链球菌及相关微生物鉴定试剂盒(比色法) 说明书 【产品名称】 通用名称:链球菌及相关微生物鉴定试剂盒(比色法) 英文名称:API 20 Strep 【包装规格】 25 测试/盒 【预期用途】 本产品用于测定链球菌(streptococci)、肠球菌(enterococci)和其它相关细菌的种或群鉴定。 临床常见样本来源有泌尿生殖道标本、呼吸道标本、血。该系统能鉴定的菌谱名单列于说明书后的鉴定表中。 【检验原理】 API 20 Strep 试条由 20 个含干燥底物的微量小管组成,能检测酶活性或糖的发酵。 酶活性测定是以由纯培养制成的浓菌悬液接种于含干燥的酶底物的微量小管中,使管内的底物溶解。在 培养期间,所产生的最终代谢产物通过自然反应或加入附加试剂而变色。 发酵试验是接种于由含糖底物组成的培养基中。发酵的碳水化合物通过 pH 指示剂颜色的改变来检测。 鉴定结果可根据说明书的判读表读出,也可参照生化检索手册或鉴定软件,得到鉴定结果。 【主要组成成分】 试剂盒组成(用于 25 个测试) – 25 个 API 20 Strep 试条 – 25 个 孵育盒 – 25 个 API GP 培养基安瓿 – 25 张结果报告单 试剂条成分 API 20 Strep 试条的成分请参阅说明书后的结果判读表。 培养基 API GP 培养基 2 mL L-胱氨酸 0.5 g 胰蛋白胨 (牛源/猪源) 20 g 氯化钠 5 g 亚硫酸钠 0.5 g 酚红 0.17 g 去离子水 加至 1000 mL pH : 7.4 – 7.6 说明书中的量可能因使用原材料滴度的变化有所调整。 链球菌及相关微生物鉴定试剂盒(比色法) 版本号 07625L-zh– 2010/07 2 需要但没有提供的试剂和设备 试剂/仪器: – API○R 悬浮培养基, 2 mL (Ref. 70 700) – 试剂: NIN (Ref. 70 491) VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422) ZYM A (Ref. 70 494) ZYM B (Ref. 70 493) – 矿物油 (Ref. 70 100) – McFarland 标准比浊管 (Ref. 70 900) MCF 4 或光度计 DENSIMAT (Ref. 99 234) – API 20 Strep 数值分析索引 (Ref. 20 690)或鉴定软件 (请于生物梅里埃公司联系) – 哥伦比亚血琼脂平板 (Ref. 43 041) – Schaedler 肉汤培养基 (选用) 材料: – 拭子 – 吸管或 PSI 管 – 安瓿架 – 安瓿保护套 – 厌氧瓶 – 微生物实验室常规设备 【储存条件及有效期】 2~8°C 保存,有效期为 12 个月。 生产日期:详见外包盒标签。 失效日期:详见外包盒标签。 【适用仪器】 – McFarland 标准比浊管 (Ref. 70 900) MCF 4 或光度计 DENSIMAT (Ref. 99 234) – API 20 Strep 数值分析索引 (Ref. 20 690) 或 鉴定软件 (请于生物梅里埃公司联系) 【样本要求】 API 20 Strep 不能直接用于临床或其他标本(例如泌尿生殖道标本、呼吸道标本、血标本等等)。 需要鉴定的微生物必须首先根据微生物标准规程在合适的培养基上进行分离。接种物的制备 按产品说明书中“警告和注意”所示,打开 API 悬浮培养基安瓿。 用拭子收集所有先前准备好的传代平板上的细菌。建议使用培养 24-48 小时的新鲜菌。. 制备菌悬液,浓度为 6 个麦氏单位。菌悬液制备好后应立即使用。试条的接种 试条前 11 个试验 (从 NIT 到 GEL ) 加入菌悬液, 注意避免气泡 (将培养盒稍前倾,吸管和 PSI 管的吸头靠住杯的内缘,菌悬液沿管壁滴入杯内。) :- 从 NIT 到 ESC:每个杯中加入约 100-150 µl 菌悬液。- URE :只加满管的部分- GEL :管和杯都加满 试条最后 9 个试验 (从 0 到 GLYG):- 按产品说明书中“警告和注意”所示,打开一支 API GP 培养基,倒入余下的菌悬液(约 0.5 ml)。混合均匀。- 将新的菌悬液加入每个小管中(只加管部) 在有下划线的试验的杯中(URE, 和 0 到 GLYG) 加入矿物油,形成新月状凸起。 盖上盖子 在有氧环境中,36°C ± 2°C 孵育 24 小时( 2 小时) 试条判读孵育后: 加入试剂:- NIT 试验:各加一滴 NIT 1 和 NIT 2- PYZ 试验:加入 1 滴 PYZ- PyrA,PAL,ßGUR,ßGAL,GLU 和 ßNAG 试验:各加一滴 ZYM A 和 ZYM B (*)- 等待 10 分钟,然后根据判读表读所有的结果。如有必要,让试条暴露在强光下 (1000 W) 10 秒钟,使 PyrA到 ßNAG 管内多余试剂退色。(*)建议在使用前控制每个 ZYM B 安瓿。为了消除任何缺陷试剂,建议按照质控章节所述应用 ATCC○R27402 菌株进行质量控制检测。 进行触酶试验 (作为第 21 测试):在 ESC 或 GEL 测试中加入一滴过氧化氢 (3 %) ,等一分钟。产生气泡即为阳性。 将结果记录到结果报告单上 API Coryne 系统只应用于包括在数据库内的棒状杆菌属或相关的属的鉴定(参说明书末的鉴定表)。不能用於鉴定或排除鉴定范围之外的菌种。产品数据库仅限于临床标本中最常见的棒状杆菌。 此方法只能用于单个细菌的纯培养物的鉴定。 某些情况下, API Coryne 试条的生化反应不足以鉴别两种菌时,必须进行补充试验,这种情况会出现一个注解。在分析图谱索引和技术手册的 “鉴定软件相关生化信息”内有试验说明和文献参考。 如果细菌鉴定为白喉棒状杆菌(C. diphtheriae), 必须做过敏毒素试验确定该菌株为致病菌。