Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01

水溶性活性酯型生物素化试剂：使用生物素（AC₅）₂Sulfo-OSu用于生物素标记蛋白质游离氨基的试剂盒。它带有用于标记的LVDS3缓冲粉，用于凝胶过滤的柱和用于柱洗脱的PBS片剂，可以纯化标记的蛋白。由于是单次注射型（10毫克x4瓶），因此可以标记4种不同类型的蛋白质。可以通过改变添加的生物素-（AC₅）₂ Sulfo-OSu的量来控制标记率。

*标记蛋白的量为1-5 mg。

使用注意事项:

1. 本试剂盒请在0-5 ℃储存。

2. Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu溶液需要现配现用 (由于Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu易水解，尽量避免在水溶液的状态保存)。

3. 标记好的蛋白质请在0-5 ℃保存 (加入0.1%的叠氮钠等防腐剂)。

使用步骤:

1. 配制溶液

1) NaHCO₃缓冲液

在含有NaHCO₃粉末的容器中加入10ml超纯水溶解。

2) PBS缓冲液

在100ml容量瓶中加入1片PBS，先用少量超纯水溶解后，再用超纯水补充至100ml，制成10mmol/l的PBS缓冲液。

3) 蛋白质溶液

在样品管中精确称量1.0-5.0mg蛋白质并记录称量值后，用移液器加入500μl操作步骤1)中的NaHCO₃缓冲液。盖上盖子后，用漩涡振荡器等搅拌溶解蛋白质。

4) Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu溶液

在1支含有Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu的管子中加入适量纯水溶解。为了控制标记率，根据不同的标记对象，请参考表1调整Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu溶液的浓度及加入量。

＊由于Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu易水解，溶解后请尽快标记。

2. 生物素标记操作方法

1) 请参考表1在配制好的蛋白质溶液中加入合适浓度和用量的Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu溶液。

2) 盖紧盖子充分混合后，在25 ℃水浴恒温摇床中培养2h。

表1 Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu标记各种蛋白质的标记率

以上数据为本公司实际检测的结果，如实验条件变动，

结果有可能改变。标记率是根据HABA法测得。

a) 1mol蛋白质：生物素的摩尔数

b) 1mol蛋白质上所结合的生物素的摩尔数

3. 蛋白质标记后的凝胶过滤纯化

1) 打开层析柱上的盖子，弃去填充液。

2) 打开层析柱出口的盖子，用PBS分数次洗脱，每根层析柱收集大约10ml的洗脱液，使凝胶平衡。

3) 用移液器吸取500μl标记好的蛋白质溶液加入到层析柱中，弃去此时的流出液。

4) 在层析柱的出口处放置一个2ml的样品管，在层析柱中加入1ml PBS，收集流出的生物素标记蛋白质。

＊经过层析，生物素标记蛋白质的最终浓度为标记时的1/2。

按照下列公式计算生物素标记蛋白质的最终浓度：

A (mol/l) = (X/MW_protein) × (1,000/Y) × 0.5

X：蛋白质的重量

MW_protein：蛋白质的分子量

Y：溶解蛋白质的NaHCO₃缓冲液体积

Q1:如何存储标记的蛋白质？

A:将标记的蛋白质存放在冰箱中。另外，添加0.1％叠氮化钠作为防腐剂。

Q2:生物素标记试剂在水溶液中稳定吗？

A:试剂盒中使用的生物素-（AC5）2 Slufo-OSu处于水溶液中时，由于它会水解，因此无法存储在水溶液中。使用前请做好准备。另外，即使在粉末状态下，也要注意由于吸湿引起的劣化。