pHLys Red – Lysosomal Acidic pH Detection货号：L265

    溶酶体是常见的细胞器之一，由生物膜包裹多种分解酶组成的酸性胞内囊泡。溶酶体可以将细胞内的废物进行分解以维持细胞内各种状态的平衡。溶酶体的功能紊乱会造成或加剧包括神经退行性疾病在内的多种疾患，因此研究溶酶体对相关疾病机理的阐释及相应治疗药物的开发非常重要。

荧光探针活体染色是在研究溶酶体功能时最常用的手段，然而市面上的溶酶体荧光探针一般都存在特异性差和荧光强度随pH变化的问题。同仁化学研究所开发的pHLys Red对溶酶体的特异性高并且可以灵敏的检测溶酶体的pH变化，得到更准确的检测结果。此外，由于停留性能好，该荧光探针还可用于需要长时间观察的实验。

现有的溶酶体pH检测试剂在准确的溶酶体定位和灵敏度方面存在一定的问题。 用低浓度溶酶体酸度抑制剂Bafilomycin A1（Baf. A1）处理的HeLa细胞用pHLys Red或现有的染料染色，并进行荧光成像。 结果显示，与现有的染料相比，pHLys Red对溶酶体pH值的变化更敏感。

<检测条件>

pHLys Red:Ex = 561 nm, Em = 560 – 620 nm

Sensor Y/B:Ex = 561 nm, Em = 560 – 620 nm

Sensor G:Ex = 488 nm, Em = 490 – 550 nm

另外，在试管内检测各pH值下，pHLys Red的荧光强度变化。结果显示，pHLys Red在pH4.0-5.5的范围内，荧光强度变化最显著。

分别使用传统溶酶体荧光探针与pHLys Red在溶酶体特异性标记物LAMP1-GFP表达的HeLa细胞中进行对比。结果可以看出，传统溶酶体荧光探针在溶酶体以外的地方也有荧光，造成背景荧光高的问题。而pHLys Red可以有效抑制背景荧光(Merged荧光图像)，展现出更高的溶酶体特异性。

<检测条件>

Green: Ex= 488 nm, Em= 500-570 nm

Red : Ex= 561 nm, Em= 560-620 nm

pHLys Red与市面上的其他产品在相同实验条件下进行对比，其他产品在染色24小时后，荧光强度有明显的下降，而pHLys Red由于在溶酶体内的停留性能高，仍然可以维持高荧光强度。

<检测条件>

Green: Ex= 488 nm, Em= 490-550 nm

Red: Ex= 561 nm, Em= 560-620 nm

细胞衰老所引起的溶酶体量和pH的变化

用Doxorubicin(DOX)刺激A549细胞诱导细胞衰老后，检测细胞内衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)和溶酶体量与pH的变化。用细胞衰老检测试剂盒—Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal(货号：SG03)检测细胞衰老，分别用pHLys Red和LysoPrime Deep Red(货号：L264)检测溶酶体的量和pH的变化。荧光显微镜的观察结果发现伴随着细胞衰老的发生，三个检测指标均有上升。另外，通过酶标仪的数值化的检测，也得到了相同的检测结果。

<检测条件>

SA-βGal(绿) : Ex = 488 nm, Em = 490 – 550 nm

溶酶体pH (红) : Ex = 561 nm, Em = 560 – 620 nm

溶酶体的量(紫) : Ex = 633 nm, Em = 640 – 700 nm

<检测条件>

SA-βGal: Ex = 525 – 535 nm, Em = 550 – 570 nm

溶酶体pH: Ex = 555 – 565 nm, Em = 590 – 610 nm

溶酶体的量: Ex = 645 – 655 nm, Em = 690 – 710 nm