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FAM-dT phosphoramidite

This phosphoramidite allows fluorescein (FAM) to be introduced into any position in the oligonucleotide sequence during synthesis by the phosphoramidite method (in the middle of the chain, at the 5’- and 3’-terminus). The reagent is a conjugate of deoxythymidine phosphoramidite and 6-isomer of FAM. Modification is performed during oligonucleotide synthesis by substituting standard dT phosphoramidite with fluorescein-dT phosphoramidite. This modification does not affect exonuclease or polymerase activity.

For modification with fluorescein at the 5’-terminus use FAM phosphoramidite, 6-isomer.

这种亚磷酰胺允许荧光素 (FAM) 在合成过程中通过亚磷酰胺方法引入寡核苷酸序列的任何位置（在链的中间，在 5′ 和 3′ 末端）。 该试剂是脱氧胸苷亚磷酰胺和 FAM 6-异构体的结合物。 在寡核苷酸合成过程中通过用荧光素-dT 亚磷酰胺代替标准 dT 亚磷酰胺进行修饰。 这种修饰不影响核酸外切酶或聚合酶活性。

要在 5′-末端使用荧光素进行修饰，请使用 FAM 亚磷酰胺，6-异构体。

Usage

Coupling: 10 minutes

Deprotection: standard conditions using ammonium hydroxide; deprotection time depends on oligonucleotide composition and nucleobase protecting groups (deprotection for 17 h at 55 °С removes all protecting groups from standard nucleobases). AMA (solution of 30% ammonium hydroxide/40% aqueous methylamine 1:1 v/v) can be used with ~5% of non-fluorescent side product forming. To avoid formation of the side product, start deprotection with ammonium hydroxide (30 min at room temperature), then add an equal volume of 40% aqueous methylamine and continue deprotection as required with AMA (e.g. 10 min at 65 °C).

耦合：10 分钟

脱保护：使用氢氧化铵的标准条件； 脱保护时间取决于寡核苷酸组成和核碱基保护基团（在 55°С 脱保护 17 小时会去除标准核碱基上的所有保护基团）。 AMA（30% 氢氧化铵/40% 甲胺水溶液 1:1 v/v 的溶液）可用于形成约 5% 的非荧光副产物。 为避免形成副产物，用氢氧化铵开始脱保护（室温下 30 分钟），然后加入等体积的 40% 甲胺水溶液，并根据需要使用 AMA 继续脱保护（例如，在 65°C 下 10 分钟）。