Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03

凑单关联产品TOP5

NO.1.    Cell Counting Kit-8     细胞增殖毒性检测   

NO.2.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST   乳酸脱氢酶(LDH)检测

NO.3.    Fluorescein Labeling Kit – NH2    荧光素标记试剂盒-氨基

NO.4.    Peroxidase Labeling Kit – NH2    过氧化物酶标记试剂盒-氨基

NO.5.    Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)    生物素标记试剂盒-氨基

生物素标记试剂盒-NH₂是用于用生物素标记带有氨基基团的蛋白质的试剂盒，尤其是抗体，由于该试剂盒中包含的NH₂-反应性生物素分子中具有活性酯基，因此仅通过与生物素混合即可形成稳定的共价键。当生物素标记在蛋白质（例如免疫球蛋白G（IgG））上时，可以使用随附的过滤管轻松去除抑制标记反应和未反应的NH₂-反应性生物素的低分子量化合物（例如Tris）。因此，没有必要进行诸如透析和凝胶过滤的处理，并且可以以高回收率获得高纯度的标记化合物。

使用注意事项：

1. 用本试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者Biotin-IgG标记物始终存在于过滤管的滤膜上。

3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

5. 1管NH₂-Reactive Biotin可以标记50-200 ug蛋白质。

标记IgG操作步骤

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（3）将10μl DMSO加入到NH₂-reactive biotin中并用移液器吹打使其溶解。^c）

（4）将100μl Reaction buffer以及8μl NH₂-reactive biotin溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。^d）

（5）将过滤管放入培养箱中，37℃培养10分钟。

（6）将100μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟，^b）除去滤液。

（7）将200μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟，^b）重复该步骤一次。

（8）将200μl WS buffer加入到过滤管中吹打10-15次来回收标记产物。^e）将该溶液转移到0.5ml试管中，在0-5℃下保存。

a) 样品溶液的体积不应超过100ul。如果蛋白质浓度低于0.5mg/ml，重复操作步骤1和2直至总的蛋白质聚积量达到50-200ug。如果聚积过程中滤液的体积超过400ul，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。

b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。

c) NH₂-Reactive Biotin在管子的底部，向管底加入10ul DMSO，吹打数次使其溶解。

d) 如果蛋白质的量为200ug，在操作步骤4时加入所有的NH₂-Reactive Biotin-DMSO溶液。

e) 并不一定要使用WS Buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

1）生物素标记的产品可以在大约2小时内制备。

2）只需将NH₂反应性生物素与目标蛋白混合即可形成稳定的共价键。

3）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

4）可以标记50-200μg的蛋白质。

5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

6）生物素标记的产品可以与试剂盒中包含的存储溶液一起存储。