产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶
Salt-T4™ 耐盐 DNA 连接酶
#M0467L 100,000 units
#M0467S 20,000 units
特性
- Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶是 T4 DNA 连接酶经基因工程改造过的酶，与 T4 DNA 连接酶相比提高了耐盐性
- 不仅能够连接平末端和粘性末端，还能修复双链 DNA 和 DNA/RNA 杂交链的单链切刻
- 随酶提供 T4 DNA 连接酶缓冲液和 StickTogether™ DNA 连接酶缓冲液
概述
Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶作为 T4 DNA 连接酶的耐盐变体，该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的5´ -磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键，比野生型T4 DNA连接酶更耐受高盐条件。该酶在盐浓度高达300mM的情况下仍能连接粘性末端而不丧失任何活性。该酶对其他反应组分（载体或插入片段）携带的盐不敏感，并允许连接反应在盐含量较高的替代反应缓冲液（如 NEBuffer 3.1）中进行。
图1：与T4 DNA连接酶相比，Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶在粘性末端底物上表现出更高的耐盐性
在 25℃ 条件下，用 400 单位的 T4 DNA 连接酶（NEB # M0202）或 Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶（NEB # M0467）与 0.12 µM 荧光标记的 HindIII（粘性末端）酶切片段在盐量增加（0-1000 mM NaCl）的 1 x T4
DNA 连接酶缓冲液中温育 10 分钟。连接产物用毛细管电泳检测。
当盐浓度超过 200 mM 时，T4 DNA连接酶的活性迅速丧失，而在盐浓度高达 500 mM时，Salt-T4 耐盐
DNA 连接酶在粘性末端底物上仍保留了 > 60% 的活性。
来源
纯化自表达 Salt- T4 耐盐 DNA连接酶基因的 E. coli。
反应条件
1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液（50 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，10 mM DTT，1 mM ATP，（pH 7.5 @ 25℃）） ，25℃ 温育。
热失活
65℃ 加热 10 分钟。
质保声明
Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。
单位定义（粘性末端活性单位）
1 单位指在 20 µl 反应体系中，含 100 mM NaCl 的 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液条件下，25℃ 温育 30 分钟，能使 50% 的 6 µg 经 HindIII 消化的 λDNA 连接所需的酶量。
浓度
400,000 units/ml。
注意事项
1、与 E. coli DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同，Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。
2、若需稀释 T4 DNA 连接酶，推荐使用 50% 甘油贮存缓冲液（稀释缓冲液 A，NEB #B8001S）稀释，
-20℃ 保存。如稀释后马上使用，也可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。
3、室温连接
为了方便，可在室温（20-25℃）进行连接。连接粘性末端（1 x T4 DNA 连接酶缓冲液）：在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶，反应 10 分钟。连接平末端或单碱基突出末端
（1 x StickTogether™ DNA 连接酶缓冲液）：在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶，反应 10 分钟。不要用加热来终止反应，因为 StickTogether™DNA连接酶缓冲液里的 PEG 受热会抑制转化。
上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375
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