ClonExpress® Ultra One Step Cloning Kit
灵活多变的一体化快速克隆试剂盒
快速：5 – 15min快速重组
简单：一管式Mix，操作简便
高效：高效克隆50 bp～10 kb片段，阳性率>95%
兼容：单片段、多片段、入门克隆三合一
零背景：提供零背景、氨苄/卡那双抗性载体
提供在线引物设计：提供在线引物设计软件CE Design
1.高度简化的实验流程
通过PCR扩增，使插入片段5’和3’最末端分别带有和线性化载体两末端一致的序列(15 – 20 bp)。用2 × ClonExpress® Mix，50℃反应5-15 min，进行重组。重组产物直接转化感受态细胞，平板上会形成数百个单克隆供阳性筛选。
2.优异的克隆效率
试剂盒能够高效克隆50 bp-10 kb片段，不同长度单片段50 bp、2 kb、4.5 kb、7.5 kb、10 kb；多片段：四个片段（3 kb）、三个片段（10 kb）、五个片段（3 kb）、五个片段（6 kb），纯化后分别与pCE-Zero vector进行同源重组，重组产物转化化学感受态细胞DH5α（Vazyme #C502），菌落数如下图所示。
试剂盒独特的非连接酶依赖体系，无载体自连，克隆阳性率高达95%以上。重组产物转化平板后，各挑取50个单克隆进行菌落PCR鉴定，不同长度插入片段阳性率如下图所示。
3.广泛的体系兼容性
试剂盒兼容1至5个片段同源重组，搭配Vazyme高保真酶，PCR产物可不经过纯化直接进行克隆。重组产物转化化学感受态细胞DH5α（Vazyme #C502），XL10（Vazyme #C503），Fast-T1（Vazyme #C505），得到较高克隆效率。
4.载体序列信息及测序方案
pCE-Zero vector载体，测序时使用通用测序引物（M13）即可。
ClonExpress® Ultra One Step Cloning Kit是新一代的重组克隆试剂盒，可快速高效的将1-5个片段定向克隆至任意载体的任意位点，高度优化的2 × ClonExpress® Mix，50℃反应5-15 min完成重组，操作简单快捷。
|
组分 |
C115-01(25 rxns) |
C115-02(50 rxns) |
|
2 ×ClonExpress Mix |
125 μl |
2 × 125 μl |
|
pCE-Zero vector，linearized (50 ng/μl) * |
25 μl |
50 μl |
|
500bp control insert (20 ng/μl) |
5 μl |
5 μl |
*双抗性载体：Amp+，Kan+
– 20℃保存。