C10H12N2Na2O8Zn・4H2O
471.64
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C10H12N2Na2O8Zn・4H2O
471.64
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C10H12MgN2Na2O8・4H2O
430.56
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421.09
C10H12CaN2Na2O8・2H2O
410.3
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C10H18N2O7
278.26
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C14H23N3O10
393.35
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C14H22N2O8・H2O
364.35
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C3H9NNa3O9P3
365
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C10H22N4O8
326.3
C10H12N2Na4O8・4H2O
452.23
C10H14N2Na2O8・2H2O
372.24
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C10H13K3N2O8・2H2O
442.54
关联产品
C25H20N6O7S2
580.59
产品详情
外观:黄色或棕色粉末
纯度:通过检测 (TLC)
反应式
WSTs产品说明
水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的,三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性,然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性,但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基,它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐,它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团,颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高,因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。
电子转移到四唑盐的机制
技术信息
图2.WST甲臜染料的吸收光谱
参考文献
1) M. Ishiyama, et al., Anal. Sci., 12, 515 (1996).
分子式:
C10H14K2N2O8・2H2O
分子量:
404.45
C4H7NO4
133.1
C6H11NO5
177.16
C19H13ClIN5O2
505.7
外观:浅黄色或橙黄色粉末
纯度:>95.0% (Titration)
反应式
C40H30Cl2N10O6
817.64
产品描述
Nitro-TB可被热水或热的甲醇溶解,丙酮和醚等有机溶剂不能溶解Nitro-TB。Nitro-TB可容易地被脱氢酶还原成紫色甲臜染料凝聚物,它可用于在琼脂糖凝胶上检测脱氢酶。
反应式
产品详情
外观:黄色晶体状粉末
纯度:>98.0%
摩尔吸光度:>63,000 (257 nm)
C25H16N7NaO8S2
629.56
产品详情
外观:橙色或橙棕色粉末
纯度:通过检测 (TLC)
摩尔吸光度(pH8):≥24,000 (320 nm左右)
反应式
WSTs产品说明
水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的,三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性,然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性,但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基,它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐,它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团,颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高,因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。
电子转移到四唑盐的机制
技术信息
图2.WST甲臜染料的吸收光谱
参考文献
1) WST-1: M. Ishiyama, et al., Chem. Pharm. Bull, 41, 1118 (1993),
2) M. Ishiyama, et al., In Vitro Toxicol, 8, 187 (1995),
3) S. Shirahata, et al., Biosci. Biotech. Biochem., 59, 345 (1995),
4) K. Teruya, et al., Biosci. Biotech. Biochem., 59, 341 (1995),
5) Y. Kayamori, et al., Clin. Biochem., 30, 595 (1997);
6) W. Zhang, et al., FASEB J., 20, 2496 (2006);
7) S. Yang, et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 319, 595 (2006);
8) D. Inokuma, et al., Stem Cells, 24, 2810 (2006);
9) T. Ishikawa, et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 26, 1998 (2006).
关联产品
C52H44N12Na2O16S6
1331.35
产品详情
外观:黄色或浅棕绿色粉末
纯度:通过检测 (TLC)
反应式
WSTs产品说明
水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的,三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性,然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性,但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基,它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐,它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团,颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高,因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。
电子转移到四唑盐的机制
技术信息
图2.WST甲臜染料的吸收光谱
参考文献
1) M. Ishiyama, et al., Anal. Sci., 12, 515 (1996).
C19H10IN6NaO10S2
696.34
产品详情
外观:浅黄棕色或浅棕色粉末
纯度:通过检测 (TLC)
反应式
WSTs产品说明
水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的,三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性,然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性,但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基,它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐,它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团,颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高,因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。
电子转移到四唑盐的机制
技术信息
图2.WST甲臜染料的吸收光谱
C19H11IN5NaO8S2
651.35
产品详情
外观:浅黄棕色粉末
纯度:通过检测 (TLC)
反应式
WSTs产品说明
水溶性四唑盐 (WST®) 是通过向四唑盐的苯环中引入正电荷或负电荷以及羟基而产生的,三烷基氨基等正电荷改进了甲臜染料的水溶性,然而大的阳离子容易与羧酸根或磷酸根等有机阴离子沉淀出来。尽管羟基也会增进四唑盐的水溶性,但所产生的甲臜染料的水溶性并不足。Dojindo的WST®具有磺酸基,它们直接或间接地加入苯环以增进水溶性。Dojindo还提供几种新开发的苯偶氮型四唑盐,它可被NADH或其他还原剂轻易地还原得到橙色或紫色的甲臜染料。由于采用苯偶氮基团,颜色会随重金属离子而改变。由于Dojindo的WST®水溶性较高,因此可以制备10 mM-100 mM不同浓度的溶液。
电子转移到四唑盐的机制
技术信息
图2.WST甲臜染料的吸收光谱
C12H18INO3
351.18
C12H16N4O7
328.28
C12H17N3O3·HCL
287.74
C16H22Cl2N2・2H2O
349.3
C16H20N2
240.34
产品概述
TMBZ是一种用于过氧化物酶检测的生色试剂。它已被开发作为具有致癌性的联苯胺的一种替代品。由于其苯环上的邻位甲基,TMBZ不会代谢成高致癌的ο-羟基联苯胺或ο,ο’-二羟基联苯胺。因此TMBZ化合物的致癌性远小于联苯胺。尽管TMBZ溶液无色,但在过氧化氢和过氧化物酶存在的情况下,它会变为蓝绿色 (最大波长:655 nm) 。此蓝绿色的复合物的结构被认为是两个氧化的TMBZ分子的自由基形式。TMBZ HCl是TMBZ的盐酸化物形式,它可溶于水 (每10 ml水溶解100 mg TMBZ HCl) 。
检测步骤
检测步骤
1. 用1 ml DMSO溶解6 mg TMBZ以制备100×TMBZ溶液。
2. 将5μl 30%的过氧化氢溶液与1 ml PBS混合以制备200×H2O2溶液。
3. 向1 ml PBS中加入10μl 100×TMBZ溶液和5μl 200×H2O2溶液以制备染色溶液。*
4. 向96孔板的每孔中加入100-200μl染色溶液。室温或37℃下孵育该板5 min-1 h。
5. 用PBS洗涤样品若干次以终止染色反应。
* 为得到最佳结果,可能有必要对TMBZ和过氧化氢的最终浓度作修改。染色溶液并不稳定。请在使用前制备新鲜溶液。
氧化反应
C12H18NNaO3S・H2O
297.34
产品特征描述
新型Trinder’s试剂是Dojindo最先开发的一种基于氧化的显色试剂,是一种高水溶性苯胺衍生物,常用作诊断试剂色原。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。Dojindo的色原纯度高,稳定性好,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,色原在与4-氨基安替比林 (4-AA) 或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH) 的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高1.5-2倍,然而4-AA溶液比MBTH溶液更稳定。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。葡萄糖、酒精、酰基-辅酶A和胆固醇可以用于检测与色原及4-AA偶合的那些底物。现有10种色原。 对于特定的底物,试验不同种类的色原对开发最佳的检测系统是必需的。
产品特征描述
新型Trinder’s试剂的特征描述
以上摩尔吸光系数为各种Trinder’s试剂在H2O2/POD催化下,与4-AA在37℃,反应10分钟生成的产物,
在各自的最大检测波长处以及合适的pH范围内检测得到的。
反应原理
氧化反应
C12H18NNaO4S・2H2O
331.36
产品概述
新型Trinder’s试剂是Dojindo最先开发的一种基于氧化的显色试剂,是一种高水溶性苯胺衍生物,常用作诊断试剂色原。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。Dojindo的色原纯度高,稳定性好,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,色原在与4-氨基安替比林 (4-AA) 或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH) 的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高1.5-2倍,然而4-AA溶液比MBTH溶液更稳定。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。葡萄糖、酒精、酰基-辅酶A和胆固醇可以用于检测与色原及4-AA偶合的那些底物。现有10种色原。 对于特定的底物,试验不同种类的色原对开发最佳的检测系统是必需的。
产品特征描述
新型Trinder’s试剂的特征描述
以上摩尔吸光系数为各种Trinder’s试剂在H2O2/POD催化下,与4-AA在37℃,反应10分钟生成的产物,
在各自的最大检测波长处以及合适的pH范围内检测得到的。
反应原理
氧化反应
C13H20NNaO4S・H2O
327.37
产品概述
新型Trinder’s试剂是Dojindo最先开发的一种基于氧化的显色试剂,是一种高水溶性苯胺衍生物,常用作诊断试剂色原。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。Dojindo的色原纯度高,稳定性好,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,色原在与4-氨基安替比林 (4-AA) 或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH) 的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高1.5-2倍,然而4-AA溶液比MBTH溶液更稳定。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。葡萄糖、酒精、酰基-辅酶A和胆固醇可以用于检测与色原及4-AA偶合的那些底物。现有10种色原。 对于特定的底物,试验不同种类的色原对开发最佳的检测系统是必需的。
产品特征描述
新型Trinder’s试剂的特征描述
以上摩尔吸光系数为各种Trinder’s试剂在H2O2/POD催化下,与4-AA在37℃,反应10分钟生成的产物,
在各自的最大检测波长处以及合适的pH范围内检测得到的。
反应原理
氧化反应
C11H16NNaO6S
313.3
产品概述
新型Trinder’s试剂是Dojindo最先开发的一种基于氧化的显色试剂,是一种高水溶性苯胺衍生物,常用作诊断试剂色原。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。Dojindo的色原纯度高,稳定性好,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,色原在与4-氨基安替比林 (4-AA) 或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH) 的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高1.5-2倍,然而4-AA溶液比MBTH溶液更稳定。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。葡萄糖、酒精、酰基-辅酶A和胆固醇可以用于检测与色原及4-AA偶合的那些底物。现有10种色原。 对于特定的底物,试验不同种类的色原对开发最佳的检测系统是必需的。
产品特征描述
新型Trinder’s试剂的特征描述
以上摩尔吸光系数为各种Trinder’s试剂在H2O2/POD催化下,与4-AA在37℃,反应10分钟生成的产物,
在各自的最大检测波长处以及合适的pH范围内检测得到的。
反应原理
氧化反应
C13H20NNaO6S
341.36
产品概述
新型Trinder’s试剂是Dojindo最先开发的一种基于氧化的显色试剂,是一种高水溶性苯胺衍生物,常用作诊断试剂色原。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。Dojindo的色原纯度高,稳定性好,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,色原在与4-氨基安替比林 (4-AA) 或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH) 的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高1.5-2倍,然而4-AA溶液比MBTH溶液更稳定。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。葡萄糖、酒精、酰基-辅酶A和胆固醇可以用于检测与色原及4-AA偶合的那些底物。现有10种色原。 对于特定的底物,试验不同种类的色原对开发最佳的检测系统是必需的。
产品特征描述
新型Trinder’s试剂的特征描述
以上摩尔吸光系数为各种Trinder’s试剂在H2O2/POD催化下,与4-AA在37℃,反应10分钟生成的产物,
在各自的最大检测波长处以及合适的pH范围内检测得到的。
反应原理
氧化反应
C11H16NNaO3S
265.31
产品概述
新型Trinder’s试剂是Dojindo最先开发的一种基于氧化的显色试剂,是一种高水溶性苯胺衍生物,常用作诊断试剂色原。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。Dojindo的色原纯度高,稳定性好,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,色原在与4-氨基安替比林 (4-AA) 或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH) 的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高1.5-2倍,然而4-AA溶液比MBTH溶液更稳定。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。葡萄糖、酒精、酰基-辅酶A和胆固醇可以用于检测与色原及4-AA偶合的那些底物。现有10种色原。 对于特定的底物,试验不同种类的色原对开发最佳的检测系统是必需的。
产品特征描述
新型Trinder’s试剂的特征描述
以上摩尔吸光系数为各种Trinder’s试剂在H2O2/POD催化下,与4-AA在37℃,反应10分钟生成的产物,
在各自的最大检测波长处以及合适的pH范围内检测得到的。
反应原理
氧化反应
C12H18NNaO4S・H2O
313.35
产品概述
新型Trinder’s试剂是Dojindo最先开发的一种基于氧化的显色试剂,是一种高水溶性苯胺衍生物,常用作诊断试剂色原。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。Dojindo的色原纯度高,稳定性好,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,色原在与4-氨基安替比林 (4-AA) 或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH) 的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高1.5-2倍,然而4-AA溶液比MBTH溶液更稳定。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。葡萄糖、酒精、酰基-辅酶A和胆固醇可以用于检测与色原及4-AA偶合的那些底物。现有10种色原。 对于特定的底物,试验不同种类的色原对开发最佳的检测系统是必需的。
产品特征描述
新型Trinder’s试剂的特征描述
以上摩尔吸光系数为各种Trinder’s试剂在H2O2/POD催化下,与4-AA在37℃,反应10分钟生成的产物,
在各自的最大检测波长处以及合适的pH范围内检测得到的。
反应原理
氧化反应
C12H18NNaO5S・2H2O
347.36
产品概述
新型Trinder’s试剂是Dojindo最先开发的一种基于氧化的显色试剂,是一种高水溶性苯胺衍生物,常用作诊断试剂色原。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。Dojindo的色原纯度高,稳定性好,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,色原在与4-氨基安替比林 (4-AA) 或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH) 的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高1.5-2倍,然而4-AA溶液比MBTH溶液更稳定。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢。该过氧化氢的浓度对应于底物浓度。因此可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。葡萄糖、酒精、酰基-辅酶A和胆固醇可以用于检测与色原及4-AA偶合的那些底物。现有10种色原。 对于特定的底物,试验不同种类的色原对开发最佳的检测系统是必需的。
产品特征描述
新型Trinder’s试剂的特征描述
以上摩尔吸光系数为各种Trinder’s试剂在H2O2/POD催化下,与4-AA在37℃,反应10分钟生成的产物,
在各自的最大检测波长处以及合适的pH范围内检测得到的。
反应原理
氧化反应
C16H22Cl2N2・2H2O
349.3
关联产品
C16H20N2
240.34
产品概述
TMBZ是一种用于过氧化物酶检测的生色试剂。它已被开发作为具有致癌性的联苯胺的一种替代品。由于其苯环上的邻位甲基,TMBZ不会代谢成高致癌的ο-羟基联苯胺或ο,ο’-二羟基联苯胺。因此TMBZ化合物的致癌性远小于联苯胺。尽管TMBZ溶液无色,但在过氧化氢和过氧化物酶存在的情况下,它会变为蓝绿色 (最大波长:655 nm) 。此蓝绿色的复合物的结构被认为是两个氧化的TMBZ分子的自由基形式。TMBZ HCl是TMBZ的盐酸化物形式,它可溶于水 (每10 ml水溶解100 mg TMBZ HCl) 。
检测步骤
检测步骤
1. 用1 ml DMSO溶解6 mg TMBZ以制备100×TMBZ溶液。
2. 将5μl 30%的过氧化氢溶液与1 ml PBS混合以制备200×H2O2溶液。
3. 向1 ml PBS中加入10μl 100×TMBZ溶液和5μl 200×H2O2溶液以制备染色溶液。*
4. 向96孔板的每孔中加入100-200μl染色溶液。室温或37℃下孵育该板5 min-1 h。
5. 用PBS洗涤样品若干次以终止染色反应。
* 为得到最佳结果,可能有必要对TMBZ和过氧化氢的最终浓度作修改。染色溶液并不稳定。请在使用前制备新鲜溶液。
氧化反应
C20H26N2Na2O8S2・4H2O
604.62
氧化反应
产品简介
SAT-3是一种稳定的、高水溶性的o-Tolidine (3,3‘-二甲基联苯胺)类似物。它很容易在过氧化物酶和过氧化氢酶存在下,被氧化为绿色的显色底物(pH 4~6)。
TMBZ需要有有机溶剂和表面活性剂才可以溶解,而SAT-3仅用缓冲液即可溶剂。并且,SAT-3溶液只需要常温避光即可保存。本试剂的最大波长在675 nm处。
操作步骤
1. 将1 ml的100 mM SAT-3 solution加至含有30 mM过氧化氢酶溶液的8 ml的50 mM citrate缓冲液(pH 4)中,制成assay solution。
2. 向96孔板的每孔中加入100-200 μl assay solution,37℃培养5-30 min。
3. 检测670 nm处吸光度或者每孔加入50 μl的4 M硫酸,检测490 nm处吸光度。
参考文献
1) M. Mizoguchi, M. Ishiyama, M. Shiga and K. Sasamoto, “Sensitive Chromogenic Substrate for Detecting Peroxidase Activity”, Anal. Commun, 1998, 35, 179.
操作和储存条件
规格
性状:白色至浅棕色粉末
纯度(HPLC):≥95.0%
水中溶解度:通过检测(透明,无色至微蓝色)
pH(25℃):6.0~8.0 (25℃)
含水量:9.0~14.0%
IR谱图:一致
操作和储存条件
0-5℃,避光
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C16H17Cl2N5
350.25
C17H20ClN3
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C27H34I2N4
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订购满5000元,200元礼品等你拿
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NO.2. Calcein-AM/PI Double Staining Kit 活死细胞双染检测
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NO.4. NAD/NADH Assay Kit-WST NAD/NADH检测
NO.5. Biofilm Formation Assay 生物被膜形成量/抑制能力检测
产品概述
使用水溶性四唑盐WST-8作为显色物质的微生物比色法检测试剂盒。微生物通过能量代谢活动在细胞内生成NAD(P)H,WST-8在电子载体的作用下被NAD(P)H还原成水溶性的甲臜产物(橙色)。甲臜产物的生成量与微生物的能量代谢活性成正比例关系。因此,可以通过橙色的显色程度确认微生物的存活率和活性。
本产品由同仁化学研究所与日本福冈县工业技术中心生物食品研究所共同开发。
检测时间大幅缩短
传统的微生物活力检测一般采用克隆形成实验(Colony Formation Assay)或通过增殖造成的混浊等目视评价方法。这些方法需要的时间很长而且操作繁杂需要一定的熟练度才可以成功检测。而使用本试剂盒检测大肠杆菌时,相对于传统寒天培地法长达22小时的检测时间,本试剂盒仅需要8小时即可检测。(1 CFU/ml)
操作上更加简单快捷,培养后只需要加入试剂即可。检测时,在96孔板内准备好微生物悬浊液后加入试剂,在培养箱内通过微生物代谢活性开始显色。
大肠杆菌的增殖检测例
<检测步骤>
1.将大肠杆菌(NBRC3972)在TSBYE培养基中进行预培养。 2.用Mueller-Hinton(以下略称为MHB)配制成108 CFU/ml的大肠杆菌悬浊液,再用MHB制成10倍稀释系列悬浊液。 3.使用多通道移液器将不同菌体密度的大肠杆菌加入至96孔板中(每孔190 μl)。 4.使用多通道移液器向各孔中加入10 μl显色试剂。 5.为了防止蒸发和污染,用透明密封贴(PCR用等)贴在孔板上,置于酶标仪(VersaMax, 日本Molecular Devices)中。 6.用动力学测定模式(Kinetics)每隔15 min检测一次460 nm处吸光度直至24 h。(37℃)
<检测结果和定量性的确认>
下图是随时间变化的大肠杆菌检测的结果。96孔板的最左列是高密度(约108 CFU/ml),
越往右密度越低,大约每隔1 h各列依次开始显色。
下图是图表化的大肠杆菌检测的结果。以“达到可以目视的吸光度值0.5所需要的时间(h)”为y轴,以各菌体密度(CFU/ml)为x轴作图。如下面的直线关系式,确认检测大肠杆菌的定量性。
y= -0.43Ln(x)+8.01
当x =1时,即1CFU/ml时,y =8.01。因此得知,1个微生物的检测大约需要8 h。也就是说,经过大约8 h培养后,吸光度如果没变化的话可以判定大肠杆菌阴性。
灵敏度更高
用容易分辨的“颜色”代替难以分辨的“浑浊度变化”
麦氏(McFarland)比浊法是通过菌液中的浑浊度来判断活菌数浓度的方法。而本试剂盒是通过颜色的变化检测活菌数的浓度。因肉眼的极限,使用比浊法无法判断的低浓度细菌活性,可以用灵敏度更高的本试剂盒进行检测。
下面是使用微生物定量法检测水溶性维他命之一的维他命B6的检测例。与传统的比浊法相比,可以在更短时间内更灵敏的进行定量。
维他命B6的微生物定量例
<检测步骤>
1.向96孔板的各孔中加入90 μl维他命定量用培养基。 2.向96孔板的各孔中加入90 μl标准溶液或样品溶液。 3.将10 μl配置好的各种需要维他命的菌种液和10 μl检测试剂加入孔中,30℃或37℃下培养一段时间。 4.将孔板置于酶标仪,使用终点(End Point)模式检测460 nm处吸光度。加入传统法的检测试剂,检测610 nm处的吸光度(浑浊度)。
使用微生物:Saccharomyces cerevisiae ATCC9080
使用培养基:维他命B6定量用基础培养基
培养温度:30℃
标准物质:吡哆醇盐酸盐
<检测结果和定量性的确认>
下图是本方法(WST法)和传统法的直线性的比较结果。本方法在培养24 h时,0.02~1 ng/ml的浓度范围内呈直线性。而传统法在培养24 h时,灵敏度仍达不到检测标准,需要将培养时间延长至48 h才能与本方法进行比较。
药物耐受性的实验例
<检测步骤>
1.将金黄葡萄菌(SA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分别播种至96孔板中。然后添加各浓度的抗生素。 2.在37℃下培养6 h,添加试剂后再培养2 h进行显色反应。
<检测结果和定量性的确认>
SA:Staphylococcus aureus
MRSA:Methicilin-resistant Staphylococcus aureus
传统方法对比
与传统抗菌性能实验(Spot-on-lawn法)的对比
抗菌性能检测的应用例
同时使用传统的Spot-on-lawn法(以下简称Spot法)和WST法进行抗菌性能对比实验。Spot法需要用目视的方法确认阻止圆的有无,而且检测所需的时间也更长。WST法的检测结果与传统法的结果相关性一致,而且可以在更短的时间内完成检测。下面是Spot法和WST法的抗菌性能检测实例。
用4种检定菌和待测样本共5种乳酸菌的培养上清液作为检测样本,筛选出具有产生抗菌能力的乳酸菌。
其中乳链菌肽(Nisin)生产菌之一的Lactobacillus lactis NBRC12007作为阳性对照,Lactobacillus lactis NBRC100933作为阴性对照。
为了分离出上清液中的抗菌物质,将乳酸菌培养上清液(pH 6.5-6.8)过滤并灭菌,然后用MHB培养基制备稀释系列,37℃培养6 h。
添加检测试剂之后, 37℃培养2 h。结果显示传统法与WST法相关性一致。
检测针对4种检定菌的24个供体的时候,Spot法需要12枚dish(每个dish8个检测点),检测时间需要20 h以上。而使用WST法检测时只需要1块96孔板,8 h左右即可完成检测。
显色原理
微生物通过能量代谢活动在细胞内生成NAD(P)H,WST-8在电子载体的作用下被NAD(P)H还原成水溶性的甲臜产物(橙色)。甲臜产物的生成量与微生物的能量代谢活性成正比例关系。因此,可以通过橙色的显色程度确认微生物的存活率和活性。
有检测实例的微生物
真菌(霉菌类):Mould | 真菌(酵母类):Yeast |
Alternaria alternata NBR+B40:B56C31805
Aspergillus flavus NBRC4295 Aspergillus fumigatus NBRC33022 Aspergillus niger NBRC105649 Aspergillus terreus NBRC6346 Aspergillus ustus NBRC4128 Aureobasidium pullulans NBRC6353 Chaetomium globosum NBRC6347z Cladosporium cladosporioides NBRC6348 Exophiala dermatitidis NBRC6421 Paecilomyces variotii NBRC33284 Penicillium citrinum NBRC6352 Penicillium pinzophilum NBRC33285 Phoma citricarpa NBRC5287 Pseudallescheria boydii NBRC32229 Rhizopus oryzae NBRC31005 Sporothrix schenckii NBRC32961 Trichoderma virens NBRC6355 Trichophyton rubrum NBRC 5807 |
Candida albicans ATCC90028
Candida albicans JCM 1542 Candida albicans SC5314 Candida krusei NBRC1395 Candida parapsilosis NBRC1396 Candida utilis Cryptococcus albidus NBRC0378 Cryptococcus neoformans ATCC66031 Saccharomyces cerevisiae NBRC2347 Trichosporon asahii NBRC103889 Trichosporon asahii M9459 Trichosporon asahii M9925 Zygosaccharomyces rouxi |
革兰氏阳性菌:Gram-positive | 格兰仕阴性菌:Gram-negative |
Bacillus cereus
Bacillus subtillis Corynebacterium glutamicum Enterococcus faecalis Enterococcus faecalis FSCC 146002 Lactobacillus casei Listeria monocytogenes Micrococcus luteus Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus NBRC13276 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus epidermidis Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 Staphylococcus epidermidis FSCC 223011 Streptococcus mutans NCTC 10449 Streptococcus mutans UA 159 |
Acetobacter sp.
Acinetobacter baumannii ATCC 19606 Campylobacter concisus ATCC 33237 Enterobacter cloacae FSCC145003 Escherichia coli 1.1369 Escherichia coli ATCC 25922 Escherichia coli BW25113 Escherichia coli K-12 Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum JCM 12990 Klebsiella pneumoniae FSCC167002 Proteus mirablils Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa NBRC13275 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Salmonella enteritidis Salmonella typhimurium Serratia marcescens Stenotrophomonas maltophilia ATCC 51331 Vivrio parahaemolyticus Yersinia enterocollica |
C16H14ClN5
311.77