金畔生物试剂,HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)

HiScript^® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)

第三代高效cDNA 一链合成试剂盒（去基因组）

基于更高效的HiScript^® III Reverse Transcriptase：逆转录效率高于二代产品

灵活选择引物： 针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物

gDNA wiper Mix可迅速彻底去除基因组污染：保证后续结果更加可靠，并可简化qPCR引物设计，无需跨内含子设计引物

1.后续实验为PCR

以1μg  HeLa细胞RNA为模板，按照R302说明书推荐体系进行逆转录，以1μl cDNA为模板，用2 × Vazyme Lamp^® Master Mix (Dye Plus)（Vazyme #P312）进行长片段扩增，将得到的产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果如图1所示：扩增条带单一且产量高

 

图1.长片段扩增电泳图

注：M：DL15000 Marker(Vazyme #MD103)

 

2. 后续实验为qPCR

以100 ng HeLa 细胞 RNA为模板，使用 HiScript^® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)(Vazyme #R312) 以及其他逆转录产品，按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应。将得到的 cDNA 进行多个基因的 qPCR定量分析。以不同公司产品为横坐标，△C_T (△C_T = Vazyme #R312 cDNA扩增C_T值–各公司逆转录产品 cDNA 扩增CT值)为纵坐标绘图。从图中可以看出，除一些体系Th1△C_T＞0外，其余逆转录产品均△C_T＜0，说明 Vazyme #R312逆转录效率优于相关逆转录产品。

HiScript^® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)是HiScript^® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)的升级版本，包含新一代逆转录酶HiScript^® III Reverse Transcriptase和针对逆转录优化的合适Buffer，进一步提高了一链合成的效率。该试剂盒中的5 × gDNAwiper Mix可在42℃，2 min条件下快速去除基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠，并可简化qPCR引物设计，无需跨内含子设计引物。试剂盒中包含单组分逆转录引物Oligo (dT)₂₀VN和Random hexamers，用户可根据需要，灵活选择逆转录引物进行后续实验。本试剂盒既可合成用于克隆等下游实验的全长cDNA (可达20 kb)，亦可合成高度均一的用于qPCR定量的cDNA。