概述
血管紧张素转换酶(ACE)可以通过血压调节机制之一的肾素-血管紧张素系统，将血管紧张素Ⅰ(AngiotensinⅠ)转化成具有升压作用的血管Ⅱ(AngiotensinⅡ)。同时，它还可以分解降压肽之一的缓激肽(Bradyinin)，是一种与血压上升有很大关系的酶。近年来，市面上有许多以预防高血压为目的的功能性食品(特定保健用途食品)，而其中具有ACE抑制活性的食品备受关注。传统的ACE抑制活性检测法是通过测定马尿酸在228nm处的吸光度来计算的，马尿酸是从合成底Hippuryl-His-Leu中生成，经过乙酸乙酯溶剂提取、浓缩干燥、再溶解得到的。该方法需要使用乙酸乙酯等有害的有机溶剂，且操作复杂，容易产生测量误差，因此急需一种操作更简单、结果更准确的检测方法。同仁化学研究所开发的ACE Kit-WST是一种新型酶法检测试剂盒。通过检测3-Hydroxybutyryl-Gly-Gly-Gly(3HB-GGG)中得到的3-Hydroxybutyric acid(3HB)，可以更安全、快速、简单的检测ACE抑制活性。本方法还可以使用96孔板进行多样品检测，进一步提高了检测的快捷性和重现性。
检测原理
特点
检测过程约2小时
检测时，只需要将样品溶液和试剂加入96孔板，培养(60 min; 10 min)，检测吸光度即可。
与传统法的比较
本试剂盒对应96孔板酶标仪检测，可以一次检测多个样品。而且无需使用有毒性的有机溶剂，可以更安全、快速、简便的得到高重现性的检测结果。
实验例
东当归处理过程中ACE抑制活性的变化3)
日本奈良县农业综合技术中心的浅尾研究员使用本试剂盒对日本大和地区的东当归在收获过程中，ACE抑制活性(IC50值)的变化进行了研究。研究结果对收获过程中的处理操作在ACE抑制活性方面的药理学影响有重要参考价值。
样品的前处理
各样品经过冻结干燥、粉碎成粉后加入20倍的蒸馏水，在40℃下振荡(100 rpm)30 min，最后通过离心分离(3000 ×g, 10 min)获得的上清液作为样品溶液。
抑制曲线例
检测波长：450 nm
横坐标为样品浓度
参考文献
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8) N. Ontiverosa, V. López-Terosb, M. Vergara-Jiménezc, A. R. Islas-Rubiod, F. I. Cárdenas-Torresc, E. Cuevas-Rodrígueze, C. Reyes-Morenoe, D. M. Granda-Restrepof, S. Lopera-Cardonaf, G. Isaí Ramírez-Torresb and F. Cabrera-Chávezc, Amaranth-hydrolyzate enriched cookies reduce the systolic blood pressure in spontaneously hypertensive rats’, J. Funct. Foods., 2019,doi:10.1016/j.jff.2019.103613.
常见问题Q&A
| Q1：可以检测ACE活性吗？ |
| A1：不可以检测ACE活性。 本试剂盒是检测ACE抑制剂活性的试剂盒。 |
| Q2：本试剂盒的优点是什么？ |
| A2：优点是 安全、快速、简便。 「无需使用有机溶剂」、 「一次检测多个样品」、 「实验结果重现性高」 *传统方法需要使用乙酸乙酯进行溶解、浓缩干燥再检测。操作非常繁杂，容易引入误差。 |
| Q3：可以检测多少个样品？ |
| A3：根据实验目的不同，分别准备了「确认抑制活性的有无」和「检测IC50」两种操作步骤。 Protocol 1：n=3时，可检测14个样品(50 tests)，28个样品(100 tests) Protocol 2：n=3时，可检测2个样品(50 tests)，4个样品(100 tests) 详情请参考产品说明书。 |
| Q4：样品在前处理的时候有什么需要注意的吗？ |
| A4：「样品前处理实例(蔬菜/水果等)」 样品为食品时，首先将样品研磨匀浆，然后离心分离，取上清液为样品溶液。如果样品有混浊，请通过过滤和稀释等手段，尽量保证样品呈澄清状。如果样品本身有颜色，适当稀释至不影响检测的范围内。（详见说明书）柠檬酸等酸性较强的样品(pH4~5)，会使Substrate buffer中的3HB-GGG发生沉淀，影响检测。可加入少量碳酸氢钠粉末，中和后离心分离，取上清进行实验。 |
| Q5：样品中有非水溶性物质，是否可以检测？ |
| A5：如果待测样品是非水溶性的，先使用DMSO或乙醇溶解制成Stock solution，然后再用 Buffer进行稀释，并控制DMSO或乙醇的含量在1%以下。 |
| Q6：对检测有影响的物质有哪些？ |
| A6：样品中如果有还原性物质或者氨基酰化酶等对3HBDH有抑制作用的物质，会影响检测。 |
| Q7：如果将Enzyme B和Enzyme A的溶解顺序颠倒的话会有什么问题吗？ |
| A7：会导致灵敏度降低。 请务必按照先用纯水溶解Enzyme B，再用Enzyme B溶液溶解Enzyme A的顺序。 |