T7 RNAi Transcription Kit
用于体外dsRNA 合成
可以转录siRNA和长片段dsRNA；
产量高达20-80 μg；
RNA磁珠可快速高效的纯化转录产物
图1. 500 bp dsRNA 2%琼脂糖凝胶电泳图
1：DL2000 Plus DNA Marker；2和4：500 bp dsRNA酶解前后产物（双端转）；3和5: 500 bp dsRNA酶解前后产物（混合转）。
图2. siRNA 12% PAGE电泳检测结果
1：siRNA转录产物；2：siRNA转录双酶消化产物；3：单链模板；4：双链退火模板
图3. siRNA干扰绿色荧光蛋白表达
左图为GFP质粒与negative control GFP siRNA共转染24 h后的293T细胞；右图为GFP质粒和positive GFP siRNA共转染24 h后的293T细胞。
T7 RNA ploymerase可识别带有T7启动子的DNA模版，以四种NTP 为底物，体外转录合成RNA。T7 RNAi Transcription Kit 是在T7 High Yield RNA Transcription Kit 基础上为转录双链RNA 而设计优化的版本，可用于转录21 bp 的siRNA 和长片段的dsRNA。转录产物经纯化后可用于阳离子脂质体、磷酸钙共沉淀、电穿孔、DEAE- 葡聚糖及显微注射等方法介导的RNAi 实验。一般情况下，一个反应可产生20 μg-80 μg 的RNA。
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组分 |
TR102-01(25 rxn) |
TR102-02(50 rxn) |
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Box 1 |
T7 Enzyme Mix |
50 μl |
100 μl |
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10 × Transcription Buffer |
50 μl |
100 μl |
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10 × Annealing Buffer |
250 μl |
500 μl |
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NTP Mix |
200 μl |
400 μl |
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DNase I |
25 μl |
50 μl |
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RNase T1(100 U/μl) |
25 μl |
50 μl |
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RNase T1 Dilution Buffer |
300 μl |
600 μl |
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Control Template* |
5 μl |
10 μl |
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Box 2 |
RNase-free H2O |
5 ml |
5 ml |
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RNA Clean Beads |
2 ml |
4 ml |
* 本试剂盒提供的Control Template 为500 bp 双端含T7 启动子的PCR 产物，浓度为0.5 μg/μl。
Box 1 于-20℃保存，Box 2 于4℃保存。