分类： 生物素和链霉亲和素

生物素是一种 244 道尔顿的小半抗原分子。它对链霉亲和素异常强的结合亲和力通常被用来检测和监测感兴趣的生物靶标。生物素具有两个特性，使其成为生物偶联物开发的理想选择。首先，生物素的体积相对较小。这允许将多个生物素标签标记到单个蛋白质或抗体上，而不会显着阻碍它们的生物反应性。二是生物素分子的戊酸侧链。该链可以衍生化以促进用于将生物素化学标记到蛋白质的各种反应基团的结合，而不改变生物素对链霉亲和素的结合亲和力。
AAT Bioquest 提供生物素化二抗、蛋白质、核苷酸和其他小分子，用于基于链霉亲和素的扩增技术。对于无法使用生物素化探针的分析，我们提供了许多生物素化试剂和试剂盒，使研究人员能够对蛋白质、核酸和表面材料进行化学标记，从而制造定制的生物素化试剂。

AAT Bioquest 特色产品
荧光生物素衍生物
生物素化二抗
生物素化核苷酸
生物素化氨基酸
活性生物素衍生物
ReadiLink™ 蛋白质生物素化试剂盒
Amplite™ 比色生物素定量试剂盒

荧光生物素衍生物
荧光生物素衍生物在同一分子中同时包含荧光团和生物素部分。这些试剂用于通过荧光检测和定量生物素结合蛋白。链霉亲和素与荧光生物素结合的强淬灭可用于精确测量链霉亲和素（或亲和素）的浓度。

生物素化二抗
我们提供生物素化二抗，用于基于链霉亲和素的扩增技术。使用生物素化二抗的一个关键优势是可以灵活地在多种应用中使用相同的二抗，只需使用不同的链霉亲和素偶联物即可。
现成的链霉亲和素偶联物
HRP-链霉亲和素（成像需要HRP 底物）
AP-链霉亲和素（成像需要AP 底物）
iFluor™-链霉亲和素
mFluor™-链霉亲和素
APC、PE 和串联染料-链霉亲和素（藻胆蛋白的强烈明亮荧光和快速光漂白非常适合流式细胞术应用）

生物素化核苷酸

生物素修饰的三磷酸核苷类似物，例如 dUTP 和 dCTP，可以酶促结合到 DNA 或 RNA 片段中，用于荧光原位杂交 (FISH)、DNA 阵列、微阵列和其他杂交技术。标准酶促非放射性 DNA 标记反应，包括 3” 末端标记、cDNA 标记、切口平移、PCR 和随机引物标记。每个生物素化核苷酸在生物素与其在核苷酸上的附着点之间包含一个 11、14、16 或 20 个原子的间隔物。这有助于通过荧光团和酶链霉亲和素缀合物或琼脂糖和磁珠对其进行检测和信号放大。

生物素化氨基酸

生物素化肽适用于需要固定在链霉亲和素或亲和素包被的微量滴定板、珠子或膜上的免疫检测研究和生物医学筛选测定。在 Fmoc 固相合成过程中，生物素可以连接到肽的 N 端或赖氨酸 (Lys)、谷氨酸 (Glu) 或天冬氨酸 (Asp) 的侧链。在 FMOC-Glu(biotinyl-PEG)-OH 和 FMOC-Asp(biotinyl-PEG)-OH 中加入 PEG 间隔子可降低目标肽和链霉亲和素之间的空间位阻，从而更好地结合生物素。PEG-间隔物的亲水性最大限度地减少了非特异性相互作用并提高了试剂和生物素化肽的溶解度。

活性生物素衍生物

反应性生物素衍生物含有反应性部分，例如琥珀酰亚胺酯或马来酰亚胺，它们有助于将生物素标记到蛋白质、抗体和其他大分子上。选择反应性生物素衍生物时，请考虑以下因素：
功能基团靶向-特异性反应部分靶向并结合到它们各自的功能基团，用于蛋白质和其他大分子的靶向或非选择性生物素化（例如，琥珀酰亚胺酯靶向伯胺，马来酰亚胺靶向硫醇或巯基）。
溶解度——这会影响目标蛋白质或大分子的生物素化。
间隔臂长度 (PEG) – 提高目标蛋白的检测灵敏度并降低空间位阻。

ReadiView™ 生物素化试剂

ReadiView 生物素琥珀酰亚胺酯
ReadiView™ 生物素琥珀酰亚胺酯（货号3059）与专门设计的颜色标签 (CT) 结合，可轻松测定生物素化。
确定蛋白质的生物素化程度非常具有挑战性，因为很难从蛋白质和核酸中辨别出生物素的内在吸收。为了促进这一测定，我们提供了一系列发色反应性生物素衍生物 ReadiView™ 生物素。
这些新型生物素化试剂包含一个专门设计的“颜色标签 (CT)”，位于两个间隔臂之间。这些间隔臂降低了空间位阻并提高了水溶性，而 CT 标签通过计算 280 nm/385 nm 的吸收比使生物素化程度易于量化。CT 标签不影响生物素与链霉亲和素的络合，对荧光链霉亲和素偶联物的淬灭影响最小。ReadiView™ 生物素有胺反应性、硫醇反应性和点击化学形式。

酶标记的链霉亲和素偶联物

Stayright 紫色污渍

FFPE肺腺癌组织中EpCAM的IHC检测。将人腺癌组织切片与兔抗 EpCAM 一抗孵育，然后与生物素化山羊抗兔 IgG (H&L) 孵育。然后将样品与 HRP-链霉亲和素一起孵育，并使用ReadiUse™ Stayright™ Purple产生信号。
酶标记的链霉亲和素偶联物通常用于酶联免疫吸附测定 (ELISA)、免疫组织化学、免疫印迹和原位杂交技术。酶辣根过氧化物酶 (HRP) 和碱性磷酸酶 (ALP) 因其高周转率、稳定性、易于结合和低成本而被广泛用作报告标记。
为了最大限度地保留酶和蛋白质活性，我们的 HRP-链霉亲和素和 AP-链霉亲和素偶联物以 1:1（酶与链霉亲和素）的标记比例制备。显色、荧光和化学发光 stubstrates 可用于这些酶缀合物。

荧光链霉亲和素偶联物

SA iF647 染色剂

HeLa 细胞中 α-微管蛋白的免疫荧光染色。将固定和透化的 HeLa 细胞中的α-微管蛋白与兔抗微管蛋白一抗孵育，然后与生物素化山羊抗兔 IgG (H&L)（货号16794）孵育，然后使用 iFluor™ 647-链霉亲和素偶联物（货号16966。使用 DAPI（货号17507）对细胞核进行复染。
荧光链霉亲和素偶联物广泛用于荧光成像，用于检测原位杂交技术、免疫组织化学和多色流式细胞术的生物素化抗体、配体和 DNA 探针。我们提供用 iFluor™ 染料、mFluor™ 染料、藻胆蛋白和串联染料等标记的荧光链霉亲和素的全面产品组合。我们的 iFluor™ 链霉亲和素偶联物的优点包括在很宽的摩尔范围内发出异常明亮的荧光、出色的光稳定性和对 pH 不敏感的荧光。

iFluor™ 链霉亲和素偶联物

用 iFluor™ 染料标记的链霉亲和素偶联物表现出异常明亮和光稳定的荧光，优于 Alexa Fluor® 和其他光谱相似的偶联物。iFluor™ 链霉亲和素偶联物设计用于各种细胞分析和蛋白质分析应用，包括成像、流式细胞术和荧光蛋白质印迹。作为预防措施，在检测低丰度目标时避免使用蓝色荧光链霉亲和素偶联物。与其他染料相比，蓝色荧光染料具有较低的荧光并且可以经历较高的非特异性背景。

用于流式细胞术的 mFluor™ 链霉亲和素偶联物

mFluor™ Blue 570 链球菌素染色剂

HL-60 细胞用（红色）或不用（绿色）1ug/ml Anti-Human HLA-ABC-Biotin 染色，然后用 mFluor™ Blue 570-链霉亲和素偶联物（货号 16935）进行流式细胞术分析。
用 mFluor™ 染料标记的链霉亲和素偶联物表现出最小的自猝灭，产生用于流式细胞仪的强荧光和光稳定偶联物。mFluor™ 链霉亲和素偶联物旨在通过流式细胞仪中常用的主要激光线之一实现最佳激发，例如 405 nm、488 nm、532 nm、561 nm 或 633 nm 激光线。

用于流式细胞术的链霉亲和素 APC、PE、PerCP 和串联染料偶联物
链霉亲和素 PE、APC 和 PerCP 偶联物通常用于需要高灵敏度但不要求光稳定性的应用，主要是流式细胞术、FACS、免疫表型分析和微阵列。藻胆蛋白异常明亮的荧光是由于它们异常高的消光系数和量子产率。

串联染料结合了标记到受体 iFluor™ 染料上的供体藻胆蛋白（例如 APC 或 PE）的妥协，这些受体 iFluor™ 染料发出更长波长的荧光。使用荧光共振能量传输器 (FRET)，供体藻胆蛋白吸收的光导致受体发出荧光。在流式细胞术中，串联染料非常适合用于细胞的多色参数分析，因为它们利用了单个激发源和显着大的斯托克斯位移。

链霉亲和素-Xtra™ 偶联物

链霉亲和素比较染色

用 Streptavidin-Xtra™ IF488 和 Streptavidin-Alexa Fluor® 488 染色的 HeLa 细胞比较。HeLa 细胞用 4% 多聚甲醛固定 30 分钟，用 0.02% Triton™ X-100 透化 10 分钟，用 1% BSA 封闭1 小时并用 1 µg/mL U+03b1-tubulin Mouse mAb 在室温下标记 1 小时。生物素化山羊抗小鼠 IgG (H+L)（货号 16729）用于检测 U+03b1-微管蛋白，并使用 Streptavidin-Xtra™ iFluor 488（货号 46001）和 Streptavidin-Alexa Fluor® 488 进行可视化。用 Hoechst 33342（货号 17535）复染。
链霉亲和素-Xtra™ iFluor™ 偶联物的最佳标记程度可产生最亮的荧光链霉亲和素偶联物，用于在细胞成像、流式细胞术和蛋白质印迹应用中检测生物素化抗体。与传统的链霉亲和素 Alexa Fluor® 偶联物相比，Streptavidin-Xtra™ iFluor™ 偶联物以更高的灵敏度和细节对低丰度目标进行成像。

好处
明亮且光稳定的荧光，没有明显的自猝灭
高信噪比：与 Alexa Fluor® 相比，信号改善 3~5 倍
宽摩尔范围内的 pH 不敏感荧光