产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 高保真PCR
Q5® 血源直扩 2X 预混液
#M0500L 500 reactions
#M0500S 100 reactions
产品特点
· 无需 DNA 纯化，可直接使用人全血细胞或干血斑样品进行扩增
· 通过 Q5® 热启动超保真 DNA 聚合酶进行精准、高效的 PCR
· 优化的缓冲液系统有效提高对扩增抑制成分和化学品的耐受度
· 适配体抑制酶活，为室温下建立反应体系奠定基础
产品信息
Q5® 血源直扩 2X 预混液可以免除 DNA 纯化步骤，直接使用干血斑或含高达 30% 的全血样品进行各种靶标扩增。该预混液包含 Q5® 热启动超保真 DNA 聚合酶，该酶热稳定性好，具有 3′→ 5′ 外切酶活性，融合了具有增强持续合成能力的 Sso7d DNA 结合域，优化的 dNTP 缓冲液有效提高了对血液中扩增抑制成分、抗凝剂以及滤纸上化学品的耐受度。该产品能够从含有 EDTA 钠盐、EDTA 钾盐、枸橼酸钠和肝素钠的全血细胞以及从保存在普通防腐滤纸上的血样品中扩增长达 7.5 kb 的片段。
Q5® 热启动超保真 DNA 聚合酶扩增性能卓越、保真度高。通过核酸适配体抑制酶活，可在室温条件下建立反应体系。
建议使用 NEB’s Tm Calculator 针对于感兴趣的聚合酶/缓冲液确认引物的最适退火温度，与其它 Tm 值估算系统不同，NEB Tm 值估算系统在估算最佳退火温度时，考虑了影响退火温度的缓冲液组分。
图 1：Q5® 血源直扩 2X 预混液扩增性能卓越，能够直接扩增全血或干血斑
根据说明书推荐的标准反应条件，使用 Q5® 血源直扩 2X 预混液进行 35 个循环的 PCR 扩增。使用 LabChip® 微流控分析仪对产率和纯度进行定量，结果分别以圆点的大小和颜色展示：圆点面积越大、绿色越深，则表示扩增性能越强。 A. 以 10% EDTA 保存的人全血为模板，扩增人基因组不同靶标（0.3 至 7.5 kb）。结果以模拟胶图（上）和相应的点图（下）呈现。结果显示：Q5® 血源直扩 2X 预混液在较大范围的模板长度区间内均表现良好。B. 以全血（上）或滤纸干血（底部）为模板，对人类基因组靶标（604 bp）进行扩增。人全血占总反应体积 (50 µl) 的 5-30%。将未经处理的 1 mm 打孔干血斑直接添加到 25 µl 反应体系中（每个反应一个打孔样品）。结果显示：Q5® 血源直扩 2X 预混液对不同的全血含量、防腐剂和各种类型的采血卡纸具有广泛的耐受性。
图 2：Q5® 血源直扩 2X 预混液对各种靶标序列均能高效扩增
使用 Q5® 血源直扩 2X 预混液和其它几种市售血液直扩聚合酶，分别对不同 GC 含量 (23-77%)（A图）和不同长度（2 -7 kb）（B 图）人类基因靶标进行 PCR。以 10% EDTA 保存的人全血为模板。根据说明书建议使用 50 µl 反应体系进行热循环。使用 LabChip® 微流控分析仪进行定量，结果分别以圆点的大小和颜色表示产量和纯度。结果显示：Q5® 血源直扩 2X 预混液对于各种类型的靶标均表现优异。
图 3：在各种滤纸，血液防腐剂、反应体系中表现稳定
根据说明书推荐的标准反应条件，使用 Q5® 血源直扩 2X 预混液对干血中的人类基因组靶标（604 bp）进行 PCR。将不同抗凝剂抗凝的血样采集于 Whatman 903 或 FTA Elute 卡纸上，在上述干血卡纸打孔，分别直接加入到 20、25 或 50 μl 反应体系中。结果显示：在各种体积的反应体系、抗凝剂或滤纸类型中，均能达到稳健扩增。