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Chemical phosphorylation reagent for oligonucleotide synthesis

Chemical phosphorylation reagent for the synthesis of 5’-phosphorylated oligonucleotides. The reagent contains a DMT group in its structure, which allows oligonucleotide purification on C18-cartridges or by reversed-phase chromatography. To yield 5’-phosphorylated oligonucleotide, remove DMT group and then deprotect the phosphate group with diluted ammonium solution (0.1 M). Deprotection of the phosphate group is rapid and efficient even under mild basic conditions, so this reagent can be used for DMT-Off synthesis, for example for RNA synthesis, or with dye phosphoramidites that require mild deprotection conditions.

用于合成 5′-磷酸化寡核苷酸的化学磷酸化试剂。 该试剂的结构中含有一个 DMT 基团，可以在 C18 小柱上或通过反相色谱法纯化寡核苷酸。 要产生 5′-磷酸化寡核苷酸，请去除 DMT 基团，然后用稀释的铵溶液 (0.1 M) 去保护磷酸基团。 即使在温和的碱性条件下，磷酸基团的脱保护也能快速有效地进行，因此该试剂可用于 DMT-Off 合成，例如 RNA 合成，或用于需要温和脱保护条件的染料亚磷酰胺。

Usage

Diluent: anhydrous acetonitrile. Add the diluent to the recommended concentration (0.1 M) and wait until reagent dissolution is complete while mixing periodically. This reagent is viscous amorphous, and it may take up to 10 minutes to dissolve it. Store the diluted reagent in anhydrous conditions for not more than 24 hours.

稀释剂：无水乙腈。 将稀释剂添加至推荐浓度 (0.1 M) 并等待直到试剂溶解完成，同时定期混合。 该试剂是粘性无定形的，可能需要 10 分钟才能溶解。 将稀释后的试剂在无水条件下存放不超过 24 小时。

Coupling: 6 minutes

耦合：6 分钟

Deprotection脱保护:

1. DMT group is removed during synthesis: to yield the 5’-terminal phosphate, deprotect under standard conditions using ammonium hydroxide.DMT 基团在合成过程中被去除：为了产生 5′-末端磷酸盐，在标准条件下使用氢氧化铵去保护。
2. DMT-ON, cartridge purification: standard cartridge purification conditions. After elution from the cartridge, deprotect the phosphate group by adding an equivalent volume of 25% aqueous ammonium solution to oligonucleotide solution, incubate for 15 minutes at room temperature, and dry the oligonucleotide down.DMT-ON，柱净化：标准柱净化条件。 从小柱中洗脱后，通过向寡核苷酸溶液中加入等体积的 25% 铵水溶液来脱去磷酸基团的保护，在室温下孵育 15 分钟，然后将寡核苷酸干燥。
3. DMT-ON, purification by HPLC: purify 5’-DMT-oligonucleotide by reversed-phase HPLC. To remove DMT group, redissolve oligonucleotide in 80% acetic acid and incubate for 30 minutes at room temperature. Dry the oligonucleotide down, add 10% aqueous ammonium and incubate for 15 minutes to cleave the remaining fragment of the protecting group.DMT-ON，HPLC 纯化：通过反相 HPLC 纯化 5′-DMT-寡核苷酸。 要去除 DMT 基团，将寡核苷酸重新溶解在 80% 乙酸中并在室温下孵育 30 分钟。 将寡核苷酸干燥，加入 10% 铵水溶液并孵育 15 分钟以切割剩余的保护基片段。
4. DMT-OFF: to yield the 5’-phosphate, use standard deprotection conditions after synthesis.DMT-OFF：要产生 5′-磷酸，在合成后使用标准脱保护条件。