No.4 半微量色谱柱使用时的注意事项

生物样品的HPLC分析，根据分离对象的不同，可能需要配制一些复杂的样品或只有微量样品。如使用4.6mm内径的分析柱进行极微量进样，可能会因柱内扩散导致样品不能被检测出。对于此类微量成分的检测，推荐使用小内径的半微量色谱柱。由于分析时使用低流速，不仅节省溶剂还可适用于LC/MS。

虽然半微量色谱柱在使用上有明显优势，但在使用时需要注意的其中一点是：会影响到色谱柱性能的含检测器上流通池在内的系统死体积的大小。
下图显示了配管的内径及流通池的容量对谱图的影响。使用常规分析色谱柱用的配管时，由于存在样品的柱外扩散，常会显示为色谱柱性能（理论塔板数、峰对称性）不佳。当使用半微量色谱柱时，避免因配管引起的样品扩散的发生是非常必要的。同时，由于选用的流通池容量变小，流通池的路径长度亦缩短,有可能会引起峰高变矮。
基于上述问题，为了获得最佳的色谱柱性能和检测灵敏度，对设备的环境进行调整很重要。