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LD06/Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂 LD06,Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂,脂滴荧光检测（深红色）,试剂盒中的Loading Buffer可维持检测过程中细胞的状态完好。本试剂盒可使用流式细胞仪检测活细胞或固定细胞，也可用于荧光酶标仪进行高通量检测。

货号：LD06
脂滴荧光检测（深红色）
Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red
储存条件：在冷暗处保存
运输条件：室温

特点：

高特异性脂滴定位
可流式定量检测
多种颜色可供选择

选择规格：1set

关联产品TOP5

NO.1. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测
NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量
NO.3. Iron Assay Kit -Colorimetric- 组织总铁含量及二价铁含量检测
NO.4. Lipid Droplet Assay Kit-Blue 脂滴荧光检测（蓝色）
NO.5. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测

试剂盒内含

概述

同仁化学研究所研发的Lipid Droplet Assays Kit-Blue＆Deep Red试剂盒，与油红O和尼罗红不同，只需简单操作即可选择性的检测LDs。与尼罗红相比试剂盒中的染色剂，具有更好的选择性，从而将荧光背景降低到最小值。此外，试剂盒中的Loading Buffer可维持检测过程中细胞的状态完好。本试剂盒可使用流式细胞仪检测活细胞或固定细胞，也可用于荧光酶标仪进行高通量检测。

原理

脂滴(脂肪滴，Lipid droplets, LDs)由中性脂肪组成，主要包括甘油三酯和胆固醇酯，其外层被一层单层磷脂分子包裹。而且脂滴不仅在脂肪细胞中存在，在真核生物中也普遍存在。最新的研究表明，以前认为脂滴仅是一个简单的脂质储存器，但最近的研究表明其在调节脂质代谢¹⁾，自噬²⁾和细胞衰老³⁾等方面都起着重要作用，因此需要进一步详细地研究脂滴形成·成长·融合·分解的机制。Lipi系列探针是高脂肪亲油性小分子探针，可在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。Lipi探针染色后，无须洗涤即可观察到脂滴。

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

特点

特点1：定量专用试剂盒

试剂盒包含所需的工作液和缓冲液、可以简便实现定量脂滴。

特点2：大幅度缩短操作，活细胞也可以使用

Lipid Droplet Assay Kit中使用的荧光染料可用于活细胞和固定细胞。因此，与使用比色法试剂相比可以大大缩短检测所需的时间。此外，由于染料不会沉积在孔板上，所以可以提高实验的重现性。

实验例

实验例1：孔板检测实验例

将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到A549细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。

<检测条件>

Blue：Ex: 376 – 386 nm、 Em: 435 – 455 nm

Deep Red ：Ex: 623 – 633 nm、 Em: 649 – 669 nm

实验例2：流式细胞术的实验例

将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到HeLa细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。

< 检测条件>

Blue：Ex: 405 nm、 Em: 425 – 475 nm

Deep Red ：Ex: 640 nm、 Em: 650 – 670 nm

脂肪滴产品选择指南

	产品名称	规格	货号
成像(成像) 脂滴荧光探针	Lipi-Blue	10 nmol	LD01
	Lipi-Green	10 nmol	LD02
	Lipi-Red	100 nmol	LD03
	Lipi-Deep Red	10 nmol	LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Blue	1 set	LD05
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red	1 set	LD06

参考文献

1. Fujimoto,T.et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits”Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2. Singh,R.et al., “Autophagy regulates lipid metabolism”Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3. Yokoyama, M.et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity”Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

4. Oka, M.et al., “Exogenous Cytokine-Free Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Classical Brown Adipocytes”, Cells., 2019, 8, (4), 373.

A552/ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence

ADP/ATP比率检测试剂盒 A552,ADP/ATP比率检测试剂盒,ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence,当产生ATP的相关代谢发生紊乱时，ADP无法再合成为ATP，ATP却不断地分解成为ADP，导致ADP/ATP的比例上升。而ADP/ATP比率的变化与细胞凋亡、细胞自噬、能量代谢等诸多途径息息相关，因此经常被作为细胞活性的指标之一检测。

货号：A552
ADP/ATP比率检测试剂盒
ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence
储存条件：0-5度保存
运输条件：常温

特点：

可获得稳定的ADP/ATP比值
溶液配制后可以保存
冷藏保存(无需解冻操作)

选择规格：100tests

产品概述

通常情况下，当细胞内ATP浓度降低时，会由二磷酸腺苷(ADP)重新合成为ATP，以维持细胞内一定的ATP浓度。当产生ATP的相关代谢发生紊乱时，ADP无法再合成为ATP，ATP却不断地分解成为ADP，导致ADP/ATP的比例上升。而ADP/ATP比率的变化与细胞凋亡、细胞自噬、能量代谢等诸多途径息息相关，因此经常被作为细胞活性的指标之一检测。

规格性状

检测原理

本试剂盒可以检测细胞中ADP与ATP的比率。首先用萤火虫荧光素酶法检测细胞内的ATP。

之后用酶将细胞内的ADP全部转化为ATP，再用相同的发光原理检测ATP，即可算出细胞内ADP/ATP的比率。

与其他公司产品比较

本试剂盒的检测结果，不受ATP和ADP的总量影响，比值的结果稳定。

实验例

使用Staurosporine诱导细胞凋亡后，用本试剂盒检测细胞中ADP/ATP的比值。另外，用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测Annexin V-FITC/PI染料标记的Staurosporine诱导凋亡的细胞。

结果显示，Staurosporine诱导后的细胞中ADP/ATP的比例明显上升。相同条件的细胞中也观察到磷脂酰丝氨酸(PS)的外翻以及细胞膜破损。说明凋亡细胞中的ADP/ATP的比率上升。

＜ADP/ATP比的检测结果＞

常见问题Q&A

Q：一个试剂盒可以检测多少个样品？

A：按照每个样品3个复孔计算，可以检测32个样品，96孔板的孔板设置请参考说明书。
Q：检测时是否可以用白色96孔板以外的孔板？

A：黑色和透明孔板都会造成发光强度的降低，透明孔板还会导致背景升高。因此建议使用白色96孔板。
Q：配制好的working solution是否可以保存？

A：本试剂盒共包含4种working solution，ADP working solution无法保存，请现配现用。其他3种的保存条件及保存时间如下：

Q：确定最佳细胞数的方法是什么？
A：配制梯度浓度的细胞悬液播种至孔板中，按照最终实验相同的条件进行培养。使用本试剂盒制作标准曲线(参照图1)，选择呈直线性的范围，并且ADP/ATP比率(参考图2)在相对稳定的范围内进行最终实验的检测。下图的情况，最细胞数的范围是2,000~4,000个。

UP04/Amino Acid Uptake Assay Kit-氨基酸摄取能力检测试剂盒

氨基酸摄取能力检测试剂盒,Amino Acid Uptake Assay Kit,氨基酸摄取能力检测试剂盒 UP04,氨基酸摄取能力检测试剂盒,Amino Acid Uptake Assay Kit,基于此方面的研究发现，癌细胞中氨基酸转运体LAT1(L-type amino acid transporter 1)的表达明显增高，说明氨基酸的大量摄取是癌细胞的普遍特征之一。

货号：UP04
氨基酸摄取能力检测试剂盒
Amino Acid Uptake Assay Kit
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温

特点：

使用荧光显微镜、荧光酶标仪或流式细胞仪即可快速检测
添加探针后无需清洗操作，可直接检测

选择规格：20tests,100tests

试剂盒内容

UP04 Amino Acid Uptake Assay Kit

20tests	BPA Solution	35u×1
	BPA Dilution Buffer	35 ul×1
	Probe Solution	15 ul×1
100 tests	BPA Solution	175ul×1
	BPA Dilution Buffer	175 ul×1
	Probe Solution	75 ul×1

产品概述

氨基酸是合成蛋白质和核酸的重要来源，对于增殖活性异常活跃的癌细胞来说尤其重要。不仅如此，癌细胞由于其自身糖酵解途径的亢进，造成乙酰辅酶A(Acetoacetyl-CoA)供应的减少，更加剧了对TCA循环来源之一的氨基酸的需求。基于此方面的研究发现，癌细胞中氨基酸转运体LAT1(L-type amino acid transporter 1)的表达明显增高，说明氨基酸的大量摄取是癌细胞的普遍特征之一。这一发现也有望成为癌症药物研发的新靶点。

在癌症免疫治疗领域，治疗效果不仅与癌细胞的代谢变化有关，免疫细胞的代谢调控也至关重要。例如，随着免疫细胞的衰老，代谢平衡的改变会导致免疫细胞对癌细胞的杀伤能力减弱。因此，通过调控免疫细胞的代谢来改善免疫治疗效果的研究也十分盛行。

氨基酸类似物(BPA)通过氨基酸转运体吸收到细胞后，探针穿透细胞膜并与氨基酸类似物结合，发出荧光(λex=360 nm，λem=460 nm)。本试剂盒可使用荧光显微镜、荧光酶标仪和流式细胞仪检测，通过可视化和数值化的检测评价细胞摄取氨基酸的能力，以及氨基酸转运体抑制剂的筛选。

本试剂盒是在日本大阪府立大学切畑光统(Kirihata Mitsunori)教授提供情报和指导下开发的产品。

运用领域

抑制氨基酸的吸收是癌症药物开发和筛选的靶点之一。此外，通过比较正常细胞和癌细胞的氨基酸吸收能力，还可以了解癌细胞的恶性程度及其细胞特征。

操作步骤

实验例

使用本试剂盒检测BCH(氨基酸转运体抑制剂)对HeLa细胞摄取氨基酸能力的阻碍作用。

＜检测条件＞

细胞：HeLa cells

培养基：MEM （5.5 mmol/l Glucose）

培养条件：1 mmol/l BCH/HBSS (Hanks’ Balanced Salt Solution), 37℃, 30 min

检测仪器：荧光酶标仪 (Ex=340-380 nm, Em: 435-485 nm)

检测仪器：荧光酶标仪 (Ex=360 nm, Em: 460 nm)

<检测条件>

检测仪器：流式细胞仪 (Ex=405 nm, Em: 425-475 nm)

与传统方法比较

与传统的同位素示踪法和代谢组学检测法相比，操作时间大幅减少。

关联产品

产品名	包装	价格	货号
Glucose Uptake Assay Kit-Blue	1 set	3,980	UP01
Glucose Uptake Assay Kit-Green	1 set	3,980	UP02
Glucose Uptake Assay Kit-Red	1 set	3,980	UP03

常见问题Q&A

Q：BPA是通过哪种转运蛋白进入细胞内的？
A：有文献报道BPA是通过LAT1, LAT2, ATB0,+转运进入细胞的(Wongthai P et al., “Boronophenylalanine, a boron delivery agent for boron neutron capture therapy, is transported by ATB0,+, LAT1 and LAT2”, Cancer Sci., 2015, Mar;106(3):279-86)。此外，同仁化学也通过实验验证了BCH等LAT1的抑制剂、leucine等LAT1的底物对BPA摄取的抑制作用。
Q：已经有检测实例的细胞系有哪些？
A：贴壁细胞有HeLa, A549, HepG2, MCF-7, C2C12, MEF, U251；悬浮细胞有MOLT4。
Q：BPA被细胞摄入后，是否会被分解或代谢掉？
A：BPA的构造非常稳定，实验操作范围的过程中不会被分解。
Q：BPA被细胞摄入后，能否进行固定化操作？
A：由于探针会从细胞内向细胞外泄漏，所以无法进行染色后的固定化操作。
Q：BPA被细胞摄入后，是否会在特定部位积累？
A：被细胞摄取的BPA均匀的分布在细胞内。
Q：BPA uptake solution，Working solution能否长时间保存？
A： BPA uptake solution，Working solution无法长期保存，请现配现用。
Q：如果荧光信号没有变化，我该怎么办？
A：主要可能的原因有以下两点：
①细胞本身对BPA solution的摄入能力较低。此时建议尝试提高BPA solution的浓度。(5~50倍稀释)
②Working solution发生变质，请重新配置Working solution，保证现配现用。
Q：如果荧光背景较高，我该怎么办？
A：检测环境中可能含有未被细胞摄入的BPA。此时建议用HBSS清洗后再检测。
Q：BPA是否可以定量检测？
A：无法进行定量检测，本染料是评价细胞摄取氨基酸能力高低或增减的试剂。
Q：检测荧光时使用什么样的微孔板比较合适？
A：有检测实例的微孔板如下：

G264/Glucose Assay Kit-WST试剂盒

葡萄糖检测试剂盒 G264,Glucose Assay Kit-WST试剂盒,葡萄糖检测试剂盒,Glucose Assay Kit-WST,葡萄糖检测试剂盒（Glucose Assay Kit-WST）可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖，通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖，适合用96孔板检测，可以同时检测多个样品。

货号：G264
葡萄糖检测试剂盒
Glucose Assay Kit-WST
储存条件：0-5度保存，避光防潮
运输条件：室温

选择规格：50 tests,200 tests

特点：

细胞上清液和细胞样品均适用
稳定性好
享有显色底物WST专利

关联产品TOP5

NO.1. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测
NO.2. Glucose Uptake Probe-Green 葡萄糖摄取检测
NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.4. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.5. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

试剂盒内含

	50 tests	200 tests
Dye Mixture	×1	×1
葡萄糖标准品（10 mmol/l）(红盖)	150 μl×1	600 μl×1
酶(绿盖)	×1	×1
Assay Buffer	3.5 ml×1	14 ml×1
Reconstitution Buffer(蓝盖)	350 μl×1	1.4 ml×1

概述

葡萄糖是一种提供体内能量来源的最重要的物质，也是一种主要能量代谢指标。它不仅是糖尿病和肥胖研究的糖代谢指标，在癌症研究中，也常和乳酸一起作为体内细胞代谢的检测指标。最新的研究表明，抑制与葡萄糖代谢和脂质代谢有关的酶的活性，可以抑制癌细胞的生长。

葡萄糖检测试剂盒（Glucose Assay Kit-WST）可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖，通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖，适合用96孔板检测，可以同时检测多个样品。

原理

操作步骤

制作葡萄糖标准曲线

可以用试剂盒中的葡萄糖标准液制作出葡萄糖标准曲线，然后通过标准曲线求出样品中的葡萄糖浓度。当葡萄糖浓度在0.5 mmol/l以上时，可以通过稀释样品进行检测。

实验例

用Phloretin抑制葡萄糖的摄取

1. 制备所需浓度Phloretin的Jurkat细胞悬液 (5×10⁵ cells/ml，在RPMI培养基中含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素)。

2. 在6孔板中接种1×10⁶ cells/孔的细胞悬液，在37℃，5% CO₂培养箱中过夜培养。

3. 将细胞悬液转移到锥形管中，在1,500 rpm离心5 min。

4. 吸取100 µl上清液至1.5 ml微型管中，用超纯水稀释30倍。

5. 按照葡萄糖标准液的制备方法制备葡萄糖标准液。

6. 在96孔板中分别加入50 µl的样品或葡萄糖标准液。

7. 在每孔中加入50 µl工作液。

8. 在37℃培养箱中培养30 min。

9. 用酶标仪检测450 nm处的吸光度，根据葡萄糖的标准曲线计算样品的葡萄糖浓度。

Phloretin抑制葡萄糖的摄取

实验证实，细胞培养基上清液中的葡萄糖摄入量减少与Phloretin (一种葡萄糖转运抑制剂)浓度之间有依存关系。

常见问题Q&A

Q1：是否可以检测2-Deoxy-D-glucose？
A1：可以检测2-Deoxy-D-glucose。
Q2：Working Solution的稳定性如何？
A2：Working Solution无法保存，请现配现用。由于对光不稳定，因此配制后请避光，在室温和避光条件下可保存4小时（当Working Solution在曝光下，溶液颜色会由红色变为橙色，背景升高）。
Q3：当有还原性物质存在时是否还可以用这个试剂盒检测？
A3：如果样品中含有还原性的物质，则也会和WST染料发生显色，此时无法准确定量葡萄糖浓度。实验中如遇到以上情况，可以设定药物对照（不含细胞含药物的培养基+试剂）作为背景对照，并从标准曲线和样品的吸光度中减去它。
Q4：测定细胞培养上清液时的注意事项。
A4：在细胞培养上清液的样品中，可能会含有蛋白质的样品，如细胞裂解物和血浆等。我们建议先去除蛋白，以避免背景上升的影响。
Q5：是否可以检测细胞内葡萄糖？
A5：细胞内葡萄糖也可以检测，请参考下面的样品制备步骤。
（1）将细胞*1悬液收于1.5 ml微量管中。
※测定所需的细胞数，需要根据细胞种类进行调整。
HepG2细胞和Jurkat细胞的测量结果如下图所示
（2）在300×g下离心5分钟，去除上清液。
(3)加入300 µl PBS，重悬细胞，在300×g下离心5分钟，除去上清液。
(4)加入250 µl细胞溶解液*2(0.1%Triton-X)，裂解细胞后，在12,000×g离心5分钟。
(5)将操作(4)的上清液200 µl转移到超滤膜过滤管(分子量：10K)中，以12,000×g离心10分钟。
※当测定样品为n=3时，总共需要150 µl以上(50 µl×3)。
※离心后的滤液不超过150 µl时，请延长离心时间。
(6)将通过操作(5)得到的滤液作为测定样品。
然后按照使用说明书，测定葡萄糖浓度。
※测定试样在标准曲线范围内(0-0.5 mmol/l)内，请适当用细胞溶解液稀释，用于测定。
*1 为了检测0.02 mmol/l以上的葡萄糖，HepG2细胞数量为1×105cells以上，Jurket细胞需要2×106 cells以上的细胞数量。
*2 细胞溶解液中含有SDS会抑制显色，因此不能使用含有SDS的缓冲液。
Q6:一个试剂盒可以检测样品的数量。
A6：制备标准曲线和样品（n=3）时，可以检测的样品数量如下所示。

标准曲线：8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)

96孔板排列示意图（n=3）

Q7:可以测量L-Glucose吗？
A7：本产品用于β-D-Glucose测量，不能测量L-Glucose。

参考文献

No	检测对象	文献
1	小鼠血清	Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes, FASEB J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR
2	链霉菌	Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus, J. Biosci.Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002
3	HCT116细胞	Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nat. Metab., 2020, 2(1), 81
4	P388白血病细胞	2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cell, Oncol. Lett., 2020, 20(1), 962-966
5	小鼠精子细胞	Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation, capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi: 10.1007/s00018-020-03683-9

*要测定细胞培养上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“测定细胞培养上清液以外的样品时的注意事项”。

L256/Lactate Assay Kit-WST试剂盒

乳酸检测试剂盒 L256,Lactate Assay Kit-WST试剂盒,乳酸检测试剂盒,Lactate Assay Kit-WST,代谢,Lactate Assay Kit-WST®可用于定量检测糖酵解代谢产生的乳酸，并优化了定量过程。本试剂盒通过测定WST®的显色反应来定量细胞上清液中的乳酸含量，可用96孔板检测，灵敏度高，最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸。

货号：L256
乳酸检测试剂盒
Lactate Assay Kit-WST
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温

特点：

细胞上清液和细胞样品均适用
操作简便
灵敏度高最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸
试剂稳定性高
享有显色底物WST专利

选择规格：50 tests,200 tests

关联产品TOP5

NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.2. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.3. Glucose Assay Kit-WST 葡萄糖检测
NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.5. MitoPeDPP 线粒体内脂质过氧化物检测

试剂盒内含

50 tests	Dye Mixture -Lactate Standard ·Enzyme Solution -Assay Buffer -Reconstitution Buffer	x1 150 ulx1 12 ulx1 5.5 mlx1 550ul x1
200 tests	– Dye Mixture Lactate Standard -Enzyme Solution ·Assay Buffer -Reconstitution Buffer	x1 600 ul x1 48 ulx1 11 mlx2 2.2 mlx1

概述

乳酸是细胞的一种主要代谢途径-糖酵解的代谢产物，也是肌肉疲劳和高乳酸血症的重要生物标志物。它还可以作为监测细胞内代谢途径变化的标志物。此外最近的代谢研究表明，乳酸是组织和癌细胞的三羧酸循环中碳的主要来源。

Lactate Assay Kit-WST^®可用于定量检测糖酵解代谢产生的乳酸，并优化了定量过程。本试剂盒通过测定WST^®的显色反应来定量细胞上清液中的乳酸含量，可用96孔板检测，灵敏度高，最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸。

WST^®：WST是日本同仁化学研究所的注册商标

原理

本试剂盒通过测定WST的显色反应来定量细胞上清或细胞内的乳酸含量。

另外，试剂盒中含有乳酸标准液，可以通过制备标准曲线来定量样品中的乳酸浓度。

特点

特点1：操作简单，只需要加入试剂

只需在加入细胞裂解液的细胞上清液中加入试剂，培养即可。

特点2：试剂稳定性高

乳酸标准曲线

可以从使用试剂盒中的乳酸标准液制作出乳酸标准曲线，然后通过标准曲线求出样品中的乳酸浓度。

当乳酸浓度在1 mmol/l以上时，可以通过稀释样品进行检测。

实验例

2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用

1、在96孔板中接种1×10⁴个/孔的HeLa细胞(MEM培养基中含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素)，在37℃，5% CO₂培养箱中过夜培养。

2、去除上清液后，在培养基中加入100 µl配制好的系列浓度的2-脱氧-D-葡萄糖溶液。

3、在37℃，5% CO₂培养箱中过夜培养。

4、培养后，吸取20 µl细胞上清液至1.5 ml微量管中，并用超纯水稀释8倍制备样品溶液，然后按照说明书的图3在每孔中加入20 µl样品溶液。

5、按照“配制乳酸标准液”的方法配制乳酸标准液。

6、在96孔板中按照说明书的图3在每孔中加入20 µl各种浓度的乳酸标准液。

7、在每孔中加入80 µl工作液。

8、在37℃培养箱中培养30 min。

9、用酶标仪测定450 nm的吸光度，并用标准曲线计算样品的乳酸浓度。

2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用，随着2-脱氧-D-葡萄糖 (一种糖酵解抑制剂)浓度的增加，乳酸浓度逐渐减少

葡萄糖和乳酸的测定例

用葡萄糖测定试剂盒（货号：G264）和乳酸测定试剂盒检测（货号：L256）:检测将葡萄糖转运蛋白抑制剂Phloretin添加到Jurkat细胞时的代谢活性变化。

■实验条件

细胞：Jurkat细胞（5×10⁵细胞）

药物：Phloretin（终浓度：100 µmol/l）

培养时间：过夜培养

■结果

Phloretin的添加抑制了葡萄糖的摄取，减少了葡萄糖的消耗，增加了培养基中葡萄糖的量，并减少了乳酸的量。

常见问题Q&A

Q：使用含有血清的培养基，可以测定培养上清液中的乳酸吗？
A：使用含有血清的培养基，可以测定培养上清液中的乳酸。
但是在含有血清的情况下，由于背景上升，需要测定培养基OD值并将其作为背景对照减去。
【参考数据】
含和不含10％FBS的吸光度比较

<结果>
在培养基中加入10％FBS的组吸光度大大升高，因此需要测定培养基作为背景对照。
Q：如何检测细胞内乳酸含量？
（1）用微量管收集1×105的细胞*1。

（2）以300×g离心2 min后去除上清液。

（3）加入300 μl的PBS，用移液器吹打使其重悬，再以300×g离心2 min后去除上清液。
（4）加入300 μl细胞裂解液*2（0.1％Triton-X）并涡旋1 min，制成细胞裂解液。

（5）以8000×g离心5 min，收集上清液。
（6）将步骤（5）所得溶液用超滤离心管（PALL，No.OD010C3，滤膜分子量：10K）以12,000×g 离心10 min*3去除蛋白质，得到待测样品。

*1、样品为HeLa细胞时，为了检测出0.02 mmol/l以上的乳酸含量，需要1×105的细胞甚至更多。
*2、如果细胞裂解液中含有SDS会抑制显色，因此不要使用含有SDS的缓冲液。

*3、内源性乳酸脱氢酶（LDH）会导致背景增高，因此通过脱蛋白处理去除内源性乳酸脱氢酶

（LDH）。
※测定样品设定为3个复孔时（n=3），合计至少需要60 μl以上（每孔20 μl×3）。
※如果过滤后滤液不足60 μl，可适当延长过滤时间。
※稀释细胞裂解液至合适的浓度，使结果在标准曲线范围内（0-1 mmol/l）。

Q：配制后的Working Solution稳定性如何，可以保存多久？
A：Working Solution需要现配现用。
光会影响Working Solution的稳定性，所以配制后请用铝箔纸包裹。
配制后的Working Solution在室温避光条件下可以保存4 h。
（Working Solution遇到光，溶液的颜色会由红色变为橙色，背景会升高。）
Q：为什么我的样品孔没有显色？
A：样品中的乳酸浓度可能低于检测限（0.02 mmol/l）。
乳酸浓度低于0.02 mmol/l的样品无法用该试剂盒检测，因此请考虑其他方法，如LC-MS。
如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的乳酸浓度可能低于0.02 mmol/l。
请降低稀释比例，从而将检测样品的乳酸浓度调整到最低检测限以上。
Q：是否可以检测含有还原性物质的样品？
A：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量乳酸浓度。
实验中如遇到以上情况，可以设定药物对照（不含细胞含药物的培养基+试剂），
并将标准品孔和样品孔的吸光度分别减去药物对照的吸光度。
Q：该试剂盒可以定量D-Lactate吗？
A：该试剂盒是用于L-Lactate的定量，不能定量D-Lactate。
Q：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？
A：也可以使用490 nm的滤光片，但是吸光度会低于在450 nm处的吸光度。
Q：一个试剂盒可以检测样品的数量。
A：制备标准曲线和样品（n=3）时，可以检测的样品数量如下所示。

标准曲线：8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)

96孔板排列示意图（n=3）

参考文献

1)Metabolome analysis reveals excessive glycolysis via PI3K/AKT/mTOR and RAS/MAPK signaling in methotrexate-resistant primary CNS lymphoma-derived cells, Clin. Cancer Res., 2020, DOI:10.1158/1078-0432.

2)Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine,Nat. Metab.,2020, 2(1), 81.

3)Novel pharmacological effects of poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor rucaparib on the lactate dehydrogenase pathway, Biochem. Biophys. Res. Commun., 2019, 510, (4), 510.

4)PDH-mediated metabolic flow is critical for skeletal muscle stem cell differentiation and myotube formation during regeneration in mice, FASEB J.,2019,33,(7), 8094.

5)Tumor Cell-Derived Angiopoietin-Like Protein 2 Establishes a Preference for Glycolytic Metabolism in Lung Cancer Cells,Cancer Science, 2020,111(4):1241-1253.

6)2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cells, Oncol. Lett., 2020, 20(1), 962-966.

N509/NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒

NAD/NADH检测试剂盒 N509,NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒,NAD/NADH检测试剂盒,NAD/NADH Assay Kit-WST,NAD/NADH检测试剂盒可以定量细胞中NAD+/NADH、NADH和NAD+的量，并测量它们的比值。细胞内NADH水平可以通过试剂盒内含的Extraction Buffer裂解细胞并在加热后选择性地定量检测。而细胞内的NAD+水平则可以通过总的NAD+/NADH总量减去NADH量计算得到。

货号：N509
NAD/NADH检测试剂盒
NAD/NADH Assay Kit-WST
储存条件：0-5度保存，避光防潮
运输条件：室温

特点：

数据可靠，不会与NADP及NADPH反应
同一样品可以用Lactate Assay Kit-WST（货号：L256）测定上清液中乳酸含量
只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管
享有显色底物WST专利

选择规格：100 tests

关联产品TOP5

NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.2. Glucose Assay Kit-WST 葡萄糖检测
NO.3. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.4. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测
NO.5. Lipi-Green 脂滴检测（绿色)

试剂盒内含

100 tests
-NAD/NADH Extraction Buffer 20 ml×1
-NAD/NADH Control Buffer 20 ml×1
Standard Buffer 10 ml×1
Assay Buffer 5.5 ml×1
– Dye Mixture 550ul×1
Enzyme x1
Standard x1
·Filtration Tube x12

概述

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)是参与糖酵解、电子转移系统和TCA循环等细胞主要代谢途径氧化还原反应的重要辅助因子。NAD以氧化型NAD⁺和还原型NADH的形式存在于细胞中。维持适当的NAD⁺和NADH水平对细胞功能至关重要。此外最近的研究表明NAD⁺水平的下降与衰老相关，NAD⁺的量被认为是衰老相关研究的一个标志。

NAD/NADH检测试剂盒可以定量细胞中NAD⁺/NADH、NADH和NAD⁺的量，并测量它们的比值。细胞内NADH水平可以通过试剂盒内含的Extraction Buffer裂解细胞并在加热后选择性地定量检测。而细胞内的NAD⁺水平则可以通过总的NAD⁺/NADH总量减去NADH量计算得到。

原理

技术情报

NAD⁺和NADH的分别检测

分别测定NAD⁺和NADH的操作步骤

*只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管

用试剂盒内的提取缓冲液及去除蛋白质用的微量管，能简便地制备细胞裂解液。通过加热细胞裂解液能单独检测细胞内的NADH量。而细胞内的NAD⁺量则可以通过总NAD⁺/NADH量减去NADH量的计算得到。

在本试剂盒中，当n=3时，可以测量12个样品和8个标准品。当使用超过12个样品时，您需要准备单独的微量管。

使用NAD⁺/NADH作为指标的研究

细胞中NAD⁺和NADH的量被评估为重要的代谢指标，用于了解受药物管理和基因重组影响的癌细胞和线粒体功能。最近已经明确了长寿相关的受体与NAD⁺的含量密切相关。越来越多的人将其评估为肥胖，糖尿病和细胞分化等生物学状况的标志物。

检索来源：Google Scholar

检索关键词：

NAD/NADH : “NAD/NADH”

线粒体：“NAD/NADH”Mitochondria

癌：“NAD/NADH”Cancer

肥胖：“NAD/NADH”Obesity

孔板检测中数据的可靠性

可以通过同时测量该试剂盒中包含的标准溶液来进行定量分析。如果样品中NAD⁺/NADH的总含量高于2 μmol/l，则可以通过稀释样品进行评估。在下面的实验中，使用细胞数相差2倍的HeLa细胞，来确定NAD⁺和NADH的数量和比率。

使用增殖培养的HeLa细胞（2.5×10⁵，5.0×10⁵个细胞），从标准曲线中得到细胞内NAD⁺和NADH的量。最终NAD⁺的量和NADH的量会随着细胞数而改变，但是即使细胞数改变，NAD⁺和NADH量的比率也不变。

经确认，将2-Deoxy-D-glucose加入到HeLa 细胞后，代谢活性发生了变化。

用乳酸检测试剂盒检测的实验例

向HeLa细胞（1×10⁶细胞）中加入2-Deoxy-D-glucose，终浓度为6 mmol/l，培养24小时后测定乳酸量和NAD⁺/NADH比。用Lactate Assay Kit-WST（货号：L256）测定上清液中乳酸含量，去除上清后用本试剂盒检测细胞中的NAD⁺/NADH比。

最终加入2-Deoxy-D-glucose抑制了细胞内糖酵解系统，并导致乳酸量的减少和NAD⁺/NADH比率的增加。

操作步骤

(1) 按照上图，在每孔中分别加入50 μl的标准液和样品溶液。

※为了获得准确的数据，建议每个样品做3个复孔。

(2) 在每孔中加入50 μl Working Solution。

※由于在加入Working Solution后酶会立刻反应，请用多通道移液器以减少由于加液时间延迟而导致的实验误差。

(3) 在37℃培养60 min。

※培养时请密封培养板，以防止液体蒸发。

(4) 用酶标仪在450 nm处检测吸光度。

(5) 用标准曲线测定样品中总NAD⁺/NADH和NADH的量。

※如果原样品在检测前已稀释，可用稀释倍率乘以检测的数值。

※NAD⁺的量可用总NAD⁺/NADH的量-NADH的量计算得到

NAD⁺= 总NAD⁺/NADH-NADH

标准曲线

常见问题Q&A

Q1：试剂盒可以测量多少个样本？
A1：

*所有样品均测定3次（n=3）

上表中显示了当标准样品从2 μmol/l连续稀释，作出一条共计8个点（n=3）的标准曲线时可以检测的样品数量。如果分为2次检测，由于需要重复做一条标准曲线，因此样品检测的数量会更少。
Q2：是否可以使用450 nm以外的滤光片进行测量？
A2：也可以使用490 nm的滤光片，但是吸光度会低于在450 nm处的吸光度。当用不同滤光片检测时，校准曲线如下：

Q3：可以单独购买过滤管吗？
A3：不可以，我们不单独出售过滤管。如果需要其他耗材，可以使用市场上售卖的过滤管。
Q4：工作液稳定吗？
A4：工作液无法长期保存。请在使用前配制工作液，由于工作液对光敏感请注意避光。该工作液在室温下可避光保存4小时。
Q5：样品颜色没有变化，是什么原因？
A5：样品中的NAD含量可能低于使用此试剂盒可测定的检测限度，在这种情况下，请增加细胞数，或者如果检测样品被稀释，则在检测前降低稀释比例。

参考文献

No	检测对象	文献名
1	老年小鼠肠道上皮组织器官	Epigenetic silencing of Lgr5 induces senescence of intestinal epithelial organoids during the process of aging, NPJ Aging Mech. Dis., 2018,doi：10.1038/s41514-018-0031-5.
2	成人T细胞白血病细胞株	High expression of NAMPT in adult T-cell leukemia/lymphoma and anti-tumor activity of a NAMPT inhibitor, Eur. J. Pharmacol., 2019,865,172738.
3	Sirt 7敲除成纤维细胞	SIRT7 regulates the nuclear export of NF-κB p65 by deacetylating Ran, Biochim. Biophys. Acta. Mol. Cell Res.,2019,1866(9),1355.
4	人iPS来源神经细胞	Kynurenine,3-OH-kynurenine, and anthranilate are nutrient metabolites that alter H3K4 trimethylation and H2AS40 O-GlcNAcylation at hypothalamus-related loci, Sci. Rep., 2019, 9(1), 19768.
5	HuH-7细胞	Contribution of GPD2/mGPDH to an alternative respiratory chain of the mitochondrial energy metabolism and the stemness in CD133-positive HuH-7 cells, Genes Cells,2020, 25(2), 139.
6	HeLa细胞	Hypoxia promotes Chlamydia trachomatis L2/434/Bu growth in immortal human epithelial cells via activation of the PI3K-AKT pathway and maintenance of a balanced NAD⁺/NADH ratio, Microbes Infect., 2020, DOI:10.1016/j.micinf.2020.04.010.

N510/NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒

NADP/NADPH检测试剂盒 N510,NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒,NADP/NADPH检测试剂盒,NADP/NADPH Assay Kit-WST, NADP/NADPH Assay Kit-WST能定量检测细胞中总NADP+/NADPH、NADPH和NADP+的量，并计算它们的比值。细胞内NADPH水平可以用试剂盒内的Extraction Buffer裂解细胞后加热进行定量检测。而细胞内的NADP+水平则可以通过总NADP+/NADPH减去NADPH的量计算得到。

货号：N510
NADP/NADPH检测试剂盒
NADP/NADPH Assay Kit-WST
储存条件：0-5度保存，避光防潮
运输条件：室温

特点：

数据可靠，不会与NAD+及NADH反应
只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管
享有显色底物WST专利

选择规格：100 tests

关联产品TOP5

NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.2. Glucose Assay Kit-WST 葡萄糖检测
NO.3. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.4. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测
NO.5. Lipi-Green 脂滴检测（绿色）

试剂盒内含

100 tests
NADP/NADPH Extraction Buffer 20 mL×1
NADP/NADPH Control Buffer 20 mL ×1
Standard Buffer 10 mL ×1
Assay Buffer 5.5mL ×1
Dye Mixture ×1
Enzyme 110uL ×1
Standard ×1
Filtration Tu ×12

概述

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP) 是磷酸戊糖途径（一种细胞代谢途径）反应中一种重要的辅因子。NADP以氧化态NADP⁺和还原态NADPH的形式存在于细胞中。NADPH不光对脂肪酸、胆固醇而且对还原型谷胱甘肽的生成至关重要。另外最近的研究表明，NADP⁺/NADPH通过限制碳水化合物的摄入来延长寿命与NADP⁺/NADPH有很大关联。

NADP/NADPH Assay Kit-WST能定量检测细胞中总NADP⁺/NADPH、NADPH和NADP⁺的量，并计算它们的比值。细胞内NADPH水平可以用试剂盒内的Extraction Buffer裂解细胞后加热进行定量检测。而细胞内的NADP⁺水平则可以通过总NADP⁺/NADPH减去NADPH的量计算得到。

原理

技术资料

分别检测NADP⁺和NADPH

分别测定NADP⁺和NADPH的操作步骤

*只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管

用试剂盒内的提取缓冲液及去除蛋白质用的微量管，能简便地制备细胞裂解液。通过加热细胞裂解液能单独检测细胞内NADPH量，而细胞内的NADP⁺量则可以通过总NADP⁺/NADPH量减去NADPH量的计算得到。

在本试剂盒中，当n=3时，可以测量12个样品和8个标准样品。使用超过12个样品时，您需要准备单独的超滤管。

使用NADP⁺/NADPH作为标记的研究

检索来源：Google Scholar

检索关键词：

NADP/NADPH：“NADP/NADPH”

线粒体：”NADP/NADPH”Mitochondria

癌：”NADP/NADPH”Cancer

氧化应激：”NADP/NADPH”Oxidative Stress

孔板检测中数据的可靠性

通过同时检测试剂盒内的标准溶液，可以对浓度在0.01-1 μmol/l的总NADP⁺/NADPH和NADPH进行定量。如果样品中的总NADP⁺/NADPH的浓度>1 μmol/l，可以通过稀释样品来调节。实验证实本试剂盒(NADP/NADPH Assay Kit-WST)不会与NAD⁺及NADH反应。

操作步骤

（1）按下图，在每孔中分别加入50 μl的标准液和样品溶液。

※为了获得准确的数据，建议每个样品做3个复孔。

（2）在每孔中加入50 μl Working Solution。

※由于在加入Working Solution后酶会立刻反应，请用多通道移液器以减少由于加液时间延迟而导致的实验误差。

（3）在37°C培养60 min。

※培养时请密封培养板，以防止液体蒸发。

（4）用酶标仪在450 nm处检测吸光度。

（5）用标准曲线测定样品中总NADP⁺/NADPH和NADPH的量。

※如果原样品在检测前已稀释，可用稀释倍率乘以检测的数值。

※NADP⁺的量可用下列计算公式计算：总NADP⁺/NADPH-NADPH的量计算得到。

NADP⁺=总NADP⁺/NADPH-NADPH

实验例

细胞样品检测实验例 (加入抗癌药物Doxorubicin)

向Jucket细胞中 (3×10⁶ cells)加入终浓度为500 nmol/l的Doxorubicin (Dox)，在培养24 h后检测NADP⁺/NADPH 比值和还原型/氧化型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)。用本试剂盒检测PBS清洗后的细胞的NADP⁺/NADPH比值，用 GSSG/GSH Quantification Kit II (货号：G263) 检测谷胱甘肽的比值。

在细胞内加入DOX后，产生的ROS(H₂O₂) 破坏了DNA、DNA修复酶 (PARP*) 被激活，并且NADP⁺被其消耗。为了补充不足的NADP⁺，NADPH氧化酶被激活，结果在数据中则会表现为NADP⁺的增加。与此同时还原型谷胱甘肽 (GSH) 会被产生的ROS所消耗，因此GSH/GSSG的比值会下降。

常见问题Q&A

Q1：该试剂盒可以检测多少个样本？
A1：

	测定“NADP*和NADPH的总量” 或”NADPH量”时	测定“NADP*和NADPH的总量” 和”NADPH量”时
样品数	24个样品	12个样品

*所有样品均测定3次（n=3）

上表中显示了当标准样品从2 μmol/l连续稀释，作出一条共计8个点（n=3）的标准曲线时可以检测的样品数量。如果分为2次检测，由于需要重复做一条标准曲线，因此样品检测的数量会更少。
Q2：可以单独购买过滤管吗？
A2：不可以，我们不单独出售过滤管。如果需要其他耗材，可以使用市场上售卖的过滤管。
Q3：工作液稳定吗？
A3：工作液无法长期保存。请在使用前配制工作液，由于工作液对光敏感请注意避光。该工作液在室温下可避光保存4小时。
Q4：样品颜色没有变化，是什么原因？
A4：样品中的NAD含量可能低于使用此试剂盒可测定的检测限度，在这种情况下，请增加细胞数，或者如果检测样品被稀释，则在检测前降低稀释比例。

参考文献

1) Statins in anthracycline-induced cardiotoxicity: Rac and Rho, and the heartbreakers, Cell Death Dis., 2017, 8(1), e2564.

2) The differential effects of green tea on dose-dependent doxorubicin toxicity, Food Nutr. Res., 2015, 59, 29754.

3) Inhibition of NAMPT markedly enhances plasma-activated medium-induced cell death in human breast cancer MDA-MB-231 cells, Arch. Biochem. Biophys., 2019, 676, 108155.

UP02/Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green

葡萄糖摄取检测试剂盒 UP02,Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green,葡萄糖摄取检测试剂盒,葡萄糖代谢,葡萄糖摄取,由于采用高亮度的荧光染料，相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。

货号：UP02
葡萄糖摄取检测试剂盒
葡萄糖代谢、葡萄糖摄取
储存条件：0-5°C
运输条件：常温

特点：

检测灵敏度高
操作简便，用时短
可以用荧光酶标仪做高通量筛选
荧光染料泄露少，数据重现性高

选择规格：1 set

规格性状

Glucose Uptake Probe-Green ×1

WI Solution (50X) 5 ml ×1

供参考的可测次数

每个试剂盒大约可检测12枚35 mm dish或1枚96孔板

关联产品TOP5

NO.1. Cell Viability Assay Kit – Luminescent Detection 细胞增殖/毒性检测-发光法(CCK-L)
NO.2. Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric- 细胞凋亡检测
NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.4. DALGreen – Autophagy Detection 细胞自噬检测
NO.5. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

产品概述

细胞通过摄入各种各样的营养物质并在胞内的代谢作用下产生能量。营养物代谢的过程随着细胞外环境、细胞状态、细胞种类的不同亦不尽相同。近年来的研究发现，营养代谢不仅与能量的产生密切相关，还与基因表达等各种各样的细胞调节机制有关。葡萄糖是最重要的一种营养物质，细胞摄取葡萄糖的过程对于研究和理解细胞机能非常重要。细胞摄取葡萄糖的评价方法主要是放射性同位素示踪法。但是由于放射性同位素示踪法操作繁杂，泛用性并不高。另外，还有一种使用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)的酶循环法，该方法虽然可以进行孔板检测，但是无法用于荧光显微镜和流式细胞仪观察。因此，最近常用的方法是通过葡萄糖类似物2-NBDG的荧光检测法1)。然而，2-NBDG也有荧光强度弱、灵敏度低的问题，而且被细胞摄取的2-NGDG还有从细胞中向外泄漏的情况出现。同仁化学研究新开发的荧光葡萄糖类似物Glucose Uptake Probe-Green是一种比2-NBDG灵敏度更高的葡萄糖摄取能力检测试剂。而且使用本试剂盒中包含的Washing and Imaging (WI) Solution可以抑制探针从细胞内泄漏，得到重现性更高的实验数据。

产品优势

与传统方向相比的优势！ 4大特征

由于采用高亮度的荧光染料，相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。

① 高灵敏度

2-NBDG在水中的荧光强度很低，而本试剂盒采用的荧光染料可以进行高灵敏度的葡萄糖摄取能力检测。

<观测条件>

细胞： A549细胞

检测仪器：荧光显微镜

检测滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)

② 快速检测

使用高亮度的Glucose Uptake Probe-Green，即使使用2-NBDG完全相同的实验步骤，也可以大幅缩短实验时间。

操作的前处理、染色(进入细胞内的过程)的步骤只需要清洗3次，非常简便

③ 荧光酶标仪的多样品检测

2-NBDG很难用于荧光酶标仪的检测，而本试剂盒可用于荧光酶标仪的高通量筛选实验。

<检测条件>

细胞：A549细胞

Ex: 488 nm; Em: 520 nm

④ 减少荧光染料的泄漏

使用试剂盒附带的WI Solution清洗细胞，可以抑制染料进入细胞后的泄漏，得到重现性更高的数据。

使用HBSS清洗细胞时

使用WI Solution清洗细胞时

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：A549细胞

检测仪器：荧光显微镜

检测滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)

与传统法的比较

Glucose Uptake Probe-Green和2-NBDG都可以用于荧光显微镜和流式细胞仪的检测。而相比较于2-NBDG的激发波长，Glucose Uptake Probe-Green对于488 nm的激发光以及GFP, FITC滤光片的适用度更高。

产品名

荧光

显微镜

荧光

酶标仪

流式

细胞仪

染料滞留时间

荧光特性

Glucose Uptake Assay Kit-Green

〇

1 h※

λex: 507 nm, λem: 518 nm

2-NBDG

〇

30 min以下※

λex: 465 nm, λem: 540 nm

※A549细胞的检测结果，不同的细胞种类，染料的滞留时间可能会有差异。

实验例

实验例1：Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用

HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后，使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察以及数值化的检测。

荧光显微镜观察

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：HepG2细胞

使用培养基：MEM (5.5 mmol/l Glucose)

培养条件：5 µmol/l Cytochalasin B / MEM （5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS）, 37℃, 24 h

染色条件：Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM （0 mol/l Glucose）, 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)

荧光酶标仪

<检测条件>

Ex: 488 nm; Em: 520 nm

实验例2：Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进

胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。

荧光显微镜观察

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：mouse adipocyte

使用培养基：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)

刺激条件：0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min

染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)

荧光酶标仪检测

<检测条件>

Ex: 488 nm; Em: 520 nm

※由于脂肪细胞的特性，很难在孔板上均匀分布，所以实验数据会有一些孔间差。

<实验操作>

1.脂肪细胞分别接种到不同的ibidi 96孔板中，过夜培养。

2.用不含葡萄糖的DMEM培养基清洗细胞2次后，加入不含葡萄糖的培养基(0 or 1 μmol/l Insulin)。

3.在37℃下培养15 min。

4.加入用不含葡萄糖的培养基500倍稀释的Probe solution， 37℃下培养15 min。

5.用预冷至4℃的WI Solution(1x)清洗3次后，再次添加WI Solution(4℃)。

6.分别用荧光显微镜和荧光酶标仪检测。

实验例3：前脂肪细胞和细胞脂肪细胞的葡萄糖摄取能力的比较

使用本试剂盒对前脂肪细胞(preadipocyte)和脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力进行高灵敏度检测。

荧光显微镜观察

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：preadipocyte, adipocyte

使用培养基：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)

染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)

荧光酶标仪检测

<检测条件>

Ex: 488 nm; Em: 520 nm

※由于脂肪细胞的特性，很难在孔板上均匀分布，所以实验数据会有一些孔间差。

<实验操作>

1.前脂肪细胞和脂肪细胞分别接种到不同的ibidi 96孔板中，过夜培养。

2.用不含葡萄糖的DMEM培养基清洗细胞2次后，加入不含葡萄糖的培养基。

3.在37℃下培养15 min。

4.加入用不含葡萄糖的培养基500倍稀释的Probe solution， 37℃下培养15 min。

5.用预冷至4℃的WI Solution(1x)清洗3次后，再次添加WI Solution(4℃)。

6.分别用荧光显微镜和荧光酶标仪检测。

实验例4：饥饿培养引起的细胞自噬和葡萄糖摄取变化

用自噬体染料DAPRed和自噬溶酶体染料DALGreen染色HeLa细胞后，用不含氨基酸的培养基培养3小时诱导细胞自噬。通过DAPRed和DALGreen的荧光强度增高确认细胞发生了细胞自噬，另外通过使用Glucose Uptake Probe-Blue发现细胞摄取葡萄糖的能力上升。

(Scale Bar: 50 μm)

<检测条件>

荧光显微镜

Blue: Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm

Green: Ex = 450-490 nm, Em = 500-550 nm

Red: Ex = 533-557 nm, Em = 570-640 nm

常见问题Q&A

Q1: Glucose Uptake Probe-Green具体是通过哪种葡萄糖转运蛋白进入细胞的?
A：对于具体的每一种葡萄糖转运蛋白的特异性目前还没有详细的数据。
Q2：目前有过检测实例的细胞有哪些?
A：目前的检测实例细胞系请参考下表：

细胞种类		Probe stock solution 的稀释倍率	染色时间
人肺腺癌细胞	A549	x 500	15 min
人肝癌细胞	HepG2	x 500	15 min
前脂肪细胞	preadipocyte(3T3-L1)	x 500	15 min
脂肪细胞	adipocyte(3T3-L1)	x 500	15 min
恶性黑色肿瘤细胞	MO5	x 500	15 min
小鼠成肌细胞	C2C12	x 500	5 min
人星形胶质瘤细胞	U-251 MG	x 500	15 min
人子宫颈癌细胞	HeLa	x 500	15 min
小鼠肺癌细胞	3LL	x 50000	15 min
T细胞	CD4⁺ T cell	x 50, x500	15 min
小鼠巨噬细胞	J774.1	x 500	15 min
线虫	N2	x 500	90 min

Q3：Glucose Uptake Probe-Green被细胞摄入后，会被分解或代谢掉吗?
A：染料的荧光部分非常稳定，实验范围内的操作不会造成分解。另外，类葡萄糖的部位，从结构上考虑可能会被Hexokinase(己糖激酶)磷酸化，除此以外应该不会参加任何代谢反应。
Q4：Glucose Uptake Probe-Green被活细胞摄入后，可以进行细胞固定的操作吗?
A：由于荧光探针会从细胞内漏出，染色后无法进行细胞固定。
Q5：用荧光酶标仪检测时候，对孔板有什么特别要求吗?
A：需要使用荧光检测用的细胞培养板。
Q6：Probe working solution可以长期保存吗?

A：Probe working solution无法长期保存，请现配现用。Probe stock solution冷冻可以保存一个月。
Q7：无法观察到荧光信号变化的时候，应该怎么办?
A：预实验的时候可以先从稀释浓度(x250~x1,000)、染色时间(5 min~1 h)范围内进行摸索。

Q8：荧光背景高的时候，应该怎么办?

A：可能是由于有未被细胞摄入的残留荧光染料。请用WI Solution再多进行一次清洗操作。
Q9：Glucose Uptake Probe-Green对细胞有毒性吗?

A：使用同仁化学研究所的Cell Counting Kit-8(货号:CK04)对A549细胞的Glucose Uptake Probe-Green细胞毒性进行了检验，没有发现细胞毒性的产生。
Q10：用WI solution清洗之后，荧光染料可以在细胞内停留多长时间?

A：一般在室温下可以保持在细胞内1 h左右，不同的细胞种类，时间可能会有一定差别。
Q11：可以对葡萄糖进行定量检测吗?

A：本产品不能用于葡萄糖的定量检测。如果需要定量检测培养基中的葡萄糖的消耗量或者细胞内的葡萄糖量，可以使用同仁化学研究所的Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)。
Q12：可以对被细胞摄入的染料进行定量吗?

A：不可以对细胞摄入的染料进行定量。本试剂盒是葡萄糖摄取能力强弱或增减的检测试剂盒。

UP03/Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red

UP03/Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red,葡萄糖代谢,葡萄糖摄取, Glucose Uptake Probe-Red是红色荧光染料，可以与红色野外其他颜色的荧光染料共染色。另外，由于采用高亮度的荧光染料，相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。

货号：UP03
葡萄糖摄取检测试剂盒
葡萄糖代谢、葡萄糖摄取
储存条件：0-5°C
运输条件：常温

特点：

检测灵敏度高
操作简便，用时短
可以用荧光酶标仪做高通量筛选
荧光染料泄露少，数据重现性高

选择规格：1 set

产品概述

细胞通过摄入各种各样的营养物质并在胞内的代谢作用下产生能量。营养物代谢的过程随着细胞外环境、细胞状态、细胞种类的不同亦不尽相同。近年来的研究发现，营养代谢不仅与能量的产生密切相关，还与基因表达等各种各样的细胞调节机制有关。葡萄糖是最重要的一种营养物质，细胞摄取葡萄糖的过程对于研究和理解细胞机能非常重要。细胞摄取葡萄糖的评价方法主要是放射性同位素示踪法。但是由于放射性同位素示踪法操作繁杂，泛用性并不高。另外，还有一种使用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)的酶循环法，该方法虽然可以进行孔板检测，但是无法用于荧光显微镜和流式细胞仪观察。因此，最近常用的方法是通过葡萄糖类似物2-NBDG的荧光检测法1)。然而，2-NBDG也有荧光强度弱、灵敏度低的问题，而且被细胞摄取的2-NGDG还有从细胞中向外泄漏的情况出现。同仁化学研究新开发的荧光葡萄糖类似物Glucose Uptake Probe-Red是一种比2-NBDG灵敏度更高的葡萄糖摄取能力检测试剂。而且使用本试剂盒中包含的Washing and Imaging (WI) Solution可以抑制探针从细胞内泄漏，得到重现性更高的实验数据。

产品优势

与传统方向相比的优势！ 4大特征

Glucose Uptake Probe-Red是红色荧光染料，可以与红色野外其他颜色的荧光染料共染色。另外，由于采用高亮度的荧光染料，相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。

① 与其他荧光染料的共染色

可以根据实验需求，选择其他荧光染料与Glucose Uptake Probe进行共染色，一次检测多个指标。下图是用Glucose Uptake Probe Red与脂肪滴(绿色：Lipi-Green货号LD02)共染色脂肪细胞分化而来的3T3-L1细胞的荧光图像。

<观测条件>

细胞： 3T3-L1

检测条件：

Glucose Uptake Probe-Red：Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

Lipi-Green：Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm

② 可用荧光显微镜或流式细胞仪检测

Glucose Uptake Probe-Red除了荧光显微镜和流式细胞仪以外还可以用荧光酶标仪进行检测。下面是A549细胞的葡萄糖摄取能力的检测结果，可以明显观察到高浓度葡萄糖对Glucose Uptake Probe-Red摄入的抑制作用。

细胞：A549

检测条件

Glucose Uptake Assay Kit-Red：Ex = 545 nm, Em = 605 nm

③ 快速检测

使用高亮度的Glucose Uptake Probe-Blue，即使使用2-NBDG完全相同的实验步骤，也可以大幅缩短实验时间。

操作的前处理、染色(进入细胞内的过程)的步骤只需要清洗3次，非常简便。

④ 减少荧光染料的泄漏

使用试剂盒附带的WI Solution清洗细胞，可以抑制染料进入细胞后的泄漏，得到重现性更高的数据。详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02的页面。

与传统法的比较

*以上结果源自A549细胞实验的结果，其他细胞系的向胞外泄露的时间可能不同。

实验例

实验例1：Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用

HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后，使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察。

荧光显微镜观察

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：HepG2细胞

使用培养基：MEM (5.5 mmol/l Glucose)

培养条件：5 µmol/l Cytochalasin B / MEM （5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS）, 37℃, 24 h

染色条件：Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM（0 mol/l Glucose）, 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；

Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

实验例2：Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进

胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。

荧光显微镜观察

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：mouse adipocyte

使用培养基：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)

刺激条件：0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min

染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；

Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

规格性状

Glucose Uptake Probe-Red ×1

WI Solution (50X) 5 ml ×1

供参考的可测次数

每个试剂盒大约可检测12枚35 mm dish或1枚96孔板

常见问题Q&A

Q1: Glucose Uptake Probe-Red具体是通过哪种葡萄糖转运蛋白进入细胞的？
A：对于具体的每一种葡萄糖转运蛋白的特异性目前还没有详细的数据。
Q2: Glucose Uptake Probe-Red被细胞摄入后，会被分解或代谢掉吗？
A：染料的荧光部分非常稳定，实验范围内的操作不会造成分解。另外，类葡萄糖的部位，从结构上考虑可能会被Hexokinase(己糖激酶)磷酸化，除此以外应该不会参加任何代谢反应。
Q3: Glucose Uptake Probe-Red被活细胞摄入后，可以进行细胞固定的操作吗？
A：由于荧光探针会从细胞内漏出，染色后无法进行细胞固定。
Q4: 用荧光酶标仪检测时候，对孔板有什么特别要求吗？
A：需要使用荧光检测用的细胞培养板。
Q5:Probe working solution可以长期保存吗？
A：Probe working solution无法长期保存，请现配现用。Probe stock solution冷冻可以保存一个月。
Q6: 无法观察到荧光信号变化的时候，应该怎么办？
A：预实验的时候可以先从稀释浓度（x250~x1,000）、染色时间(5 min~1 h)范围内进行摸索。
Q7: 荧光背景高的时候，应该怎么办？
A：可能是由于有未被细胞摄入的残留荧光染料。请用WI Solution再多进行一次清洗操作。
Q8: 用WI solution清洗之后，荧光染料可以在细胞内停留多长时间？
A：一般在室温下可以保持在细胞内1 h左右，不同的细胞种类，时间可能会有一定差别。
Q9: 可以对葡萄糖进行定量检测吗？
A：本产品不能用于葡萄糖的定量检测。如果需要定量检测培养基中的葡萄糖的消耗量或者细胞内的葡萄糖量，可以使用同仁化学研究所的Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)。
Q10: 可以对被细胞摄入的染料进行定量吗？
A：不可以对细胞摄入的染料进行定量。本试剂盒是葡萄糖摄取能力强弱或增减的检测试剂盒。

UP01/Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue

UP01/Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue,葡萄糖代谢、葡萄糖摄取,使用试剂盒附带的WI Solution清洗细胞，可以抑制染料进入细胞后的泄漏，得到重现性更高的数据。详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02的页面。

货号：UP01
葡萄糖摄取检测试剂盒
葡萄糖代谢、葡萄糖摄取
储存条件：0-5°C
运输条件：常温

选择规格：1 set

特点：

检测灵敏度高
操作简便，用时短
可以用荧光酶标仪做高通量筛选
荧光染料泄露少，数据重现性高

产品概述

细胞通过摄入各种各样的营养物质并在胞内的代谢作用下产生能量。营养物代谢的过程随着细胞外环境、细胞状态、细胞种类的不同亦不尽相同。近年来的研究发现，营养代谢不仅与能量的产生密切相关，还与基因表达等各种各样的细胞调节机制有关。葡萄糖是最重要的一种营养物质，细胞摄取葡萄糖的过程对于研究和理解细胞机能非常重要。细胞摄取葡萄糖的评价方法主要是放射性同位素示踪法。但是由于放射性同位素示踪法操作繁杂，泛用性并不高。另外，还有一种使用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)的酶循环法，该方法虽然可以进行孔板检测，但是无法用于荧光显微镜和流式细胞仪观察。因此，最近常用的方法是通过葡萄糖类似物2-NBDG的荧光检测法1)。然而，2-NBDG也有荧光强度弱、灵敏度低的问题，而且被细胞摄取的2-NGDG还有从细胞中向外泄漏的情况出现。同仁化学研究新开发的荧光葡萄糖类似物Glucose Uptake Probe-Blue是一种比2-NBDG灵敏度更高的葡萄糖摄取能力检测试剂。而且使用本试剂盒中包含的Washing and Imaging (WI) Solution可以抑制探针从细胞内泄漏，得到重现性更高的实验数据。

产品优势

与传统方向相比的优势！ 4大特征

Glucose Uptake Probe-Blue是蓝色荧光染料，可以轻松得与其他颜色的荧光染料共染色。另外，由于采用高亮度的荧光染料，相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。

① 与其他荧光染料的共染色

可以根据实验需求，选择其他荧光染料与Glucose Uptake Probe进行共染色，一次检测多个指标。下图是用Glucose Uptake Probe Blue与脂肪滴(红色：Lipi-Red 货号LD03)共染色脂肪细胞分化而来的3T3-L1细胞的荧光图像。

<观测条件>

细胞： 3T3-L1

检测条件：

Glucose Uptake Probe-Blue：Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm

Lipi-Red：Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

② 可用荧光显微镜或流式细胞仪检测

下面是分别使用不含葡萄糖的培养基以及高葡萄糖浓度的培养基培养A549细胞并用Glucose Uptake Probe-Blue进行染色的实验结果。可以观察到高浓度葡萄糖对Glucose Uptake Probe-Blue摄入的抑制作用。结果分别用荧光显微镜和流失细胞仪进行检测。

细胞：A549

检测条件

Glucose Uptake Assay Kit-Blue：Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm

③ 快速检测

使用高亮度的Glucose Uptake Probe-Blue，即使使用2-NBDG完全相同的实验步骤，也可以大幅缩短实验时间。

操作的前处理、染色(进入细胞内的过程)的步骤只需要清洗3次，非常简便。

④ 减少荧光染料的泄漏

与传统法的比较

*以上结果源自A549细胞实验的结果，其他细胞系的向胞外泄露的时间可能不同。

实验例

实验例1：Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用

HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后，使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察。

荧光显微镜观察

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：HepG2细胞

使用培养基：MEM (5.5 mmol/l Glucose)

培养条件：5 µmol/l Cytochalasin B / MEM （5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS）, 37℃, 24 h

染色条件：Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM （0 mol/l Glucose）, 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；

Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

实验例2：Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进

胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。

荧光显微镜观察

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：mouse adipocyte

使用培养基：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)

刺激条件：0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min

染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；

Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

实验例：饥饿培养诱导细胞自噬以及葡萄糖摄取能力的变化

用自噬体染色试剂DAPRed和自噬溶酶体染色试剂DALGreen染色HeLa细胞后，再用不含氨基酸的培养基饥饿培养3小时诱导细胞自噬。通过荧光显微镜观察发现DAPRed和DALGreen的荧光强度增强，证明细胞自噬的发生，另外通过Glucose Uptake Probe-Blue观察到细胞摄取葡萄糖的能力上升。

<检测条件>

Blue: Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm

Green: Ex = 450-490 nm, Em = 500-550 nm

Red: Ex = 533-557 nm, Em = 570-640 nm

Scale bar: 50 μm

规格性状

Glucose Uptake Probe-Blue ×1

WI Solution (50X) 5 ml ×1

供参考的可测次数

每个试剂盒大约可检测12枚35 mm dish或1枚96孔板

常见问题Q&A

Q1:Glucose Uptake Probe-Blue具体是通过哪种葡萄糖转运蛋白进入细胞的？
A：对于具体的每一种葡萄糖转运蛋白的特异性目前还没有详细的数据。
Q2：Glucose Uptake Probe-Blue被细胞摄入后，会被分解或代谢掉吗？
A：染料的荧光部分非常稳定，实验范围内的操作不会造成分解。另外，类葡萄糖的部位，从结构上考虑可能会被Hexokinase(己糖激酶)磷酸化，除此以外应该不会参加任何代谢反应。

Q3: Glucose Uptake Probe-Blue被活细胞摄入后，可以进行细胞固定的操作吗？
A：由于荧光探针会从细胞内漏出，染色后无法进行细胞固定。
Q4：Probe working solution可以长期保存吗？
A：Probe working solution无法长期保存，请现配现用。Probe stock solution冷冻可以保存一个月。

Q5: 无法观察到荧光信号变化的时候，应该怎么办？
A：预实验的时候可以先从稀释浓度（x250~x1,000）、染色时间(5 min~1 h)范围内进行摸索。
Q6：荧光背景高的时候，应该怎么办？
A：可能是由于有未被细胞摄入的残留荧光染料。请用WI Solution再多进行一次清洗操作。

Q7: 用WI solution清洗之后，荧光染料可以在细胞内停留多长时间？
A：一般在室温下可以保持在细胞内1 h左右，不同的细胞种类，时间可能会有一定差别。
Q8：可以对葡萄糖进行定量检测吗？
A：本产品不能用于葡萄糖的定量检测。如果需要定量检测培养基中的葡萄糖的消耗量或者细胞内的葡萄糖量，可以使用同仁化学研究所的Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)。

Q9: 可以对被细胞摄入的染料进行定量吗？
A：不可以对细胞摄入的染料进行定量。本试剂盒是葡萄糖摄取能力强弱或增减的检测试剂盒。

特点：

选择规格：1set

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概述

原理

特点

实验例

脂肪滴产品选择指南

参考文献

特点：

选择规格：100tests

产品概述

规格性状

检测原理

与其他公司产品比较

实验例

常见问题Q&A

特点：

选择规格：20tests,100tests

试剂盒内容

产品概述

运用领域

操作步骤

实验例

关联产品

常见问题Q&A

选择规格：50 tests,200 tests

特点：

关联产品TOP5

试剂盒内含

概述

原理

操作步骤

制作葡萄糖标准曲线

实验例

常见问题Q&A

参考文献

特点：

选择规格：50 tests,200 tests

关联产品TOP5

试剂盒内含

概述

原理

特点

乳酸标准曲线

实验例

参考文献

特点：

选择规格：100 tests

关联产品TOP5

试剂盒内含

概述

原理

技术情报

操作步骤

常见问题Q&A

参考文献

特点：

选择规格：100 tests

关联产品TOP5

试剂盒内含

概述

原理

技术资料

操作步骤

实验例

常见问题Q&A

参考文献

特点：

选择规格：1 set

规格性状

关联产品TOP5

产品概述

产品优势

与传统法的比较

相关产品区别

实验例

常见问题Q&A

特点：

选择规格：1 set