胶原酶Ⅰ

胶原酶Ⅰ

胶原酶Ⅰ用于上皮、肺和肾上腺组织细胞的分离

胶原蛋白酶 来源于溶组织梭菌

胶原酶Ⅰ可以用 TESCA buffer （50 mM TES，0.36 mM 氯化钙，pH 7.4，37°C）配制成 1-2 mg/ml。 也可以用含钙镁的 PBS、含钙镁的 hanks 或不含血清的培养基配制。配完后分装，避免反复冻融。
1 个胶原消化单位（CDU）：在 pH 7.4，37℃以及钙离子存在的条件下，以每5小时从胶原中 释放的多肽相当于茚三酮显色1微摩尔亮氨酸量为一个活性单位。
1FALGPA 单位：在 pH 7.5、25℃以及钙离子存在的条件下，一个 FALGPA 水解单位每分钟 可水解 1.0μmol 呋喃基丙烯酰基-Leu-Gly-Pro-Ala。
胶原酶Ⅰ为粗品，用于上皮、肺和肾上腺组织细胞的分离。外观为黑棕色粉末。分子量68,000 到125,000，最适PH为6.3-8.8。胶原酶能够特异性结合-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-序列中的中性氨基酸（X） 和甘氨酸之间的肽键。该粗品是溶组织梭菌分泌的混合酶。主要为胶原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白 酶。其中梭菌蛋白酶是被氧化的、最不活泼的酶，组织的分离必须依靠胶原酶和中性蛋白酶两者共 同作用。

激活剂：Ca2+，最适合浓度为5 mM。

抑制剂：EGTA、还原性谷胱甘肽、β-巯基乙醇、巯基乙酸钠、8-羟基喹啉、2,2′-联吡啶等。

底物：不同类型的胶原是其天然底物，而一些合成的多肽也可以作为其底物，比如： N-CBZ-gly-pro-gly-gly-pro-ala (Km = 0.71 mM)、N-CBZ-gly-pro-leu-gly-pro、N-(3-(2-furyl)acryloyl)- leu-gly-pro-ala(FALGPA)、4-Phenylazo benzyloxycarbonyl-pro-leu-gly-pro-D-arg、N-2,4-Dinitrophenyl- pro-gln-gly-ile-ala-gly-gln-D-arg。除此之外N-Succinyl-gly-pro-leu-glypro7-amido-4-methylcoumarin是 类胶原酶的肽酶的底物。N-(2,4-Dinitrophenyl)-proleu-gly-leu-trp-ala-D-arg 氨基酸化合物是脊椎动物 胶原酶的底物。

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备注：

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