超氧阴离子和羟自由基检测（EPR）—DMPO货号：D048

凑单关联产品TOP5

NO.1.    TEMP    单线态氧检测

NO.2.    BMPO    超氧阴离子和羟自由基检测

NO.3.    ROS Assay Kit    活性氧检测

NO.4.    SOD Assay Kit    超氧化物歧化酶(SOD)检测

NO.5.    Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric-    细胞凋亡检测

质量约为1.1g

由于具有潜在的致癌风险和促进衰老的作用，生物体内的自由基已成为研究的热点。 DMPO是研究自由基最常用的自旋捕获剂。 它适用于捕获氧自由基，尤其是超氧化物，并生成具有特征的EPR信号的加合物。 但是，大多数市售的DMPO包含会引起高背景的杂质。 因此，这些DMPO需要进一步纯化才能在EPR上进行实验。 Dojindo的DMPO实行严格的质量管控，没有杂质引起的背景问题，因此不需要任何预纯化处理。

•超高纯度

•更高的信噪比

•无需预纯化

同仁化学研究所 (Dojindo) 的DMPO没有杂质 (*) 检出

以羟自由基的Fenton反应(黑色)和空白(蓝色)为例，同仁化学研究所(Dojindo)的峰更清晰，S/N比例更高

自旋捕获剂，EPR（ESR）检测，超氧阴离子，羟基自由基

自旋捕捉ESR技术是一种检测活性氧的最可靠的办法，它能提供具有特征的ESR信号。DMPO采用一种特殊的敏感方法，可以捕捉超氧阴离子和羟自由基等，分别产生独特的ESR光谱。因此它是探测生物系统内ROS的强有力工具。

SOD清除超氧阴离子的活性检测

1. 将15 μl的DMPO溶液和 50 μl的5 mM的次黄嘌呤加入到35 μl的0.1 M的磷酸盐缓冲液 (pH 7.8) 中。

2. 加入50 μl的待测SOD标准品或待测样品，涡旋振荡 1-2 s。

3. 加入50 μl的0.4 U/ml的黄嘌呤氧化酶之后立即涡旋振荡。

4. 放置一段时间 (例如 1 min) 将溶液转入ESR样品管中检测。

5. 通过峰值计算相对强度(DMPO-O^2-/Mn²⁺)。

C-,N-,S-基自由基的检测

1. 制备100 mM含有25 μM Diethylenetriaminepentaacetic Acid (DTPA)的磷酸盐缓冲液 (pH 7.4)，作为过渡金属螯合剂。

2. 制备以下过氧化物酶底物：A) 100 mM 甲酸钠(HCOONa)；B) 100 mM氰化钾(KCN)；C) 100 mM叠氮钠(NaN₃)；D) 含有100 mM亚硫酸钠 (Na₂SO₃)的100 mM磷酸盐缓冲液 (pH 7.4)。

3. 制备4.0 mg/ml(~100 μM)的辣根过氧化物酶 (HRP)溶液和1 mM H₂O₂溶液。

4. 制备浓度为1 M的DMPO溶液。

5. 在离心管中加入130 μl的缓冲液，加入20 μl已配好的1 M的DMPO溶液，再加入20 μl底物储存液，10 μl的1 mM H₂O₂溶液，最后加入20 μl HRP触发反应。

6. 涡旋振荡离心管，加入到进样系统中，检测图谱。

7. 加样后调节光谱并得到图谱。各物质的终浓度为：100 mM DMPO，10 mM的底物，50 μM H₂O₂，10 μM HRP。

数据和操作流程由Bruker公司友情提供