分子？ |
| A:每个IgG平均能标记上1-3个辣根过氧化物酶分子。 |
Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09
Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09
过氧化物酶标记试剂盒-巯基
Peroxidase Labeling Kit – SH
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。
● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● POD标记的产品只需与SH反应过氧化物酶混合即可形成。
● 还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● POD标签可与随附的存储溶液一起存储。
选择规格：
3samples
试剂盒内含
产品概述
该试剂盒主要用于制备酶免疫分析（EIA）所需的辣根过氧化物酶标IgG以及竞争性EIA所需的辣根过氧化物酶标抗原。该试剂盒中的SH-reactive peroxidase能够与含有巯基的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的全部试剂，包括还原剂和储存用缓冲液。SH-reactive peroxidase可以和靶分子形成共价键，还原剂能够在IgG分子上建立自由巯基。当辣根过氧化物酶标IgG用于EIA时，SH-reactive peroxidase的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。
原理
操作步骤
使用注意事项:
1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。
2.所需标记的较小的巯基化合物的分子量要<5,000。
3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。
4.如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化（不包含于此试剂盒中）。
5.如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。
6.如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶SH -reactive peroxidase放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。
标记IgG操作步骤：
（1）将100μl Solution A以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）用移液器使溶液混合，8,000-10,000g离心10分钟。b）
（3）将150μl Solution A加入到Reducing agent中并用移液器吹打使其溶解。
（4）将100μl步骤3所得溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吹打数次，然后在37℃下培养30分钟。
（6）将100μl Solution B加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟。除去滤液，加入200μl Solution B，再离心一次。b）
（7）将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive peroxidase中并用移液器吹打使其溶解。
（8）将SH-reactive peroxidase溶液移到被还原的IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（9）用移液器吹打数次，然后在37℃下培养1小时。
（10）将100μl Solution A加入到试管中，8,000-10,000g离心10分钟。b）
（11）加入200μl Storage buffer并吹打10-15次来回收标记产物。c）将此溶液转移至一支0.5ml的试管，并储存于0-5℃。
a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。如果在聚积过程中，滤液体积超过了400μl，则需在进行下一步离心前将滤液除去。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记产物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个还原后的IgG分子上会被标记 上1到2个辣根过氧化物酶分子。没有被结合的辣根过氧化物酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常辣根过氧化物酶标记后的还原型IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。另外，还要注意样品自身是否稳定。
标记小分子操作步骤：
（1）用Reaction buffer制备50μl，1 mM的巯基化合物溶液，a）并将该溶液加入到SH-reactive peroxidase管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。
（2）将100μl Solution A加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。
（3）在8,000-10,000g离心10分钟，b）弃滤液，向管中加入200μl Solution A。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g离心10分钟。b）
（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10-15次来回收抗体。c）将此溶液转移至一支0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）如果巯基化合物无法在水溶液中溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl 与45μl Reaction buffer混合。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记产物的浓度大约为400-500μg/ml（10-12.5μM）。1到2个靶分子能够和1个辣根过氧化物酶分子结合。
d）标记后的小分子在0-5℃下能够存放至少6个月。
产品优势
1）POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。
2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）POD标记的产品只需与SH反应过氧化物酶混合即可形成。
5）还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。
6）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
7）POD标签可与随附的存储溶液一起存储。
常见问题Q&A
| Q1: 能够使用这个试剂盒标记F(ab’)2吗？ |
| A:可以标记。请参照标记IgG的操作说明，回收率通常都超过80%。 |
| Q2: 能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？ |
| A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000或者<5,000且具有活性巯基结构。如果分子量.>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品用 LK09-10来标记。如果分子量<5,000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话 ：800-988-0083 |
| Q3: 能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:可以，只要它的分子量小于5,000且具有活性巯基。可以参照标记小分子的操作说明。 |
| Q4:LK09所能标记的最小的IgG的量是多少？ |
| A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。但是，在步骤8，使用SH-reactive peroxidase溶液时，用量缩小为原来的1/5，也能够标记10 μg的IgG。 |
| Q5: 每个IgG能够标记多少辣根过氧化物酶分子？ |
| A:每个IgG平均能标记上1-2个辣根过氧化物酶分子。 |
| Q6:标记蛋白质之前是否必须先使用过滤管？ |
| A:如果蛋白溶液中不含有带有活性巯基的小分子并且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右，则没有必要使用过滤管。只需要将样品溶液和Solution B混合，再把混合液加入到SH-reactive peroxidase管中即可。 |
| Q7:是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？ |
| A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该试验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。 |
| Q8:我的样品中含有小的不溶物，我该怎么办？ |
| A:低速离心后用上清液来标记。 |
| Q9:标记反应结束后，未标记的SH-reactive peroxidase是否仍然含有活性马来酰亚胺？ |
| A:不含有。几乎100%的SH-reactive peroxidase都被用于了IgG或者小分子的标记。 |
| Q10:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？ |
| A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。 |
Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK11
Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK11
过氧化物酶标记试剂盒-氨基
Peroxidase Labeling Kit – NH2
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。
● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● POD标记的产品只需与NH2-反应性过氧化物酶混合即可形成。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● POD标签可以用随附的保存溶液保存。
选择规格：
3samples
活动进行中
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NO.5. HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2 荧光素标记-氨基
试剂盒内含
产品概述
该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的辣根过氧化物酶标IgG以及竞争性EIA所需的辣根过氧化物酶标抗原。该试剂盒中的NH2-reactive peroxidase具有琥珀酰亚胺基 (NHS)，它能够与含有NH2的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的所有试剂，包括储存用缓冲液。标记过程相当简单：只需将IgG和NH2-reactive peroxidase混合并且在37℃下培养2小时。NH2-reactive peroxidase不需任何活化就可以和靶分子形成共价键。NHS与辣根过氧化物酶之间的距离大约为1.2nm，为辣根过氧化物酶分子半径的一半。因此，当辣根过氧化物酶标IgG用于EIA时，NH2-reactive peroxidase的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。由于NH2-reactive peroxidase自身的氨基已经被阻断，因此自身不会发生反应。
原理
操作步骤
使用注意事项:
1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。
2.所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。
3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。
4.如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化（不包含于此试剂盒中）。如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。
5.如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶NH2-reactive peroxidase放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。
标记IgG操作步骤：
（1）将100μl Washing buffer以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。b）
（3）将10μl Reaction buffer加入到NH2-reactive peroxidase中并用移液器吹打使其溶解。
（4）将含有NH2-reactive peroxidase的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。
（5）用移液器吸取溶液吹吸净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。
（6）将100μl Washing buffer加入到过滤管中。如果滤液的体积超过300μl，在进行步骤7前需要先丢弃滤液。
（7）8,000-10,000g离心10分钟。b）
（8）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。c） 将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。如果在聚积过程中，滤液体积达到或超过了400μl，则需在进行下一步离心前将滤液除去。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记产物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-3个辣根过氧化物酶分子。没有被结合的辣根过氧化物酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。
d）通常，辣根过氧化物酶标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。
标记小分子操作步骤：
（1）用Reaction buffer制备50μl，1mM的氨基化合物，a）并将该溶液加入到NH2-reactive peroxidase管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。
（2）将100μl Washing buffer加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。
（3）在8,000-10,000g离心10分钟，b）弃滤液，向管中加入200μl Washing buffer。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g离心10分钟。b）
（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收抗体。c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）
a）如果氨基化合物在水溶液中无法溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl与45μl Reaction buffer混合。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）标记产物的浓度大约为400-500μg/ml (10-12.5μM)。1-2个靶分子能够和1个辣根过氧化物酶分子结合。
d）标记后的小分子在0-5℃下能够存放至少6个月。
产品优势
1）POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。
2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）POD标记的产品只需与NH2-反应性过氧化物酶混合即可形成。
5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
6）POD标签可以用随附的保存溶液保存。
常见问题Q&A
| Q1: 标记反应结束后，未反应的NH2-reactive peroxdase是否还具有活性？ |
| A:没有了。它在反应过程中会完全被水解。 |
| Q2: 标记反应过程中，NH2-reactive peroxdase是否会形成一些低聚物？ |
| A:不会。由于NH2-reactive peroxdase中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。 |
| Q3: 是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？ |
| A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该实验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。 |
| Q4:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？ |
| A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。 |
| Q5: 能够使用这个试剂盒标记Fab或者Fab’吗？ |
| A:可以标记。并且回收率通常都超过80%。 |
| Q6:能够用这个试剂盒标记其它蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000或者<5,000且具有活性伯胺或仲胺结构。如果分子量>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品用LK11-10来标记。 如果分子量<5,000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话：800-988-0083 |
| Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:可以。只要它的分子量小于5,000且具有活性伯胺或仲胺。可以参照标记小分子的操作说明。 |
| Q8:LK11所能标记的最小的IgG的量是多少？ |
| A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。尽管这个试剂盒也能标记10 μg的IgG，但是本底会较高。 |
| Q9:每个IgG能够标记多少辣根过氧化物酶分子？ |
| A:每个IgG平均能标记上1-3个辣根过氧化物酶分子。 |
FITC-I试剂货号：F007
FITC-I试剂货号：F007
FITC-I试剂
CAS号：3326-32-7
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光防潮
运输条件：室温
分子式：
C21H11NO5S
分子量：
389.38
选择规格：
100mg
Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 647 Labeling Kit试剂盒货号：LK36
Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 647 Labeling Kit试剂盒货号：LK36
HiLyte Fluor 647快速标记试剂盒（微量）
Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 647 Labeling Kit
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
选择规格：
3samples
Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 555 Labeling Kit试剂盒货号：LK35
Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 555 Labeling Kit试剂盒货号：LK35
HiLyte Fluor 555快速标记试剂盒（微量）
Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 555 Labeling Kit
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
选择规格：
3samples
关联产品
Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒
生物素抗体标记试剂盒-氨基
Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒
过氧化物酶标记试剂盒-氨基
Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒
生物素标记试剂盒-氨基
Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒
荧光素标记试剂盒-氨基
Isothiocyanobenzyl-EDTA试剂
Isothiocyanobenzyl-EDTA（ITCBE）
Ab-10 Rapid Fluorescein Labeling Kit试剂盒货号：LK32
Ab-10 Rapid Fluorescein Labeling Kit试剂盒货号：LK32
荧光素快速标记试剂盒（微量）
Ab-10 Rapid Fluorescein Labeling Kit
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
选择规格：
3samples
关联产品
Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒
生物素抗体标记试剂盒-氨基
Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒
过氧化物酶标记试剂盒-氨基
Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒
生物素标记试剂盒-氨基
Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒
荧光素标记试剂盒-氨基
Isothiocyanobenzyl-EDTA试剂
Isothiocyanobenzyl-EDTA（ITCBE）
HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK15
HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK15
HiLyte Fluor 647标记试剂盒-氨基
HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● 荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。
选择规格：
3samples
试剂盒内含
产品概述
NH2-reactive HiLyte FluorTM 647是试剂盒的成分之一，它有一个琥珀酰亚胺基（NHS），能与蛋白质或者其它分子的氨基反应。该试剂盒中包含了标记所需的全部试剂。每一管NH2-reactive HiLyte FluorTM 647最多能够标记200 μg的IgG，每个IgG分子可与4-6个HiLyte FluorTM 647分子共价结合。标记过程十分简单，只需要在特制的过滤膜上将NH2-reactive HiLyte FluorTM 647加入到IgG溶液中，然后在37℃下培养10分钟。过量的HiLyte FluorTM 647能够用过滤管除去。被HiLyte FluorTM 647标记后的IgG的激发和发射波长分别为652 nm和673 nm。
* HiLyte FluorTM为AnaSpec,Inc公司的商标
原理
荧光特性
操作步骤
使用注意事项:
1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。
2. 在标记过程中，IgG或者HiLyte FluorTM 647-IgG标记物始终在Filtration tube的滤膜上。
3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits（不包含于本试剂盒 中）来纯化。
4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
5. 如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的标记试剂NH2-reactive HiLyte FluorTM 647放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持标记试剂的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。
标记IgG操作步骤
（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000g离心10分钟。b）
（3）将10μl DMSO加入到NH2-reactive HiLyte FluorTM647中并用移液器吹打使其溶解。c）
（4）将100μl Reaction buffer以及8μl NH2-reactive HiLyte FluorTM647溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。d）
（5）将过滤管放入培养箱中，37℃培养10分钟。
（6）将100μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟，b）除去滤液。
（7）将200μl WS buffer加入到过滤管中，8,000g离心10分钟，b）重复该步骤一次。
（8）将200μl WS buffer加入到过滤管中吹打10-15次来回收标记产物。e）将该溶液转移到0.5ml试管中，在0-5℃下保存。
a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于1mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。如果聚积过程中滤液的体积超过400μl，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）NH2-reactive HiLyte FluorTM647在管子的底部，向管底加入10μl DMSO，吹打数次使其溶解。
d）如果IgG的量为200μg，加入所有的NH2-reactive HiLyte FluorTM647溶液。
e）并不一定要使用WS buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。
产品优势
1）荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。
常见问题Q&A
| Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000。 |
| Q2:标记蛋白之前是否必须使用过滤管？ |
| A:如果蛋白溶液中不含有带有活性氨基的小分子且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右时，可以不使用过滤管来过滤，只需要将10 μl 样品溶液和90 μl Reaction Buffer以及8 μl NH2-reactive HiLyte FluorTM 555（由步骤3所得）混合并按照操作说明上的方法做从步骤4开始的后续试验。 |
| Q3:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。 |
| Q4:用该试剂盒所能标记的IgG的最小量是多少？ |
| A:IgG的最小量为10 μg。IgG的量在10 μg-100 μg之间时，标记比率是相同的。 |
| Q5:标记产物能保存多久？ |
| A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。 |
HiLyte Fluor 555 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK14
HiLyte Fluor 555 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK14
HiLyte Fluor 555标记试剂盒-氨基
HiLyte Fluor 555 Labeling Kit – NH2
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● 荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。
选择规格：
3samples
试剂盒内含
产品概述
该试剂盒主要用于制备红色荧光标记的蛋白质，如免疫转染中的IgG和示踪用胞内蛋白。用NH2-reactive HiLyte FluorTM 555是试剂盒的成分之一，它有一个琥珀酰亚胺基（NHS），能与蛋白质或者其它分子的氨基反应。该试剂盒中包含了标记所需的全部试剂。每一管NH2-reactive HiLyte FluorTM 555最多能够标记200μg的IgG，每个IgG分子与4-6个HiLyte FluorTM 555分子共价结合。标记过程十分简单，只需要在特制的过滤膜上将NH2-reactive HiLyte FluorTM 555加入到IgG溶液中，然后在37℃下培养10分钟。过量的HiLyte FluorTM 555能够用过滤管除去。被HiLyte FluorTM 555标记后的IgG的激发和发射波长分别为555nm和570nm。
* HiLyte FluorTM 为AnaSpec,Inc公司的商标
原理
荧光特性
操作步骤
使用注意事项:
1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。
2. 在标记过程中，IgG或者HiLyte FluorTM 555-IgG标记物始终在Filtration tube的滤膜上。。
3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits（不包含于本试剂盒 中）来纯化。
4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
5. 如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的标记试剂NH2-reactive HiLyte FluorTM 555放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持标记试剂的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。
标记IgG操作步骤：
（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000g离心10分钟。 b）
（3）将10μl DMSO加入到NH2-reactive HiLyte FluorTM 555中并用移液器吹打使其溶解。c）
（4）将100μl Reaction buffer以及8μl NH2-reactive HiLyte FluorTM 555溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。d）
（5）将过滤管放入培养箱中，37℃培养10分钟。
（6）将100μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟，b）除去滤液。
（7）将200μl WS buffer加入到过滤管中，8,000g离心10分钟，b）重复该步骤一次。
（8）将200μl WS buffer加入到过滤管中吹打10-15次来回收标记产物。e）将该溶液转移到0.5ml试管中，在0-5℃下保存。
a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于1mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。如果聚积过程中滤液的体积超过400μl，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）NH2-reactive HiLyte FluorTM 555在管子的底部，向管底加入10μl DMSO，吹打数次使其溶解。
d）如果IgG的量为200μg，加入所有的NH2-reactive HiLyte FluorTM 555溶液。
e）并不一定要使用WS buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。
产品优势
1）荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。
常见问题Q&A
| Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000。 |
| Q2:标记蛋白之前是否必须使用过滤管？ |
| A:如果蛋白溶液中不含有带有活性氨基的小分子且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右时，可以不使用过滤管来过滤，只需要将10 μl 样品溶液和90 μl Reaction Buffer以及8 μl NH2-reactive HiLyte FluorTM 555（由步骤3所得）混合并按照操作说明上的方法做从步骤4开始的后续试验。 |
| Q3:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。 |
| Q4:用该试剂盒所能标记的IgG的最小量是多少？ |
| A:IgG的最小量为10 μg。IgG的量在10 μg-100 μg之间时，标记比率是相同的。 |
| Q5:标记产物能保存多久？ |
| A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。 |
Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01
Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01
荧光素标记试剂盒-氨基
Fluorescein Labeling Kit – NH2
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● 荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。
选择规格：
3samples
凑单关联产品TOP5
NO.1. Biotin Labeling Kit – NH2 生物素抗体标记试剂盒-氨基
NO.2. Peroxidase Labeling Kit – NH2 过氧化物酶标记试剂盒-氨基
NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.4. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测
NO.5. Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 乳酸脱氢酶(LDH)检测
试剂盒内含
产品概述
该试剂盒主要用于制备用荧光素标记的蛋白质，如免疫转染中的IgG和胞内蛋白示踪。氨基反应型荧光素是试剂盒的成分之一，它含有琥珀酰亚胺基（NHS），能与蛋白质或者其它分子的氨基反应。该试剂盒中包含了标记所需的全部试剂，包括Storage buffer。每一管荧光素最多能够标记200μg的IgG，每个IgG分子可与4-6个荧光素分子共价结合。该试剂盒还包含一个缓冲液交换系统，因此含有氨基缓冲液的样品也能用此试剂盒来标记。虽然用膜来过滤有时会导致IgG聚集，但是试剂盒中的缓冲液交换系统能够防止标记过程中聚集现象的发生。用该试剂盒标记的抗体在4℃下能够保存至少2个月。被荧光素标记后的IgG的激发和发射波长分别为495nm和520nm。
原理
产品优势
1）荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。
荧光特性
操作步骤
使用注意事项:
1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。
2. 在标记过程中，IgG或者Fluorescein -IgG标记物始终存在于Filtration tube的滤膜上。
3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits（不包含于本试剂盒 中）来纯化。
4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
5. 如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的标记试剂NH2-reactive fluorescein放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持标记试剂的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。
a) 样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于1mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100 μg。如果聚积过程中滤液的体积超过400μl，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。
b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5 min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。
c) NH2-Reactive Fluorescein Dye在管子的底部，向管底加入10μl DMSO，吹打数次使其溶解，如果没有DMSO的话，可以用乙醇来替代。
d) 如果IgG的量为200μg，在步骤4时加入所有的NH2-Reactive Fluorescein Dye溶液。
e) 并不一定要使用WS Buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。
标记率计算
计算标记率：
1分子蛋白质上结合的荧光素的数量 (标记率) 的计算方法：将标记的蛋白质溶液用5倍的中性缓冲液稀释，分别测定在280nm和各个荧光染料的最大吸收波长处的吸光度，采用以下公式计算。
* 如果是IgG，摩尔吸光系数ε=216,000。
* 荧光染料在WS缓冲液中的摩尔吸光系数参见下表：
常见问题Q&A
| Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000。 |
| Q2:标记蛋白之前是否必须使用过滤管？ |
| A:如果蛋白溶液中不含有带有活性氨基的小分子且蛋白浓度在10mg/ml或者70μM左右时，可以不使用过滤管来过滤，只需要将10μl 样品溶液和90μl Reaction Buffer以及8μl NH2-reactive Fluorescein（由步骤3所得）混合并按照操作说明上的方法做从步骤4开始的后续试验。 |
| Q3:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。 |
| Q4:用该试剂盒所能标记的IgG的最小量是多少？ |
| A:IgG的最小量为10μg。IgG的量在10μg-100μg之间时，标记比率是相同的。 |
| Q5:标记产物能保存多久？ |
| A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。 |
CLAMP F405-Signal Boosting货号：C554
CLAMP F405-Signal Boosting货号：C554
免疫染色用蓝色荧光底物
CLAMP F405-Signal Boosting
商品信息
储存条件：-20度保存
运输条件：常温
特点：
● 可高灵敏的检测细胞表面抗原
● 高选择性与细胞内的滞留能力
选择规格：
10 μl
产品概述
近年来，以细胞表面抗原为目标的癌症治疗和诊断的相关研究引起了科研人员的广泛关注。目前较为常用的方法是利用荧光标记的抗体来检测细胞表面抗原(免疫荧光法)，但是由于许多细胞表面蛋白的表达水平不高，往往造成检测结果灵敏度低、适用范围小的问题。针对这些问题，同仁化学研究所专门开发了一种高灵敏度的荧光染色方法，即CLAMP法(quinone methide-based catalyzed signal amplification)。
*本产品是在日本九州大学片山佳树教授的指导下研制而成。
检测原理
通过利用一抗、β-Galactosidase(β-Gal)标记的二抗、β-Gal的荧光底物CLAMP F405进行荧光染色。CLAMP F405自身没有荧光也无法通过细胞膜，在与β-Gal反应后会形成具有细胞膜透过能力的Quinone methide，在进入细胞后可以与细胞内氨基和巯基结合并发出荧光。因为该荧光强度经过β-Gal的酶反应而得到增强，因此可以高灵敏的检测细胞膜上蛋白质。
操作简单、灵敏度高
CLAMP法的操作步骤与一般的二抗法相同。依次加入目的蛋白对应的一抗、β-gal标记的二抗、染色液，简单的三步操作后即可开始检测。
实验例
PD-1L1性能比较表
同时准备PD-L1诱导表达的HepG2细胞以及作为对照组的CFSE染色的细胞。将这两个细胞样品混合后，用CLAMP检测PD-L1表达的细胞。从结果可以看出，在CFSE染色细胞中，没有任何CLAMP法阳性细胞出现，PD-L1表达的细胞被清楚地标记区分出来。说明CLAMP可以用于检测一般的二次抗体法很难检测出来的PD-L1表达的HepG2细胞。
*CFSE: 5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3‘,6’-diacetate。(同仁货号：C375)
<检测结果>
<检测条件>
Blue: Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm
Green: Ex = 450-490 nm, Em = 500-550 nm
FFPE组织切片-人小肠组织
分别用CLAMP法和酪酰胺信号放大法(TSA, Tyramide signal amplification)检测人小肠FFPE组织切片上的α 平滑肌肌动蛋白(αSMA, α-smooth muscle actin)和角蛋白。结果显示CLAMP法的灵敏度更高，并且清晰的呈现了组织的免疫荧光共染色。
*数据提供：日本京都大学医学部附属医院病理诊断科 平田胜启老师
操作步骤实验例
① Protocol 1 (实验例：荧光显微镜检测HeLa细胞的表面抗原CD44)
参照操作说明书的Protocol 1，用CLAMP法检测HeLa细胞上的表面抗原CD44。
<检测条件>
1. 将HeLa细胞(1 x 105 cell/ml)播种于96孔板(100 μl/well)，37℃，5% CO2培养箱内过夜培养。
2. 去除上清，用100 µl MEM (10% FBS) 培养基清洗2次。
3. 去除上清，加入100 µl μg/ml 抗CD44抗体 (ab189524, abcam) /MEM (10% FBS) ，37℃，5% CO2培养箱内培养1 h。
4. 去除上清，用100 µl MEM (10% FBS)培养基清洗2次。
5. 加入100 µl x500 β-Galactosidase标记的抗体（ab136774, abcam）/MEM (10% FBS)，37℃，5% CO2培养箱内培养1 h。
6. 去除上清，用100 µl HBSS清洗细胞2次。
7. 加入100 µl Staining Solution，37℃，5% CO2培养箱内培养30 min。
8. 去除上清，用100 µl HBSS清洗细胞3次。
9. 用荧光显微镜观察荧光。（DAPI filter: Ex = 320-360 nm, Em = 435-480 nm）
② Protocol 2 (实验例：流式细胞仪检测HeLa细胞的表面抗原CD44)
参照操作说明书的Protocol 2，用CLAMP法检测HeLa细胞上的表面抗原CD44。
<检测条件>
1. 在1.5 ml微管中用MEM培养基(10% FBS) 制成2 x 105 cells/tube HeLa细胞的细胞悬液。
2. 300×g离心5 min，去除上清。
3. 添加500 µl 2 μg/ml CD44抗体(ab189524, abcam)/MEM培养基(10% FBS)，吹打混匀。
4. 在37℃静置1 h。
5. 按下列步骤进行清洗。
Ⅰ. 300×g离心5 min，去除上清。 Ⅱ. 加入500 µl培养基吹打制成细胞悬液。
Ⅲ. 300×g离心5 min，去除上清。 Ⅳ. 再重复一次步骤Ⅱ和Ⅲ。
6. 加入500 µl x500 β-Galactosidase标记的抗体(ab16774, abcam) /MEM培养基(10% FBS)，吹打制成细胞悬液。
荧光二抗法使用Alexa Fluor405标记的抗体 (ab175652, abcam)
7. 在37℃静置1 h。
8. 用HBSS替代培养基，重复步骤5的清洗操作，
9. 加入500 µl用HBSS配制的Staining Solution(悬浮细胞用)，吹打制成细胞悬液。
10.在37℃下，用微管旋转器(Tube Rotator)搅拌30 min。注意：不搅拌的话会造成灵敏度降低。
11. 300×g离心5 min，去除上清。
12.加入500 µl HBSS吹打混匀。
13.上流式细胞仪检测(LSR Fortessa X-20, BD)。 *BV421 filter set (Ex:405 nm, Em:430-470 nm)
③ Protocol 3 (实验例：检测固定化HeLa细胞的表面抗原CD44)
参照操作说明书的Protocol 3，用CLAMP法检测固定化HeLa细胞上的表面抗原CD44。
<检测条件>
PFA固定细胞的准备
1. 将HeLa细胞 (1 x 105 cell/ml)播种于96孔板(100 μl/well)，37℃，5% CO2培养箱内过夜培养。
2. 去除上清，用100 µl PBS清洗2次。
3. 加入100 µl 4% PFA/PBS溶液，室温静置30 min。
4. 去除上清，加入100 µl 0.1% Triton X-100/PBS溶液，室温静置30 min。
5. 去除上清，每孔加入100 µl Blocking Buffer (10% Blocking One/PBS)，室温静置30 min。
染色步骤
1. 去除上清，加入100 2 μg/ml 抗CD44抗体 (ab189524, Abcam) /Blocking Buffer ，室温静置1 h。
2. 去除上清，用100 µl Blocking Buffer清洗2次。
3. 加入100 µl x500 β-Galactosidase 标记的抗体 (ab16774, abcam) /Blocking Buffer ，室温静置1 h。
4. 去除上清，用100 µl Blocking Buffer清洗2次。
5. 加入100 µl Staining Solution，37℃静置30 min 。
6. 去除上清，用100 µl PBS清洗细胞3次。
7. 用荧光显微镜观察荧光。(DAPI filter: Ex = 320-360 nm, Em = 435-480 nm)
④ Protocol 4 (实验例：检测固定化MOLT4细胞的表面抗原PD1)
参照操作说明书的Protocol 4，用CLAMP法检测固定化MOLT4细胞上的表面抗原PD1。
<检测条件>
PFA细胞固定的准备
1. 在1.5 ml微管中加入(2 x 105 cells/tube)MOLT4细胞制成细胞悬液。
2. 300×g离心5 min，去除上清。
3. 添加500 µl 4% PFA/PBS溶液，吹打混匀。
4. 室温静置30 min，300×g离心5 min。
5. 去除上清，加入500 µl 0.1% TritonX-100/PBS溶液，吹打混匀。
6. 室温静置30 min，300×g离心5 min。
7. 去除上清，加入500 µl Blocking Buffer (10% Blocking One/PBS)，吹打混匀。
8. 去除上清后用100 µl HBSS清洗3次。
9. 室温静置30 min，300×g离心5 min，去除上清后开始染色步骤。
染色步骤
1. 加入500 µl 1 μg/ml PD1抗体(ab52587, abcam)/Blocking Buffer，吹打混匀。(同型对照使用IgG1KAPPA, 401408, Biolegend)
2. 室温静置1 h。
3. 按下列步骤进行清洗。
Ⅰ. 300×g离心5 min，去除上清。 Ⅱ. 加入500 µl Blocking Buffer吹打制成细胞悬液。
Ⅲ. 300×g离心5 min，去除上清。 Ⅳ. 再重复一次步骤Ⅱ和Ⅲ。
4. 加入<span style=”font-size: 11px; font-family: Arial; color: blac
FAQ
| Q：目前有染色实例的细胞和抗原有哪些？ |
| A：请参考下表：
|
| Q：染色后的样品可以保存吗 |
| A：活细胞在染色后再进行PFA固定的样品可以在PBS中冷藏保存1周。已经固定好的细胞再进行染色，在PBS中也可冷藏保存1周。 |
| Q：内源性β-Galactosidase是否会影响染色结果？ |
| A：活细胞染色时，CLAMP F405无法通过细胞膜，所以不会与内源性β-Galactosidase反应。而固定细胞染色时，按照书名数要求需要在PBS溶液中进行染色，一般也不会产生背景荧光上升的问题。 |
| Q：是否可以用PBS和HBSS以外的缓冲液来配制Staining Solution？ |
| A：中性以外的缓冲液会对染色反应有影响，所以不推荐使用。 |
| Q：各仪器的推荐检测条件？ |
| A：普通荧光显微镜：DAPI filter, Ex = 320-380 nm, Em = 435-485 nm
激光共聚焦显微镜：Ex = 405 nm, Em = 425-475 nm 流式细胞仪：Ex = 405nm, Em：BV421, Pacific Blue (450/50 nm) |
| Q：我从哪里可以购买到β-Gal标记的二次抗体？ |
| A：同仁化学并不销售一抗和标标记好的二抗，下面是我们实际检测过并实验成功的抗体和厂家。
|
| Q：CLAMP F405-Signal Boosting的DMSO溶液是否可以反复冻融？ |
| A：我们尝试过20次的反复冻融，对产品性能没有影响。 |
| Q：配置好的Staining Solution是否可以长期保存？ |
| A：Staining Solution 无法长期保存，请现配现用。 |
| Q：是否可以用PBS和HBSS以外的缓冲液来配制Staining Solution？ |
| A：中性以外的缓冲液会对染色反应有影响，所以不推荐使用。 |
| Q：各仪器的推荐检测条件？ |
| A：普通荧光显微镜：DAPI filter, Ex = 320-380 nm, Em = 435-485 nm
激光共聚焦显微镜：Ex = 405 nm, Em = 425-475 nm 流式细胞仪：Ex = 405nm, Em：BV421, Pacific Blue (450/50 nm) |
| Q：如果荧光的背景高，有哪些改善的建议？ |
| A：请按照操作说明书上的“抗体浓度预实验”的步骤预先摸索最佳抗体浓度。另外，对于悬浮细胞样品，在染色时请务必使用微管旋转器时刻保持微管内的悬浊状态。以上两种方法都可以降低背景荧光。 |
| Q：如果观察不到荧光，有哪些改善的建议？ |
| A：重新配置Staining Solution，并且在37℃下染色30-60分钟。如果还是观察不到荧光，有可能是抗体的浓度不合适，请按照操作说明书上的“抗体浓度预实验”的步骤预先摸索最佳抗体浓度 |
ARP(Aldehyde Reactive Probe)试剂货号：A305
ARP(Aldehyde Reactive Probe)试剂货号：A305
N-(Aminooxyacetyl)-N’-biotinylhydrazine
CAS号：139585-03-8
商品信息
储存条件：-20度保存
运输条件：室温
分子式：
C12H21N5O4S
分子量：
331.39
选择规格：
10mg
关联产品
Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒
生物素抗体标记试剂盒-氨基
Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒
过氧化物酶标记试剂盒-氨基
Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒
生物素标记试剂盒-氨基
Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒
荧光素标记试剂盒-氨基
Isothiocyanobenzyl-EDTA试剂
Isothiocyanobenzyl-EDTA（ITCBE）
在线小工具
实验工具稀释计算器摩尔浓度计算器
Biotin-PEAC5-maleimide试剂货号：B299
Biotin-PEAC5-maleimide试剂货号：B299
N-6-(Biotinylamino)hexanoyl-N’-[2-(N-maleimido)ethyl]piperazine, hydrochloride
CAS号：374592-98-0
商品信息
储存条件：-20度保存
运输条件：室温
分子式：
C26H41ClN6O5S
分子量：
585.16
选择规格：
10mg
试剂盒内含
规格性状
性状：该产品为白色至微黄色粉末，溶于二甲基亚砜。
纯度（HPLC）：90.0％以上
二甲基亚砜可溶：测试合格
产品概述
已知生物素与抗生物素蛋白牢固结合，其特性已广泛用于高灵敏度分析。由于生物素与抗生物素蛋白之间的结合稳定性常数为1015，比抗原-抗体反应高3至4个数量级，因此一旦结合至抗生物素蛋白的生物素在生理条件下不会脱落。另外，生物素是具有羧基的小分子，可以容易地化学修饰，并且可以在不损害蛋白质等的活性的情况下进行标记。因此，已经开发出许多生物素化合物作为使用抗体进行免疫测定的标记剂。具有活性酯基的生物素通常用于与蛋白质的氨基（NH2基）结合，具有马来酰亚胺基的生物素用于巯基（SH基）。
根据目的，有必要选择在抗生物素蛋白识别的生物素头和反应性基团之间的间隔物的长度，但是通常，间隔物越长，当抗生物素蛋白结合时，对抗体的抗原识别活性越强。可以认为，间隔物的影响可能引起非特异性吸附，并且在测量期间的背景可能很高。因此，为了提高测量灵敏度，请查看S/N（信噪比）。必须选择适当长度的垫片。
间隔基通常使用氨基己酸，并且存在一种化合物，其中一个分子的氨基己酸通过酰胺键被引入生物素中，并且该化合物中的两个分子被引入。由于己酸间隔物变长，水溶性变差，因此通常将生物素标记试剂溶解在DMSO中并添加到含有蛋白质的缓冲液中的方法是普遍的。
当在用氨基标记蛋白质时不能使用有机溶剂时，可以使用具有磺酸基的活性酯化合物。此外，在与巯基的反应中，以相同的方式使用由DMSO制备的溶液，但是由于其在间隔部分具有哌嗪结构，因此通过质子化在中性区域显示水溶性。
用于还原糖的生物素酰肼化合物的水溶性低，需要在DMSO溶液中进行调节。
在ELISA（酶联免疫吸附测定）中，将酶标记的链霉亲和素与生物素标记的抗体结合的方法是常见的。与抗生蛋白链菌素相比，抗生物素蛋白便宜，但很少用于ELISA中。原因是背景极高，并且认为高PI是原因。抗生物素蛋白通常用于通过柱分离生物素结合蛋白等的目的。
原理
操作步骤
产品使用步骤:
1. 制备含巯基的抗体
1) 用PBS溶解DTT (浓度为200mmol/l)，制成DTT溶液。
2) 精确称量1.0-5.0mg抗体并记录，加入500ul 10mmol/l HEPES Buffer (pH8.0) 溶解蛋白质，制成抗体溶液。
3) 在抗体溶液加入2ul DTT溶液，充分混合。
2. 凝胶过滤纯化
1) 打开NAP-5层析柱上的盖子，弃去填充液。
2) 打开层析柱出口的盖子，用PBS分数次洗脱，每根层析柱收集大约10ml的洗脱液，使凝胶平衡。
3) 用移液器吸取500μl标记好的抗体溶液加入到层析柱中，弃去此时的流出液。
4) 在层析柱的出口处放置一根管子，在层析柱中加入1mlPBS，收集流出的抗体。
3. 生物素标记
1) 用DMSO溶解Biotin-PE-maleimide (浓度为50mmol/l，4.7mg/200ul或10mg/424ul)。
＊用Biotin-PEAC5-maleimide时浓度为5.9mg/200ul或10mg/342ul。
2) 在纯化好的抗体溶液中加入配制好的生物素标记试剂溶液，抗体：生物素标记试剂的混合摩尔比为1:10左右。
3) 充分混合后，在水浴恒温摇床 (25℃)中过夜培养。
4. 标记抗体的凝胶过滤纯化
1) 打开NAP-10层析柱上的盖子，弃去填充液。
2) 打开层析柱出口的盖子，用PBS分数次洗脱，每根层析柱收集大约15ml的洗脱液，使凝胶平衡。
3) 用移液器吸取1ml标记好的抗体溶液加入到层析柱中，弃去此时的流出液。
4) 在层析柱的出口处放置一根管子，在层析柱中加入1.5ml PBS，收集流出的生物素标记抗体。
Biotin-Osu试剂货号：B304
Biotin-Osu试剂货号：B304
Biotin N-Succinimidyl D-biotin
CAS号：35013-72-0
商品信息
储存条件：-20度保存
运输条件：室温
分子式：
C14H19N3O5S
分子量：
341.38
选择规格：
10mg
试剂盒内含
规格性状
性状：该产品为白色至微黄色粉末，溶于二甲基亚砜。
纯度（HPLC）：95.0％以上
二甲基亚砜可溶：测试合格
产品概述
已知生物素与抗生物素蛋白牢固结合，其特性已广泛用于高灵敏度分析。由于生物素与抗生物素蛋白之间的结合稳定性常数为1015，比抗原-抗体反应高3至4个数量级，因此一旦结合至抗生物素蛋白的生物素在生理条件下不会脱落。另外，生物素是具有羧基的小分子，可以容易地化学修饰，并且可以在不损害蛋白质等的活性的情况下进行标记。因此，已经开发出许多生物素化合物作为使用抗体进行免疫测定的标记剂。具有活性酯基的生物素通常用于与蛋白质的氨基（NH2）结合，具有马来酰亚胺基的生物素用于巯基（SH）。
根据目的，有必要选择在抗生物素蛋白识别的生物素头和反应性基团之间的间隔物的长度，但是通常，间隔物越长，当抗生物素蛋白结合时，对抗体的抗原识别活性越强。可以认为，间隔物的影响可能引起非特异性吸附，并且在测量期间的背景可能很高。因此，为了提高测量灵敏度，请查看S/N（信噪比）。必须选择适当长度的垫片。
间隔基通常使用氨基己酸，并且存在一种化合物，其中一个分子的氨基己酸通过酰胺键被引入生物素中，并且该化合物中的两个分子被引入。由于己酸间隔物变长，水溶性变差，因此通常将生物素标记试剂溶解在DMSO中并添加到含有蛋白质的缓冲液中的方法是普遍的。
如果有机溶剂不能用于蛋白质的氨基标记，则可以使用带有磺酸基的活性酯化合物。此外，在与巯基的反应中，以相同的方式使用由DMSO制备的溶液，但是由于其在间隔部分具有哌嗪结构，因此通过质子化在中性区域显示水溶性。
用于还原糖的生物素酰肼化合物的水溶性低，需要在DMSO溶液中进行调节。
在ELISA（酶联免疫吸附测定）中，将酶标记的抗生蛋白链菌素与生物素标记的抗体结合的方法是常见的。与抗生蛋白链菌素相比，抗生物素蛋白便宜，但很少用于ELISA中。原因是背景极高，并且认为高PI是原因。抗生物素蛋白通常用于通过柱分离生物素结合蛋白等的目的。
原理
操作步骤
产品使用步骤:
- 参照下表配制50mmol/l的生物素标记试剂溶液：
由于生物素标记试剂遇水易分解，所以需要现配现用。
2. 蛋白质的生物素标记操作方法
1) 用10mmol/l Bicine Buffer (pH8.5) 溶解蛋白质，制成蛋白质溶液。
2) 在蛋白质溶液中加入配制好的生物素标记试剂溶液，蛋白质：生物素标记试剂的混合摩尔比为1:2-1:10。
3) 充分混合后，在水浴恒温摇床 (25 ℃) 中培养2-4 h。
3. 标记蛋白质的凝胶过滤及纯化。
1) 打开层析柱上的盖子，弃去填充液。
2) 打开层析柱出口的盖子，用PBS分数次洗脱，每根层析柱收集大约10ml的洗脱液，使凝胶平衡。
3) 用移液器吸取500μl标记好的蛋白质溶液加入到层析柱中，弃去此时的流出液。
4) 在层析柱的出口处放置一个2ml的样品管，在层析柱中加入1ml PBS，收集流出的生物素标记蛋白质。
常见问题Q&A
|
Q1:氨基标记有两种类型，OSu和Sulfo-OSu。 它们有何不同？ |
|
A:反应性几乎相同。由于磺基-OSu型具有磺酸基，因此它在水中的溶解度很高，并且可以在高浓度下反应。当您不想向系统中添加有机溶剂（例如DMSO）时，它也很有效。另一方面，在储存过程中它容易吸收水分并容易水解。 |
| Q2:标记蛋白之前是否必须使用过滤管？ |
| A:如果蛋白溶液中不含有带有活性氨基的小分子且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右时，可以不使用过滤管来过滤，只需要将10 μl 样品溶液和90 μl Reaction Buffer以及8 μl NH2-reactive Fluorescein（由步骤3所得）混合并按照操作说明上的方法做从步骤4开始的后续试验。 |
Biotin-(AC5)2-Osu试剂货号：B306
Biotin-(AC5)2-Osu试剂货号：B306
6-[6-(Biotinylamino)hexanoylamino]hexanoic acid N-hydroxysuccinimide ester
CAS号：89889-52-1
商品信息
储存条件：-20度保存
运输条件：室温
分子式：
C26H41NO7S
分子量：
567.7
选择规格：
10mg
试剂盒内含
10 mg Biotin-(AC5)2-Osu
规格性状
性状：该产品为白色至微黄色粉末，溶于二甲基亚砜。
纯度（HPLC）：90.0％以上
二甲基亚砜可溶：测试合格
红外光谱：测试合格
NMR谱：测试合格
产品概述
已知生物素与抗生物素蛋白牢固结合，其特性已广泛用于高灵敏度分析。由于生物素与抗生物素蛋白之间的结合稳定性常数为1015，比抗原-抗体反应高3至4个数量级，因此一旦结合至抗生物素蛋白的生物素在生理条件下不会脱落。另外，生物素是具有羧基的小分子，可以容易地化学修饰，并且可以在不损害蛋白质等的活性的情况下进行标记。因此，已经开发出许多生物素化合物作为使用抗体进行免疫测定的标记剂。具有活性酯基的生物素通常用于与蛋白质的氨基（NH2）结合，具有马来酰亚胺基的生物素用于巯基（SH）。
根据目的，有必要选择在抗生物素蛋白识别的生物素头和反应性基团之间的间隔物的长度，但是通常，间隔物越长，当抗生物素蛋白结合时，对抗体的抗原识别活性越强。可以认为，间隔物的影响可能引起非特异性吸附，并且在测量期间的背景可能很高。因此，为了提高测量灵敏度，请查看S/N（信噪比）。必须选择适当长度的垫片。
间隔基通常使用氨基己酸，并且存在一种化合物，其中一个分子的氨基己酸通过酰胺键被引入生物素中，并且该化合物中的两个分子被引入。由于己酸间隔物变长，水溶性变差，因此通常将生物素标记试剂溶解在DMSO中并添加到含有蛋白质的缓冲液中的方法是普遍的。
如果有机溶剂不能用于蛋白质的氨基标记，则可以使用带有磺酸基的活性酯化合物。此外，在与巯基的反应中，以相同的方式使用由DMSO制备的溶液，但是由于其在间隔部分具有哌嗪结构，因此通过质子化在中性区域显示水溶性。
用于还原糖的生物素酰肼化合物的水溶性低，需要在DMSO溶液中进行调节。
在ELISA（酶联免疫吸附测定）中，将酶标记的抗生蛋白链菌素与生物素标记的抗体结合的方法是常见的。与抗生蛋白链菌素相比，抗生物素蛋白便宜，但很少用于ELISA中。原因是背景极高，并且认为高PI是原因。抗生物素蛋白通常用于通过柱分离生物素结合蛋白等的目的。
原理
操作步骤
产品使用步骤:
- 参照下表配制50mmol/l的生物素标记试剂溶液：
由于生物素标记试剂遇水易分解，所以需要现配现用。
2. 蛋白质的生物素标记操作方法
1) 用10mmol/l Bicine Buffer (pH8.5) 溶解蛋白质，制成蛋白质溶液。
2) 在蛋白质溶液中加入配制好的生物素标记试剂溶液，蛋白质：生物素标记试剂的混合摩尔比为1:2-1:10。
3) 充分混合后，在水浴恒温摇床 (25 ℃) 中培养2-4 h。
3. 标记蛋白质的凝胶过滤及纯化。
1) 打开层析柱上的盖子，弃去填充液。
2) 打开层析柱出口的盖子，用PBS分数次洗脱，每根层析柱收集大约10ml的洗脱液，使凝胶平衡。
3) 用移液器吸取500μl标记好的蛋白质溶液加入到层析柱中，弃去此时的流出液。
4) 在层析柱的出口处放置一个2ml的样品管，在层析柱中加入1ml PBS，收集流出的生物素标记蛋白质。
常见问题Q&A
| Q1:氨基标记有两种类型，OSu和Sulfo-OSu。 它们有何不同？ |
| A:反应性几乎相同。由于磺基-OSu型具有磺酸基，因此它在水中的溶解度很高，并且可以在高浓度下反应。当您不想向系统中添加有机溶剂（例如DMSO）时，它也很有效。另一方面，在储存过程中它容易吸收水分并容易水解。 |
| Q2:标记蛋白之前是否必须使用过滤管？ |
| A:如果蛋白溶液中不含有带有活性氨基的小分子且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右时，可以不使用过滤管来过滤，只需要将10 μl 样品溶液和90 μl Reaction Buffer以及8 μl NH2-reactive Fluorescein（由步骤3所得）混合并按照操作说明上的方法做从步骤4开始的后续试验。 |
Biotin-AC5-Osu试剂货号：B305
Biotin-AC5-Osu试剂货号：B305
6-(Biotinylamino)hexanoic acid N-hydroxysuccinimide ester
CAS号：72040-63-2
商品信息
储存条件：-20度保存
运输条件：室温
分子式：
C20H30N4O6S
分子量：
454.54
选择规格：
10mg
试剂盒内含
10 mg Biotin-AC5-Osu
规格性状
性状：该产品为白色至微黄色粉末，溶于二甲基亚砜。
纯度（HPLC）：95.0％以上
二甲基亚砜可溶：测试合格
产品概述
已知生物素与抗生物素蛋白牢固结合，其特性已广泛用于高灵敏度分析。由于生物素与抗生物素蛋白之间的结合稳定性常数为1015，比抗原-抗体反应高3至4个数量级，因此一旦结合至抗生物素蛋白的生物素在生理条件下不会脱落。另外，生物素是具有羧基的小分子，可以容易地化学修饰，并且可以在不损害蛋白质等的活性的情况下进行标记。因此，已经开发出许多生物素化合物作为使用抗体进行免疫测定的标记剂。具有活性酯基的生物素通常用于与蛋白质的氨基（NH2）结合，具有马来酰亚胺基的生物素用于巯基（SH）。
根据目的，有必要选择在抗生物素蛋白识别的生物素头和反应性基团之间的间隔物的长度，但是通常，间隔物越长，当抗生物素蛋白结合时，对抗体的抗原识别活性越强。可以认为，间隔物的影响可能引起非特异性吸附，并且在测量期间的背景可能很高。因此，为了提高测量灵敏度，请查看S/N（信噪比）。必须选择适当长度的垫片。
间隔基通常使用氨基己酸，并且存在一种化合物，其中一个分子的氨基己酸通过酰胺键被引入生物素中，并且该化合物中的两个分子被引入。由于己酸间隔物变长，水溶性变差，因此通常将生物素标记试剂溶解在DMSO中并添加到含有蛋白质的缓冲液中的方法是普遍的。
如果有机溶剂不能用于蛋白质的氨基标记，则可以使用带有磺酸基的活性酯化合物。此外，在与巯基的反应中，以相同的方式使用由DMSO制备的溶液，但是由于其在间隔部分具有哌嗪结构，因此通过质子化在中性区域显示水溶性。
用于还原糖的生物素酰肼化合物的水溶性低，需要在DMSO溶液中进行调节。
在ELISA（酶联免疫吸附测定）中，将酶标记的抗生蛋白链菌素与生物素标记的抗体结合的方法是常见的。与抗生蛋白链菌素相比，抗生物素蛋白便宜，但很少用于ELISA中。原因是背景极高，并且认为高PI是原因。抗生物素蛋白通常用于通过柱分离生物素结合蛋白等的目的。
原理
操作步骤
产品使用步骤:
1.参照下表配制50mmol/l的生物素标记试剂溶液：
由于生物素标记试剂遇水易分解，所以需要现配现用。
2.蛋白质的生物素标记操作方法
1) 用10mmol/l Bicine Buffer (pH8.5) 溶解蛋白质，制成蛋白质溶液。
2) 在蛋白质溶液中加入配制好的生物素标记试剂溶液，蛋白质：生物素标记试剂的混合摩尔比为1:2-1:10。
3) 充分混合后，在水浴恒温摇床 (25 ℃) 中培养2-4 h。
3.标记蛋白质的凝胶过滤及纯化。
1) 打开层析柱上的盖子，弃去填充液。
2) 打开层析柱出口的盖子，用PBS分数次洗脱，每根层析柱收集大约10ml的洗脱液，使凝胶平衡。
3) 用移液器吸取500μl标记好的蛋白质溶液加入到层析柱中，弃去此时的流出液。
4) 在层析柱的出口处放置一个2ml的样品管，在层析柱中加入1ml PBS，收集流出的生物素标记蛋白质。
常见问题Q&A
|
Q1:氨基标记有两种类型，OSu和Sulfo-OSu。 它们有何不同？ |
|
A:反应性几乎相同。由于磺基-OSu型具有磺酸基，因此它在水中的溶解度很高，并且可以在高浓度下反应。当您不想向系统中添加有机溶剂（例如DMSO）时，它也很有效。另一方面，在储存过程中它容易吸收水分并容易水解。 |
| Q2:标记蛋白之前是否必须使用过滤管？ |
| A:如果蛋白溶液中不含有带有活性氨基的小分子且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右时，可以不使用过滤管来过滤，只需要将10 μl 样品溶液和90 μl Reaction Buffer以及8 μl NH2-reactive Fluorescein（由步骤3所得）混合并按照操作说明上的方法做从步骤4开始的后续试验。 |
Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01
Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01
生物素标记抗体试剂
Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
选择规格：
1set
试剂盒内含
产品概述
水溶性活性酯型生物素化试剂：使用生物素（AC5）2Sulfo-OSu用于生物素标记蛋白质游离氨基的试剂盒。它带有用于标记的LVDS3缓冲粉，用于凝胶过滤的柱和用于柱洗脱的PBS片剂，可以纯化标记的蛋白。由于是单次注射型（10毫克x4瓶），因此可以标记4种不同类型的蛋白质。可以通过改变添加的生物素-（AC5）2 Sulfo-OSu的量来控制标记率。
*标记蛋白的量为1-5 mg。
原理
操作步骤
使用注意事项:
1. 本试剂盒请在0-5 ℃储存。
2. Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu溶液需要现配现用 (由于Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu易水解，尽量避免在水溶液的状态保存)。
3. 标记好的蛋白质请在0-5 ℃保存 (加入0.1%的叠氮钠等防腐剂)。
使用步骤:
1. 配制溶液
1) NaHCO3缓冲液
在含有NaHCO3粉末的容器中加入10ml超纯水溶解。
2) PBS缓冲液
在100ml容量瓶中加入1片PBS，先用少量超纯水溶解后，再用超纯水补充至100ml，制成10mmol/l的PBS缓冲液。
3) 蛋白质溶液
在样品管中精确称量1.0-5.0mg蛋白质并记录称量值后，用移液器加入500μl操作步骤1)中的NaHCO3缓冲液。盖上盖子后，用漩涡振荡器等搅拌溶解蛋白质。
4) Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu溶液
在1支含有Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu的管子中加入适量纯水溶解。为了控制标记率，根据不同的标记对象，请参考表1调整Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu溶液的浓度及加入量。
＊由于Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu易水解，溶解后请尽快标记。
2. 生物素标记操作方法
1) 请参考表1在配制好的蛋白质溶液中加入合适浓度和用量的Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu溶液。
2) 盖紧盖子充分混合后，在25 ℃水浴恒温摇床中培养2h。
表1 Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu标记各种蛋白质的标记率
以上数据为本公司实际检测的结果，如实验条件变动，
结果有可能改变。标记率是根据HABA法测得。
a) 1mol蛋白质：生物素的摩尔数
b) 1mol蛋白质上所结合的生物素的摩尔数
3. 蛋白质标记后的凝胶过滤纯化
1) 打开层析柱上的盖子，弃去填充液。
2) 打开层析柱出口的盖子，用PBS分数次洗脱，每根层析柱收集大约10ml的洗脱液，使凝胶平衡。
3) 用移液器吸取500μl标记好的蛋白质溶液加入到层析柱中，弃去此时的流出液。
4) 在层析柱的出口处放置一个2ml的样品管，在层析柱中加入1ml PBS，收集流出的生物素标记蛋白质。
＊经过层析，生物素标记蛋白质的最终浓度为标记时的1/2。
按照下列公式计算生物素标记蛋白质的最终浓度：
A (mol/l) = (X/MWprotein) × (1,000/Y) × 0.5
X：蛋白质的重量
MWprotein：蛋白质的分子量
Y：溶解蛋白质的NaHCO3缓冲液体积
常见问题Q&A
| Q1:如何存储标记的蛋白质？ |
| A:将标记的蛋白质存放在冰箱中。另外，添加0.1％叠氮化钠作为防腐剂。 |
| Q2:生物素标记试剂在水溶液中稳定吗？ |
| A:试剂盒中使用的生物素-（AC5）2 Slufo-OSu处于水溶液中时，由于它会水解，因此无法存储在水溶液中。使用前请做好准备。另外，即使在粉末状态下，也要注意由于吸湿引起的劣化。 |
Biotin-PE-maleimide试剂货号：B592
Biotin-PE-maleimide试剂货号：B592
N-Biotinyl-N’-[2-(N-maleimido)ethyl]piperazine
CAS号：374592-99-1
商品信息
储存条件：-20度保存
运输条件：室温
分子式：
C20H29N5O4S
分子量：
435.54
选择规格：
10mg
关联产品
Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒
生物素抗体标记试剂盒-氨基
Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒
过氧化物酶标记试剂盒-氨基
Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒
生物素标记试剂盒-氨基
Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒
荧光素标记试剂盒-氨基
Isothiocyanobenzyl-EDTA试剂
Isothiocyanobenzyl-EDTA（ITCBE）
Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01
Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01
生物素标记抗体试剂
Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
选择规格：
1set
试剂盒内含
产品概述
水溶性活性酯型生物素化试剂：使用生物素（AC5）2Sulfo-OSu用于生物素标记蛋白质游离氨基的试剂盒。它带有用于标记的LVDS3缓冲粉，用于凝胶过滤的柱和用于柱洗脱的PBS片剂，可以纯化标记的蛋白。由于是单次注射型（10毫克x4瓶），因此可以标记4种不同类型的蛋白质。可以通过改变添加的生物素-（AC5）2 Sulfo-OSu的量来控制标记率。
*标记蛋白的量为1-5 mg。
原理
操作步骤
使用注意事项:
1. 本试剂盒请在0-5 ℃储存。
2. Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu溶液需要现配现用 (由于Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu易水解，尽量避免在水溶液的状态保存)。
3. 标记好的蛋白质请在0-5 ℃保存 (加入0.1%的叠氮钠等防腐剂)。
使用步骤:
1. 配制溶液
1) NaHCO3缓冲液
在含有NaHCO3粉末的容器中加入10ml超纯水溶解。
2) PBS缓冲液
在100ml容量瓶中加入1片PBS，先用少量超纯水溶解后，再用超纯水补充至100ml，制成10mmol/l的PBS缓冲液。
3) 蛋白质溶液
在样品管中精确称量1.0-5.0mg蛋白质并记录称量值后，用移液器加入500μl操作步骤1)中的NaHCO3缓冲液。盖上盖子后，用漩涡振荡器等搅拌溶解蛋白质。
4) Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu溶液
在1支含有Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu的管子中加入适量纯水溶解。为了控制标记率，根据不同的标记对象，请参考表1调整Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu溶液的浓度及加入量。
＊由于Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu易水解，溶解后请尽快标记。
2. 生物素标记操作方法
1) 请参考表1在配制好的蛋白质溶液中加入合适浓度和用量的Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu溶液。
2) 盖紧盖子充分混合后，在25 ℃水浴恒温摇床中培养2h。
表1 Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu标记各种蛋白质的标记率
以上数据为本公司实际检测的结果，如实验条件变动，
结果有可能改变。标记率是根据HABA法测得。
a) 1mol蛋白质：生物素的摩尔数
b) 1mol蛋白质上所结合的生物素的摩尔数
3. 蛋白质标记后的凝胶过滤纯化
1) 打开层析柱上的盖子，弃去填充液。
2) 打开层析柱出口的盖子，用PBS分数次洗脱，每根层析柱收集大约10ml的洗脱液，使凝胶平衡。
3) 用移液器吸取500μl标记好的蛋白质溶液加入到层析柱中，弃去此时的流出液。
4) 在层析柱的出口处放置一个2ml的样品管，在层析柱中加入1ml PBS，收集流出的生物素标记蛋白质。
＊经过层析，生物素标记蛋白质的最终浓度为标记时的1/2。
按照下列公式计算生物素标记蛋白质的最终浓度：
A (mol/l) = (X/MWprotein) × (1,000/Y) × 0.5
X：蛋白质的重量
MWprotein：蛋白质的分子量
Y：溶解蛋白质的NaHCO3缓冲液体积
常见问题Q&A
| Q1:如何存储标记的蛋白质？ |
| A:将标记的蛋白质存放在冰箱中。另外，添加0.1％叠氮化钠作为防腐剂。 |
| Q2:生物素标记试剂在水溶液中稳定吗？ |
| A:试剂盒中使用的生物素-（AC5）2 Slufo-OSu处于水溶液中时，由于它会水解，因此无法存储在水溶液中。使用前请做好准备。另外，即使在粉末状态下，也要注意由于吸湿引起的劣化。 |
Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit试剂盒货号：LK37
Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit试剂盒货号：LK37
生物素快速标记试剂盒（微量）
Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
选择规格：
3samples
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生物素抗体标记试剂盒-氨基
Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒
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生物素标记试剂盒-氨基
Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒
荧光素标记试剂盒-氨基
Isothiocyanobenzyl-EDTA试剂
Isothiocyanobenzyl-EDTA（ITCBE）
Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10
Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10
生物素标记试剂盒-巯基
Biotin Labeling Kit – SH
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● 整个标记过程仅需3个小时
● 整个标记过程在1支过滤管中进行
● 荧光标记抗体回收率高
● 适用于50-200 μg的IgG
选择规格：
3samples
试剂盒内含
产品概述
生物素标记试剂盒-SH是用于在具有SH基团的蛋白质（尤其是抗体）上标记生物素的试剂盒。由于试剂盒中包含的SH反应性生物素分子中具有马来酰亚胺基团，因此仅通过与具有SH基团的分子混合即可形成稳定的共价键。如果蛋白质具有S-S键，则可以使用连接的还原剂制备游离的SH基团。（但是，由于SS键的断裂，蛋白质的活性可能会丢失。）当用生物素标记高分子量蛋白质（例如免疫球蛋白G（IgG））时，可以使用所附的过滤管轻松进行预采样。如果可以进行处理并且将铰链区中的SH基团用于标记，则可以制备生物素标记的还原IgG，而不会损害抗体活性。另外，未反应的SH-反应性生物素可以在反应后通过使用滤管的纯化操作除去。
原理
操作步骤
使用注意事项:
1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。
2. 在标记过程中，IgG或者Biotin-IgG标记物始终存在于过滤管的滤膜上。
3. 如果蛋白质溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。
4. 如果蛋白质溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
5. 1管SH-Reactive Biotin可以标记50-200ug蛋白质。
标记IgG操作步骤
（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000g离心10分钟。b）
（3）将150μl WS buffer加入到Reducing agent管中，并用移液器吹打使其溶解。
（4）将100μl Reducing agent溶液转移到过滤管的滤膜上，吹打使IgG在膜上溶解。
（5）37℃培养30分钟。加入100μl Reaction buffer，8,000-10,000g离心10分钟。b）
（6）将10μl DMSO加入到SH-reactive biotin中，吹打使其溶解。c）
（7）将100μl Reaction buffer与8μl SH-reactive biotin溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。d）
（8）37℃培养30分钟。将100μl WS buffer加入到过滤管中8,000-10,000g离心10分钟。 b）
（9）加入200μl WS buffer，8,000-10,000g离心10分钟。b）再重复该步骤一次。
（10）加入200μl WS buffer，吹打10-15次来回收标记产物。e）将该溶液转移到0.5ml试管中，在0-5℃下保存。
a) 样品溶液的体积不应超过100ul。如果蛋白质浓度<0.5mg/ml，重复操作步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100ug。如果聚积过程中滤液的体积超过400 ul，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。
b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。
c) NH2-Reactive Biotin/SH-Reactive Biotin在管子的底部，向管底加入10ul DMSO，吹打数次使其溶解。
d) 如果IgG的量为200ug，在步骤4时加入所有的NH2-ReactiveBiotin溶液。
e) 并不一定要使用WS Buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。
产品优势
1、整个标记过程仅需3个小时
2、整个标记过程在1支过滤管中进行
3、荧光标记抗体回收率高
4、适用于50-200 μg的IgG
常见问题Q&A
| Q1:样品溶液中的共存会影响反应吗？ |
| A:它可能会受到共存类型的影响。确认溶液中包含哪种物质后，根据情况纯化用于标记的蛋白质，并将其用于标记反应。<聚合物：分子量10,000以上>它可能会影响。即使使用Filtration Tube，也无法去除具有氨基的高分子量化合物，例如BSA和明胶。因此，它被标记并充当荧光杂质。 在反应中使用之前，请执行单独的清除操作。另一方面，如果存在许多高分子杂质，即使没有氨基的化合物也可能导致过滤器堵塞。它可能会干扰标记/纯化操作。 *不仅对于生物素标记试剂盒-SH，而且对于其他标记试剂盒，都需要采取相同的预防措施。 |
| Q2:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法。 |
| A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使用50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。
—————————————— PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33 PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33 —————————————— 离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。 |
| Q3:标记后，离心过滤管，液体仍会留在膜上怎么处理？ |
| A:（1）目视检查隔膜时，如果液体稍微残留在隔膜杯的边缘，请继续执行下面操作。如果倾斜和旋转膜杯时液体残留在膜上或滴下，请以8,000 g离心约15至30分钟。 （2）即使在1）中的离心操作之后，如果液体仍留在膜上，请检查标记物质是否聚集。
根据抗体或蛋白质本身的特性，用小分子标记剂进行标记可能会增加抗体或蛋白质的疏水性并使其聚集。如果在标记的物质上观察到团聚，将其转移到另一个微管中一次，离心并使用上清液。 （回收的抗体/蛋白质的量将减少。）如果上述方法没有帮助，请与公司技术支持联系。 *如果您怀疑过滤器堵塞，可以通过更换新的膜过滤器来解决。 替代品：PALL Nanocep 30K（制造商代码：OD030C33） |
| Q4:该试剂盒可以标记什么？ |
| A:可以标记分子量为“50,000或更高”并且具有[S-S]或[SH]的任何化合物（抗体，蛋白质等）。量为“50-200μg”。 *由于试剂盒中包含的过滤管尺寸为30K，因此无法纯化低分子量化合物。 |
Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK55
Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK55
生物素标记试剂盒-氨基
Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
选择规格：
1sample
凑单关联产品TOP5
NO.1. Biotin Labeling Kit – NH2 生物素标记-氨基
NO.2. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.3. Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 细胞活性/毒性双重检测
NO.4. Fluorescein Labeling Kit – NH2 FITC（488激发）标记-氨基
NO.5. Biotin Labeling Kit – SH 生物素标记-巯基
Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03
Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03
生物素抗体标记试剂盒-氨基
Biotin Labeling Kit – NH2
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● 生物素标记的产品可以在大约2小时内制备。
● 只需将NH2反应性生物素与目标蛋白混合即可形成稳定的共价键。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50-200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 生物素标记的产品可以与试剂盒中包含的存储溶液一起存储。
选择规格：
3samples
凑单关联产品TOP5
NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.2. Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 乳酸脱氢酶(LDH)检测
NO.3. Fluorescein Labeling Kit – NH2 荧光素标记试剂盒-氨基
NO.4. Peroxidase Labeling Kit – NH2 过氧化物酶标记试剂盒-氨基
NO.5. Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg) 生物素标记试剂盒-氨基
试剂盒内含
产品概述
生物素标记试剂盒-NH2是用于用生物素标记带有氨基基团的蛋白质的试剂盒，尤其是抗体，由于该试剂盒中包含的NH2-反应性生物素分子中具有活性酯基，因此仅通过与生物素混合即可形成稳定的共价键。当生物素标记在蛋白质（例如免疫球蛋白G（IgG））上时，可以使用随附的过滤管轻松去除抑制标记反应和未反应的NH2-反应性生物素的低分子量化合物（例如Tris）。因此，没有必要进行诸如透析和凝胶过滤的处理，并且可以以高回收率获得高纯度的标记化合物。
原理
操作步骤
使用注意事项：
1. 用本试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。
2. 在标记过程中，IgG或者Biotin-IgG标记物始终存在于过滤管的滤膜上。
3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。
4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
5. 1管NH2-Reactive Biotin可以标记50-200 ug蛋白质。
标记IgG操作步骤
（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000g离心10分钟。b）
（3）将10μl DMSO加入到NH2-reactive biotin中并用移液器吹打使其溶解。c）
（4）将100μl Reaction buffer以及8μl NH2-reactive biotin溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。d）
（5）将过滤管放入培养箱中，37℃培养10分钟。
（6）将100μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟，b）除去滤液。
（7）将200μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟，b）重复该步骤一次。
（8）将200μl WS buffer加入到过滤管中吹打10-15次来回收标记产物。e）将该溶液转移到0.5ml试管中，在0-5℃下保存。
a) 样品溶液的体积不应超过100ul。如果蛋白质浓度低于0.5mg/ml，重复操作步骤1和2直至总的蛋白质聚积量达到50-200ug。如果聚积过程中滤液的体积超过400ul，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。
b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。
c) NH2-Reactive Biotin在管子的底部，向管底加入10ul DMSO，吹打数次使其溶解。
d) 如果蛋白质的量为200ug，在操作步骤4时加入所有的NH2-Reactive Biotin-DMSO溶液。
e) 并不一定要使用WS Buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。
产品优势
1）生物素标记的产品可以在大约2小时内制备。
2）只需将NH2反应性生物素与目标蛋白混合即可形成稳定的共价键。
3）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
4）可以标记50-200μg的蛋白质。
5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
6）生物素标记的产品可以与试剂盒中包含的存储溶液一起存储。
常见问题Q&A
| Q1:这个试剂盒可以用于标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。但是如果含有像血清白蛋白或者明胶的蛋白，标记反应可能会受到干扰。用这个试剂盒标记之前，有必要先纯化抗体溶液。如果您想进一步了解纯化过程可以联系我们。 |
| Q2:我只有少量的IgG，可以标记吗？ |
| A:在该试剂盒中，标记所需的IgG量为50至200μg。
在此范围内，性能没有太大差异。 可以用10μg IgG进行标记，但是可能会出现诸如背景升高的问题。 |
| Q3:样品溶液中的共存会影响反应吗？ |
| A:它可能会受到共存类型的影响。确认溶液中包含哪种物质后，根据情况纯化用于标记的蛋白质，并将其用于标记反应。
<聚合物：分子量10,000以上>它可能会影响。即使使用Filtration Tube，也无法去除具有氨基的高分子量化合物，例如BSA和明胶。因此，它被标记并充当荧光杂质。 在反应中使用之前，请执行单独的清除操作。另一方面，如果存在许多高分子杂质，即使没有氨基的化合物也可能导致过滤器堵塞。它可能会干扰标记/纯化操作。 *生物素标记试剂盒-不仅需要对NH2采取相同的预防措施，还需要对其他标记试剂盒采取相同的预防措施。 |
| Q4:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法。 |
| A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使用50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。
当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。 —————————————— PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33 PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33 —————————————— 离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。 |
| Q5:标记后，离心过滤管，液体仍会留在膜上怎么处理？ |
| A:（1）目视检查隔膜时，如果液体稍微残留在隔膜杯的边缘，请继续执行下面操作。如果倾斜和旋转膜杯时液体残留在膜上或滴下，请以8,000 g离心约15至30分钟。
（2）即使在1）中的离心操作之后，如果液体仍留在膜上，请检查标记物质是否聚集。根据抗体或蛋白质本身的特性，用小分子标记剂进行标记可能会增加抗体或蛋白质的疏水性并使其聚集。如果在标记的物质上观察到团聚，将其转移到另一个微管中一次，离心并使用上清液。 （回收的抗体/蛋白质的量将减少。） *如果您怀疑过滤器堵塞，可以通过更换新的膜过滤器来解决。 替代品：PALL Nanocep 30K（制造商代码：OD030C33） |
| Q6:该试剂盒可以标记什么？ |
| A:可以标记分子量为“ 50,000或更高”和反应性氨基（NH2）的化合物（抗体，蛋白质等）。标记样品量为“50-200μg”。
*当考虑标记“ mg”的量时，也可以使用“生物素化试剂盒（Sulfo-OSu）；同仁产品货号：BK01”。 *由于试剂盒附带的过滤管为30K，因此无法纯化低分子量化合物。 |
| Q7:一个IgG分子能标记多少生物素？ |
| A:每个IgG分子平均能标记7至10个生物素。 |
| Q8:标记产物能保存多久？ |
| A:在0-5℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下 (只要该蛋白可以冷冻) 存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。 |
| Q9:能不能用这个试剂盒标记寡核苷酸和寡肽？ |
| A:不能，寡核苷酸和寡肽的分子量太小不能使其保留在过滤膜上。请参照Q4。 |
| Q10:含有生物素标记蛋白质的活细胞怎么处理？ |
| A:我们推荐使用PBS (含2-10% FBS) 制备细胞悬液，保持最佳细胞状态。 |
| Q11:回收缓冲液 (WS Buffer)对活细胞有危害吗？ |
| A:没有。WS Buffer含有表面活性剂，它的浓度控制在对细胞没有毒性的范围内。如果您担心WS Buffer中的添加剂，请您使用常用的缓冲液代替。 |
ECGreen-Endocytosis Detection试剂盒货号：E296
ECGreen-Endocytosis Detection试剂盒货号：E296
ECGreen-Endocytosis Detection
ECGreen-Endocytosis Detection
商品信息
储存条件：-20°C
运输条件：室温
选择规格：
40μl
凑单关联产品TOP5
NO.1. Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric- 细胞凋亡检测
NO.2. Cell Viability Assay Kit 细胞增殖/毒性检测
NO.3. DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting DNA损伤定量检测
NO.4. ECGreen-Endocytosis Detection 外泌体细胞膜检测
NO.5. Cellular Senescence Detection Kit 细胞衰老检测
产品特性
细胞内吞作用(Endocytosis)是一种通过细胞膜形成内体(Endosome)的细胞摄入机制。内吞作用不仅可以将各种营养物质摄入到细胞内，还可以将细胞内外的有害物质转运至溶酶体中分解，帮助维持细胞稳态。近年来的研究发现，内吞作用的紊乱与很多神经变异性疾病和免疫疾病密切相关，因此受到了广泛关注。而通过荧光探针标记细胞内吞作用摄入的葡聚糖，是最广泛使用的一种研究方法。但是由于葡聚糖的大小不固定，细胞摄入时的通路以及细胞内动力学都会随之发生变化。所以急需一种更准确的研究细胞内吞作用通路的方法。
ECGreen是一种细胞膜非透过性的小分子荧光染料，它可停留在细胞膜上。随着内吞作用进入细胞后，内体中的酸性环境会使它的荧光增强。与传统的标记葡聚糖的方法不同，ECGreen通过对内体的膜直接染色，可以更准确的进行活细胞内的内吞作用通路分析。
弥补了传统方法的缺点
目前最常用的细胞内吞作用可视化的方法是荧光标记葡聚糖或细胞膜，由于准确性差和停留时间短等缺点，在进行细胞内吞作用的动态观察时存在各种各样的问题。而ECGreen可以解决上述问题。
| 产品名 | Endosome | pH的应答性 | Lysosome |
| ECGreen-Endocytosis Detection | 内体的膜 | ECGreen>葡聚糖 | 可染色 |
| T公司产品P(葡聚糖荧光染料) | 内体内部 | 可染色 | |
| T公司产品C | 很少染色内体 | 无应答性 | 可染色 |
直接的内体(Endosome)可视化
ECGreen-Endocytosis Detection可以染色内体的膜，随着pH的变化荧光强度发生变化。因此与其他公司的通过标记蛋白质的方法相比，可以更直接的观察初级阶段的内体。
pH变化的应答性高
ECGreen-Endocytosis Detection与传统的荧光标记葡聚糖的方法相比，对pH变化的应答性更优秀。因此可以高灵敏的检测初级内体。
实验例
实验例：通过悬浮细胞观察内吞作用对温度依赖性的变化
本实验使用ECGreen内吞检测试剂（产品货号：E296）和PlasMem Bright Red（产品货号：P505）染色，对Jurkat细胞内吞时对温度的依赖性变化
<检测条件>
内体检测(ECGreen, 绿色): Ex. 405 nm / Em. 500 – 560 nm
细胞膜检测 (PlasMem Bright Red,红色): Ex. 561 nm / Em. 560 – 700 nm
<实验步骤>
（1）在样品管中加入Jurkat细胞悬液（10%FBS，RPMI）并在4℃或37℃孵育30min。
（2） 使用步骤（1）配置的细胞悬浮液将ECGreen溶液稀释1000倍。
（3） 4℃或37℃孵育30min。
（4） 用HBSS清洗细胞两次。
（5） 加入含有PlasMem Bright Red（100倍稀释）的培养基，悬浮细胞。
（6） 将悬浮液转移到成像板上，并使用共聚焦显微镜观察细胞。
实验例：使用药物后初期内体的观察
Wortmannin是一种阻碍内体向循环内体(Recycling endosome)和溶酶体(Lysosome)转变的药物，可造成内体肥大。Wortmannin作用后通过ECGreen(绿)和下列试剂进行共染色。
初级内体(Early Endosome)： Rab5-RFP(红)
循环内体(Recycling Endosome)：荧光标记Transferrin(红)
次级内体(Late Endosome): Rab7-RFP(红)
溶酶体(Lysosome): Lamp1-RFP(红)
结果显示，ECGreen(绿)由于Wortmannin的作用仅与肥大化的初级内体和循环内体共同存在（图①和②），而不与次级内体和溶酶体共同存在（图③和④）。 因此，ECGreen可以准确可视化细胞内体的转运和形态变化。
实验例：内体局部实时观察
用共聚焦激光显微镜观察ECGreen时，即使染色后不清洗也可以观察到内吞作用产生的荧光亮点。 作为使用ECGreen的应用实验的一个例子，HeLa细胞用ECGreen（绿色）和溶酶体染色剂（红色）染色，并确认了成像图像的时间变化。
结果证实了随着时间的流逝，内体与溶酶体共定位。
<观察条件>
内体 (ECGreen, 绿) Ex. 405 nm / Em. 500-560 nm
溶酶体 (Lysosome染色试剂, 红) Ex. 561 nm / Em. 600-700 nm
清洗后观察和不清洗观察，所获得的成像图像具有以下特征。
〇染色后不洗：
由于染料可以保留在细胞膜中，因此可以随时间观察内吞状态。
那时，在细胞膜上也观察到荧光亮点，因为过量的染料残留在膜上。
〇染色后清洗：
通过去除残留在细胞膜上的多余染料，可以更清楚地观察到来自内吞作用的荧光亮点
ECGreen的荧光特性
λex: 386 nm, λem: 522 nm
<观察条件>
Ex. 350~410 nm / Em. 500-560 nm
关联产品
常见问题Q&A
| Q1: 可以使用落射型显微镜观察吗？ |
| A:建议使用共焦显微镜进行观察，但是也可以用落射型显微镜进行观察。本公司有在DAPI通道（Ex:360/40nm，Em:460/50nm）检测的实例。
|
| Q2: 可以使用含血清的培养基进行染色吗？ |
| A: 可以使用含血清的培养基。
对HeLa细胞，使用含有血清的培养基制作的working solution，在24小时内进行染色，发现无细胞毒性。 细胞毒性已使用本公司Cell Counting Kit-8确认。
|
AcidSensor Labeling Kit – Endocytic Internalization Assay 细胞内吞作用的内化过程检测货号：A558
AcidSensor Labeling Kit – Endocytic Internalization Assay 细胞内吞作用的内化过程检测货号：A558
AcidSensor Labeling Kit – 细胞内吞作用的内化过程检测
AcidSensor Labeling Kit – Endocytic Internalization Assay
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：常温
特点：
● pH敏感型荧光标记染料
● 试剂盒包括所有试剂
● 详细的标记手册
选择规格：
3 samples
产品概述
本款试剂盒一套试剂盒就包含了全部所需材料，可以对目标物质的内吞作用进行可视化分析。
试剂盒中包含的NH2-反应性AcidSensor（荧光探针）具有分子内活性酯基，与含氨基的目标物质（蛋白质）混合后形成稳定的共价键。AcidSensor标记后可在633纳米处被激发，可满足同时与绿色或红色荧光进行多重染色。
AcidSensor标记后在中性条件下几乎没有荧光，而在细胞中受环境酸化影响后会发出荧光，并被内吞作用所吸收。
*注意：
・与内吞作用的检测染料ECGreen（产品代码：E296）不同，本试剂盒是对进入细胞的目标物质进行染色。
本试剂盒可以标记分子量超过50,000和含有活性氨基的样本。
・本试剂盒也会标记分子量在10,000以上的除标记样本以外的含氨基的共存物质，这些物质也会被标记和回收。请在使用前对样品溶液进行纯化。
原理
AcidSensor的反应原理与细胞内吞途径的示意图
与其他产品的比较
与内体染料共染
标记的IgG的细胞摄取量随时间变化
用本试剂盒的AcidSensor标记的小鼠IgG和Dojindo的内吞检测染料（货号E296, ECGreen -Endocytosis Detection）一同添加到HeLa细胞中。
染色后10分钟、20分钟和180分钟观察细胞，结果显示AcidSensor（深红色）和内体膜（绿色）在同一位置定位，表明小鼠IgG是通过内吞作用途径被细胞吸收的。
＜检测条件＞
绿：ECGreen
(Ex = 405 nm, Em= 500-550 nm)
紫：AcidSensor
(Ex = 633 nm, Em= 650-700 nm)
使用AcidSensor标记的BSA和小鼠IgG被HeLa细胞吸收的情况
使用该试剂盒将标记的BSA或小鼠IgG加入HeLa细胞中，2小时后观察HeLa细胞的吸收情况。
结果，在HeLa细胞中检测到了AcidSensor的荧光，证实两种标记的物体都被内吞途径吸收了。
＜检测条件＞
仪器:共聚焦显微镜
Ex = 633 nm, Em = 650-700 nm
常见问题Q&A
| Q1: 样品溶液中存在的物质是否会影响标记反应？ |
| A1:
取决于存在的物质种类。 在确认溶液中含有哪些物质后，对样品进行相应的纯化。 样品中共存的带有氨基的化合物和分子量超过10,000的化合物会降低标记效率，并且由于其分子量高，不能被过滤管去除。即使是没有氨基的化合物，高分子量的杂质也会造成过滤器的堵塞，从而影响标记和纯化。请在使用前对样品进行纯化。
|
| Q2:回收标记体所使用的WS buffer是否有细胞毒性？ |
| A2: WS buffer中含有几乎不会对细胞产生毒性的稳定剂（表面活性剂）。如果无论如何还是介意表面活性剂，可以根据自身习惯来选择合适的缓冲液来回收标记体。 |
| Q3:如果用含有血清的培养基回收标记体，是否会影响观察？ |
| A3: 血清中的成分虽然不会对AcidSensor的性能产生影响，但是由于血清中的蛋白质也会通过内吞途径进入细胞，可能会与标记的蛋白质的摄取产生竞争。请您根据自身实验目的进行判断。 |
| Q4:如何计算标记率？ |
| A4: A用WS buffer 5倍稀释标记体，然后检测500 nm和280 nm处的吸光度，按照下列公式进行计算，得出标记率。
A500： 500 nm 的吸光度 A280： 280 nm 的吸光度 εprotein： 蛋白质的280 nm处的摩尔吸光系数 NH2-Reactive AcidSensor 在WS buffer中的 A500 的摩尔吸光系数为[48400]。 NH2-Reactive AcidSensor 在280nm和500nm的吸光度、280nm/500nm的比值为[0.16]。 |
| Q5:每个蛋白质分子上会有多少个AcidSensors标记上？ |
| A5:对于小鼠IgG，我们已经确认每个分子平均有三个AcidSensors被标记。 |
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red试剂盒货号：EX06
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red试剂盒货号：EX06
外泌体蛋白质染色-深红色
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red
商品信息
储存条件：0-5度保存，防潮
运输条件：室温
特点：
● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集
● 回收率高
● 多种颜色可供选择
选择规格：
5samples
试剂盒内含
概述
近年来研究发现，外泌体作为细胞外囊泡（Extracellular vesicle; EV）的一种，与癌症的恶化与转移密切相关， 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信，细胞摄入外泌体时的示踪技术非 常重要，然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点（1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子，造成背景增高）。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料，并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色，可满足多重染色在内的各种实验需求。
特点
特点1：外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
纯化方法(未反应染料的去除)的比较
ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管，与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比，能够以更高的回收率纯化外泌体。
| 回收率 | |||||
| 过滤管（本试剂盒） | 50% | ||||
| 凝胶过滤法 | 10% | ||||
| ※本公司的实施例：通过NTA技术（纳米颗粒跟踪分析）比较提取前后的外泌体粒子数 | |||||
关于使用过滤管进行纯化的有效性，常见问题是：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？详见Q&A。
特点2：多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。
■实验条件
超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。
■观察条件
Green:
Ex： 488 nm / Em： 490-540 nm
Red:
Ex： 561 nm / Em： 570-640 nm
Deep Red:
Ex： 640 nm / Em： 640-760 nm
实验例
实验例：确认外泌体的局部存在
将用ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red(产品名称：EX06，Protein Dye-Deep Red)或ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red(产品名称：EX02，Mem Dye-Red)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，通过与溶酶体染色试剂(绿色)共染确认了外泌体在细胞内的定位。结果证实，用蛋白质或膜染色的外泌体均位于溶酶体中。
观察条件
Protein Dye-Deep Red（紫）：Ex：640 nm / Em：640-760 nm
Mem Dye-Red（红色）：Ex：561 nm / Em：570-640 nm
溶酶体染色试剂（绿）：Ex：488 nm / Em：490-540 nm
实验条件
将用超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为5 µg)用每个外泌体染色试剂盒染色，添加到HeLa细胞(0.75×104cells)中，孵育3.5小时后对溶酶体进行染色，观察洗涤后的荧光图像。
| 产品名称 | 容量 | 货号 | |||
| 外泌体膜荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green | 5 samples | EX01 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red | 5 samples | EX02 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX03 | |||
| 外泌体蛋白荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green | 5 samples | EX04 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red | 5 samples | EX05 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX06 | |||
| *纯化的外泌体(超离心法)，蛋白质：1-10 µg/sample，粒子数：10-100×10^8个/sample | |||||
常见问题Q&A
| Q1：纯化外泌体建议用什么方法？ |
| A1：一般我们推荐使用超速离心法纯化外泌体。但是，免疫沉淀法和磁珠法纯化的外泌体也有过成功染色的实例。 目前，聚合物沉淀法纯化的外泌体由于有聚合物的残留会影响外泌体的染色，所以无法使用本试剂盒。 |
| Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？ |
| A2：我们公司在做染色后外泌体进入细胞的实验时，使用过MEM（Minimum Essential Medium）和DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）。目前我们公司一直采用的含血清培养基进行外泌体实验，暂时无法推荐无血清培养基。 |
| Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？ |
| A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。 |
| Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？ |
| A5:虽然在过滤膜上可以观察到颜色的残留，但是我们公司通过下面的实验验证了过滤膜上的回收产物里不含未反应的染料。 <实验条件> 超速离心法纯化的①含有外泌体（蛋白质含量10 µg）的缓冲液和②单纯缓冲液，分别按照试剂盒说明书记载的步骤进行染色操作。染色后的产物加入到HeLa细胞中（1.25×104 cells），4小时后进行荧光观察。 结果显示，单纯缓冲液染色后的回收产物加入到细胞后，没有观察到荧光，进而可证明回收产物中没有残留的染料。 |
① Exosome + Buffer
② Only Buffer
Fluorescent images at 4 h incubation
Detection conditions
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red试剂盒货号：EX05
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red试剂盒货号：EX05
外泌体蛋白质染色-红色
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red
商品信息
储存条件：0-5度保存，防潮
运输条件：室温
特点：
● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集
● 回收率高
● 多种颜色可供选择
选择规格：
5samples
试剂盒内含
概述
特点
实验例
常见问题Q&A
试剂盒内含
概述
近年来研究发现，外泌体作为细胞外囊泡（Extracellular vesicle; EV）的一种，与癌症的恶化与转移密切相关， 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信，细胞摄入外泌体时的示踪技术非 常重要，然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点（1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子，造成背景增高）。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料，并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色，可满足多重染色在内的各种实验需求。
特点
特点1：外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
纯化方法(未反应染料的去除)的比较
ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管，与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比，能够以更高的回收率纯化外泌体。
| 回收率 | |||||
| 过滤管（本试剂盒） | 50% | ||||
| 凝胶过滤法 | 10% | ||||
| ※本公司的实施例：通过NTA技术（纳米颗粒跟踪分析）比较提取前后的外泌体粒子数 | |||||
关于使用过滤管进行纯化的有效性，常见问题是：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？详见Q&A。
特点2：多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。
■实验条件
超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。
■观察条件
Green:
Ex： 488 nm / Em： 490-540 nm
Red:
Ex： 561 nm / Em： 570-640 nm
Deep Red:
Ex： 640 nm / Em： 640-760 nm
实验例
实验例：确认外泌体的局部存在
将用ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red(产品名称：EX06，Protein Dye-Deep Red)或ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red(产品名称：EX02，Mem Dye-Red)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，通过与溶酶体染色试剂(绿色)共染确认了外泌体在细胞内的定位。结果证实，用蛋白质或膜染色的外泌体均位于溶酶体中。
观察条件
Protein Dye-Deep Red（紫）：Ex：640 nm / Em：640-760 nm
Mem Dye-Red（红色）：Ex：561 nm / Em：570-640 nm
溶酶体染色试剂（绿）：Ex：488 nm / Em：490-540 nm
实验条件
将用超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为5 µg)用每个外泌体染色试剂盒染色，添加到HeLa细胞(0.75×104cells)中，孵育3.5小时后对溶酶体进行染色，观察洗涤后的荧光图像。
| 产品名称 | 容量 | 货号 | |||
| 外泌体膜荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green | 5 samples | EX01 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red | 5 samples | EX02 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX03 | |||
| 外泌体蛋白荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green | 5 samples | EX04 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red | 5 samples | EX05 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX06 | |||
| *纯化的外泌体(超离心法)，蛋白质：1-10 µg/sample，粒子数：10-100×10^8个/sample | |||||
常见问题Q&A
| Q1：纯化外泌体建议用什么方法？ |
| A1：一般我们推荐使用超速离心法纯化外泌体。但是，免疫沉淀法和磁珠法纯化的外泌体也有过成功染色的实例。 目前，聚合物沉淀法纯化的外泌体由于有聚合物的残留会影响外泌体的染色，所以无法使用本试剂盒。 |
| Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？ |
| A2：我们公司在做染色后外泌体进入细胞的实验时，使用过MEM（Minimum Essential Medium）和DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）。目前我们公司一直采用的含血清培养基进行外泌体实验，暂时无法推荐无血清培养基。 |
| Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？ |
| A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。 |
| Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？ |
| A5:虽然在过滤膜上可以观察到颜色的残留，但是我们公司通过下面的实验验证了过滤膜上的回收产物里不含未反应的染料。 <实验条件> 超速离心法纯化的①含有外泌体（蛋白质含量10 µg）的缓冲液和②单纯缓冲液，分别按照试剂盒说明书记载的步骤进行染色操作。染色后的产物加入到HeLa细胞中（1.25×104 cells），4小时后进行荧光观察。 结果显示，单纯缓冲液染色后的回收产物加入到细胞后，没有观察到荧光，进而可证明回收产物中没有残留的染料。 |
① Exosome + Buffer
② Only Buffer
Fluorescent images at 4 h incubation
Detection conditions
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green试剂盒货号：EX04
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green试剂盒货号：EX04
外泌体蛋白质染色-绿色
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集
● 回收率高
● 多种颜色可供选择
选择规格：
5samples
凑单关联产品TOP5
NO.1. ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green 外泌体膜染色试剂-绿色
NO.2. ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red 外泌体膜染色试剂-红色
NO.3. ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green 外泌体蛋白质染色-绿色
NO.4. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测
NO.5. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
试剂盒内含
概述
近年来研究发现，外泌体作为细胞外囊泡（Extracellular vesicle; EV）的一种，与癌症的恶化与转移密切相关， 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信，细胞摄入外泌体时的示踪技术非常重要，然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点（1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子，造成背景增高）。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料，并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色，可满足多重染色在内的各种实验需求。
特点
特点1：外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
纯化方法(未反应染料的去除)的比较
ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管，与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比，能够以更高的回收率纯化外泌体。
| 回收率 | |||||
| 过滤管（本试剂盒） | 50% | ||||
| 凝胶过滤法 | 10% | ||||
| ※本公司的实施例：通过NTA技术（纳米颗粒跟踪分析）比较提取前后的外泌体粒子数 | |||||
关于使用过滤管进行纯化的有效性，常见问题是：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？详见Q&A。
特点2：多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。
■实验条件
超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。
■观察条件
Green:
Ex： 488 nm / Em： 490-540 nm
Red:
Ex： 561 nm / Em： 570-640 nm
Deep Red:
Ex： 640 nm / Em： 640-760 nm
实验例
实验例：确认外泌体的局部存在
将用ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red(产品名称：EX06，Protein Dye-Deep Red)或ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red(产品名称：EX02，Mem Dye-Red)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，通过与溶酶体染色试剂(绿色)共染确认了外泌体在细胞内的定位。结果证实，用蛋白质或膜染色的外泌体均位于溶酶体中。
观察条件
Protein Dye-Deep Red（紫）：Ex：640 nm / Em：640-760 nm
Mem Dye-Red（红色）：Ex：561 nm / Em：570-640 nm
溶酶体染色试剂（绿）：Ex：488 nm / Em：490-540 nm
实验条件
将用超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为5 µg)用每个外泌体染色试剂盒染色，添加到HeLa细胞(0.75×104cells)中，孵育3.5小时后对溶酶体进行染色，观察洗涤后的荧光图像。
| 产品名称 | 容量 | 货号 | |||
| 外泌体膜荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green | 5 samples | EX01 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red | 5 samples | EX02 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX03 | |||
| 外泌体蛋白荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green | 5 samples | EX04 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red | 5 samples | EX05 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX06 | |||
| *纯化的外泌体(超离心法)，蛋白质：1-10 µg/sample，粒子数：10-100×10^8个/sample | |||||
常见问题Q&A
| Q1：纯化外泌体建议用什么方法？ |
| A1：一般我们推荐使用超速离心法纯化外泌体。但是，免疫沉淀法和磁珠法纯化的外泌体也有过成功染色的实例。 目前，聚合物沉淀法纯化的外泌体由于有聚合物的残留会影响外泌体的染色，所以无法使用本试剂盒。 |
| Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？ |
| A2：我们公司在做染色后外泌体进入细胞的实验时，使用过MEM（Minimum Essential Medium）和DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）。目前我们公司一直采用的含血清培养基进行外泌体实验，暂时无法推荐无血清培养基。 |
| Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？ |
| A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。 |
| Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？ |
| A5:虽然在过滤膜上可以观察到颜色的残留，但是我们公司通过下面的实验验证了过滤膜上的回收产物里不含未反应的染料。 <实验条件> 超速离心法纯化的①含有外泌体（蛋白质含量10 µg）的缓冲液和②单纯缓冲液，分别按照试剂盒说明书记载的步骤进行染色操作。染色后的产物加入到HeLa细胞中（1.25×104 cells），4小时后进行荧光观察。 结果显示，单纯缓冲液染色后的回收产物加入到细胞后，没有观察到荧光，进而可证明回收产物中没有残留的染料。 |
① Exosome + Buffer
② Only Buffer
Fluorescent images at 4 h incubation
Detection conditions
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm