LysoPrime Deep Red – High Specificity and pH Resistance货号：L264

   溶酶体是常见的细胞器之一，由生物膜包裹多种分解酶组成的酸性胞内囊泡。溶酶体可以将细胞内的废物进行分解以维持细胞内各种状态的平衡。溶酶体的功能紊乱会造成或加剧包括神经退行性疾病在内的多种疾患，因此研究溶酶体对相关疾病机理的阐释及相应治疗药物的开发非常重要。

荧光探针活体染色是在研究溶酶体功能时最常用的手段，然而市面上的溶酶体荧光探针一般都存在特异性差和荧光强度随pH变化的问题。同仁化学研究所开发的LysoPrime Deep Red荧光探针对溶酶体具有高度特异性，并且不易受pH值变化的影响，因此可以更准确的对溶酶体进行研究。另外，由于其细胞内的滞留能力强，还适用于需要长期荧光观察的实验。

分别使用传统溶酶体荧光探针与LysoPrime Deep Red在溶酶体特异性标记物LAMP1-GFP表达的HeLa细胞中进行对比。结果可以看出，传统溶酶体荧光探针在溶酶体以外的地方也有荧光，造成背景荧光高的问题。而LysoPrime Deep Red可以有效抑制背景荧光(Merged荧光图像)，展现出更高的溶酶体特异性。

<检测条件>

Green: Ex= 488 nm, Em= 500-570 nm

Deep Red : Ex= 633 nm, Em= 640-700 nm

LysoPrime Deep Red与市面上的其他产品都是在溶酶体集聚的荧光染料。然而随着溶酶体酸性抑制剂Bafilomycin A1的作用，溶酶体pH由酸性向中性变化的过程中，其他产品逐渐离开溶酶体，荧光信号也显著下降。而LysoPrime Deep Red却可以继续保持在溶酶体内，荧光强度几乎不变，与其他产品的荧光减弱形成鲜明的对比。

＜检测条件＞

Deep Red: Ex= 633 nm, Em= 640-700 nm

Red: Ex= 561 nm, Em= 560-620 nm

LysoPrime Deep Red与市面上的其他产品在相同实验条件下进行对比，其他产品在染色24小时后，荧光强度有明显的下降，而LysoPrime Deep Red由于在溶酶体内的停留性能高，仍然可以维持高荧光强度。

<检测条件>

Deep Red: Ex= 633 nm, Em= 640-700 nm

Green: Ex= 488 nm, Em= 490-550 nm

Red: Ex= 561 nm, Em= 560-620 nm

细胞衰老所引起的溶酶体量和pH的变化

用Doxorubicin(DOX)刺激A549细胞诱导细胞衰老后，检测细胞内衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)和溶酶体量与pH的变化。用细胞衰老检测试剂盒—Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal(货号：SG03)检测细胞衰老，分别用LysoPrime Deep Red和pHLys Red(货号：L265)检测溶酶体的量和pH的变化。荧光显微镜的观察结果发现伴随着细胞衰老的发生，三个检测指标均有上升。另外，通过酶标仪的数值化的检测，也得到了相同的检测结果。

<检测条件>

SA-βGal(绿):

Ex = 488 nm, Em = 490 – 550 nm

溶酶体pH (红):

Ex = 561 nm, Em = 560 – 620 nm

溶酶体的量(紫):

Ex = 633 nm, Em = 640 – 700 nm

<检测条件>

SA-βGal: Ex = 525 – 535 nm, Em = 550 – 570 nm

溶酶体pH: Ex = 555 – 565 nm, Em = 590 – 610 nm

溶酶体的量: Ex = 645 – 655 nm, Em = 690 – 710 nm